UNIVERSIDAD DE CHILE FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS Y PECUARIAS DEPARTAMENTO FOMENTO DE LA PRODUCCION ANIMAL UNIDAD DE REPRODUCCION

CICLO ESTRAL DE LA HEMBRA BOVINA

Dr. Mario Duchens; Dra. Mnica De los Reyes

La produccin bovina, tanto de carne como de leche, depende fuertemente de la actividad reproductiva, y por lo tanto los problemas reproductivos tienen un gran impacto econmico. En este apartado docente se presentarn los principales eventos fisiolgicos y endocrinos que estn asociados con el inicio de la maduracin sexual o pubertad, y la fisiologa del ciclo estral, y se discutirn algunos aspectos clnicos y de manejo del ciclo.

INICIO DE LA MADURACIN SEXUAL O PUBERTAD

El mejoramiento de la eficiencia reproductiva en bovinos depende en forma importante de la introduccin en su momento adecuado de las hembras de reemplazo, o vaquillas, al rebao. Las vaquillas debieran tener su primer parto alrededor de los dos aos de edad. Esto implica que la gestacin debe iniciarse a los 15 meses de edad. En los sistemas de bovinos para produccin de carne, en que por razones de manejo los encastes y los partos se concentran en determinadas pocas del ao, se debe maximizar la proporcin de vaquillas que paren temprano en la estacin de modo de tener terneros de mayor edad, y por lo tanto de mayor peso, al llegar la fecha del destete. Esto permite adems,

reencastarlas ms temprano en la siguiente temporada. Con esto aumenta la permanencia de los animales en el rebao, ya que es menos probable su eliminacin por causas reproductivas. En bovinos para produccin de leche, las hembras de reemplazo tambin deben parir, e iniciar la produccin de leche, a los dos aos. Para lograr esta meta se requiere un desarrollo corporal adecuado de las vaquillas y un inicio precoz de la pubertad y de la primera gestacin.

En animales domsticos, la pubertad se define en trminos generales como la presentacin del primer estro asociado a una ovulacin potencialmente frtil, que es seguida por una fase luteal de duracin normal y el inicio del primer ciclo sexual. En primates y humanos, primero ocurre una serie de ciclos anovulatorios antes de alcanzarse la plena fertilidad. El bovino se encontrara en una situacin intermedia, ya que la primera ovulacin no va acompaada de signos de celo y es seguida de un ciclo estral de corta duracin. Adems se describe que en un 13 a 22% de las vaquillas prepberes ocurre un celo anovulatorio que precede el primer ciclo normal, presentndose

aproximadamente 3 meses antes de la pubertad, y se denomina estro no puberal.

La pubertad representa solamente el inicio de la maduracin sexual, la que en realidad no se completa hasta que la hembra alcanza la madurez caracterstica de su raza. Esta idea se ilustra ms claramente en especies de parto mltiple como los cerdos, en que la tasa de ovulacin va aumentando en ciclos estrales sucesivos, y se considera que han alcanzado la madurez sexual cuando se alcanza la mxima tasa de ovulacin o tamao de la camada. Este hecho tiene implicancias prcticas al momento de decidir el momento en el cual comenzar a cubrir las hembras. La incidencia de pubertad, as como la de estro no puberal,

est influenciada por varios factores entre ellos la edad, genotipo, estacin del ao, peso corporal, nutricin, y ambiente social en la crianza.

