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INTRODUCCION Dentro de los txicos voltiles, los alcoholes Etanol y Metanol son sustancias de Importancia toxicolgica dada su accin

farmacolgica depresora del sistema nervioso central (SNC) y el abuso creciente del consumo de bebidas alcohlicas. Esto ltimo, presenta importancia mdico - social debido a que los individuos alcoholizados pueden ser causa de trastornos y accidentes, de. los cuales son imputables. Las vas de penetracin posibles de los alcoholes son la digestiva, la respiratoria, y la absorcin a travs de la piel. En el caso del etanol, la intoxicacin ms frecuente ocurre cuando el individuo ingiere cantidades excesivas de esta sustancia por el consumo de bebidas alcohlicas fermentadas y/o destiladas. Los tipos de muestras generalmente usados para estas determinaciones son: sangre (alcoholemia) , orina, otros fluidos biolgicos, vsceras, alimentos, etc. Las muestras de sangre se obtienen por puncin venosa, teniendo la precaucin de no utilizar alcohol como antisptico local ni otras soluciones constituidas por sustancias reductoras que puedan interferir en la determinacin posterior. Se recomienda usar solucin jabonosa o solucin acuosa de cloruro mercrico 0.05%. La conservacin de las muestras de sangre requiere el empleo de recipientes de plstico con cierre hermtico (no usar tapones de goma) conteniendo fluoruro de sodio (anticoagulante y preservador) o bien oxalato y citrato (anticoagulante) y su almacenamiento refrigerado a T = 4C. El fluoruro de sodio impide el desarrollo de microorganismos que pueden consumir o generar etanol. Los tapones de goma contienen vulcanizantes que son sustancias reductoras capaces de dar falsos positivos en los mtodos qumicos. El cierre hermtico es necesario dado el carcter voltil del etanol y adems, es importante que no exista cmara de aire en el recipiente de recoleccin de las muestras dado que el oxgeno presente podra oxidar al etanol y tambin para minimizar prdidas por volatilizacin. En el caso de muestras de orina, se aplicara una metodologa similar para la recoleccin y conservacin de las mismas, pero cabe considerar que dicho fluido biolgico no presenta una correlacin apreciable con una intoxicacin debida a etanol. Para su, determinacin, las metodologas basadas en la oxidacin bajo ciertas condiciones son tiles para la dosificacin de los alcoholes pero no para su identificacin ya que no dosifican el alcohol como tal sino a tus productos de oxidacin. Por ejemplo, la determinacin de cido actico (CH3COOH), posterior a la oxidacin completa del etanol, significara un error por exceso si un licor a ser analizado tuviera en su composicin adems acetaldehido. El alcohol etlico se separa de las vsceras y tejidos mediante la tcnica de destilacin cida. A continuacin, se procede a la dosificacin del alcohol sobre una alcuota del destilado mediante el mtodo de Nicloux (actualmente en desuso).

