Qumica alimenticia 112 (2009) 310-315

Perfil del aminocido y realce de la hidrlisis enzimtica de los carotenoproteins fermentados del camarn
Roberto E. Armenta a, *, Isabel Guerrero-Legarreta b
a b

Nutricin Canad, impulsin de la investigacin 101, Dartmouth, Nueva Escocia, Canad B2Y 4 T 6 del ocano Departamento de Biotecnologa, Universidad Autnoma Metropolitana-Iztapalapa, Apartado 55-535 postal, C.P. 09340, Ciudad de Mxico, Mxico

un r t i c l N-F E-I o un A.C. t de b s t r

Palabras claves: Carotenoproteins Astaxantina Carotenoides Hidrlisis enzimtica Proteasa Lipasa Historia del artculo: 16 de enero de 2008 recibido Recibido en forma el 2 de mayo de 2008 revisado 20 de mayo de 2008 aceptado

unidades olytic junto con 10 unidades lipolticas. El tratamiento ms eficiente usar solamente la proteasa fue obtenido con 15 unidades proteolticas (852 y 48 mg/g de la protena soluble y de carotenoides totales, respectivamente). Una forma relativamente sin protena de astaxantina derivada de carotenoproteins de la basura del camarn puede estar de inters para los usos en la cultura de color salmn, y en productos y cosmticos naturales de la salud. Adems, los carotenoproteins fermentados se podran utilizar en ser humano y el animal adieta debido a su alta concentracin de los aminocidos esenciales. Elsevier Ltd 2008. Todos los derechos reservados. Los perfiles del aminocido de los carotenoproteins extrados de basura fermentada y no fermentada del camarn eran analizados. Los carotenoproteins fermentados fueron hidrolizados con una proteasa y una combinacin de una proteasa y de una lipasa. Los aminocidos esenciales en carotenoproteins fermentados y no fermentados eran los 49% y los 47%, respectivamente, con respecto a los aminocidos totales. La hidrlisis ms alta del carotenoprotein (900 y 66 mg/g de la protena soluble y los carotenoides totales, respectivamente) fueron obtenidos por una combinacin del prote- 15

Armenta, qumica del I. Guerrero-Legarreta /Food 112 (2009) 310-315 315

Introduccin Carotenoproteins es los complejos estables en los cuales los carotenoides estn limitados a una lipoprotena de alta densidad (Lakshman y Okoh, 1993). Entre este protena-pigmento los complejos son la astaxantina (3,30dihydroxy-b, b-carotene-4,40-dione), dando el azul a los colores verdes en los crustceos (Zagalsky, Eliopoulos, y Findlay, 1990). La astaxantina en crustceos se esterifica sobre todo a los cidos grasos, por ejemplo, Guillou, Khalil, y Adambounou (1995) divulgaron que en el ensilaje intil del camarn (borealis de Pandalus), la astaxantina est encontrada como el dister, el monoster y formas libres (el 76%, el 20% y el 4%, respectivamente, concerniente a astaxantina total). La astaxantina tambin produce un color rojo-anaranjado en crustceos cocinados porque haba sido separada totalmente o en parte de la mitad de la protena (Schiedt, Bischof, Glinz, y Packer, 1993). La astaxantina es una xantofila usada principalmente para proporcionar el color rojo-anaranjado a los msculos de los salmones producidos por la acuacultura (Meyers, 1994). Los salmnidos no pueden sintetizar astaxantina, as la adquieren de fuentes externas tales como microalgas o dieta agregada con los pigmentos (Lorenz y Cysewski, 2000; Shahidi y Synowiecki, 1991). La demanda para las fuentes naturales de astaxantina ha estado creciendo debido a las consideraciones de la salud sobre el uso de la astaxantina sinttica (Lorenz y Cysewski, 2000; Meyers, 1994). Por otra parte, debido al color rojo-anaranjado intenso y a la carencia de la astaxantina
* Autor correspondiente. Tel./fax: +1 902 480 3241. Email address: rarmenta@ocean-nutrition.com (R.E. Armenta).

