Enzimas Seminar

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NDICE
INTRODUCCIN------------------------------------------------------------------------------------------- 2 DESCUBRIMIENTO DE LAS ENZIMAS-------------------------------------------------------------- 3 CONCEPTO DE ENZIMA-------------------------------------------------------------------------------- 4 IMPORTANCIA--------------------------------------------------------------------------------------------- 4 ESTRUCTURA--------------------------------------------------------------------------------------------5
PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS------------------------------------------------------------------ 7 NOMENCLATURA Y CLASIFICACIN DE LAS ENZIMAS----------------------------------- 9 CMO FUNCIONAN LAS ENZIMAS----------------------------------------------------------------- 14 LA CINTICA ENZIMTICA ---------------------------------------------------------------------------- 21
REGULACIN DE LOS ENZIMAS--------------------------------------------------------------------- 32 PATOLOGAS---------------------------------------------------------------------------------------------BIBLIOGRAFA-------------------------------------------------------------------------------------------35 41
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INTRODUCCIN Hace un siglo se conocan solo unas cuantas enzimas, la mayor parte catalizaban la hidrlisis de los enlaces covalentes. Estas enzimas se identificaron mediante la adicin del sufijo-asa al nombre de la sustancia o del sustrato que hidrolizan. As las lipasas hidrolizan la grasa, la amilasa hidrolizan el almidn la proteasas la protenas si bien actualmente persisten Numerosos vestigios de tal terminologa, esta se encontr inadecuada al describirse, varias enzimas catalizadoras de reacciones diferentes en el mismo sustraa, por ejemplo, la oxidacin o la reduccin de una funcin de alcohol en un azcar. Si bien persiste el uso del sufijo-asa, hoy da los nombres de las enzimas enfatizan el tipo de reaccin que catalizan. Prcticamente, las enzimas catalizan todas las reacciones biolgicamente importantes. Muchas reas de la medicina de han visto notablemente beneficiada por la aplicacin del anlisis enzimtico: enfermedades como la galactocemia, los infartos de miocardio Las enfermedades seas, el cncer de prstata. La enfermedad heptica obstructiva y las distrofias musculares pueden citarse como por ejemplo clnicas comunes. La actividad enzimtica puede mostrarse elevado en ciertas enfermedades y estar disminuida en otras enzimas titulares y se hallan distribuidas de una forma sumamente organizada: Las clulas no son simples sacos de enzimas. Los productos de una reaccin enzimtica en un componente tisular pueden tener importantes efectos sobre un proceso enzimtico distinto. En otro componente de ese mismo tejido e incluso en un tejido diferente, por lo tanto, para una mejor comprensin de los mecanismos de desarrollo de las enfermedades, y de su tratamiento. Resulta importante conocer algo mas detallado de la distribucin de las enzimas dentro de las clulas. As como su qumica y sus funciones.
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I. DESCUBRIMIENTO DE LAS ENZIMAS Hasta finales del siglo XIX, estaba aceptado universalmente que los procesos de la vida eran el resultado directo de una fuerza vital y que ocurran exclusivamente en las clulas. En el verano de 1896, esta doctrina llamada vitalismo, parte de las ideas de la generacin espontnea, fue desacreditada por el experimento que dio origen al nacimiento de la Bioqumica. M Hahn, un cientfico alemn, trataba de separar protenas de las levaduras molindolas en un mortero con arena muy fina y tierra de diatomeas, que no es sino las frstula o envoltura de las diatomeas unos protoctistas muy bonitos. El extracto de levadura se filtraba en un pao muy fino, pero desafortunadamente para Hahn, era muy difcil de preservar. Hans Buchner, colega de Hahn le record que la fruta se conserva agregndole azcares, haciendo una mermelada; le sugiri agregar sacarosa al extracto de levaduras. El experimento lo realiz Eduard, hermano de Hans y que visitaba el laboratorio para experimentar precisamente con los extractos de levadura. Cuando agreg la sacarosa al extracto, observ que de la solucin emergan burbujas. Eduard concluy que la fermentacin, el proceso descrito por Louis Pasteur como la vida sin aire, estaba ocurriendo. Actualmente esta observacin tal vez no seria particularmente importante para nosotros, pero Buchner haba demostrado que los procesos de la vida (la fermentacin en este caso), podan ocurrir fuera de las clulas vivas. El fantasma posedo de la mquina viviente se haba exorcizado. La hiptesis de Buchner consisti en que la fermentacin resulta de la actividad de una enzima, que l llam zimasa. Actualmente llamamos a este proceso que realmente se lleva a cabo por 10 enzimas, gluclisis del griego glycos: dulce + lysis: ruptura. Por estas observaciones, Buchner recibi el premio Nobel de Qumica en 1907.Los sistemas vivientes estn formados por una enorme variedad de reacciones bioqumicas, la inmensa mayora de las cuales se llevan a cabo por entidades proteicas con actividad cataltica conocidas como enzimas. La enzimologa, en estudio de las enzimas. Virtualmente todas las reacciones en los seres vivos se llevan a cabo por enzimas, que son las protenas que catalizan a las reacciones qumicas, incrementando la velocidad a las cuales estas reacciones de manera natural ocurren, en el proceso las enzimas no resultan modificadas, es decir, el estado inicial de la enzima es igual al final. A pesar de la inmensa variedad de reacciones que son energticamente posibles en los seres vivos, las enzimas conducen a los reactivos, a menudo denominados substratos, en las vas metablicas de los seres vivos.
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II. CONCEPTO DE ENZIMA Las enzimas son molculas de protenas que tienen la capacidad de facilitar y acelerar las reacciones qumicas que tienen lugar en los tejidos vivos, disminuyendo el nivel de la "energa de activacin" propia de la reaccin. Se entiende por "energa de activacin" al valor de la energa que es necesario aplicar (en forma de calor, electricidad o radiacin) para que dos molculas determinadas colisionen y se produzca una reaccin qumica entre ellas. Generalmente, las enzimas se nombran aadiendo la terminacin "asa" a la raz del nombre de la sustancia sobre la que actan. Las enzimas no reaccionan qumicamente con las sustancias sobre las que actan (que se denominan sustrato), ni alteran el equilibrio de la reaccin. Solamente aumentan la velocidad con que estas se producen, actuando como catalizadores. La velocidad de las reacciones enzimticos dependen de la concentracin de la enzima, de la concentracin del sustrato (hasta un lmite) y de la temperatura y el PH del medio. Cada clula y cada tejido tienen su actividad propia, lo que comporta continuos cambios en su estado bioqumico, en la base de la cual estn las enzimas, que tienen el poder de catalizar, facilitar, y agilizar determinados procesos sintticos y analticos. Los propios genes son reguladores de la produccin de las enzimas; por tanto, genes y enzimas pueden considerados como las unidades fundamentales de la vida.
III. IMPORTANCIA. FACULTAD DE MEDICINA - E.A.P. MEDICINA HUMANA
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Las enzimas son polmeros biolgicos que catalizan mltiples procesos dinmicos, los cuales hacen posible la vida tal como se conoce. Como determinantes de la velocidad a la cual tienen lugar los eventos fisiolgicos, las enzimas tienen participacin importante en la salud y en la enfermedad. Gracias a sus acciones cuidadosamente coordinados, se logra la degradacin de los alimentos para suministrar energa y bloques estructurales, el ensamblaje de estos bloques en protenas, membranas y DNA codificante de la informacin gentica, as como el encausar la energa para producir el movimiento celular. Mientras que en la salud todos los procesos fisiolgicos acontecen de manera regulada y ordenada, se conserva la hemostasia en los estados patolgicos estas pueden sufrir importantes trastornos. Por ejemplo, la lesin tisular grave, caractersticas de las cirrosis hepticas pueden deteriorar profundamente la capacidad de las clulas para formar las enzimas catalizadoras de procesos metablicos tan importantes como la sntesis de la urea. La incapacidad toxica, es la seguida por la intoxicacin amoniacal y, por ltimo, por coma heptica. Diversas enfermedades genticas poco frecuentes pero a menudo debilitantes y mortales, proporcionan impresionantes ejemplos adicionales sobre deterioro de la actividad, incluso de una sola enzima. Despus de la lesin tisular grave (infartos cardiacos o pulmonar, aplastamiento de una extremidad) o del crecimiento celular incontrolado (como carcinoma prosttico), se liberan a la sangre las enzimas propias del tejido especifico. Por tanto la medicin de dichas enzimas intracelulares en el suero sanguneo proporcionan a los mdicos en formacin diagnostica y pronostica invaluable IV. ESTRUCTURA Casi todas las enzimas conocidas son protenas. Los pesos moleculares de las enzimas cubren u amplio rango. As, por ejemplo, la enzima ribonucleasa, se hidroliza los cidos nucleicos que contienen ribosa, es relativamente pequea (13,700da). En contraste, la aldolasa enzima que participa en el metabolismo de la glucosa, tiene un peso molecular de aproximadamente 156,500, y esta formada por cuatro subunidades, cada una de ellas con una masa de alrededor de 40 000Da. La piruvato deshidrogenada, que cataliza la conversin de piruvato en acetil CoA, es una complejo multienzimatico con componentes organizados de forma tan compleja que es posible aislar a partir de muchos tejidos todo el sistema como una entidad discreta en forma de partculas. El complejo aislado a partir del corazn de cerdo tiene un peso molecular aproximado de 10x106 cada complejo contiene no menos de 60 molculas de protenas, cada una con sus cofactores esenciales. Para la catlisis es necesaria toda la estructura del complejo de la piruvato deshidrogenasa.