METODO DE NICLOUX Fundamento Se basa en la dosificacin del alcohol sobre una alcuota del producto de la destilacin por oxidacin con mezcla sulfocrmica en caliente. 3C2H5OH + 2K2Cr2O7 + 8H2SO4 3CH3COOH + 2Cr2(S04)3 + 2K2SO4 + 11 H20 Muestras: destilado de sangre, orina, contenido de vsceras Tcnica En un matraz de destilacin de 250 ml se colocan 10 ml de sangre u orina, una pequea cantidad de cido pcrico y 65 ml de agua. Si se trata de orina se toman 10 ml de muestra, se agregan 25 ml de solucin saturada de cido pcrico y 40 ml de agua. Se destila recogiendo sobre 5 ml de cido sulfrico 3 N hasta un volumen de 40 ml. Se toman 5 ml del destilado, se agregan 6 ml de cido sulfrico concentrado y se titula con solucin de dicromato de potasio 19 por mil hasta viraje del color verde azulado a verde amarillento, manteniendo la temperatura del tubo de reaccin en (90100C). Es Importante que la titulacin se realice a (90-100C), dado que a temperaturas menores (60C) el etanol se oxida a su correspondiente aldehdo (acetaldehdo). Expresin de resultados Alcoholemia (ml etanol/1000 ml sangre) 4 x Volumen Cr204K2

MICRODIFUSION

La microdifusin se realiza en cmaras de Conway que poseen en el compartimiento externo muestra y agente liberador (C03K2) y en el interno el agente atrapante Cr207K2 + H2SO4 0.01N. En este caso, se produce la captacin y oxidacin del etanol hacia cido actico, forzndose la remocin completa del primer compuesto al cabo de un tiempo y temperatura previamente determinados. Las muestras sobre las que se utiliza esta tcnica son sangre, orina, saliva y otros fluidos biolgicos. Tcnica Se colocan en el compartimiento interno de la cmara de Conway 0.5 ml de una solucin de dicromato de potasio 0.4 N en cido sulfrico 10 N; en el compartimento externo 0.5 - 1.0 ml de sangre u orina y (0.5 - 1.0 ml) del reactivo liberador (solucin saturada de carbonato de potasio). Efectuar paralelamente un blanco con agua. destilada. Se deja difundir 2 horas a 50C. Una vez cumplido dicho tiempo, se procede a la microtitulacin directamente en el compartimiento interno. Para ello, se agregan 0.5 ml de la solucin de ioduro de potasio 3 N, se agita con varilla y se titula rpidamente al principio y ms lentamente luego, con la solucin valorada de tiosulfato de sodio, 0.1 N colocada en una microbureta. Al observarse el comienzo de la aparicin del color celeste verdoso del Cr+3 se adiciona una gota de la solucin de almidn, continundose ahora gota a gota la titulacin hasta la desaparicin del color azul del iodo. Se titula el blanco de manera similar anotando los volmenes de tiosulfato consumidos en cada uno de los casos. Expresin de resultados Etanol (g/l sangre) = N (Vb - VM ) / Vs . 11,51 donde: N = normalidad del tiosulfato Vb ml tiosulfato consumidos en el blanco VM ml tiosulfato consumidos en la muestra Vs ml de sangre u orina colocados en la cmara de Conway 11.51= PM etanol / 4 de acuerdo a la reaccin redox Mediante esta expresin puede evidenciarse la relacin de concentraciones de etanol en sangre y en orina. En la microdifusin interfieren acetaldehdo, alcohol metlico, alcohol isoproplico, propanaldehdo, alcohol amlico, octanol, ter etlico, etc. No interfieren cloroformo, benceno, tetracloruro de carbono, tricloroetileno, etc. - Otra alternativa aplicando la tcnica de microdifusin sera la siguiente: Reactivos - Solucin de Cr207K2 0.106 N en H2SO4 22.08 N ( Pesar 5.2 gr de Cr207K2 en 400 ml de H20 (d) y llevar a 1 L en H2SO4 (c) ) Solucin saturada de C03K2 Muestras -sangre anticoagulada y en recipiente con cierre hermtico Curva de calibracin -soluciones de sangre con concentraciones conocidas de alcohol etlico: 0.25 g/l; 0.50 g/l, 1. 25 g/l ; 2.50 g/l ; 5. 