FISIOLOGA DEL CICLO ESTRAL

Generalidades

Una vez que se logra la pubertad, los ciclos estrales se presentan a intervalos regulares y sin interrupcin, a menos que se inicie una gestacin o que las condiciones nutricionales sean muy malas. No se ha demostrado un efecto de la estacin del ao sobre la actividad cclica en bovinos. Por estas razones se clasifica a la hembra bovina como polistrica tpica. El ciclo estral en la hembra bovina tiene una duracin de aproximadamente 21 das, pero normalmente puede variar de 17 a 25 das. El periodo de estro vara de 2 a 50 horas, pero promedia 12 a 18 horas en la mayora de las condiciones. En vacas lecheras en manejo intensivo, se describe una duracin promedio del celo de aproximadamente 7 horas. La ovulacin es espontnea, es decir ocurre independiente de la existencia de una monta, y se presenta aproximadamente 24 a 30 horas despus del inicio del celo. Generalmente es un solo ovocito el que ovula; las ovulaciones dobles (y por lo tanto la probabilidad de gestacin de mellizos) son poco frecuentes. Los primeros signos de celo generalmente coinciden con el inicio del alza preovulatoria de las hormonas luteinizante (LH) y folculo estimulante (FSH). La duracin del ciclo estral es generalmente 1 a 2 das menor en vaquillas que en vacas. La temperatura ambiental alta no parece alterar la duracin del ciclo estral, pero puede reducir la duracin e intensidad del celo, y reducir el flujo de sangre al tracto reproductivo y alterando las concentraciones de algunas hormonas reproductivas.

El ciclo estral se divide tradicionalmente en 4 fases: estro (da 0) metaestro (das 1 a 3) diestro o fase luteal (das 4 a 8) proestro o fase folicular (da 19 hasta el inicio del siguiente celo)

El estro o celo se caracteriza por la receptividad sexual de la hembra (se deja montar) a un toro o a la actividad de monta de otras hembras, adems del crecimiento de un folculo y su preparacin para la ovulacin. El metaestro comprende las fases finales de la maduracin folicular y la ovulacin, la formacin del cuerpo lteo y el inicio de la secrecin de progesterona. Una vez que se observan concentraciones significativas de progesterona ( 1 ng mL-1) en la sangre, es el comienzo de la fase luteal o diestro, la que contina hasta que el cuerpo lteo comienza a regresar al inicio de la luteolisis. En la medida que las concentraciones de progesterona en sangre comienzan a declinar rpidamente producto de la lisis luteal, se inicia el proestro o fase folicular, llevando al crecimiento de una onda folicular y la seleccin de un folculo ovulatorio.

PATRONES ENDOCRINOS DURANTE EL CICLO

Para propsitos de describir mejor las interacciones entre las hormonas de hipotlamo, hipfisis, ovarios y tero, que estn asociadas al comportamiento sexual y la endocrinologa normal del ciclo estral, la mayora de los autores prefiere considerar que el ciclo se inicia cuando comienza a crecer el folculo que se selecciona para ovular. De esta manera, el ciclo se divide en 3 periodos endocrinos: (1) antes del peak de gonadotrofinas, que es posterior a la luteolisis

y que corresponde a la fase de crecimiento del folculo ovulatorio, (2) alza preovulatoria de gonadotrofinas, y (3) fase luteal.

1. Previo al alza de gonadotrofinas

Este periodo comienza con la lisis del cuerpo lteo y finaliza con el peak preovulatorio de FSH y LH, el que inicia el proceso ovulatorio de un folculo maduro 24 a 30 horas ms tarde. Al final de este periodo adems se inicia la manifestacin del celo. Durante este tiempo, las concentraciones de progesterona declinan rpidamente y las de estradiol comienzan a aumentar paralelo al rpido crecimiento de un folculo preovulatorio. En la medida que la progesterona disminuye, las concentraciones basales de LH aumentan, y la frecuencia de pulsos de LH se incrementa desde aproximadamente un pulso cada 4 a 6 horas, a un pulso cada 1 hora. Sin embargo, la amplitud de estos pulsos disminuye debido a la reduccin del feedback negativo de los esteroides ovricos sobre el hipotlamo y la hipfisis. La esteroidognesis folicular es producto de la actividad de clulas de la teca externa y de la granulosa. Aunque el crecimiento folicular puede ser estimulado por FSH sola, la mxima sntesis de estradiol in vitro es inducida por una combinacin de FSH y LH.