de reacciones alrgicas a su forma natural, este carotenoide tiene consideracin para los usos cosmticos (Arad y Yaron, 1992; Oshima, 1998). Adems, la astaxantina se utiliza como suplemento natural para la consumicin humana debido a su capacidad antioxidante, aproximadamente 10 veces ms arriba que otros carotenoides tales como zeaxantina, lutena, cantaxantina y b-caroteno, y 500 veces ms arriba que el atocopherol (Shimidzu, 1996). Nur-E-Borhan, Okada, Watabe, y Yamaguchi (1995) demostraron que la astaxantina es el carotenoide principal presente en carotenoprotein del camarn. Carotenoproteins del kDa 120 (Monodon) de Litopenaeus (Nur-E-Borhan y otros, 1995), kDa 280 (Litopenaeus japonicus) (Muriana, Ruz-Gutirrez, Gallardo-Guerrero, y Mnguez-Mosquera, 1993), y kDa 265 (vannamei) de Litopenaeus (ArmentaLpez, Guerrero, y Huerta, 2002) se han divulgado de camarn. Los estudios anteriores divulgaron el uso de las proteasas del infante de marina y del animal de tierra a los carotenoproteins del extracto de la basura crustcea, recuperando el casi 80% de protena total y los carotenoides de basura del camarn cuando los trypsins de fuentes bovinas, porcinas y del bacalao fueron utilizados (Cano-Lpez, Simpson, y Haard, 1987; Simpson y Haard, 1985). Por otra parte, los resultados similares fueron obtenidos cuando las proteasas microbianas fueron utilizadas (Armenta-Lpez y otros, 2002). As, las protenas de la basura del camarn se pueden hidrolizar usar las proteasas y la recuperacin del hidrolizado de la astaxantina y de la protena puede ser factible (Gildberg y Stenberg, 2001). En lo referente al perfil del aminocido de los carotenoproteins Cremades y otros (2003), divulgado que un carotenoprotein aislado del cido lctico ferment los cangrejos (usar la tensin A3 del paracasei del lactobacilo)

-8146/$ - ver la materia delantera Elsevier Ltd 2008. Todos los derechos reservados. doi:10.1016/j.foodchem.2008.05.075

tena un alto contenido de los aminocidos esenciales (el 47% concerniente a los aminocidos totales) que sugeran que esta protena se puede utilizar para preparar las dietas para los pacientes humanos que sufren enfermedades tales como sndrome de la cncer-anorexia-caquexia y falta renal. Puesto que el color rojo-anaranjado de la astaxantina aumenta mientras que se separa de la mitad de la protena (Armenta-Lpez y otros, 2002; Guillou y otros, 1995; Schiedt y otros, 1993), una astaxantina relativamente sin protena producida por la hidrlisis enzimtica de carotenoproteins puede estar de inters para los usos comerciales por ejemplo para la cultura de color salmn (Lorenz y Cysewski, 2000; Meyers, 1994) y para el ingrediente de los productos naturales de la salud (Arad y Yaron, 1992; Oshima, 1998). Por lo tanto, la puntera de este trabajo era realzar la produccin de astaxantina y de protena soluble con la hidrlisis de carotenoproteins de la basura del camarn usar una proteasa comercial, y determinar un tratamiento enzimtico nuevo que combin una proteasa con una lipasa. Adems, este estudio apunt estudiar el contenido de aminocido del cido lctico fermentado y carotenoproteins no fermentados del camarn. 2. Materiales y mtodos El camarn que procesaba descartes fue obtenido del vannamei de Litopenaeus, cogido en el golfo de Mxico. Estos descartes fueron estabilizados por la fermentacin del cido lctico, usar el pentosaceus del Pediococcus que segua el proceso descrito por Armenta-Lpez y otros (2002) para producir los carotenoproteins liofilizados (fig. 1). Este carotenoprotein liofilizado fue sujetado a dos tratamientos enzimticos: (1) usar la proteasa comercial SavinaseTM (EC 3.4.21.62), y (2) una mezcla de SavinaseTM y de la lipasa comercial LipolaseMR (EC 3.1.1.3). Las enzimas fueron suministradas amablemente en la solucin por Novozymes (Franklinton, NC, los E.E.U.U.), produjeron de los microorganismos no patgenos (las Oryzae

del bacilo clausii y del aspergillus, para la proteasa y la lipasa, respectivamente) clasificados como no txicos, y usados en formulaciones detergentes para quitar la protena y manchas a base de aceite. Todos los reactivo eran de sigma Aldrich (St. Louis, MES, los E.E.U.U.) a menos que estuvieron indicados de otra manera. Hidrlisis de la proteasa La actividad enzimtica de la proteasa fue determinada por el mtodo de Kunitz que utiliza una solucin de la casena del 1% como substrato (Kunitz, 1947); la casena fue disuelta en 50 ml de un almacenador intermediario de 0.05 M Na3PO4 revolviendo la solucin para el minuto 20 en una temperatura de ebullicin en un bao mara; el pH fue ajustado a 7. nueve mililitros del substrato fue agregado a 9 tubos de prueba (triplicados de la muestra, del espacio en blanco, y del control) que fueron incubados en 40 C en un bao mara. El almacenador intermediario de la proteasa (0.15 ml) y de 0.05 M Na3PO4 (0.15 ml) fue puesto en tubos de la muestra y de prueba en blanco, respectivamente, e incubado para el minuto 20 en 40 C. Dos mililitros de una solucin cida tricloroactica del 2% fueron agregados a todos los tubos para parar la reaccin enzimtica. La enzima (0.15 ml) fue agregada a los tubos del control despus de la adicin del TCA. Despus de revolver, 1.5 ml fueron puestos en frascos y despus centrifugados en 252 g; la absorbencia del sobrenadante fue medida en 280 nanmetro. Los promedios de la absorbencia fueron utilizados para obtener la absorbencia del absorbance enzimtico del anlisis de la absorbencia enzimtica del del anlisis de la absorbencia de la muestra del control. Los resultados fueron interpolados en una curva de calibracin de la tirosina (r2 = 0.9992). Una unidad proteoltica fue definida como la cantidad de proteasa requerida para lanzar 1 lmol de la tirosina libre/del minuto en 40 C.