00 g/l Procedimiento Se colocan en el compartimento interno de la cmara de Conway (tamao pequeo), 0.5 ml de la solucin cida de Cr207K2. En un extremo del compartimento externo, se agregan 0.2 ml de sangre y en el otro extremo del mismo 0.2 ml de la solucin saturada de C03K2, Tapar la cmara y hacerla girar cuidadosamente (en forma horizontal) sobre la mesa de trabajo, para poner en contacto los reactivos colocados en el compartimento externo. Dejar difundir 1 hora a temperatura ambiente. Luego, destapar la cmara y recoger la solucin del compartimento interno. Proceder a la lectura espectrofotomtrica a 620 nm. En el caso de utilizar cmaras de Conway (tamao grande) los volmenes de los reactivos a utilizar seran los siguientes: 3 ml de la solucin cida de Cr207K2, 1 ml de sangre y 1 ml de la solucin saturada de C03K2. Resultados Valores de alcoholemia a partir de 0.5 g/ l tienen importancia mdico legal. A pesar de estar reconocido el Cdigo y el Reglamento de Trnsito por la poblacin y de las diferentes actividades que ponen en riesgo la seguridad de hombres, mujeres y nios/as a causa del estado de embriaguez, la ciudad de Cochabamba no cuenta con la garanta del anlisis de alcoholemia ya que no existen normativas de aseguramiento de calidad y Cadena de Custodia, que la muestra exige y para permitir una argumentacin slida para la vctima. Los mtodos de determinacin de alcoholemia ms frecuentemente empleados en la ciudad de Cochabamba son:

Mtodos Bioqumicos: Mtodos enzimticos (Mtodo de alcohol deshidrogenasa ADH), Mtodo de Widmark y el Mtodo de la Microdifusin Mtodos Instrumentales: Cromatografa gaseosa Head-Space A partir de ello, el presente trabajo de investigacin consider relevante validar el dictamen de embriaguez y correlacionarlo con los valores de alcoholemia mediante el Mtodo de Widmark, realizado en el Instituto de Ciencia Forense e Investigacin Criminal (ICFIC Cochabamba) y el Mtodo de la Microdifusin en el Instituto de Investigaciones Forenses (IDIF Sucre). La investigacin tuvo el apoyo de 22 profesionales (13 mujeres y 9 varones), participantes del Diplomado en Toxicologa Forense y Peritaje Judicial, en la ciudad de Cochabamba. Se efectu la determinacin de la alcoholemia mediante el Mtodo de Widmark y el de la Microdifusin, tomando en cuenta las siguientes caractersticas: a) de los participantes (el sexo, el peso en Kg., si fuma, si estaba en ayunas y, finalmente, la apreciacin clnica) b) de las bebidas ingeridas y del porcentaje de alcohol (Garapia 5%, Chicha 6%, Guarapo 7,5%, Cerveza 5%, Ron 35%, Singani 40%, Whisky 40% y Fernet 50%) y la cantidad en ml. transformada a gr. de bebida alcohlica ingerida. La informacin obtenida, correspondiente a la presente gestin, permiti evaluar la concentracin de alcohol en sangre, mediante el tipo de bebida ingerida, el estado y la sintomatologa de cada uno de los integrantes de la investigacin, relacionando con las diferentes variables antes mencionadas. Los niveles de alcoholemia detectados demostraron mayor concentracin de alcohol en sangre en el sexo femenino con referencia al sexo masculino en cuanto a la ingesta de la misma cantidad y grado alcohlico de la bebida; tambin se evidenci mayor grado de alcohol en sangre en aquellas personas que se encontraban en ayunas en comparacin con aquellas quienes haban ingerido algn alimento y se apreci menor concentracin de alcohol en sangre en aquellas personas que fumaban en relacin a aqullas que no fumaban en el momento del consumo de bebidas alcohlicas. Tambin se pudo constatar la apreciacin clnica que presentaba cada persona con las diferentes concentraciones de alcohol en sangre hallados, mediante pruebas de laboratorio; se relacionaron stos con la Tabla que desarroll el toxiclogo, Dr. Manuel Repetto, quien describe perfectamente en "Toxicologa del Alcohol Etlico", las caractersticas del estado y la sintomatologa de los sujetos segn el grado de alcoholemia correspondiente. Palabras Clave: Mtodos Bioqumicos, Mtodos Enzimticos, Mtodo de Widmark, Mtodo de la Microdifusin, Mtodo