Las mismas seales endocrinas que estimulan el crecimiento y maduracin de los folculos son las que inician la involucin del endometrio y las glndulas uterinas. En la vaca, y las otras especies domsticas, no hay signos evidentes de este proceso que puedan compararse a la menstruacin en primates y humanos, pero estudios histolgicos muestran cambios importantes en el tero.

El aumento en los pulsos de LH y en los ttulos de estradiol, sumado a la presencia de concentraciones basales de progesterona (Figura 1), culminan eventualmente en el inicio del celo, con el peak de estradiol desencadenando el peak preovulatorio de FSH y LH (Figura 2). Este peak es precedido por la descarga masiva de GnRH desde el hipotlamo. Otro importante efecto del estradiol a nivel central es desencadenar el cambio en el comportamiento conocido como celo. El signo ms importante de la ocurrencia de estro, y el ms fcil de reconocer, es la actitud de la hembra de dejarse montar por un toro o por otra vaca. Se considera iniciado el celo cuando la hembra se deja montar por primera vez. La interaccin entre macho y hembra es reforzada por la secrecin de feromonas desde la regin perineal de la hembra, proceso que tambin est regulado por el estradiol. El estradiol adems estimula cambios en el tracto reproductivo que permitirn la ocurrencia de la monta y fecundacin. Se produce secrecin seromucosa en la vagina y vulva, con edema de la vulva y el crvix. Esto asegura la lubricacin del tracto reproductivo para permitir la monta y ayudar al avance de los espermatozoides a travs de la unin terocervical. En el tero y oviductos, el predominio de los estrgenos induce un aumento de la contractibilidad del miometrio, la que es esencial para permitir el transporte de los espermatozoides hacia el sitio de fecundacin. Los estrgenos adems estimulan la inmunidad local del tero a travs de la llegada masiva de linfocitos. Esto protege al tracto reproductivo de infecciones y promueve la absorcin de espermatozoides y restos seminales despus de la monta.

El estradiol induce el peak de LH aumentando la frecuencia de pulsos en la secrecin de GnRH por el hipotlamo y aumentando la sensibilidad de la hipfisis a los pulsos de GnRH. Si se inhibe este aumento de estradiol, ya sea por medios qumicos o inmunolgicos, se puede bloquear el peak de gonadotrofinas. Adems, para que el estradiol pueda inducir el alza de gonadotrofinas, las concentraciones de progesterona deben estar bajas, ya que

la administracin de progesterona durante el periodo previo al peak puede bloquear esta alza. El peak de FSH y LH generalmente dura 8 a 10 horas (Figura 2). La disminucin del peak preovulatorio ocurrira por refractariedad de la hipfisis a la GnRH, por una disminucin en los receptores de GnRH en las clulas gonadotrficas, y adems por el trmino del pool disponible de gonadotrofinas en la hipfisis. Esta hiptesis se sostiene en dos observaciones: (1) cuando vaquillas son ovariectomizadas inmediatamente despus del inicio del celo y el peak de gonadotrofinas preovulatorio, se observa un retraso en el aumento de LH que ocurre post castracin, y (2) las inyecciones de GnRH luego de 12 a 16 horas desde el inicio del peak producen liberacin solo de cantidades marginales de gonadotrofinas.

2. Alza preovulatoria de gonadotrofinas

Este periodo se caracteriza por presentar concentraciones sanguneas de estradiol en declinacin (Figura 1), despus de su peak al inicio del celo, paralelo al comienzo de la luteinizacin del folculo. La respuesta inmediata al alza de LH es una marcada disminucin en la sntesis de estradiol, debido a una baja en la disponibilidad de andrgenos y/o una reduccin en la actividad de aromatizacin. Despus del peak se inicia la luteinizacin de las clulas foliculares, comenzando la produccin de progesterona

