ESTUDIO DE AMINOACIDOS, CROMATOGRAFIA DE AMINOACIDOS Y ESPECTROFOMETRIA Absorvancia: 2-log T Rf= dist.

Soluto/distancia origen frente

C1= C2 * Absorvancia 1/ Absorvancia 2 Cromatografia en capa fina de aminocidos:

En una cromatoplaca de 5 x 20 marcar una lnea a 1.5-2 cm y a 0.5 cm colocar con un tubo capilar agregar las muestras. Aminocidos (lisina, leucina, triptfano, histidina), aplicar 5 veces c/u y dejar secar. Luego meter en cromatocamara q contenga (n-butanol, agua, acido actico en proporcin (12:3:5)). Cerrar hermticamente. 30-40 min. Luego remover y marcar con lpiz el frente del disolvente luego colocar a 80 grados en horno de conveccin, luego colquela en la campana de estraccion para revelar el cromatograma. Espectrofometria de protenas:

2ml de muestra + 8 ml de biuret La muestra conocida..debemos tener la concentracin y absorbancia para luego obtener la concentracin de la muestra desconocida. EXTRACCION DE GLUCIDOS DE MUESTRAS VEGETALES Y EXTRACCION DE LIPIDOS DE MUESTRAS VEGETALES: 1. Preparar el destilador soxhler 2. Agregar agua arriba de los 250 ml 3. Agregar 5 perlas de ebullicin en el baln 4. Luego formar un dedal y agregar la muestra 15grs luego colocarlo dentro de la cmara de extraccin. 5. Armar 6. Poner fuego y abrir la lleve de agua. 7. Esperar 5 reflujos. PRACTICA 7: ESTUDIO DE GLUCIDOS EN MUESTRAS VEGETALES: 1. Hidrolisis de disacridos y polisacridos: en dos tubos colocar en cada uno 20 ml de estracto +20gts HCl al otro 20 ml de sacarosa +20gts HCl concentrado, en otro 20 ml de almidon e igual. Y poner en bao maria 3 min.

2. MOLISH:(anillo purpura..detecta mono, di y polisacaridos) 1 ml muestra + 2 gts de alfa-naftol + 2 ml H2SO4 gota a gota. 3. BENEDICT (pa azucares reductores) media vez contenga glucosa..+ rojo o amarillo verdoso 1 ml muetra + 2 ml react. Benedict. Calendar a bao maria 4. YODO: (polisacaridos como almidon, celulosa) + color azul- rojo xq cont. Mono o di 1 ml muestra + 6 gotas de reactivo de yodo. 5. BARFOED: (pa diferenciar mono y disacrido por dif. En tiempo de reaccin) 1 ml muestra + 2 ml de reactivo de barfoed y calentar x 10 min. + rojo ladrillo 6. SELIWANOFF:(diferencia aldohexoxas y cetohexosas) osea glucosa de fructosa. 1 ml muestra + 2 ml reactivo seliwanoff y calentar en bao maria +/- 10 min. Da + con cetosas como la sacarosa (glucosa + fructosa) contiene cetosas. La fructosa cont. Un grupo cetona en su estruct. MONOSACARIDOS: (Pentosas(arabinosa, xilosa, ribosa), Hexosas (glucosa, fructosa, galactosa)). DISACARIDOS: Sacarosa, lactosa, maltosa OLIGOSACARIDOS: Maltodextrina, fructo-oligosacaridos POLISACARIDOS: Almidon: celulosa, amilopectina. Glucosa: aldehdo Fructosa: cenona Galactosa + glucosa = GALACTOSA + molish, + Benedict, + Barfoedx q contienen al monosacrido glucosa + molish + Barfoed + seliwanoffxq contiene al monosacrido fructosa + molish + yodopolisacrido almidon..celulosa PRACTICA 9.. ESTUDIO DE LIPIDOS DE MUESTRAS VEGETALES Caracterizacion cuantitativa de lpidos % de pureza= gr lpido/gr extracto 1. Pesar 40 gr extracto en beacker d 50 ml 2. Calentar en bao maria hasta q no huela a n-hexano

3. Dejar enfriar y pesar..luego calcular con la formula. INDICE DE SAPONIFICACION: 1. Pesar 10 gr de extracto en beacker de 100 ml 2. Agregar 25 ml de KOH (0.05 M) (sol. Etanolica) 3. Calentar en bao maria x 30 min 4. Dejar enfriar 5. Agregar 3 gts de fenolftalena en Erlenmeyer de 100 ml 6. Titule con HCl (0.05 M) hasta q cambie de color IA= vol gastado x % pureza x peso formula INDICE DE ACIDEZ 1. Pesar 10 grs extracto en Erlenmeyer de 250 ml 2. Agregar 5 ml etanol 3. Agregar 3 gts de fenolftalena 4. Titule con KOH (0.1 N) 5. Agite despus de c/gota para liberar los acidos grasos de los lpidos IS = vol gastado x % pureza x peso formula SOLUBILIDAD DE LIPIDOS: Dos tubos 1(1 ml lpido dl exp de % + 1ml etanol + 1 ml agua dest.). el tubo 2 (1 ml extracto + 1 ml etanol (testigo)) INSATURACION: 1. Agregar 1 ml de muestra del d saponif. 2. Aada 10-15 grs de sol. De I2 en CHCl3 (cloroformo) al 1 % p/v ..en campana 3. En otro tubo agregar 1ml de la misma sol. Y agite ambos tubos. (la decoloracin de la sol yodo implica presencia de acidos grasos insaturados). 4. Agregar 1 ml extracto 5. Aada poco a poco 10-15 gts. Sol Br2 en agua, al 1% p/v. el Br2 en agua s trab. En campana.

6. Observar 7. Agregar en un tubo 1 ml de sol Br 2 en agua al 1% p/v y agitar ambos tubos 8. Observarla decoloracin de la sol de bromo implica presencia de Acidos Grasos Insaturados.