Instrumental, Cromatografa gaseosa Head-Space. INTRODUCCIN Tradicionalmente, las bebidas alcohlicas ingeridas en el Departamento de Cochabamba (chicha, garapia, guarapo, singani, ron, etc.) han constituido una parte integrante dentro de nuestra idiosincrasia social; una parte de la poblacin toma con moderacin y existe un porcentaje mayor de abusadores en frecuencia y cantidad: La juventud opta por un consumo abusivo principalmente de mezclas de bebidas durante los fines de semana; las consecuencias que conllevan su excesivo consumo puede originar una intoxicacin comn, accidental o voluntaria, a la vez que constituyen un factor de riesgo en los accidentes de trnsito y otros intencionales, como ser los homicidios y suicidios. Ante tales situaciones, los laboratorios encargados de realizar la determinacin de la concentracin de alcohol en sangre estn en la obligacin de asegurar la calidad y Cadena de Custodia que la muestra exige; slo as se podra garantizar un resultado fidedigno y veraz para la vctima. La importancia toxicolgica proviene -en primer trmino- del consumo universalmente extendido de bebidas que contienen alcohol etlico en proporcin variable desde un 3 a ms del 50%. Su entrada -en excesiva cantidad- al organismo ocasiona un desequilibrio metablico. En grandes concentraciones es toxico, especialmente su metabolito "acetaldehdo", ms txico por su alta reactividad qumica (1). La importancia mdico-legal del consumo del alcohol est dada por constituir un factor de riesgo crimingenos presente -muchas veces- en hechos violentos accidentales (accidentes de trnsito) e intencionales (delitos por lesiones, homicidios, suicidios, entre otros) (2). En trminos generales, las bebidas fermentadas (chicha y vinos) contienen una concentracin alcohlica en volumen 8 12%; las cervezas, entre 3 y 7% y las bebidas destiladas (coac, whisky, ron, etc.), entre 45 y 55%. Por diversas razones, a las bebidas alcohlicas se les adiciona sustancias (metanol, furfural, sulfato de potasio, etc.) que producen, a su vez, mayor toxicidad. Las bebidas alcohlicas deben estar etiquetadas con el Grado alcohlico volumtrico, expresado en: % Vol. /Vol. Pero las dosis deben expresarse en peso gramos de Etanol (3). El Etanol es un compuesto hidro y liposoluble, aunque se disuelve ms en agua que en lpidos (coeficiente de reparto octanol/agua= 0,70795); ello le permite ser absorbido con facilidad, por cualquier va, y distribuirse rpidamente -tanto en los compartimientos acuosos como en los lipdicos- y penetrar en el sistema nervioso central (SNC) (3).

Es posible comprobar la presencia de alcohol en sangre an cuando no se haya ingerido alcohol, pero siempre en cantidades muy reducidas. Este alcohol sanguneo fisiolgico, denominado Alcohol Endgeno, se origina por la descomposicin microbiana de los hidratos de carbono en el tubo digestivo. Puede alcanzar hasta 0,3g/L (3). La mayora de los compuestos siguen una cintica de primer orden, pero no todos: El alcohol etlico sigue una cintica de orden cero, en la cual la velocidad de eliminacin es independiente de la concentracin y slo en funcin del tiempo. El alcohol habitualmente ingresa al organismo por va oral, excepcionalmente por inhalacin o a travs de la piel; es absorbido a partir de los 30 60 minutos y hasta 180 minutos, mediante un mecanismo de difusin pasiva, pasando al torrente sanguneo. En ayunas, la absorcin es ms rpida en duodeno y yeyuno. Con el estmago lleno, la absorcin se retarda. El alcohol, una vez en el torrente sanguneo, pasa por el hgado, alcanzando su mayor concentracin alrededor de los 30 minutos en la circulacin sistmica. Durante la absorcin y la distribucin se va produciendo tambin la biotransformacin, aunque predomine un incremento de la alcoholemia, como se puede apreciar representando la evolucin de la concentracin en sangre frente al tiempo, con lo que se obtiene la llamada Curva