Posterior al alza de gonadotrofinas el folculo colapsa y se libera el ovocito maduro hacia la fimbria. En el proceso de ovulacin ocurren cambios bioqumicos y vasculares similares a los que ocurren en una reaccin inflamatoria. La ruptura folicular es regulada por una serie de mediadores intrafoliculares como prostaglandinas. La ruptura de la membrana basal y capilares lleva a extravasacin al folculo vaco y la formacin del cuerpo hemorrgico. El folculo roto tambin es invadido por clulas tecales. El

contenido de estradiol en el folculo declina rpidamente y el contenido de progesterona comienza a aumentar, debido a que las clulas de la teca y de la granulosa se diferencian hacia clulas luteales para formar el cuerpo lteo. Las clulas tecales se desarrollan a clulas de menor dimetro, conocidas como clulas luteales pequeas, y las clulas de granulosa se convierten en las clulas luteales grandes.

En la ovulacin, el ovocito se libera rodeado de varias capas de clulas de granulosa, formndose el cmulo oforo, y este complejo ovocito-cmulo (COC) es enviado hacia el extremo del oviducto ayudado por la actividad ciliar de la fimbria. La motilidad de los cilios y las contracciones de la musculatura lisa del oviducto transportan el COC hacia el sitio de fecundacin.

El periodo restante del llamado metaestro (das 1 a 3) se caracteriza por presentar concentraciones bajas de LH. El estradiol se encuentra tambin bajo, y las concentraciones de progesterona comienzan a mostrar un aumento, que sin embargo no es significativo (Figuras 1 y 2). Un alza secundaria en FSH, de menor magnitud que el observado durante el peak de LH ocurre justo antes de la ovulacin o alrededor de 24 a 30 horas despus del inicio del peak preovulatorio (Figura 1). Esta alza secundaria puede ser una consecuencia de la disminucin en la produccin de inhibina durante el periodo ovulatorio. Este aumento en FSH probablemente estara relacionado con el recruitment de la primera onda de folculos antrales.

3. Fase luteal

La fase luteal se extiende entre los das 4 y 18 del ciclo, y comienza cuando el cuerpo lteo secreta concentraciones significativa de progesterona, las que generalmente sobrepasan 1ng mL-1 (aprox 3,2 nmol L-1) hacia el da 4 del ciclo

(Figura 1). Mientras persista el cuerpo lteo y se mantengan niveles altos de progesterona en circulacin, no hay manifestacin de estro. Cuando la progesterona pasa a ser nuevamente la hormona dominante, favoreciendo el feedback negativo para gonadotrofinas en la fase luteal, los patrones de secrecin de LH se modifican nuevamente hacia una baja frecuencia (un pulso cada 4 a 6 horas) pero con pulsos de mayor amplitud. La progesterona alcanza concentraciones mximas en los das 8 a 10 (Figura 1), lo que es casi coincidente con el peso y tamao mximos del CL en desarrollo.

La dominancia de la progesterona en esta fase, causa hipertrofia y un aumento en la vascularizacin y secrecin del endometrio. En la vaca y otros rumiantes, esta vascularizacin es especialmente importante en las carnculas del endometrio, ya que estas reas formarn el componente materno de la placenta en caso de haber gestacin. Otro efecto de la progesterona es la inhibicin de la contractibilidad del miometrio. Todas estas acciones tienen por objeto crear un ambiente apropiado para la implantacin y desarrollo embrionario.

Las clulas del cuerpo lteo secretan progesterona, pero las clulas luteales pequeas parecen tener casi todos los receptores a LH. En estudios in vitro, su respuesta a la accin de LH, medida como secrecin de progesterona, es mucho mayor que la de las clulas luteales grandes. Las clulas luteales pequeas representan alrededor del 20 a 25% de la poblacin celular total y contribuyen con alrededor del 15% de la progesterona secretada por el cuerpo lteo, mientras la secrecin esteroidal restante se deriva de las clulas luteales grandes. Por otro lado, las clulas grandes tienen los receptores para prostaglandina E2 (PGE2) y prostaglandina F2 alfa (PGF2). Las concentraciones y la afinidad de receptores a PGF2 en el cuerpo lteo bovino son similares en los das 2, 4, 6 y 10 del ciclo estral, por lo cual esto no explica la falta de repuesta luteoltica del cuerpo lteo a la administracin de PGF 2 que ocurre

antes del da 5 o 6 del ciclo. Las clulas luteales grandes tambin producen neurofisina y ocitocina.