La absorbencia de la mezcla de reaccin (flotante) fue medida en k = 280 nanmetro para seguir la hidrlisis del carotenoprotein que aplicaba PU 5, 10 y 15 al sistema enzimtico siguiente: el magnesio 10 del carotenoprotein liofilizado fue colocado en los tubos de prueba tornillo-capsulados que contenan 10 ml el almacenador intermediario de fosfato de sodio de 0.05 M (1 almacenador intermediario del magnesio carotenoprotein/ml como

concentracin final). La hidrlisis enzimtica fue determinada en pH 6, 7, 8, 9 y 10, ajustando el almacenador intermediario de fosfato de sodio pH. El sistema enzimtico fue revuelto para 24 h en 40 C en 80 RPM. La protena soluble y los carotenoides totales eran analizados despus de 24 h de la hidrlisis. Hidrlisis de Carotenoprotein en el pH

Fig. 1. el proceso sigui para fermentar la basura del camarn y para extraer el carotenoprotein Armenta-Lpez y otros (2002). 312 R.E. Armenta, I. Guerrero-Legarreta/qumica alimenticia 112 (2009) 310-315

Unidades proteolticas Unidades proteolticas

pH 6 pH 7 pH 8 pH 9 pH 10
Fig. 2. protena soluble (a) y carotenoides totales (b) obtenidos de la hidrlisis enzimtica de carotenoproteins en diverso pH para 24 h en 40 C (n = 6).

8 fueron seguidos ms a fondo en 12 y 24 h analizando la protena soluble y los carotenoides totales. hidrlisis de la Proteasa-lipasa La actividad enzimtica para la lipasa era resuelta despus del mtodo divulgado por Kiran, Hari, Suresh, Karanth, y Divakar (2000) usando una emulsin de la tributirina en almacenador intermediario de fosfato como el substrato de la lipasa. Una unidad lipoltica fue descrita como la cantidad de lipasa requerida para producir 1 lmol del cido butrico/del minuto en 40 C. Cuatro tratamientos de la proteasa-lipasa en 15 fijos PU, fueron probados (PU 15:0 LU, PU 15:5 LU, PU 15:PU 10 LU y 15:15 LU) en pH 8 y 40 C para 24 h, analizando la protena soluble y los carotenoides totales en 12 y 24 H. Los tratamientos enzimticos de la proteasa y de la proteasa-lipasa fueron comparados a los controles (tratamiento sin la proteasa o la proteasa-lipasa agregada). Protena soluble y carotenoides totales

Las formas de monoster, de dister y de astaxantina libre en supernatants fueron separadas por el TLC segn Sachindra y otros (2005), donde los puntos que correspondan a cada forma de la astaxantina fueron desechados-apagado la placa desarrollada TLC, suspendidos en acetona, filtrados y concentrados. Este concentrado, disuelto en ter de petrleo, fue purificado dos veces por el TLC. El estndar libre de la astaxantina (suministrado amablemente por Roche, Basilea, Suiza), y el monoster y el dister preparados TLC de la astaxantina, fueron utilizados para la identificacin mxima por cromatografa lquida del alto rendimiento con el detector de array de diodos (HPLC-DAD). Supernatants de reacciones enzimticas era analizado por HPLC-DAD para determinar los carotenoides totales en relacin con del porcentaje de la astaxantina medidos espectrofotomtrico. Un sistema de la CLAR de las aguas fue cabido con la simetra C18 (Milford, mA, los E.E.U.U.) del agua de la columna y de la pre-columna, y una fase mvil de acetonitrilo/de cloroformo/de metanol/de agua/del cido propinico (71:22:4:2:1 por el volumen) fue utilizado bajo condiciones isocratic con un flujo de 1 ml Min.