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_____________________________________________________________________ Adems del componente proteico, muchas enzimas requieren constituyentes no proteicos para su funcin como catalizadores. Estas sustancias accesorias reciben diversos nombres, como grupo prosttico, cofactor o coenzima. El Grupo prosttico: Es cualquier porcin no aminocido, de una protena que contiene a esta alguna propiedad especial. As el hemo, que confiere una elevada capacidad de fijacin del O 2 , es el grupo prosttico de la hemoglobina .En ella, el grupo prosttico no esta unido por fuerzas covalentes en otras protenas con grupo Hemo, como los citocromos, el Hemo se presenta enlaces covalentes. Los Cofactores: Son pequeas molculas enrgicas esenciales para la catlisis. As, por ejemplo, la actividad de la B-hidroxibutirato hidrogenasa requiere fosfolpidos, Estos lpidos son cofactores aunque no estn directamente implicados en el proceso catlico. Algunas enzimas requieren factores catinicos o aninicos inorgnicos como el in cloruro necesario para la amilasa pancretica. El termino coenzima se aplica a las molculas orgnicas, derivados a menudo de una vitamina, y que son esenciales para la actividad de una enzima. Algunas coenzimas se hallan estrechamente unidas a la porcin proteica de una determinada enzima, esta se puede desnaturalizarse si se intenta la coenzima. En otras ocasiones; la coenzima est unida de forma, tan dbil que simple dilisis la separar de la protena. Las coenzimas s participan en la reaccin cataltica Es complejo funcional de una protena y todos sus factores accesorios necesarios reciben el nombre de holoenzima: la parte proteica. Libre de cofactores, se denominan Apoenzima. A veces. La mezcla de los componentes separados es todo cuanto se necesitan para restablecer la actividad completa. La anhidrasa carbnica, anteriormente mencionada, es una clase de enzimas conocidas como metaloenzimas, dado que, para poder actuar, tienen unos requerimientos absolutos de al menos 1 tomo gramo de cinc por mol de protena. La separacin del cinc produce la completa inactivacin de la anhidrasa carbnica. El hombre necesita ingerir con la dieta muchos metales en cantidades muy pequeas, lo cual constituye la expresin directa de la necesidad de ciertos metales especficos de las estructuras de diversas enzimas.
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apoenzima + grupo prosttico= holoenzima
RECAMBIO DE ENZIMAS Y COFACTORES Como cualquier otro material biolgico, las enzimas estn sujetas a recambio y sustitucin. Por consiguiente, toda dieta debe incluir suficientes aminocidos esenciales, metales y vitaminas para la reposicin de las enzimas. La limitada capacidad de almacenamiento de la mayora de los iones metlicos esenciales y la labilidad biolgica de la mayor parte de las vitaminas en el ser humano, hacen necesario satisfacer de forma continua las necesidades nutricionales de todos los componentes enzimticos. V. PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS Como todo verdadero catalizador, las enzimas muestran las siguientes propiedades: 1. Presentes en pequea cantidad. 2. No sufren alteraciones irreversibles en el curso de la reaccin, y por lo tanto cada molcula de enzima puede participar en muchas reacciones individuales. 3. No tiene efecto sobre la termodinmica de la reaccin. Este ltimo punto tiene particular importancia. Las enzimas no determinan si una reaccin es
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_____________________________________________________________________ termodinmicamente favorable (exergnica) o desfavorable (endergnica) y tampoco determinan cual es la relacin en el equilibrio entre productos y reactantes.
Estas propiedades inherentes de los reactantes qumicos. Como catalizadores, las enzimas slo pueden acelerar la velocidad de una reaccin qumica termodinmicamente favorecida. No hay una relacin necesaria entre la magnitud de G slo informa de la diferencia de energa libre entre el estado inicial y el equilibrio. Es totalmente independiente de la va o del tiempo que toma la reaccin par alcanzar el equilibrio. Por ejemplo, consideremos a la glucosa. La oxidacin de este carbohidrato es un proceso termodinmicamente muy favorecido, segn se puede determinar por la cantidad de energa liberada durante su combustin. Sin embargo, se pueden exponer al ambiente cristales de glucosa indefinidamente sin que ocurra una conversin notable en materiales menos energticos. En otras palabras, la glucosa es cinticamente estable, aunque sea inestable de manera termodinmica. Incluso si el azcar estuviera disuelto, en tanto la solucin se mantenga estril no se deteriora con rapidez. Sin embargo, si se aaden unas pocas de bacterias, en poco tiempo el azcar sera captado por las clulas y sometido a degradacin enzimtica. Las enzimas son catalizadores empleados por los qumicos en el laboratorio, como calor, cido, platino y magnesio metlicos, por lo general aceleran la reaccin cien a mil veces en relacin con la velocidad no catalizada. Por lo contrario, las enzimas incrementan tpicamente la velocidad de una reaccin un milln a un trilln de veces 10 12 . Todava ms notable es que esto se logra a temperaturas y pH sumamente bajos presentes en la clula. Adems a diferencia de los catalizadores inorgnicos empleados por los qumicos, la mayor parte de las enzimas son muy especficas en relacin con los reactantes a los que se unen a una enzima se denominan sustratos. Por ejemplo, si la enzima hexocinasa est presente en una solucin junto con cientos de compuestos de bajo peso molecular adems del sustrato, la glucosa y slo molculas de glucosa se combinarn con la enzima y sufrirn la reaccin. Para todo propsito prctico, las otras sustancias bien podran estar ausentes. Este tipo de especificidad, sea entre enzima o sustrato o con otros tipos de protenas y sustancias a las cuales se unen, es crucial para mantener el orden requerido para sustentar la vida. Adems de su elevado nivel de actividad y especificidad, las enzimas actan como directores del trfico metablico en el sentido de que las reacciones catalizadas por enzimas son muy ordenadas: Los nicos productos formados son los apropiados. Esto es muy importante, ya que la produccin de compuestos no deseados rpidamente acabara con la vida de una frgil clula. Por ltimo, a diferencia de otros catalizadores, la actividad
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_____________________________________________________________________ de las enzimas puede regularse para satisfacer necesidades particulares de la clula en un momento determinado.
VI. NOMENCLATURA Y CLASIFICACIN DE LAS ENZIMAS Cien aos atrs solo se conocan enzimas, muchas de estas, catalizaban la hidrlisis de enlaces covalentes. Algunas enzimas, de manera especial las que fueron descubiertas en un principio, recibieron nombres ligados mas bien a su sitio de procedencia anatmica que no siguen ninguna regla ni sistema; tal es el caso de la ptialina de la saliva, que ataca al almidn de la pepsina del estmago y de la tripsina del pncreas, que atacan protenas; de la renina, que coagula la leche; de la papaina, enzima proteoltica que se encuentra en la papaya y de las catepsinas, tambin proteasas, que se encuentran en las clulas. Las enzimas relacionadas con la coagulacin de la sangre, como son la trombina, la plasmina, el plasmingeno, etc. reciben tambin nombres sistematizados. Al descubrir nuevas enzimas y proceder a su caracterizacin estricta se aplicaron reglas de nomenclatura basadas en el nombre del sustrato atacado, o en el tipo general de sustrato, o en la reaccin catalizada y se ha aadido convencionalmente, la terminacin -asa. Por ejemplo: Las lipasas (hidrolizan lpidos o grasas) Las amilasas (hidrolizan almidn) Las proteasas (hidrolizan protenas) Las esterasas (basado en la unin general de tipo ster presentes en muchas sustancias) Colesterol estrerasa (si la esterasa es especfica de los esteres de colesterol) Acetilcolina esterasa (si la estersa de la acetilcolina).
Otros ejemplos: Las fosfatasas son enzimas que atacan las uniones ster, pero en este caso, toman su nombre del grupo vecino a la unin que van a atacar, de manera que se denominan fosfatasas (cuando quitan una molcula de monofosfato), pirofosfatasas (cuando quitan el cido fosfrico como esteres dobles (pirofosfatos), o triples, etc.) De la misma manera, las carbohidrasas se denominan as genricamente, pero pueden comprender enzimas con nombres proveniente del sustrato particular sobre el que actan como la amilasa que ataca al almidn y la celulasa que acta sobre la celulosa y, en otras
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_____________________________________________________________________ ocasiones, se denominan de acuerdo con la unin atacada, como la D -glucosidasa que acta sobre las uniones D -glucosdicas. Esta manera de llamarlas, se demostr que era inadecuada porque al descubrirse varias enzimas, notaron que varias enzimas catalizaban reacciones diferentes del mismo sustrato, por ejemplo, oxidacin o reduccin de la funcin alcohol de un azcar. Aunque el sufijo asa contina en uso; actualmente, al nombrar a las enzimas, se enfatiza el tipo de reaccin catalizada. Por ejemplo: las hidrogenasas catalizan la eliminacin de hidrogeno y las transferasas, reacciones de transferencia de grupo. Con el descubrimiento de mas y mas enzimas, surgieron ambigedades y con frecuencia no estaba claro cual era la enzima que un investigador deseaba estudiar. Para remediar esta deficiencia, la Comisin para el estudio de las enzimas, que constituye con respecto a los sistemas anteriores un punto de vista ms uniforme, preciso y descriptivo; esta formada por la Unin Internacional de Bioqumica (IUB) adopto, en 1964, un sistema complejo pero inequvoco de la nomenclatura enzimtica basado en el mecanismo de reaccin. El sistema se basa en la reaccin qumica catalizada que es la propiedad especfica que caracteriza a cada enzima las cuales se agrupan en clases, porque catalizan procesos semejantes, y en subclases que especifican con mayor exactitud la reaccin particular considerada. En general, las enzimas reciben un nombre de acuerdo con el sustrato o los sustratos que participan en la reaccin seguido por el tipo de reaccin catalizada y, por fin, la terminacin asa. A menudo los nombres as obtenidos resultan largos y complejos, por lo que es muy difcil que en la prctica se pueda excluir el uso de los nombres triviales, consagrados por la costumbre. Sin embargo, con fines de sistematizacin, se reconoce la necesidad de aceptar el nuevo sistema. Aunque su claridad y carencia de ambigedad recomiendan al sistema de nomenclatura IUB para trabajos de investigacin, nombres ms ambiguos, pero bastante ms cortos persisten en libros de texto y en el laboratorio clnico. Por esta razn, a continuacin solo se presenta principios generales del sistema IUB: Las reacciones y las enzimas que las catalizan se dividen en 6 clases principales, cada una con 4 a 13 subclases. El nombre de la enzima tiene 2 partes: La primera es el nombre del o los sustratos; la segunda, con terminacin asa, indica el tipo de reaccin catalizada. Cada enzima tiene un numero clave (E.C.) que caracteriza al tipo de reaccin segn la clase (primer digito), subclase (segundo digito) y subsubclase (tercer digito). El cuarto digito es para la enzima especfica. As, E.C. 2.7.1.1 denota la clase 2 (una transferasa), FACULTAD DE MEDICINA - E.A.P. MEDICINA HUMANA
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_____________________________________________________________________ subclase 7 (transferencia de fosfato), sub-clase 1 (una funcin alcohol como aceptor de fosfato). El ltimo digito denota a la enzima hexocinasa o ATP: D-hexosa-6fosforotransferasa, enzima que cataliza la transferencia de fosfato desde el ATP al grupo hidroxilo de carbono 6 de la glucosa. Oxido-Reductasas Son las enzimas relacionadas con las oxidaciones y las reducciones biolgicas que intervienen de modo fundamental en los procesos de respiracin y fermentacin. Las oxidoreductasas son importantes a nivel de algunas cadenas metablicas, como la escisin enzimtica de la glucosa, fabricando tambin el ATP, verdadero almacn de energa. Extrayendo dos tomos de hidrgeno, catalizan las oxidaciones de muchas molculas orgnicas presentes en el protoplasma; los tomos de hidrgeno tomados del sustrato son cedidos a algn captor. En esta clase se encuentran las siguientes subclases principales: Deshidrogenasas y oxidasas. Son ms de un centenar de enzimas en cuyos sistemas actan como donadores, alcoholes, oxcidos aldehdos, cetonas, aminocidos, DPNH 2, TPNH2, y muchos otros compuestos y, como receptores, las propias coenzimas DPN y TPN, citocromos, O 2, etc.