Al principio de la preez, alrededor de 20 das despus de la concepcin, las clulas grandes originales desaparecen y dejan a las clulas luteales pequeas, algunas de las cuales se expanden hacia clulas de mayor tamao. Se cree que la principal luteotrofina en bovinos es la LH, ya que si se administra suero anti LH durante la fase luteal ocurre regresin del cuerpo lteo.

La funcin luteal no significa una supresin total del crecimiento folicular en los ovarios. El patrn de liberacin de gonadotrofinas en esta fase permite el desarrollo de ondas de crecimiento folicular. La primera onda se inicia por el alza secundaria de FSH que sigue al peak preovulatorio de LH (Figura 1), y es visualizada por ecografa en los das siguientes. Los niveles altos de progesterona inhiben el feedback positivo de estrgenos sobre LH, evitando as la ovulacin, y producindose regresin y atresia folicular, apareciendo una nueva onda. Las siguientes ondas tambin se inician por aumentos en FSH de corta duracin. Cuando los folculos crecen, y uno se hace dominante, se observa un aumento en las concentraciones de estradiol. Debido a la formacin regular de ondas foliculares, en cualquier estado del ciclo siempre est presente al menos un folculo dominante (pudiendo haber en algunos casos folculos dominantes) en uno de los ovarios. Este fenmeno hace que sea difcil hacer una prediccin exacta del estado del ciclo o de la ocurrencia del celo solamente a travs de la palpacin de los ovarios por va rectal, an cuando se identifique un cuerpo lteo. A esto se suma que el diagnstico exacto de un cuerpo lteo funcional a travs de palpacin rectal es difcil.

La funcin luteal y por lo tanto el ciclo estral se prolongan por un periodo de tiempo suficiente como para que, si eventualmente ha ocurrido la monta y

concepcin, el embrin pueda activar los mecanismos de reconocimiento materno de la preez, evitndose as la luteolisis. Si no hay monta o no hay concepcin, es fundamental para el animal regresar de este estado programado para gestar, a un estado de proestro. Esto se logra porque al final de la fase luteal ocurren pulsos marcados de PGF2, secretada por el tero, causando regresin o lisis del cuerpo lteo, terminndose as la fase luteal. Despus de alrededor de 14 das bajo la influencia de la secrecin de progesterona, el endometrio secreta pulsos de PGF2de duracin aproximada de 6 horas cada uno (Figura ), por un total de aproximadamente 36 horas. La PGF 2 produce una disminucin inmediata de los niveles de progesterona y oxitocina, en la circulacin perifrica y en el cuerpo lteo, a niveles basales dentro de 6 a 10 horas. El rol del tero en el proceso de luteolisis se basa en la persistencia prolongada del cuerpo lteo cuando se extrae el tero a vacas en fase luteal. Adems, bovinos con una ausencia congnita del cuerno uterino, ipsilateral al ovario que lleva el cuerpo lteo, tienen ciclos estrales prolongados con una extensin de la fase luteal. Tales observaciones, as como experimentos en ovejas, han entregado evidencia de un control local utero-ovrico de la vida media luteal. Diversos ensayos sugieren que la PGF2 producida por el cuerno uterino adyacente al ovario que lleva el cuerpo lteo, se transfiere desde el flujo venoso uterino hacia la arteria ovrica va un mecanismo de transferencia por contracorrenteo.

