ESCUELA NACIONAL DE ANTROPOLOGA E HISTORIA LABORATORIO BIOQUMICA PRCTICA 1: TRANSPORTE DE MEMBRANA

INTRODUCCIN La existencia de la membrana plasmtica que rodea las clulas, funciona como una especie de "muro comunicante" que separa dos compartimentos, el extracelular y el intracelular. Esta separacin trae como consecuencia que las diferentes molculas e iones se distribuyan de manera asimtrica estableciendo diferenciales de concentracin y cargas elctricas que promueven el intercambio entre ambos compartimentos. Estas molculas e iones, pueden atravesar las membranas biolgicas mediante diferentes mecanismos, dependiendo de la naturaleza polar, el tamao de ellas y la diferencia de concentracin. Dentro del grupo de molculas que pueden atravesar las membranas, el paso de agua es muy importante para las clulas, porque utiliza un mecanismo particular que puede contribuir a disminuir diferencias extremas en las concentraciones de las sustancias disueltas entre los compartimentos, permitir la adaptacin celular al medio ambiente o causar la destruccin de la misma. Este flujo de agua y/o de diferentes sustancias puede traer como consecuencia cambios en la morfologa de clula que pueden ser apreciables al microscopio y que el estudiante aprender a identificar en esta prctica. Es por esto, que antes de iniciar este laboratorio los alumnos debern consultar con anterioridad acerca de los diferentes mecanismos de transportes de molculas por las membranas con permeabilidad selectiva. OBJETIVO GENERAL: Comparar los procesos fsicos de difusin, osmosis y dilisis con el proceso fisiolgico mediante el cual las molculas se transportan a travs de las membranas celulares. OBJETIVOS ESPECFICOS Visualizar y diferenciar los fenmenos de smosis y dilisis en clulas y modelos celulares Demostrar la importancia que tienen las concentraciones de distintas soluciones en el mantenimiento de la integridad de las clulas vegetales y animales. MATERIALES: Microscopios Porta y cubre objetos Gradilla para tubos de ensayo 5 Tubos de ensayo 2 pipetas Pasteur Navaja de un solo filo SOLUCIONES Permanganato de potasio Solucin de NaCl al 6 % Solucin fisiolgica (NaCl al 0.9%) Rojo neutro en buffer de fosfatos Agua destilada *MATERIAL proporcionado por el estudiante, la sangre la llevar la maestra. MATERIAL BIOLGICO Sangre de animal Hojas de lirio* Cebolla* Hojas de elodea*

PROCEDIMIENTO: Difusin: Coloque en tres tubos de ensayo 5 ml de agua destilada, a igual temperatura y numrelos. Agregue en cada tubo un nmero de gotas de permanganato de potasio en la siguiente forma: Tubo No. 1 = 1 gota Tubo No. 2 = 3 gotas Tubo No. 3 = 5 gotas Mida el tiempo de difusin en cada caso. Para ello anote el tiempo inicial cuando se agreg el colorante y el tiempo final en que se difundi totalmente. La diferencia entre ambos es el tiempo de difusin. Haga una grfica en papel milimtrico de concentracin (# de gotas) vs. tiempo de difusin. smosis: a. Deposite una hojita de Elodea en un portaobjeto, adicinele tres gotas de solucin hipotnica (agua destilada), pngale el cubreobjeto y observe con menor y mayor aumento. Dibuje. Observa algn movimiento en los cloroplastos? Qu nombre recibe este fenmeno? Segn el concepto de smosis en qu sentido se debe difundir el agua? b. Deposite una hojita de Elodea en un porta objeto y agrguele tres gotas de una solucin hipertnica de cloruro de sodio (NaC al 6 %), pngale el cubre objeto y observe con menor y mayor aumento. Haga un esquema de lo observado. Qu cambios se presentan en el citoplasma de las clulas que usted observa? Qu nombre recibe este fenmeno? c. Deposite un pedacito de la epidermis de cebolla y agrguele 3 gotas de una solucin hipotnica (rojo neutro en buffer de fosfato), pngale un cubreobjetos y observe. d. Deposite un pedacito de la epidermis de cebolla y agrguele 3 gotas de una solucin hipertnica (NaCl al 6%) pngale un cubreobjetos y observe.

Plasmlisis: a. Extraiga con una navaja un pedacito de epidermis del envs de una hoja de lirio, trate que quede libre de clorofila. Cuidando que no se arrugue depostela en el portaobjeto y adicinele tres gotas de solucin hipotnica (agua destilada). Ponga el cubre objeto y observe. Dibuje b. Haga un nuevo montaje de epidermis de hoja de lirio, pero con una solucin hipertnica (NaCl al 6%). Observe y dibuje. En cul de las dos muestras, elodea y epidermis de hoja de lirio, se observa mejor el fenmeno de plasmlisis? Explique Por qu? c. Coloque una gotita de sangre en un porta objeto, agrguele unas gotas de suero fisiolgico 0.9%. Observe y dibuje Qu forma tienen las clulas? Siguiendo el procedimiento anterior observe gotas de sangre, pero con soluciones hipotnicas e hipertnicas respectivamente. Qu diferencias morfolgicas observ entre las clulas sanguneas ubicadas en las soluciones isotnicas, hipotnicas e hipertnicas? Interprete que sucede en cada una de las tres preparaciones sanguneas

CUESTIONARIO: S se vara la temperatura del agua en los tubos del apartado de difusin. 1.-Qu efecto tiene la temperatura sobre la velocidad de difusin? 2.-Cul es el efecto de la concentracin sobre la velocidad de difusin? 3.- Investigue la ley de difusin de Graham y la primera ley de Fick. 4.-Qu diferencia observ entre las clulas de elodea y la epidermis de lirio? 5.-Cmo se llaman las estructuras respiratorias que hacen parte del tejido de epidermis de lirio? 6.-Defina que son soluciones iso, hipo, e hipertnicas? 7.-Cmo se podra desplasmolizar una clula? 8.-Por qu no estalla una clula vegetal cuando se encuentra en un medio hipotnico? 9.-Qu es permeabilidad diferencial? 10.-Qu es presin osmtica? 11.-Qu es presin de turgencia? 12.-Por qu no estallan los glbulos rojos cuando estn circulando por nuestros vasos sanguneos? 13.-Qu es crenacin? 14.-Qu es homestasis? 15.-A qu se le llama transporte pasivo? 16.-En qu consiste el transporte activo y el facilitado? 17.-Cul es la diferencia entre smosis y dilisis? 18.-Cmo regula el organismo humano el mantenimiento de la concentracin de sales en la sangre? BIBLIOGRAFA Mathews, C. K., et. al. 2002. Bioqumica. Tercera edicin. Pearson Addison Wesley. McKee, T. et al., 2003. Bioqumica. Tercera edicin, McGraw-Hill Interamericana.

TAREA PREVIA (Se entrega el da de la prctica) PRCTICA: TIPOS DE TRANSPORTE DE MEMBRANA 1.-Realice un diagrama de flujo de la prctica. 2.-Haga esquemas de los fenmenos de turgencia, plasmlisis, crenacin y hemolisis observados en las clulas animales y vegetales. 3.-Realice un dibujo de las clulas epiteliales de la hoja de lirio y los estomas, explique la funcin de estas estructuras. 4.-Haga esquemas del fenmeno de smosis y difusin en la clula.