Perfiles del aminocido de carotenoproteins La protena soluble (mg/g del carotenoprotein) era resuelta usar el mtodo divulgado por Peterson (1977) que las aplicaciones una curva de calibracin del seroalbumin (0-300 mg/l). Un mililitro del reactivo A (hecha de partes iguales de agua destilada, de la solucin del cobre-tartrato-carbonato, de la solucin del 10% del sulfato dodecyl de sodio, y de 0.8 soluciones del NaOH de N) fue agregado a las muestras, o a la referencia del seroalbumin, y reaccion para el minuto 10 en 25 C; el reactivo B (0.5 ml de 1:1 diluido reactivo del FolinCiocalteu con agua destilada) fue agregado y las muestras vortexed. Las muestras fueron colocadas en la oscuridad para el minuto 30 en 25 C y la absorbencia fue medida en 750 nanmetro. la solucin del Tartrato-carbonato era una mezcla de dos soluciones: 12.5 g de Na2CO3 disuelto en 62.5 ml de agua destilada, y 0.125 g de CuSO4 y 0.25 g del tartrato del potasio fue disuelto en 62.5 ml de agua destilada. Las concentraciones totales del carotenoide (mg/g del carotenoprotein) eran analizadas usar el mtodo espectrofotomtrico divulgado por Armenta, Burja, Radianingtyas, y la carretilla (2006) y Sachindra, Bhaskar, y Mahendrakar (2005), que utiliza la frmula siguiente:
Extracto total

DF del A 477nm V del carotenoidmg=g Muestra 1000 del 0:2 W

El contenido de aminocido en cido lctico ferment y los carotenoproteins no fermentados eran analizados en un modelo 6300 de Beckman del analizador del aminocido (Palo Alto, CA, los E.E.U.U.) con los almacenadores intermediarios E, F y D, reactivo de Beckman de la ninhidrina diluido con el almacenador intermediario desionizado del agua, y de regeneracin de Beckman. Todos los almacenadores intermediarios fueron almacenados en la Pre-hidrlisis de 4 C. para el anlisis de la cistena y de la metionina, tan bien como todos los procedimientos de la hidrlisis fueron realizados como descrito por Gehrke, pared, Absheer, Kaiser, y Zumwalt (1985). Las muestras fueron hidrolizadas con el cido clorhdrico, y el NaOH. Las muestras fueron preparadas para la hidrlisis de cido mezclando el carotenoprotein liofilizado magnesio 25 con 12.5 ml 6 de cido clorhdrico de N en tubos de la hidrlisis con los tapones de tuerca del Teflon. El aire fue quitado de la solucin purgando del nitrgeno, colocando los tubos en un bao ultrasnico. La hidrlisis fue realizada en 110 C para 24 h, muestras despus fue liofilizada, disuelta en el almacenador intermediario de la dilusin de 5 ml (0.2 citratos de sodio de N, pH 2.2) y filtrada a travs de 0.45 membranas del lm (Gelman Acrodisc GHP No. 13). Las muestras filtradas fueron inyectadas al analizador del aminocido. Pues el triptfano se destruye casi enteramente durante la hidrlisis de cido, su cuantificacin fue realizada en condiciones bsicas. El procedimiento era igual que el mtodo cido, pero el NaOH de 6 N era en lugar de otro usado cido clorhdrico de 6 N. La determinacin de la cistena y de la metionina de muestras fue realizada tratndolas primero con el cido perfrmico, antes de la hidrlisis de la protena, para formar los derivados cidos (el cido cstico y sulfon la metionina, respectivamente). Veinticinco miligramos liofilizados de carotenoprotein en tubos de prueba

donde est la absorbencia A477 nanmetro en 477 nanmetro; Vextract es el volumen del extracto; El DF es el factor de la dilusin; 0.2 es el valor de A477 nanmetro de 1 estndar de la astaxantina de lg/ml; y Wsample es el peso de la muestra. Anlisis del TLC y de la CLAR de la astaxantina

Armenta, qumica del I. Guerrero-Legarreta /Food 112 (2009) 310-315 315

de la hidrlisis fueron puestos en un bao de hielo. El cido perfrmico fue preparado mezclando 1 ml el 30% H2O2 y 9 ml de cido frmico del 88%; la mezcla fue dejada la situacin para 1 h en el sitio de la temperatura. Antes de usar, la mezcla fue enfriada en un bao de hielo; 10 ml de cido perfrmico fro fueron agregados con suavemente el revolvimiento a las muestras del carotenoprotein, y refrigerados en 0 C para 14 H. Un mililitro del fro el 98% HBr fue agregado mientras que lentamente revolva, y los tubos colocados en el hielo para 5 el minuto, entonces situacin izquierda en la temperatura ambiente. Fue liofilizado e hidrolizado por el procedimiento del cido clorhdrico, descrito ya. Todos los tratamientos enzimticos fueron replegados seis veces. Los datos obtenidos para la protena soluble y las concentraciones totales del carotenoide fueron sujetados al anlisis de variacin y prueba mltiple de la gama de Duncan. Las comparaciones entre el contenido de aminocido del carotenoprotein de las basuras fermentadas y no fermentadas del camarn fueron realizadas usar t-pruebas del estudiante. Las diferencias entre los medios individuales eran juzgadas para ser significativas en p < 0.05. Los anlisis estadsticos fueron realizados usar un paquete de SPSS, versin 13.0 (Chicago, IL, los E.E.U.U.). 3. Resultados y discusin Hidrlisis de la protena SavinaseTM fue elegido para este estudio debido a, segn las indicaciones de un estudio anterior (Armenta-Lpez y otros, 2002), de su alta eficacia en hidrlisis del carotenoprotein, produciendo mg/g >700 y >35 de la protena soluble y de carotenoides totales, respectivamente. Considerando que el mecanismo de la oxidacin del carotenoide est asociado a las reacciones no saturadas de los cidos grasos, ocurriendo rpido alrededor 0 C, la temperatura enzimtica del anlisis era fija en 40 C porque en esta temperatura una oxidacin mnima del carotenoide ocurre (Simpson y Haard, 1985). La fig. 2 demuestra una hidrlisis ms alta del carotenoprotein (p < 0.05) en pH 8, produciendo hasta 852 mg/g de la protena soluble y 48 mg/g de los carotenoides totales cuando el tratamiento de 15 unidades proteolticas para 24 h en pH 8 era aplicado. Este tratamiento (la PU 15 para 24 h, pH 8) tambin rinde la hasta protena ms soluble del 6% y del 14% y los carotenoides totales, respectivamente, con respecto a la misma PU y tiempo, pero en el tratamiento del pH 7. Por otra parte, la PU 15 para 24 h, pH 8 produjo la hasta protena ms soluble del 62% y del 119% y los carotenoides totales, respectivamente, con respecto al control (ninguna enzima agregada). No se observ ninguna diferencia significativa (p < 0.05) con respecto a la hidrlisis entre pH 8, 9 y 10