Las Transferasas Estas enzimas catalizan la transferencia de una parte de la molcula (dadora) a otra (aceptora). Su clasificacin se basa en la naturaleza qumica del sustrato atacado y en la del aceptor. Tambin este grupo de enzimas actan sobre los sustratos mas diversos, transfiriendo grupos metilo, aldehdo, glucosilo, amina, sulfat, sulfrico, etc.
Las Hidrolasas Esta clase de enzimas actan normalmente sobre las grandes molculas del protoplasma, como son la de glicgeno, las grasas y las protenas. La accin cataltica se expresa en la escisin de los enlaces entre tomos de carbono y nitrgeno (C-N) o carbono oxigeno (CO); Simultneamente se obtiene la hidrlisis (reaccin de un compuesto con el agua) de FACULTAD DE MEDICINA - E.A.P. MEDICINA HUMANA
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_____________________________________________________________________ una molcula de agua. El hidrgeno y el oxidrilo resultantes de la hidrlisis se unen respectivamente a las dos molculas obtenidas por la ruptura de los mencionados enlaces. La clasificacin de estas enzimas se realiza en funcin del tipo de enlace qumico sobre el que actan. A este grupo pertenecen protenas muy conocidas: la pepsina, presente en el jugo gstrico, y la tripsina y la quimiotripsina, segregada por el pncreas. Desempean un papel esencial en los procesos digestivos, puesto que hidrolizan enlaces ppticos, estricos y glucosdicos.
Las Isomerasas Transforman ciertas sustancias en otras ismeras, es decir, de idntica formula emprica pero con distinto desarrollo. Son las enzimas que catalizan diversos tipos de isomerizacin, sea ptica, geomtrica, funcional, de posicin, etc. Se dividen en varias subclases. Las racemasas y las epimerasas actan en la racemizacin de los aminocidos y en la epimerizacin de los azcares. Las primeras son en realidad pares de enzimas especficas para los dos ismeros y que producen un solo producto comn. Las isomerasas cis trans modifican la configuracin geomtrica a nivel de un doble ligadura. Las xido reductasas intramoleculares cetalizan la interconversin de aldosas y cetosas, oxidando un grupo CHOH y reduciendo al mismo tiempo al C = O vecino, como en el caso de la triosa fosfato isomerasa, presente en el proceso de la gluclisis ; en otros casos cambian de lugar dobles ligaduras, como en la (tabla) isopentenil fosfato isomerasa, indispensable en el cambio biosintico del escualeno y el colesterol. Por fin las transferasas intramoleculares (o mutasas) pueden facilitar el traspaso de grupos acilo, o fosforilo de una parte a otra de la molcula, como la lisolecitina acil mutasa que transforma la 2 lisolecitina en 3 lisolecitina, etc. Algunas isomerasa actan realizando inversiones muy complejas, como transformar compuestos aldehdos en compuestos cetona, o viceversa. Estas ultimas desarrollan una oxidorreduccin dentro de la propia molcula (oxido rreductasa intramoleculares) sobre la que actan, quitando hidrgeno, a algunos grupos y reduciendo otros; actan ampliamente sobre los aminocidos, los hidroxcidos, hidratos de carbono y sus derivados.
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Las Liasas Estas enzimas escinden (raramente construyen) enlaces entre tomos de carbono, o bien entre carbono y oxigeno, carbono y nitrgeno, y carbono y azufre. Los grupos separados de las molculas que de sustrato son casi el agua, el anhdrido carbnico, y el amoniaco. Algunas liasa actan sobre compuestos orgnicos fosforados muy txicos, escindindolos; otros separan el carbono de numerosos sustratos.
Las Ligasas Es un grupo de enzimas que permite la unin de dos molculas, lo cual sucede simultneamente a la degradacin del ATP, que, en rigor, libera la energa necesaria para llevar a cabo la unin de las primeras. Se trata de un grupo de enzimas muy importantes y recin conocidas, pues antes se pensaba que este efecto se llevaba a cabo por la accin conjunta de dos enzimas, una fosfocinasa. A este grupo pertenecen enzimas de gran relevancia reciente, como las aminocido ARNt ligasas conocidas habitualmente con el nombre de sintetasas de aminocidos ARNt o enzimas activadoras de aminocidos que representan el primer paso en el proceso biosinttico de las protenas, y que forman uniones C-O; las cidotiol ligasas, un ejemplo tpico de las cuales es la acetil coenzima A sintetasa, que forma acetil coenzima. A partir de cido actico y coenzima A ; las ligasas cido amoniaco (glutamina sintetasa), y las ligasas cido-aminocido o sintetasas de pptidos, algunos de cuyos ejemplos ms conocidos son la glutacin sintetasa, la carnosina sintetasa, etc. La accin de estas enzimas se manifiesta con la formacin de enlaces entre tomos de carbono y oxigeno de diversas molculas, o bien entre carbono y azufre, carbono y nitrgeno y carbono y carbono. Las ligasas utilizan siempre, para el proceso de reaccin, la energa proporcionada por el ATP o compuestos homlogos que son degradados, Por consiguiente las enzimas de esta clase son los nicos que intervienen en reaccin no espontnea desde un punto de vista termodinmico; Actan sobre los sustratos ms diversos y revisten particular importancia en el metabolismo de los cidos nucleicos. Estas reacciones enzimticas se desarrollan en dos tiempos: en el primero se forma un complejo intermedio con potencia energtica muy alta, en el segundo utilizan la energa obtenida para realizar la reaccin de sntesis.
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Grupo Oxidoreductasas
Accin Catalizan reacciones de oxidorreduccin. Tras la accin catlica quedan modificados en su grado de oxidacin por lo que debe ser transformados antes de volver a actuar de nuevo.
ejemplos Dehidrogenasas Aminooxidasa Deaminasas Catalasas
Transferasas
Transfieren grupos activos (obtenidos de la ruptura Transaldolasas de ciertas molculas)a otras sustancias receptoras. Transcetolasas Suelen actuar en procesos de interconversiones de Transaminasas azucares, de aminocidos, etc Verifican reacciones de hidrlisis con la consiguiente obtencin de monmeros a partir de polmeros. Suele ser de tipo digestivo, por lo que normalmente actan en primer lugar Actan sobre determinadas molculas obteniendo de ellas sus ismeros de funcin o de posicin. Suelen actuar en procesos de interconversion Realizan la degradacin o sntesis (entonces se llaman sintetasas) de los enlaces denominados fuertes sin ir acoplados a sustancias de alto valor energtico. Glucosidasas Lipasas Peptidasas Esterasas Fosfatasas Isomerasas de azcar Epimerasas Mutasas Aldolasas Decarboxilasas
Hidrolasas
Isomerasas
Liasas
Ligasas
Realizan la degradacin o sntesis de los enlaces Carboxilasas fuertes mediante el acoplamiento a sustancias ricas Peptidosintetasas en energa como los nucleosidos del ATP
VII. CMO FUNCIONAN LAS ENZIMAS? La catlisis enzimtica de las reacciones es esencial para los sistemas vivos. En condiciones biolgicas, las reacciones no catalizadas tienden a se lentas. La mayora de molculas biolgicas son muy estables al ph neutro, la temperatura suave y el ambiente acuosos presente en el interior de las clulas. Adems muchas reacciones bioqumicas comunes implican procesos qumicos que son desfavorables o poco probables en el ambiente celular, tales como la formacin transitoria FACULTAD DE MEDICINA - E.A.P. MEDICINA HUMANA
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_____________________________________________________________________ de intermediarios cargados inestables o la colisin de dos o ms molculas con la orientacin precisa requerida para la reaccin. El rasgo distintivo de una reaccin catalizada enzimticamente es que tiene lugar dentro de los confines de una bolsa del enzima denominado sitio activo. La molcula fijada en el sitio activo y sobre la que acta el enzima se denomina sustrato. La superficie del sitio activo del enzima est revestida con residuos aminocidos cuyos grupos sustituyentes se unen al sustrato y lo secuestra completamente de la solucin.