Hay alguna controversia con relacin a los mecanismos por los cuales la PGF 2 induce la luteolisis. Se cree que los efectos luteolticos de la PGF 2 ocurren, en parte, a travs de una intervencin directa con las clulas luteales e indirectamente va una reduccin en el flujo sanguneo luteal. Aunque la PGF 2 tiene propiedades vasoconstrictoras, no se ha determinado claramente si el descenso marcado en el flujo sanguneo ovrico o luteal, o ambos, que ocurren en la luteolisis, espontnea o inducida, es una causa o una consecuencia de la

luteolisis. Se ha estudiado que la ocitocina luteal est involucrada en la luteolisis, a travs de su efecto estimulador de la secrecin de PGF 2 desde el endometrio cuando el cuerpo lteo comienza a regresar y se libera ocitocina durante la lisis luteal. La administracin de oxitocina en los das 5 a 8 del ciclo produce regresin del cuerpo lteo, solamente si el tero est presente, y si ste ha sido sensibilizado previamente mediante estrgenos.

Se cree que el estradiol producido por el folculo dominante al final del ciclo es el que inicia el proceso de luteolisis al inducir la produccin de PGF2 uterina. El estradiol induce receptores endometriales para oxitocina, los que cuando se unen a la oxitocina, activan la fosfolipasa A2 y liberan cido araquidnico y la cascada araquidnica, estimulando tambin la PGF sintetasa, y llevando finalmente a la produccin de PGF2 uterina y a la eventual luteolisis. La administracin de estrgenos inicia la luteolisis y puede estimular la produccin uterina de PGF2. Por otro lado, la remocin de folculos ovricos despus del da 10 del ciclo extiende la funcin luteal por varios das ms all de la duracin de un ciclo normal. El proceso de la luteolisis y las acciones de la PGF 2 pueden monitorearse midiendo el principal metabolito estable de PGF 2, 15keto-13,14-dihidro-PGF2 (PGFM). Los pulsos luteolticos de PGF2

(evidenciado como PGFM perifrica) se observan junto a aumentos simultneos de estradiol y concentraciones de progesterona en descenso.

SUPRESIN DE LA ACTIVIDAD ESTRAL CCLICA

En vacas normales no preadas, la actividad cclica se mantiene regularmente y sin interrupciones. Durante la gestacin se suprimen los ciclos y no se observa celo y ovulacin, an cuando la funcin ovrica no se inhibe completamente, ya que ondas de crecimiento folicular y atresia aparecen a intervalos regulares y se

mantienen hasta al menos los 6 meses de preez. Inmediatamente despus del parto, la vaca sufre un periodo variable de aciclia antes del reinicio de la actividad ovrica y la primera ovulacin. Uno de los principales factores que retrasa el reinicio de la actividad ovrica post parto es el amamantamiento de la cra, ms que la lactancia per se. Vacas que amamantan un ternero tienen un periodo de anestro ms prolongado que el de vacas que son ordeadas. Otro factor relacionado con aciclia post parto es la alimentacin. El inicio de la lactancia, sumado a una depresin en el consumo de alimentos lleva a un estado de balance energtico negativo, que se mantiene por un periodo variable de tiempo. La magnitud y duracin de este desbalance estn fuertemente relacionados con el tiempo que transcurre desde el parto a la primera ovulacin. Finalmente, el stress, es decir la activacin de la mdula adrenal y liberacin de ACTH, puede deprimir, e incluso suprimir, la actividad de las gonadotrofinas. Situaciones como mala alimentacin, enfermedades, mala calidad del alojamiento, alta densidad de animales, maltrato, ambiente social adverso, y en general malas condiciones de manejo, afectan la fertilidad. Proveer de buenas condiciones a los animales permite la plena expresin de su potencial reproductivo.

Figura 2: Niveles de estradiol y LH (EE) en plasma en vaquillas (n=8), medidos cada 1 hora alrededor del momento del peak de LH. La barra horizontal representa el promedio de duracin del celo (fuente: Dieleman et al., 1986)

REFERENCIAS

Dieleman, S.J.; Bevers, M.M.; Van Tol, H.T.M.; Willemse, A.H. 1986. Peripheral plasma concentrations of oestradiol, cortisol, LH and prolactin during the oestrous cycle in the cow, with emphasis on the peri-oestrous period. Animal Reproduction Science 10: 275-292

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