(fig. 2). La hidrlisis ptima de SavinaseTM en detergentes ocurre en un pH 88.5 (Novozymes). El cuadro 1 demuestra que con PU 15, en 12 o 24 h, la alta hidrlisis del carotenoprotein fue observada (mg/g >840 y >46 de la protena y de los carotenoides solubles, respectivamente, p < 0.05). No se observ ningunas diferencias significativas entre 12 h y 24 h de la hidrlisis (p < 0.05) dentro de cada tratamiento enzimtico. Por lo tanto, el tratamiento ms rpido y ms eficaz solicitaba el tratamiento de 15 PARA ARRIBA 12 h en un pH 8. Las concentraciones solubles de la protena eran ms altas que sas encontradas en estudios anteriores en la hidrlisis de la basura del camarn, divulgando 560 mg/g con tripsina del bacalao en 4 C para 48 h, el mg/g del pH 7.7 (Cano-Lpez y otros, 1987), y 800 usar las proteasas y la tripsina bacterianas (Simpson y Haard, 1985). Adems, usar SavinaseTM en carotenoproteins fermentados, la produccin de protena soluble aument en el 60% con respecto a la hidrlisis con las proteasas extradas de las basuras del camarn (Armenta-Lpez y otros, 2002). Por lo tanto, para obtener una hidrlisis extensa del carotenoprotein, nuestros resultados sugieren el usar del tratamiento que incluye PU 15 para 12 h en 40 C, pH 8. La alta hidrlisis del carotenoprotein alcanzada con SavinaseTM (852 y 48 mg/g de la protena soluble y de carotenoides totales, respectivamente) se puede relacionar con la capacidad de esta enzima de atacar pro-

Cuadro 1 Protena soluble (mg/g) y carotenoides totales (mg/g) obtenidos de la protelisis de carotenoproteins en pH 8 para 0, 12 y 24 h en el TAXI 40 Tratamiento PUC 0 0 0 5 5 5 10 10 10 15 15 15
A B C

Tiempo (h) 0 12 24 0 12 24 0 12 24 0 12 24

Protena soluble 524.88 5.36a 529.11 13.21a 525.78 12.85a 529.11 12.14a 703.90 9.54b 729.60 14.70c 530.30 11.32a 740.80 7.96c 772.53 11.00d 526.65 8.75a 843.66 9.20e 852.22 8.90e

Carotenoides totales 21.35 a 1.40 22.14 0.92a 22.00 1.90a 22.90 0.84a 33.70 1.74b 37.30 c 1.24 21.62 0.79 a 40.90 1.52d 42.50 0.86d 21.08 1.28a 46.30 1.05e 48.18 0.93 e

Datos expresados como medios de seis desviaciones estndar del de las rplicas. Diversas letras dentro de una columna denotan diferencias significativas (p < 0.05). Unidades proteolticas.