Los enzimas alteran las velocidades de reaccin pero no los equilibrios Se puede escribir una reaccin enzimtica sencilla como:
E + S = ES = EP = E + P
en donde E, S y P representan el enzima, el sustrato y el producto, respectivamente. ES y EP son complejos transitorios del enzima con el sustrato y con el producto, respectivamente. Para entender la catlisis, hemos de apreciar en primer lugar la importante distincin entre equilibrios de reaccin y velocidades de reaccin. La funcin de un catalizador es aumentar la velocidad de una reaccin. Los catalizadores no modifican los equilibrios de reaccin. Cualquier reaccin, por ejemplo S == P se puede describir mediante un diagrama de la coordenada de reaccin. Una descripcin de los cambios energticos durante la reaccin. La energa de los sistemas biolgicos se describe en funcin de la energa libre (G). En el diagrama de la coordenada, se representa la energa libre del sistema frente al progreso de la reaccin (coordenada de la reaccin). El punto de partida tanto para la reaccin hacia la derecha como hacia la izquierda se denomina Estado basal que es la contribucin a la energa libre del sistema de una molcula promedio (S o P) bajo un conjunto de condiciones dadas. Para describir las variaciones de energa libre de las reacciones, los qumicos definen un conjunto estndar de condiciones (temperatura 298 K; presin parcial de cada gas 1 atm o 101,3 kPa; concentracin de todos los solutos igual a 1 m) y expresan la variacin de energa libre de este sistema reaccionante como G, la variacin de energa libre estndar. Dado que en los sistemas bioqumicos participa normalmente el H+ en concentraciones muy lejanas de 1 m, los bioqumicos definen la variacin de la energa libre estndar bioqumica, (G), como la variacin de energa libro estndar a pH 7,0. FACULTAD DE MEDICINA - E.A.P. MEDICINA HUMANA
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Las velocidades de reaccin y los equilibrios tienen definiciones termodinmicas precisas Los equilibrios de reaccin estn asociados inextricablemente a la variacin de energa libre estndar de la reaccin, (G), mientras que las velocidades de reaccin estn asociadas a la energa de activacin, (G). Un equilibrio tal como S - P viene descrito por una constante de equilibrio, Keq, o K'. En las condiciones estndar utilizadas para comparar los procesos bioqumicos, una constante de equilibrio se denota por Keq o (K'). Keq = (P) (S) De la termodinmica, puede describirse la relacin entre Keq y (G) mediante la expresin: G = -RT1n K'eq donde R es la constante de los gases (8,315 J/mol . K) y T es la temperatura absoluta, 298 K (25 C). Aqu el punto importante es que la constante de equilibrio es un re flejo directo de la variacin de energa libre estndar global de la reaccin. Un valor negativo grande de G refleja un equilibrio de reaccin favorable aunque, tal como se ha comentado antes, no signifique que la reaccin transcurra con una velocidad elevada. La velocidad de una reaccin cualquiera viene determinada por la concentracin de reactivo (o reactivos) y por una constante de velocidad usualmenle representada por el smbolo k. Para la reaccin unimolecular una ecuacin de la velocidad: V = K(S) En esta reaccin, la velocidad solo depende de la concentracin de S. Es lo que se denomina una reaccin de primer orden. El factor K es una constante de proporcionalidad que refleja la probabilidad de reaccin bajo un conjunto de condiciones (pH. temperatura, etc.). Aqu, K es una constante de velocidad de primer orden y sus unidades son tiempos inversos, como por ejemplo s -1. Si FACULTAD DE MEDICINA - E.A.P. MEDICINA HUMANA S-P, la velocidad de la reaccin V, que representa la cantidad de S que ha reaccionado por unidad de tiempo, viene expresada por
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_____________________________________________________________________ una reaccin de primer orden tiene una constante de velocidad K de 0,03 s -1 se puede interpretar (cualitativamente) que el 3% de sustrato asequible ser convertido en P en 1 s. Una reaccin con una constante de velocidad de 2000 s -1 estar lista en una pequea fraccin de segundo. Si la velocidad de reaccin depende de la concentracin de dos compuestos diferentes, o si reaccionan dos molculas del mismo compuesto, la reaccin es de segundo orden y K es una constante de velocidad de segundo orden (con unidades M -1 s-1). La ecuacin de la velocidad tiene entonces la forma: V = K (S1)(S2) Aplicando la teora del estado de transicin se puede deducir una expresin que relaciona la magnitud de la constante de velocidad con la energa de activacin: K = KT e-G /RT h en donde k es la constante de Boltzmann y h es la constante de Planck. El punto importante es que esta relacin entre la constante de velocidad k y la energa de activacin G es inversa y exponencial. En forma simplificada sta es la base de la afirmacin de que una energa de activacin menor significa una velocidad de reaccin mayor. Unos pocos principios explican el poder cataltico y la especificidad de los enzimas Los enzimas son catalizadores extraordinarios. Los aumentos do velocidad conseguidos por los enzimas son de 5 a 17 rdenes de magnitud. Los enzimas son tambin muy especficos, discriminando fcilmente entre sustratos con estructuras muy similares. Cmo se pueden explicar estos incrementos enormes y altamente selectivos en su velocidad?, De donde viene la energa que proporciona un descenso espectacular de las energas de activacin de reacciones especificas?
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La respuesta a estas preguntas tiene dos partes distintas pero relacionadas. La primera se basa en las reordenaciones de los enlaces covalentes durante la reaccin catalizada por el enzima. Entre sustratos y grupos funcionales de los enzimas (cadenas laterales especficas de aminocidos, iones metlicos y coenzimas) tienen lugar reacciones qumicas de muchos tipos. Los grupos funcionales catalticos de los enzimas pueden formar enlaces covalentes transitorios con un sustrato, activndolo para la reaccin, o bien puede transferirse transitoriamente un grupo funcional del sustrato al enzima. En muchos casos, estas reacciones slo tienen lugar en el sitio activo del enzima. Las interacciones covalentes entre enzimas y sustratos reducen la energa de activacin (acelerando, por tanto, la reaccin), proporcionando una va de reaccin alternativa y de menor energa. La segunda parte de la explicacin se basa en las interacciones no covalentes entre el enzima y el sustrato. Gran parte de la energa requerida para disminuir la energa de activacin proviene generalmente de interacciones dbiles covalentes entre el sustrato y el enzima. El factor que diferencia realmente a los enzimas de la mayora de catalizadores no enzimticos es la formacin de un complejo especfico. La interaccin entre enzima y sustrato en este complejo est canalizada por las mismas fuerzas que estabilizan la estructura proteica, incluyendo puentes de hidrgeno e interacciones inicas e hidrofbicas. El establecimiento de cada interaccin dbil en el complejo ES viene acompaado por la liberacin de una pequea cantidad de energa libre que proporciona un cierto grado de estabilidad a la interaccin. La energa proveniente de la interaccin enzima-sustrato se denomina energa de fijacin GB, . Su significado se extiende ms all del de una simple estabilizacin de la interaccin enzima- sustrato. La energa de fijacin es la principal fuente de energa libre utilizada por los enzimas para disminuir la energa de activacin de las reacciones. Hay (los principios fundamentales que estn interrelacionados y que proporcionan una explicacin general de cmo aprovechan los enzimas la energa de unin no covalente. 1. La mayor parte del poder cataltico de las enzimas proviene en ltimo trmino de la energa libre emitida al formarse los mltiples enlaces dbiles e interacciones entre el enzima y su sustrato. sta energa de fijacin contribuye tanto a la especificidad como a la catlisis. 2. Las interacciones dbiles estn optimizadas en el estado de transicin de la reaccin: Los sitios activos de los enzimas son complementarios no a los sustratos per se, sino a los estados de transicin a travs de los que pasas los sustratos al ser convertidos en productos durante una reaccin enzimtica.
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Las interacciones dbiles entre enzima y sustrato son ptimas en el estado de transicin Cmo utiliza un enzima la energa de fijacin para disminuir la energa de activacin de la reaccin? La formacin del complejo ES no es por s misma la explicacin, aunque algunas de las primeras consideraciones sobre los mecanismos de reaccin empezaron con esta idea. Estudios sobre la especificidad enzimtica llevados a cabo por Emil Fischer le condujeron a proponer, en 1894, que los enzimas eran estructuralmente complementarios a sus sustratos, de forma que se acoplaban del mismo modo que una llave y una cerradura. Esta elegante idea de que una interaccin especfica (y exclusiva) dos molculas biolgicas est facilitada por superficies moleculares con formas complementarias ha influido profundamente en el desarrollo de la bioqumica y se halla en el centro de muchos procesos bioqumicos. No obstante, la hiptesis de la "llave y la cerradura" puede ser engaosa cuando se aplica a la catlisis enzimtica. La nocin moderna de la catlisis enzimtica, propuesta por primera vez por Michael Polanyi (1921) y por Haldane en 1930 y despus elaborada por Linus Pauling en 1946 dice: para que un enzima catalice una reaccin ha de ser complementario al estado de transicin de la reaccin. Ello significa que las interacciones ptimas entre sustrato y enzima slo pueden tener lugar en el estado de transicin. El sustrato ligado aun ha de experimentar el aumento de energa libre necesario para alcanzar el estado de transicin. Los enzimas reales funcionan segn un principio anlogo. En el complejo ES se forman algunas interacciones dbiles, pero el complemento total de las interacciones dbiles posibles entre sustrato y enzima slo se forma cuando el sustrato alcanza el estado de transicin. La energa libre (energa de fijacin ) liberada por la formacin de esas interacciones equilibra parcialmente la energa requerida para llegar a la cima de la colina energtica. La suma de la energa de activacin desfavorable (positiva) G y la energa de fijacin GB favorable (negativa) da como resultado una energa de activacin neta menor. El estado de transicin tampoco es una especie estable en el enzima, sino que representa un punto breve en el tiempo que pasa un sustrato en la cima de la colina ener gtica. Sin embargo, la reaccin catalizada por el enzima es mucho ms rpida que el proceso sin catalizar, porque la colina es mucho ms baja. El principio imprtame subyacente es que las interacciones de fijacin dbiles entre el enzima y el sustrato proporcionan la fuerza impulsora principal de la catlisis enzimtica. Grupos catalticos especficos contribuyen a la catlisis