de Alcoholemia (Figura N 1, tramo A-B). Alcanza el mximo (punto B); se inicia la segunda fase de la Curva, en que predomina la biotransformacin y eliminacin, que confieren a la Curva un signo decreciente. Cuando se ingieren sucesivas dosis, la Curva adquiere un trazo en zig-zag, formado por varias curvas fraccionarias, pero cuando cesan las libaciones se alcanza el mximo definitivo, a partir del cual se desarrolla en exclusiva la Fase de Eliminacin. La pendiente de la curva en esta Fase (tramo B-C), que se calcula dividiendo el decremento de la concentracin por el incremento del tiempo, es la constante de eliminacin, que oscila entre 0,10 y 0,20, aceptndose un valor medio de 0,15 g/L/hora como la cantidad en que el valor de la alcoholemia disminuye cada hora. Consecuentemente, un individuo que posea una alcoholemia de 1,5 g/L, tardar 10 horas en eliminar todo su alcohol (llegar a 0 g/L) (3). Fuente: (3) En el organismo, el alcohol sufre un proceso de oxidacin, que se desarrolla exclusivamente en el hgado, transformndose el etanol en acetaldehdo y posteriormente en acetato por medio de la cadena enzimtica. Los metabolitos se excretan por va pulmonar, va urinaria, por la saliva y por la leche en poca de lactancia (3). Por su importancia mdico-legal, slo se mencionar la evolucin de la intoxicacin etlica aguda. Una caracterstica del etanol, a la que no suele prestarse atencin, es que su molcula no posee ningn carbono asimtrico (con sus cuatro sustituyentes diferentes), por lo que su interaccin con las biomolculas (que son quirales) no es estereoselectiva; dicho de otra manera, los seres vivos carecen de receptores biolgicos especficos para el alcohol etlico. Esta circunstancia, a diferencia de lo que ocurre con muchos otros txicos en que pueden describirse interacciones ligando-receptor, dificulta la comprensin de su mecanismo de accin (3). Efectos txicos Son muy distintos los Efectos Agudos y Efectos Crnicos. Efectos agudos: El etanol es, bsicamente, un depresor del sistema nervioso, aunque a dosis bajas y al principio de sus efectos, acte como excitante por estimulacin en la corteza cerebral y su accin desinhibidora. La actividad neurodepresora no puede aprovecharse para anestesia porque la dosis que se precisa para ello es txica. (No hay margen teraputico de seguridad). Tras una ingestin de bebida alcohlica, dependiendo de la dosis y de la progresin del tiempo, como consecuencia de la accin sobre el SNC, se puede experimentar: Sndrome Excitatorio: Excitacin, euforia Sndrome Confusional: Confusin o embotamiento mental Sndrome Cerebeloso: Anestesia, hipnosis (somnolencia), desequilibrio y ataxia (andar dificultoso) Sndrome Comatoso: Progresiva disminucin de la consciencia, coma y paro respiratorio Horas despus de la toma aparece la llamada "resaca", con enrojecimiento facial, cefalea, torpeza mental, sed, dficit de vitamina B, etc., motivada por el metabolismo del alcohol y la accin vasodilatadora del acetaldehdo. Algunas bebidas, incluso las denominadas "sin alcohol" pueden originar, especialmente en personas hipersensibles, en el momento inmediato de su ingestin, un cuadro leve similar a ste, que no se debe al alcohol sino a los compuestos histaminoides presentes en la bebida; se trata, por tanto, de un fenmeno pseudo alrgico (3). Tanto con fines clnicos como forenses, es til interpretar los valores de alcoholemia relacionndolos con situaciones clnicas o de intoxicacin. A pesar de que en la poblacin humana, como en todas las animales, existen individuos sensibles frente a otros resistentes, unos sin contacto previo con el alcohol y otros que han desarrollado tolerancia. Manejando datos de miles de individuos se han elaborado correspondencias epidemiolgicamente muy vlidas y aceptadas internacionalmente, como las que se exponen en la Tabla N 1 (3).

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