Tratamiento PUC 0 0 0 15 15 LUD 0 0 0 0 0 Tiempo (h) 0 12 24 0 12 Protena soluble 523.84 7.25a 528.00 14.55a 520.82 18.40a 524.04 17.80a 839.66 9.95b Carotenoides totales 22.00 a 1.02 22.95 1.85a 21.90 1.70a 22.30 1.68a 44.77 2.08b

15 15 15 15 15 15 15 15 15 15

0 5 5 5 10 10 10 15 15 15

24 0 12 24 0 12 24 0 12 24

844.28 8.80b 520.62 14.00a 841.18 8.10b 847.00 15.26b 526.43 13.89a 895.07 16.70c 900.72 13.60c 525.00 11.03a 903.61 10.80c 896.65 10.70c

47.82 b 1.55 22.12 1.10a 49.49 1.00b 55.87 1.29c 22.15 0.95a 65.08 0.97d 66.11 d 1.04 22.48 1.79a 64.20 2.10d 66.24 0.88d

314 R.E. Armenta, I. Guerrero-Legarreta/qumica alimenticia 112 (2009) 310-315

hidrolizado. Adems, como la astaxantina crustcea se esterifica sobre todo a los cidos grasos (Guillou y otros, 1995), la hidrlisis del enlace de ster por las lipasas puede mejorar la extraccin libre de la astaxantina (astaxantina sin los lpidos esterificados). Potencialmente, la astaxantina se puede limitar a otras molculas por los enlaces del imina y de ster (fig. 3). Sin embargo, no todos los enlaces pueden ocurrir simultneamente debido al obstculo estrico. La astaxantina tena una absorcin de la luz mxima en 474 nanmetro, y tiempo de retencin de 5 minutos en el anlisis de la CLAR; era el

complejos del tein-lpido. Debido a esta caracterstica, SavinaseTM se utilizatively (p < 0.05, cuadro 2). En lo referente al uso de una proteasa solamente (PU 15 para 12 o 24 h), la PU 15:Tratamiento de 10 LU creciente hasta la comercialmente en los detergentes biodegradables (Novozymes). protena soluble del 6% y del 38% y el contenido total del carotenoide, respectivamente. Tambin, el tratamiento de la proteasa-lipasa creciente hasta hidrlisis de la Proteasa-lipasa la protena soluble del 71% y del 200% y la concentracin total del carotenoide, respectivamente, con respecto al control. Mientras que una proteasa fue utilizada junto con una lipasa, los La hidrlisis del carotenoprotein creciente cuando una proteasa junto con una lipasa fue utilizada, probablemente porque la lipasa solubiliz los lpidos contenidos dentro de la mitad de la lipoprotena del complejo del carotenoprotein. Esto pudo haber facilitado el acceso de la proteasa a las subunidades de la apoprotena que forman carotenoproteins. Por lo tanto, Cuadro 2 porque cada unidad de la apoprotena contiene hasta dos molculas de la Protena soluble (mg/g) y carotenoides totales (mg/g) obtenidos de la lipolisis de la protelisis deastaxantina (Nur-E-Borhan y otros, 1995; Schiedt y otros, 1993), produccin carotenoproteins en pH 8 para 0, 12 y 24 h en el TAXI 40 total del carotenoide creciente como la protena estaba ms eficientemente aproximadamente 90% de los carotenoides totales demostrados en fig. 2, y los cuadros 1 y 2. Fue encontrado que dentro de este 90% de astaxantina, los aproximadamente 50%, los 30% y los 20% eran dister, monoster y formas libres de astaxantina, respectivamente. Un estudio anterior divulg que la astaxantina es el carotenoide principal (el >80%, incluyendo el dister, el monoster y las formas libres) en los carotenoproteins (Nur-E-Borhan y otros, 1995; Zagalsky, Eliopoulos, y Findlay, 1990). Guillou y otros (1995) divulg eso adentro carotenoproteins fueron hidrolizados seriamente con los tratamientos incluyendo PU 15:PU 15 LU y 15:10 LU para 12 o 24 h, produciendo 900 y 66 mg/g de la protena soluble y de carotenoides totales, respecDatos expresados como medios de seis desviaciones estndar del de las rplicas. Diversas letras de B dentro de una columna denotan diferencia significativa (p < 0.05). Unidades proteolticas de C. D Unidades lipolticas.

el ensilaje intil del camarn (borealis del P.), astaxantina se encuentra como el dister del 76%, el monoster del 20% y formas libres del 4%. La diferencia con nuestros resultados se puede atribuir al hecho de que utilizamos un diverso camarn (vannamei de Litopenaeus) que procesaba descarte.

Fig. 3. atascamientos qumicos posibles de la astaxantina con otras molculas en camarn (no todos los atascamientos pueden ocurrir simultneamente debido al obstculo estrico). E Cuadro 3 Aminocidos no esenciales. Perfiles del aminocido de los carotenoproteins del camarn (mg/g del carotenoprotein) AB Aminocido Carotenoprotein no fermentado Carotenoprotein fermentado Alanina Arginina cido asprtico Cistena cido glutmico Glicocola HistidineC IsoleucineC LeucineC LysineC MethionineC PhenylalanineC Prolina Serina Taurino ThreonineC TryptophanC Tirosina ValineC Aminocidos totales Suma EAAD Suma NEAAE
A B C D