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_____________________________________________________________________ En la mayora de enzimas, la energa de fijacin utilizada para formar el complejo ES es tan slo una de las diversas contribuciones al mecanismo cataltico general. Una vez unido el sustrato al enzima, grupos funcionales catalticos situados adecuadamente colaboran en la rotura o formacin de enlaces mediante una variedad de mecanismos, entre los que se encuentran la catlisis cido-base general, la catlisis covalente y la catlisis por iones metlicos. Estos mecanismos son diferentes a los basados en la energa de fijacin porque generalmente suponen una interaccin covalente transitoria con un sustrato o la transferencia de grupos desde o hacia un sustrato. Catlisis cido-base general Muchas reacciones bioqumicas suponen la formacin de intermediarios cargados inestables que tienden a descomponerse rpidamente en sus especies reactivas constituyentes no pudiendo, de este modo, reaccionar. Los intermediarios cargados a menudo se pueden estabilizar transfiriendo protones a o desde el sustrato o intermediario para formar una especie que se descompone en productos ms fcilmente que en reactivos. En las reacciones no enzimticas, las transferencias de protones pueden utilizar slo los constituyentes del agua u otros dadores o aceptores dbiles de protones. La catlisis que slo utiliza los iones H3O+ u OH presentes en el agua se denomina catlisis acida o bsica especifica. Si la transferencia de protones entre el Intermediario y el agua es ms rpida que la descomposicin del intermediario en reactivos, el intermediario se estabilizar de manera efectiva cada vez que se forme. En este caso no se producir catlisis adicional facilitada por otros aceptores o dadores de protones. No obstante, en muchos casos el agua no es suficiente. El trmino catlisis cido-base general se refiere a transferencias de protones facilitadas por otros clases de molculas. En reacciones no enzimticas en solucin acuosa, esto se observa solamente cuando la velocidad de descomposicin del intermediario inestable en reactivos es mayor que la de transferencia de protones a o desde el agua. Muchos cidos orgnicos dbiles pueden suplementar al agua como dadores de protones en esta situacin, al igual que liases orgnicas dbiles pueden servir como aceptores de protones. Varias cadenas laterales de aminocidos pueden actuar de modo similar como dadores y aceptores de protones en el sitio activo de un enzima. Catlisis Covalente: En la catlisis covalente se forma un enlace covalente transitorio entre el enzima y el sustrato. Esto altera la ruta de la reaccin y slo produce catlisis la nueva ruta tiene una energa de activacin inferior a la de ruta no catalizada. Los dos nuevos pasos han de ser ms rpidos que la reaccin no catalizada. Diversas cadenas laterales de aminocidos, as como los grupos funcionales de algunos cofactores enzimticos, sirven como nuclefilos en algunos enzimas para la formacin de enlaces covalentes con los sustratos. Estos complejos covalentes siempre experimentan una reaccin adicional con el fin de regenerar el enzima FACULTAD DE MEDICINA - E.A.P. MEDICINA HUMANA
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_____________________________________________________________________ libre. El enlace covalente formado entre el enzima y el sustrato puede activar un sustrato para una nueva reaccin de una forma que es normalmente especfica para el grupo o coenzima implicado. Catlisis por Iones metlicos: Los metales, tanto si estn fuertemente unidos al enzima como si son captados de la solucin junto con el sustrato, pueden participar de diferentes maneras en la catlisis. Interacciones inicas entre un metal fijado al enzima y el sustrato pueden ayudar a orientar un sustrato para que reaccione o estabilizar estados de transicin de la reaccin que estn cargados. Esta utilizacin de interacciones de fijacin dbiles entre el metal y el sustrato es similar a algunos de los usos de la energa de fijacin enzima-sustrato descrita anteriormente. Los metales tambin pueden facilitar reacciones de oxidacin-reduccin mediante cambios reversibles en el estado de oxidacin del in metlico. Casi una tercera parte de los enzimas conocidos requieren uno o ms iones metlicos para su actividad cataltica. La mayora de enzimas utilizan una combinacin de varias estrategias catalticas para conseguir un incremento de velocidad. Un buen ejemplo de la utilizacin de la catlisis covalente junto con la catlisis cido base general se da en la reaccin catalizada por la quimotripsina. VIII. LA CINTICA ENZIMTICA La Concentracin Del Sustrato Afecta A La Velocidades Las Reacciones Catalizadas Por Enzimas Uno de los factores clave que afectan a la velocidad de una reaccin catalizada por un enzima es la concentracin de sustrato presente. Sin embargo, el estudio de los efectos de la concentracin de sustrato es complicado debido al hecho cambia durante el transcurso de una reaccin a medida que el sustrato se convierte en producto. Una aproximacin simplificadora en los experimentos cinticos consiste en medir la velocidad inicial, llamada K0, cuando [S] es mucho mayor que la concentracin de enzima, [E]. En una reaccin tpica el enzima puede estar presente en concentraciones del orden nomolar mientras que [S] puede ser cinco o seis rdenes : magnitud mayor.
Concentracin de sustrato, (SI) (mM)
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_____________________________________________________________________ Efecto de la concentracin de sustrato sobre la velocidad inicial de una reaccin catalizada por un enzima. En una grfica de este tipo slo se puede obtener una aproximacin de V max por extrapolacin debido a que V0 se acercar pero nunca alcanzar Vmax La concentracin de sustrato a la que V0 es la mitad de la mxima es Km la constante de Michaelis. En un experimento de este tipo la concentracin de enzima es generalmente tan baja que (SI). (El incluso cuando (S) se describe como baja o relativamente baja. Las unidades reseadas son tpicas de las reacciones catalizadas por enzimas y slo se muestran aqu para ayudar a ilustrar el significado de V 0 y (SI. (Obsrvese que la curva describe parte de una hiprbola rectangular con una asntota en V max. Si se continuase la curva por debajo de [SI = O se aproximara a una asntota vertical a (SI = - K m), a menudo 60 segundos o menos), los cambios en (S) se limitan a un pequeo porcentaje y puede considerarse que la concentracin permanece constante. En rata situacin puede explorarse el valor de Vt en funcin re [S';. valor que es ajustado por el investigador. El efecto de la variacin de (S) sobre cuando se mantiene constante la concentracin de enzima se muestra concentraciones de sustrato relativamente bajas, V 0 aumenta casi linealmente con el incremento de (S). A mayores concentraciones de sustrato, aumenta a incrementos cada vez menores en respuesta a incrementos de [S]. Finalmente, se alcanza un punto ms all del cual se dan incrementos pequesimos de ".", con el incremento de [S]. Esta meseta se denomina velocidad mxima, Kmax. El complejo ES constituye la clave para entender este comportamiento cintico, del mismo modo que represent un punto de partida para la discusin de la catlisis. El patrn cintico de la hizo que Vctor Henri, siguiendo una sugerencia de Wurtz, propusiese en 1903 que la combinacin de un enzima con su molcula de sustrato para formar el complejo es un paso necesario en la catlisis enzimtica. Esta idea fije ampliada para dar lugar a una teora general de la accin enzimtica, en particular a cargo de Leonor Michaelis y Maud Menten en 1913, quienes postularon que el enzima se combina en primer lugar de forma reversible con su sustrato formando un complejo enzima sustrato en un paso reversible relativamente rpido:
E + S ES
El complejo ES se descompone seguidamente en un segundo paso ms lento dando el enzima libre y el producto de la reaccin P:
ES E + P
La segunda reaccin es ms lenta y limita, por tanto, la velocidad de la reaccin global. De ah se desprende que la velocidad global de la reaccin catalizada enzimticamente ha de sur proporcional a la concentracin de la especie que reacciona en el segundo paso, es decir, ES.
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_____________________________________________________________________ En cualquier momento de una reaccin catalizada por un enzima, este existe en dos formas, la forma libre o sin combinar E y la forma combinada ES. A baja [S], la mayor parte del enzima estar en la forma sin combinar E. Aqu la velocidad ser proporcional a (S) porque el equilibrio de la Ecuacin ser empujado hacia la formacin de ms ES a medida que (S) aumenta, la velocidad inicial mxima de la reaccin catalizada (V max) se observar cuando virtualmente todo el enzima est en forma de complejo ES y la concentracin de E sea extremadamente pequea. En estas condiciones, el enzima est "saturado" con su sustrato de modo que el aumento adicional de [S] no tendr efecto sobre la velocidad. Esta condicin se producir cuando (S) sea lo suficientemente alta como para que todo el enzima libre se haya convertido en la forma ES. Cuando el complejo este se descompone dando el producto P, el enzima queda libre para catalizar la otra reaccin de otra molcula de sustrato. El electo de saturacin es una caracterstica distintiva de la catlisis enzimtica y es el responsable de la meseta observada. El modelo seguido en la Figura 6-11 recibe en ocasiones el nombre de cintica de saturacin. Cuando el enzima se mezcla inicialmente con un gran exceso de sustrato, existe un periodo inicial, denominado estado pre-estacionario, durante el cual aumenta la concentracin del complejo ES. Normalmente el estado pre-estacionario es demasiado corto para que sea observado fcilmente y dura tan slo unos nicrosegundos. La reaccin alcanza rpidamente un estado estacionario en el que [ES] (y la concentracin de otros intermediarios) permanece aproximadamente constante con el tiempo. El concepto de estado estacionario fue presentado por G.E. Briggs y Haldane en 1925. La medida refleja generalmente el estado estacionario, aun cuando se limite a los primeros instantes de la reaccin, y el anlisis de las velocidades iniciales se conoce como cintica del estado estacionario. La relacin entre concentracin de sustrato y velocidad de reaccin se puede expresar de manera cuantitativa La curva que representa la relacin entre (S) y V 0 tiene la misma forma general para la mayora de enzimas (se acerca a una hiprbola rectangular) y se puede expresar algebraicamente mediante la ecuacin de Michaelis-Menten. Estos investigadores dedujeron esta ecuacin a partir de su hiptesis bsica de que el paso limitante ce velocidad en las reacciones enzimticos es la descomposicin del complejo ES para formar el producto y el enzima libre. La ecuacin es
V0 =
Vmax ( S ) K m + (S )
Los trminos importantes son (S), V0, Vmax y una constante llamada constantes de Michaelis o Km. Todos estos trminos se pueden medir fcilmente de manera experimental. FACULTAD DE MEDICINA - E.A.P. MEDICINA HUMANA
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_____________________________________________________________________ Aqu desarrollaremos la lgica bsica y los pasos algebraicos en una deduccin moderna de la ecuacin de Michaelis-Menten, la cual incluye la suposicin del estado estacionario introducida por Briggs y Haldane. La deduccin se inicia con las dos reacciones bsicas que intervienen en la formacin y descomposicin ce ES. En los primeros momentos de la reaccin, la concentracin del producto (E) es despreciable y se hace la suposicin simplificadora de que puede ignorarse la reaccin inversa P S (descrita por k. Esta suposicin no es crtica y simplifica nuestra tarea. La reaccin global se reduce a
E + S ES E + P
V0 se determina por la descomposicin ce ES para dar producto, la que viene fijada por (ES):
V0 = K 2 ( ES )
En primer lugar introduciremos el trmino (E) que representa la concentracin total de enzima (la suma de enzima libre y enzima unido al sustrato). El enzima libre, o no fijado, se puede representar por tanto, como (E) (ES). Adems, debido a que (S) es normalmente mucho mayor que (E,), la cantidad de sustrato fijada por el enzima en cualquier momento de la reaccin es despreciable comparada con la (S) total. Con estas consideraciones los pasos siguientes nos conducirn a una expresin de V 0 en funcin de parmetros que se miden fcilmente. Paso 1 Las velocidades de formacin y descomposicin de ES vienen determinadas por las constantes ce velocidad A, (formacin) y k-1 + k-2 (descomposicin), segn las expresiones siguientes: Velocidad de formacin de ES = K 1 ( E ) ( ES ])[ S ] Velocidad de descomposicin de ES = K 1 ( ES ) + K 2 [ ES ] Suponemos ahora una importante consideracin: que; la velocidad inicial ce reaccin refleja un estado estacionario en el que [ES] es constante, es decir, la velocidad de formacin de es igual a la velocidad de descomposicin. A esto seto: denomina hiptesis del estado estacionario.