45.4 0.7a 58.0 0.6b 129.5 1.5a 14.0 0.5a 142.6 1.4a 36.2 0.5b 23.0 0.3a 40.2 0.6a 112.3 1.4a 99.9 0.8a 20.2 0.3a 42.6 0.4a 25.3 0.3a 32.3 0.3a 1.9 0.2a 38.4 0.3a 19.4 0.2a 21.7 0.2a 47.0 0.5b 949.9 11.0a 443.0 4.8a 506.9 6.2a

45.0 0.6a 46.2 0.5a 126.7 1.4a 13.0 0.5a 142.2 1.6a 31.2 0.4 a 32.1 0.4b 39.8 0.5a 110.1 1.2a 99.2 0.7a 20.4 0.3 a 51.3 0.6b 25.6 0.3a 40.0 0.4b 2.1 0.1a 55.7 0.4b 36.0 0.3b 35.5 0.3b 37.2 0.4a 989.3 b 10.9 481.8 4.8 b 507.5 6.1 a

Perfiles del aminocido de carotenoproteins Ambos carotenoproteins, cido lctico fermentaron y no fermentado, eran ricos en cidos asprticos y glutmicos, y los aminocidos esenciales leucina y los mg/g de la lisina (128, 142, 111 y 100, respectivamente) (el cuadro 3). Los carotenoproteins fermentados eran una fuente significativa (p < 0.05) de los 56 y 36 mg/g de los aminocidos esenciales histidina, de la fenilalanina, de la treonina y del triptfano (32, 51, respectivamente). La valina del aminocido esencial fue encontrada en una concentracin ms alta (47 mg/g) en carotenoprotein de la basura no fermentada del camarn. Los aminocidos no esenciales serina y tirosina fueron encontrados en concentraciones ms altas en el carotenoprotein de las basuras fermentadas (40 y 36 mg/g, respectivamente), mientras que la glicocola estaba en una concentracin ms alta (36 mg/g) en el carotenoprotein intil no fermentado (cuadro 3). La concentracin ms alta de aminocidos esenciales tales como histidina, fenilalanina, treonina y triptfano en los carotenoproteins obtenidos de basuras fermentadas, era posiblemente debido a la ruina de las bacterias del cido lctico, el arrancador usado para la fermentacin del camarn. La cantidad total de aminocidos esenciales encontrados en carotenoproteins fermentados era el 49% de aminocidos totales. Esta cantidad estuvo de acuerdo con sa divulgada por Cremades y otros (2003) en un estudio con los carotenoproteins obtenidos de basura fermentada de los cangrejos.

Datos expresados como medios de tres desviaciones estndar del de las rplicas. Diversas letras dentro de una fila denotan diferencias significativas (p < 0.05). Aminocidos esenciales en adultos. Aminocidos esenciales.