V1 = ( E )( S ) K1( ES )( S ) = K 1 + K 2 )( ES )
Se realiza una serie de pasos algebraicos para resol ver la Ecuacin en funcin de [ES], Se resuelve el primer miembro y se saca factor comn en el segundo:
V1 = ( E ] ( ES ])[ S ] = K 1 + K 2 )[ ES ]
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Sumando el trmino K1(ES)(S) a ambos lados de la ecuacin simplificando da:
K1 = ( E ])[S ] = ( K1 ( S ) + K 1 + K 2 )[ ES ]
Despejando [E] se obtiene:
[ ES ] =
K1[ E ][ S ] K1 ( S ) + K 1 + K 2
Esta expresin aun se puede simplificar ms combinando toas las constantes de velocidad en una expresin:
[ ES ] =
K1[ E ][ S ] K1 ( S ) + K 2 + K1 ) / k1
El trmino (K2 K1)/K1 se define como la constante de Michaelis Menten. Km.
[ ES ] =
[ E ][ S ] ( S ) + K 2 + K 1 ) / k1
Ahora podemos expresar V0 en funcin de (ES], sustituyendo [ES] por el segundo miembro de. obtenemos
[ ES ] =
K 2( E ][ S ] Km + ( S )
Esta ecuacin aun se puede simplificar ms. Dado que velocidad mxima se obtendr cuando el enzima est saturado (es decir cuando (E) = (E), V max se puede definir como K2(E).
V0 =
Vmax ( S ) Km + ( S )
Pista es la ecuacin de Michaelis-Menten, la ecuacin de velocidad de una reaccin catalizada enzimticamente con un sustrato. Es una definicin de la relacin cuantitativa entre? la velocidad inicial V0 la velocidad mxima Vmax y la concentracin inicial de sustrato [S], todos ellos relacionados a travs.
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Dependencia de la velocidad inicial con respecto a la concentracin de sustrato. En el graneo se muestran los parmetros Cinticos que definen los lmites de la curva a (S) alta y baja. A baja (S), Km (S), por lo que el trmino IS1 del denominador de la ecuacin de MichaelisMenten es insignificante; la ecuacin se simplifica a V0 = Vmax l(S)/Km por lo que V0 tiene una dependencia lineal con respecto a (S) tal como se observa. A (S) alta, en donde (S) Km. el trmino Km del denominador de la ecuacin de Michaelis Menten es insignificante, simplificndose la reaccin a V0=Vmax esto coincide con la meseta que se observa a (S) elevada. La ecuacin de Michaelis-Menten es, pues, congruente con la dependencia observada de V0 con respecto a (S) y la forma de la curva est definida por los trminos V max/Km a baja (S) y Vmax a alta (S) de la constante de Michaelis, Km. Obsrvese que A tiene unidades de concentracin. Se ajusta esta ecuacin a los hechos? S, podemos confirmar esto considerando las situaciones lmite donde (S) es muy alta o muy baja De la ecuacin de Michaelis-Menten emerge una relacin numrica importante en el caso especial en que sea exactamente la mitad de Vmax . En ese caso
Vmax V max( S ) = 2 Km ( S )
Al dividir por Vmax obtenemos:
1 (S ) = 2 Km + ( S )
Despejando Km obtenemos Km + (S))2(S)-0
1 Km = ( S ), cuando V0 = Vmax 2
Se trata de una definicin prctica de Km, que resulta muy til: Km es concentracin de sustrato a la cual I es la mitad de V max. FACULTAD DE MEDICINA - E.A.P. MEDICINA HUMANA equivalente a la
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_____________________________________________________________________ La ecuacin de Michaelis-Menten puede transformarse algebraicamente en formas que son tiles para la determinacin prctica de Km y V max. Para comparar las actividades enzimticos se utilizan los parmetros cinticos. Es importante distinguir entre la ecuacin de MichaelisMenten y el mecanismo cintico especfico sobre el que se bas originalmente. La ecuacin describe el comportamiento cintico de muchos enzimas, dicindose de todos los enzimas que muestran una dependencia hiperblica de frente a (S) que siguen una cintica de MichaelisMenten. La regla prctica do que Km = (S) cuando V0=1/2 V max es vlida para todos los enzimas que siguen una cintica de Michaelis-Menten. Sin embargo, la ecuacin de MichaelisMenten no depende del mecanismo relativamente sencillo de dos pasos propuesto por Michaelis y Menten. Muchos enzimas que siguen cintica de Michaelis-Menten tienen mecanismos de reaccin muy diferentes y enzimas que catalizan reacciones con seis u ocho pasos identificabas muestran, a menudo, el mismo comportamiento cintico en el estado estacionario.
ALGUNOS ENZIMAS Y SUSTRATOS Enzima Hexoquinasa (cerebro) Carbnico Anhidrasa Quimotripsina B Galactosasidasa Treonina Deshidratada Sustrato ATP D-Glucosa D-Fructosa HC03 Gliciltirosinilglicina N-Benzoiltirosinamida D-Lactosa L-Treonina Km(mM) 0,4 0,05 1.5 26 108 2.5 4.0 5.0
Muchos Enzimas Catalizan Reacciones En Las Que Intervienen Dos O Ms Sustratos. Hemos visto de qu modo afecta la (S) a la velocidad de una reaccin enzimtica sencilla (S P) en la que hay una sola molcula de sustrato. No obstante, en muchas reacciones enzimticos, se fijan al enzima dos (o incluso ms) molculas de sustrato diferentes que participan en la reaccin. Por ejemplo en la reaccin catalizada por la hexoquinasa, el ATP y la glucosa son las molculas de sustrato y el ADP y la glucosa 6-fosfato los productos: ATP +-glucosa ADP + glucosa 6-fosfato Las velocidades de tales reacciones bisustrato se pueden analizar segn el mtodo de Michaelis-Menten. La hexoquinasa tiene un Km caracterstico para cada uno de sus sustratos. Las reacciones enzimticas en las que hay dos sustratos implican normalmente la transferencia de un tomo o un grupo funcional de un sustrato al otro. Tales reacciones transcurren por una o varias rutas diferentes. En algunos casos, ambos sustratos estn fijados al enzima al mismo FACULTAD DE MEDICINA - E.A.P. MEDICINA HUMANA
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_____________________________________________________________________ tiempo, formando en algn momento de la reaccin un complejo ternario no covalente; los sustratos pueden fijarse en una secuencia al azar o en un orden especfico. En otros casos no se forma complejo ternario cuando el primer sustrato se convierte en producto y se disocia antes de que se una el segundo sustrato. Un ejemplo de esto es el mecanismo ping-pong o de doble desplazamiento. La cintica del estado estacionario puede ayudar a menudo a distinguir entre estas posibilidades. LOS ENZIMAS ESTN SUJETOS A INHIBICIN REVERSIBLE O IRREVERSIBLE Los inhibidores enzimticos son agentes moleculares que interfieren en la catlisis, haciendo ms lentas o deteniendo las reacciones. Los enzimas catalizan virtualmente todos los procesos celulares, por lo que no es sorprendente que los inhibidores enzimticos se encuentren entre los agentes farmacuticos ms importantes. Por ejemplo, la aspirina el enzima que cataliza el primer pas de la sntesis de prostaglandinas, compuestos que intervienen en muchos procesos, algunos de los cuales producen dolor. El estudio de los inhibidores enzimticos tambin ha proporcionado informacin valiosa sobre mecanismos enzimticos y ha ayudado a definir algunas rutas metablicas. Hay dos amplias clases ce inhibidores enzimticos: reversibles e irreversibles. Inhibicin reversible Un tipo de inhibicin reversible frecuente se denomina competitiva. Un inhibidor competitivo compite con el sustrato por el sitio activo del enzima. Mientras el inhibidor (I) ocupa el sitio activo, impide la fijacin del sustrato. Muchos inhibidores competitivos son compuestos que se parecen al sustrato y que se combinan con el enzima formando el complejo El, pero sin llevarlo a la catlisis. Incluso combinaciones transitorias de este tipo afectarn negativamente a la eficiencia del enzima. Al considerar la geometra molecular de los inhibidores que se parecen al sustrato podemos llegar a menudo a conclusiones sobre qu regiones de un sustrato normal interaccionan con el enzima. La inhibicin competitiva se puede analizar cuantitativamente mediante cintica del estado estacionario. En presencia de un inhibidor competitivo, la ecuacin de Michaelis-Menten pasa a ser:
V0 =
V max ( S ) Km + ( S )
Donde:
=1
[I ] K1
y k1 =
[ E ][ I ] [ EI ]
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Tres tipos de inhibicin reversible, (a) Los inhibidores competitivos se unen al sitio activo del enzima, (b) Los inhibidores competitivos se unen en un sitio distinto, pero slo se unen al complejo ES. K es la constante de equilibrio de fijacin del inhibidor a , mientras que K,' es la constante de equilibrio de Fijacin del inhibidor a ES. (c) Los inhibidores mixtos se unen a sitios separados, pero pueden unirse tanto a E como ES. El trmino Km determinado experimentalmente. la K m observada en presencia de inhibidor, a menudo se denomina Km aparente". Debido a que el inhibidor se une de manera reversible al enzima, se puede cambiar el sentido de la competicin en favor del sustrato simplemente con la adicin de ms sustrato Cuando [S] excede sobradamente a [I] se minimiza la probabilidad de que se fije una molcula de inhibidor, motivo por e cual la reaccin muestra una Km Vmax normal.