Armenta, qumica del I. Guerrero-Legarreta /Food 112 (2009) 310-315 315

Puesto que la astaxantina aumenta su color rojo-anaranjado mientras que se separa de la mitad de la protena (Armenta-Lpez y otros, 2002; Guillou y otros, 1995; Schiedt y otros, 1993), el partir enzimtico de la astaxantina y mitades de la protena de carotenoproteins puede afectar a las aplicaciones comerciales de este carotenoide. Por ejemplo, la astaxantina natural relativamente sin protena puede estar de inters para la cultura de color salmn debido a las consideraciones de la salud sobre el uso de la astaxantina sinttica (Meyers, 1994; Lorenz y Cysewski, 2000). Adems, la astaxantina natural puede estar de inters para su uso en los productos naturales de la salud debido a su carencia de reacciones alrgicas (Arad y Yaron, 1992; Oshima, 1998) y su alta capacidad antioxidante (Shimidzu, 1996). El color rojo-anaranjado se convirti por el lmite de la astaxantina a una cantidad reducida de la protena puede tambin estar de inters para el uso en cosmticos (Arad y Yaron, 1992; Oshima, 1998). As, la alta recuperacin de la astaxantina, junto con la recuperacin de protena alto soluble, de basuras fermentadas del camarn puede agregar valor a la industria del camarn. Nuestro estudio encontr que la astaxantina estaba en las formas de dister del 50%, el monoster del 30% y la astaxantina libre del 10%. Los cidos grasos tales como cido eicosapentaenoic y cido docosahexaenoic se podran encontrar en la astaxantina esterificada de la basura del camarn (Guillou y otros, 1995), que podra aumentar el valor alimenticio del pigmento. Finalmente, debido al alto contenido de aminocidos esenciales en el carotenoprotein fermentado del cido lctico, estes 3ultimo se pueden considerar como fuente excelente de la protena a los productos alimenticios y forrajeros. Referencias
Arad, S.M., y Yaron, A. (1992). Pigmentos naturales de las microalgas rojas para el uso en alimentos y cosmticos. Tendencias en la ciencia de la alimentacin y la tecnologa, 3, 9297. Armenta, R.E., Burja, A., Radianingtyas, H., y carretilla, C.J. (2006). El gravamen crtico de las varias tcnicas para la extraccin de carotenoides y la coenzima Q10 del Thraustochytrid filtran ONC-T18. Diario de la qumica alimenticia agrcola y, 54, 9752-9758. Armenta-Lpez, R., Guerrero, I., y Huerta, S. (2002). Extraccin de la astaxantina de la basura del camarn por la fermentacin lctica y la hidrlisis enzimtica del complejo del carotenoprotein. Diario de la ciencia de la alimentacin, 67, 1002-1006. Cano-Lpez, A., Simpson, B.K., y Haard, Terranova. (1987). Extraccin del carotenoprotein de basuras de proceso del camarn con la ayuda de la tripsina del bacalao atlntico. Diario de la ciencia de la alimentacin, 52, 503-506. Cremades, O., Parrado, J., Alvarez-Osorio, M., Jover, M., Collantes de Teran, L., Gutirrez, J., y otros (2003). Aislamiento y caracterizacin de carotenoproteins de los cangrejos (clarkii de Procambarus). Qumica alimenticia, 82, 559-566. Gehrke, C.W., pared, L.L., Absheer, J.S., Kaiser, FE., y Zumwalt, R.W. (1985). Preparacin de la muestra para la cromatografa de aminocidos: Hidrlisis de cido de protenas. Diario de la asociacin de los qumicos analticos oficiales, 68 (5), 811-821. Gildberg, A., y Stenberg, E. (2001). Un nuevo proceso para la utilizacin avanzada de la basura del camarn. Bioqumica de proceso, 36, 809-812. Guillou, A., Khalil, M., y Adambounou, L. (1995). Efectos de la preservacin del ensilaje en formas de la astaxantina y perfiles de los cidos grasos de la basura procesada del camarn (borealis del P.). Acuacultura, 130, 351-360. Kiran, K.R., Hari, S., Suresh, C.V., Karanth, N.G., y Divakar, S. (2000). Un mtodo de la esterificacin para la determinacin de la actividad de la lipasa. Letras de la biotecnologa, 22, 1511-1514. Kunitz, M. (1947). Caractersticas generales del inhibidor II. cristalino de la tripsina de la soja. El diario de la fisiologa general, 30, 291-310. Lakshman, M.R., y Okoh, C. (1993). complejos de la Carotenoide-protena. Mtodos en enzimologa, 214, 74-86. Lorenz, R.T., y Cysewski, R. (2000). Potencial comercial para las microalgas de Haematococcus como fuente natural de astaxantina. Tendencias en biotecnologa, 18, 160-167. Meyers, S.P. (1994). Progresos en acuacultura del mundo, formulaciones de la alimentacin, y el papel de carotenoides. Qumica aplicada pura, 66, 1069-1076. Muriana, F.J., Ruz-Gutirrez, V., Gallardo-Guerrero, L., y Mnguez-Mosquera, M. (1993). Un estudio de los lpidos y del carotenoprotein en la gamba, Penaeus japonicus. El diario de la bioqumica, 114, 223-229. Nur-E-Borhan, S.A., Okada, S., Watabe, S., y Yamaguchi, K. (1995). Carotenoproteins del exoesqueleto y del epitelio muscular del monodon negro de Penaeus de la gamba del tigre. Ciencia de las industrias pesqueras, 61, 337-343. Oshima, T. (1998). Recuperacin y uso de los productos de Nutraceutical de recursos de marina. Tecnologa alimenticia, 52, 50-54. Peterson, G.L. (1977). Una simplificacin del anlisis de la protena de Lowry y otros que es ms generalmente aplicable. Bioqumica analtica, 83, 346-356.

Sachindra, N., Bhaskar, N., y Mahendrakar, N. (2005). Carotenoides en diversos componentes del cuerpo de camarones indios. Diario de la ciencia de la agricultura del alimento, 85, 167172. Schiedt, K., Bischof, S., Glinz, E., y Packer, L. (1993). Metabolismo de carotenoides y racemizacin in vivo de (3S, 30S) - astaxantina en el Penaeus crustceo. Mtodos en enzimologa, 214, 148-168. Shahidi, F., y Synowiecki, J. (1991). Aislamiento y caracterizacin de alimentos y de productos de valor aadido del cangrejo de la nieve (opilio de Chinoecetes) y del camarn (borealis del P.) que procesa descartes. Diario de la qumica alimenticia agrcola y, 39, 1527-1532. Shimidzu, N. (1996). Carotenoides como extintores del oxgeno de la camiseta en mamferos marinos. Ciencia de las industrias pesqueras, 62, 134-137. Simpson, B.K., y Haard, H.F. (1985). El uso de enzimas proteolticas de extraer carotenoproteins de basuras del camarn. Diario de la bioqumica aplicada, 7, 212-217. Zagalsky, P.F., Eliopoulos, E.E., y Findlay, J.B. (1990). La arquitectura de carotenoproteins invertebrados. Parte comparativa B de la bioqumica y de la fisiologa: Bioqumica y biologa molecular, 97, 1-18.