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_____________________________________________________________________ El etanol compite de manera efectiva con el metanol como sustrato de la alcohol
deshidrogenasa. El efecto del etanol es muy parecido al de un inhibidor competitivo, con la distincin de que el etanol tambin es un sustrato y su concentracin disminuir con el tiempo a medida que el enzima lo convierta en aceitado. El tratamiento por intoxicacin por metanol es la infusin intravenosa lenta de etanol a una velocidad que mantiene una concentracin controlada en el torrente sanguneo durante varias horas. Esto disminuye la formacin de formaldehido, reduciendo el peligro mientras los riones filtran el metanol que se excretar inocuamente por la orina. Hay otros dos tipos de inhibicin reversible, acompetitiva y mixta, que a menudo se definen aplicados a enzimas con un solo sustrato pero que en la prctica slo se observan con enzimas que actan con dos o ms sustratos. Un inhibidor competitivo es el que se fija a un sitio distinto al que se fija el sustrato en el sitio activo y que, a diferencia del inhibidor competitivo, slo se une al complejo ES. En presencia de un inhibidor acompetitivo, la ecuacin de MichaelisMenten ''Cambia
V0 =
Donde:
V max[ SI ] Km +[ S ] V max[ SI ] Km + [ S ]
V0 =
As un inhibidor acompetitivo disminuye La Vmax medida. La Km aparente tambin disminuye, debido a que la (S) necesaria para alcanzar la mitad de la Vmax disminuye en un factor ES. La ecuacin de velocidad que describe la inhibicin mixta es
Un inhibidor mixto tambin se fija a un sitio distinto al del sustrato, pero se fija tanto a E como a
V0 =
V max[S ]
Km + [ S ]
Normalmente, un inhibidor mixto afecta tanto a Km como a Vmax. El caso especial en que
, raramente encontrado en la prctica, se define clsicamente como inhibicin no
competitiva. Inhibicin irreversible. La reaccin de la quimotripsina con el diisopropilluorofosato (DIFP) inhibe el enzima irreversiblemente. Esta reaccin condujo al descubrimiento de que la Ser'95 es la serina clave del sitio activo de la quimotripsina. Un caso muy especial de inhibidores irreversibles son los inactivadores suicidas. Estos compuestos son relativamente poco reactivos hasta que se unen al sitio activo de un enzima especfico. Un inactivador suicida pasa a travs de los primeros pasos de una reaccin enzimtico normal, pero a continuacin se convierte en un compuesto muy reactivo que se FACULTAD DE MEDICINA - E.A.P. MEDICINA HUMANA
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_____________________________________________________________________ combina irreversiblemente con el enzima en lugar ce ser transformado en el producto normal. A esto? compuestos tambin se los llama inactivadores basados en el mecanismo, va que utilizan el mecanismo de reaccin enzimtico normal para inactivar el enzima. Estos inhibidoras juegan un papel central en el diseo racional un mtodo moderno para la obtencin de nuevos agentes farmacuticos mediante el que se sintetizan nuevos sustratos sobre la base del conocimiento adquirido sobre sustratos y mecanismos de reaccin. Debido a que el inactivador suicida se ha diseado para un enzima especfico y no es reactivo hasta que se halla en el sitio activo del mismo, los frmacos basados en este mtodo son con frecuencia muy efectivos y tienen pocos efectos secundarios.
EL PH AFECTA A LA ACTIVIDAD ENZIMTICA Los enzimas tienen un pH ptimo o un intervalo de pH en el que su actividad es mxima: a valores superiores o inferiores de pH la actividad disminuye. Esto no es sorprendente, dado que algunas cadenas laterales de aminocidos pueden actuar como cidos o bases dbiles que desarrollan funciones crticas en el sitio activo del enzima que dependen del mantenimiento de un cierto estado de mientras que en otras zonas de la protena algunas laterales ionizadas pueden jugar un papel esencial en las interacciones que mantienen la estructura de la protenas. La eliminacin de un protn de un residuo podra, por ejemplo, eliminar una interaccin inica esencial para la estabilizacin de la conformacin activa del enzima. Menos frecuentes son los casos en los que la sensibilidad al pH tenga relacen con la titulacin de un grupo del sustrato.
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IX. ENZIMAS REGULADORAS En el metabolismo celular hay grupos de enzimas que funcionan conjuntamente en rutas secuenciales para llevar a cabo un proceso metablico determinado, tal como la conservacin, en varias reacciones, de la glucosa en lactato o la sntesis a travs de diversas reacciones de un aminocido a partir de precursores sencillos. En tales sistemas enzimticos, el producto de la reaccin del primer enzima se convierte en el sustrato del siguiente. La mayor parte de las enzimas de cada ruta metablica siguen los comportamientos cinticos ya descritos. Sin embargo en cada ruta hay uno o ms enzimas que tienen un mayor efecto sobre la velocidad global de la secuencia de reacciones. Estos sistemas enzimas reguladores muestran una actividad cataltica mayor o menor en respuesta a ciertas seales. Los ajustes en la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas reguladores y, por ende, en la velocidad de la secuencia entera de reacciones, permiten que la clula se adapte a las necesidades cambiantes de energa y biomolculas requeridas para su crecimiento y la reparacin de sus componentes. En muchos sistemas multienzimticos el primer enzima de la secuencia es un enzima regulador. Este es un lugar excelente para regular una ruta metablica, puesto que la catlisis incluyo de las primeras reacciones de una ruta que conduce a un producto innecesario despilfarra energa y metabolitos requeridos en procesos mas importantes. Las restantes enzimas de las secuencia se encuentran normalmente en cantidades que proporcionan un exceso considerable de actividades catalticas, lo que hace proporcionado por las reacciones precedentes. Las actividades de las enzimas reguladoras se modulan de diversas maneras. Los enzimas alostricas funcionan a travs de la unin reversible, no covalente, de compuestos reguladores denominados moduladores alostricos o efectos alostricos, los cuales son generalmente pequeos metabolitos o cofactores. Otras enzimas estn reguladas por modificacin covalente reversible. Ambas clases de enzimas reguladores tienden a tener varias subunidades y, en algunos casos, el sitio o sitios reguladores y el sitio activo se FACULTAD DE MEDICINA - E.A.P. MEDICINA HUMANA que sus reacciones tengan lugar tan rpidamente como lo permita la asequibilidad de sustrato
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_____________________________________________________________________ encuentran en subunidades separadas. En los sistemas metablicos existen a los menos otros mecanismos mediante los que se regula la actividad de las enzimas. Algunas enzimas son estimuladas o inhibidas por protenas de control a las que se fijan. Otros se activan cuando se eliminan segmentos peptdicos mediante escisin proteoltica, la cual, a diferencia de la regulacin mediada por efectores, es irreversible. En procesos fisiolgicos tales como la digestin, la coagulacin de la sangre, la accin hormonal y la visin se encuentran importantes ejemplos de estos dos tipos de mecanismos. El crecimiento y la supervivencia celulares dependen del uso eficaz de los recursos que hacen posible las enzimas reguladores. No hay una regla nica que gobierne la existencia de diferentes tipos de regulacin en sistemas diferentes: Hasta cierto punto, la regulacin alostrica (no covalente) puede permitir el control afinado de las rutas metablicas que se requieren de modo continuado pero a diferentes niveles de actividad cuando cambian las condiciones celulares. La regulacin por modificacin covalente puede ser del tipo todo o nada (el caso mas comn en las roturas proteolticas) o dar lugar a ligeros cambios de actividad. En un mismo enzima regulador pueden darse varios tipos de regulacin. El resto de este capitulo se dedica a tratar estos procesos de regulacin enzimtica. Las protenas alostericas son las que presentan otras formas o conformaciones inducidas por la unin de moduladores. El mismo concepto se aplica a ciertos enzimas reguladores, en los que cambios conformacionales inducidos por uno o ms moduladores interconvierten formas ms activas y menos activas del enzima. Los moduladores de enzimas alostericos pueden ser inhibidores o estimuladores. El mismo sustrato es a menudo el modulador; las enzimas reguladores en los cuales el sustrato y el modulador son idnticos se denominan homotropicos. El efecto es similar al de la unin de O2 a la hemoglobina: la unin del ligando(o del sustrato en el caso de las enzimas) origina cambios conformacionales que afectan a la actividad posterior de otros sitios en la protena. Cuando el modulador es otra molcula diferente del sustrato, se dice que el enzima es heterotopico. Obsrvese que los moduladores alostericos no se deben confundir con los inhibidores acompetitivos y mixtos. Aunque estos ltimos se unen en un segundo sitio del enzima, no provocan necesariamente cambios conformacionales entre las formas activas e inactivas, por lo que los efectos cinticos son de ndole distintas. Las propiedades de las enzimas alostericas son significativamente diferentes a la de las enzimas no reguladores sencillos. Algunas de las diferencias son estructurales. Adems de sitios activos, las enzimas alostricos tiene generalmente uno o mas sitios reguladores o alostericos para la fijacin del modulador. Del mismo modo que el sitio activo de un enzima es especfico para su modulador. Las enzimas con varias moduladores tienen generalmente diferentes sitios de fijacin especficos para cada uno de ellos. En las enzimas homotropicos el sitio activo y el sitio regulador son el mismo. Generalmente las enzimas alostericos tambin son mayores y ms complejos que las enzimas sencillas. La mayora tienen dos o ms cadenas polipeptidicas o subunidades. La FACULTAD DE MEDICINA - E.A.P. MEDICINA HUMANA
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_____________________________________________________________________ asparto transcarbamilasa, que cataliza la primera reaccin de la biosntesis de nucletidos pirimidinicos, tiene 12 cadenas polipeptidicas organizadas en subunidades catalticas y reguladoras. Algunas enzimas reguladores experimentan modificaciones covalentes reversibles En otra clase importante de enzimas reguladores se modula la actividad por modificacin covalente de la molcula enzimtica. Entre los grupos modificadores se cuentan el fosforillo, adenililo, uridililo, metilo y adenosina difosfato ribosilo. Generalmente estos grupos se unen y se eliminan del enzima regulador por la accin de otras enzimas. Un ejemplo de enzima regulado por metilacin es el de la protena aceptora de metilos de la quimiotaxis de las bacterias. Esta protena forma parte de un sistema que permite a una bacteria nadar hacia un sistema atrayente en solucin y alejarse de las sustancias qumicas repelentes. El agente metilante es la S-adenosilmetionina. Algunas Enzimas Reguladores Utilizan Varios Mecanismos De Regulacin El glucgeno fosforilasa cataliza la primera reaccin de una ruta que alimenta el metabolismo energtico de los glcidos a partir de glucosa almacena. Esta es una etapa metablica importante y su correspondiente regulacin compleja. Aunque su regulacin primaria es a travs de una modificacin covalente, la glucgeno fosforilasa tambin es modulada de forma alosterica no covalente por AMP, un activador de la fosforilasa b, y por diversas molculas inhibidoras. Otras enzimas reguladores son moduladoras mediante modificacin covalente de un grupo funcional especfico necesario para la actividad. La fosforilacion de residuos aminocidos especficos es un mtodo particularmente comn de regulacin de la actividad enzimtica. Muchas enzimas proteolticas se sintetizan como precursores inactivos denominados zimogenos, que se activan por rotura de fragmentos peptdico pequeos. Las enzimas que actan en importantes interacciones metablicas pueden estar reguladas a travs de combinaciones complejas de efectores, lo que permite la coordinacin de las actividades en rutas interconectadas. X. PATOLOGAS INVESTIGADAS 1. Fenilcetonuria (PKU): La Fenilcetonuria (PKU) es una ECM de Fenilanina (Phe) capaz de causar retraso mental irreversible en ausencia de tratamiento, debido, en el 97-99% de los casos, a deficiencia en la enzima Phe-hidroxilasa heptica. La enfermedad cursa con niveles de Ph aumentados en sangre, lo cual permite establecer su diagnstico en el perodo neonatal, cuando an las manifestaciones
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_____________________________________________________________________ clnicas no son evidentes. La frecuencia con que se presenta es de 1:10000 nacidos vivos, y su patrn de herencia es autosmico recesivo. El tratamiento consiste en la administracin de una dieta especial restringida en Ph, bajo control continuo y cuidadoso. Dicho tratamiento debe iniciarse antes del mes de vida, a fin de conseguir un desarrollo intelectual normal del nio. Existe una forma menos frecuente de PKU (1-3%), debida a deficiencia de tetrahidrobiopterina (THB), que es un cofactor natural de la Phe-hidroxilasa, donde el defecto puede hallarse en la va de sntesis o de reciclado del mencionado cofactor. En estos casos, el tratamiento debe efectuarse suplementando adems con el cofactor activo, L-DOPA y 5-OH triptofano. Tambin existen deficiencias menos severas de la enzima Phe-hidroxilasa, las cuales cursan con niveles moderadamente aumentados de Ph en sangre y reciben el nombre de Hiperfenilalaninimias (HPA). en las mismas, la necesidad de implementacin del tratamiento depende de la tolerancia a la sobrecarga oral de Ph y de los niveles alcanzados por el aminocidos en sangre. 2. Hipotiroidismo Congnito Primario (HCP): El HCP es un desorden de la funcin tiroidea caracterizado por una produccin reducida de hormonas tiroideas, que consecuentemente genera niveles circulantes deficientes de las mismas. Dicha deficiencia en el perodo neonatal, es responsable de un importante retraso en el crecimiento y en el desarrollo mental. Esta enfermedad manifiesta algunos sntomas y signos inespecficos que pueden orientar al diagnstico clnico precoz, como ictericia prolongada, cada tarda del cordn, fontanela posterior mayor de 1cm, retraso en la eliminacin del meconio, hernia umbilical, constipacin, macroglosia, abdomen distendido, cabello grueso, piel fra, hipotermia, edad sea retrasada y dificultad en la alimentacin. Sin embargo, debe recalcarse que slo el 5% de los casos de HCP son diagnosticados sobre la base de manifestaciones clnicas, las cuales en general son moderadas y de progresin lenta. El HCP puede reconocer distintos orgenes. Los mismos son presentados en la siguiente tabla: Causas de HCP DISGENESIA TIROIDEA (85-90%) Agenesia Ectopa Hipoplasia DISHORMONOGENESIS (5-10%) Defecto en el receptor de Defecto post-receptor de
TSH TSH
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Defecto Defecto
en
el en
transporte
de
iodo
Defecto en el sistema de peroxidacin tiroglobulina Defecto en iodotirosina desiodinasa Existe un 3-4% restante que corresponde a hipotiroidismo secundario o terciario, donde la afectacin se localiza a nivel de hipfisis o hipotlamo. La frecuencia con que se manifiesta el HCP es de 1:3000 recin nacidos. El tratamiento requiere la administracin de sustitutos de hormona tiroidea (levotiroxina) antes de los 21 das de vida, con lo cual se evita, fundamentalmente, el dao neurolgico. Para la deteccin neonatal puede investigarse TSH (tirotrofina) y T4. En algunos programas se mide solamente TSH o T4, en cambio en otros se determinan ambos parmetros. El diagnstico definitivo se realiza midiendo el TSH, T3, T4 y T4 libre en suero del paciente, evaluando la edad sea radiolgicamente y determinando las caractersticas de la tiroides por centellografa. 3. Galactosemia: Se conocen tres tipos de errores congnitos del metabolismo (ECM) de galactosa (GAL) originados en la deficiencia de distintas enzimas involucradas en la ruta metablica principal, los cuales difieren en su cuadro clnicos y en su patrn bioqumico en sangre. De acuerdo a la severidad de dicho cuadro, la ms importante es la deficiencia de Gal-1-P-Uridil Transferasa, la cual se conoce comnmente como Galactosemia Clsica. La misma es capaz de producir retraso mental, cataratas, toxicidad hepatorrenal y en ocasiones la muerte del individuo a los pocos das de vida. La afeccin cursa con niveles elevados de GAL Total lo cual permite su deteccin en sangre del recin nacido. El patrn de herencia es autosmico recesivo y la frecuencia con que se manifiesta es de 1:60000. La restriccin dietaria de GAL en el perodo neonatal evita la instalacin de los mencionados sntomas y los pacientes resultan normales. 4.Hiperplasia Suprarrenal Congnita (HSC): La HSC es un desorden heredado en forma autosmica recesiva cuya frecuencia establecida internacionalmente es de aproximadamente 1 : 12.000 nacidos vivos. La misma, es ocasionada por un defecto en alguna de las 5 enzimas que intervienen en la esteroidognesis adrenal, lo cual trae aparejado una cada en la produccin de cortisol y, en algunos casos, una disminucin en la produccin de aldosterona.
En ms del 95 % de los casos la enzima afectada es la 21-Hidroxilasa, siendo la 17alfa-Hidroxi progesterona (17-OHPG) el principal precursor que se acumula en sangre. FACULTAD DE MEDICINA - E.A.P. MEDICINA HUMANA
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_____________________________________________________________________ Por esta razn, es el parmetro bioqumico de eleccin para la deteccin de HSC en Programas de Pesquisa Neonatal. Desde el punto de vista clnico - bioqumico, el dficit de 21-Hidroxilasa posee distintas formas de presentacin: 1) Forma perdedora de sal: se presenta con un dficit tanto de glucocorticoides como de mineralocorticoides, observndose una excesiva produccin de andrgenos. 2) Forma virilizante simple: no se manifiestan prdidas de sodio en orina ni hipercaliemia, sugiriendo que los pacientes afectados controlan la produccin de mineralocorticoides. 3) Forma no clsica o tarda: su principal signo clnico es la aparicin de hirsutismo en la adolescencia. 4) Forma asintomtica o crptica: carece de manifestaciones clnicas. Los pacientes del primer grupo pueden parecer normales al nacimiento, pero entre los 7 y 30 das de vida desarrollan una crisis salina que puede llevarlos a la muerte si no son diagnosticados y tratados adecuadamente. El exceso de andrgenos que se produce en los pacientes de las 3 primeras formas determina que las nias afectadas presenten al nacimiento genitales ambiguos, con distintos grados de virilizacin. Si este exceso de andrgenos no es corregido, traer aparejado en ambos sexos un aceleramiento del crecimiento seo con cierre temprano de las epfisis y desarrollo de pubertad precoz. El tratamiento se basa en la administracin de sustitutos hormonales que cumplen la funcin de las hormonas faltantes. En el caso de los pacientes que presentan la forma perdedora de sal se busca corregir el dficit tanto de mineralocorticoides como de glucocorticoides, en tanto en los grupos restantes solo es necesaria la correccin de estos ltimos. El objetivo principal del tratamiento consiste en lograr que el organismo sea capaz de mantener un balance adecuado de sales y agua, alcanzando parmetros normales de crecimiento, maduracin sexual y fertilidad en la vida adulta. El control del progreso del tratamiento se realiza mediante evaluaciones clnicas y monitoreos peridicos que permiten ajustar las dosis de la medicacin.
5. Deficiencia de Biotinidasa: Se trata de un error congnito del metabolismo que carece de signos clnicos en el perodo neonatal, capaz de producir sntomas neurolgicos como convulsiones, prdida FACULTAD DE MEDICINA - E.A.P. MEDICINA HUMANA
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_____________________________________________________________________ de la audicin y la vista, ataxia, hipotona y otras manifestaciones como retraso del crecimiento, hiperventilacin, apneas, dermatitis y alopeca. En ausencia de tratamiento, el inicio de la enfermedad se da en promedio a los tres meses de vida, pudiendo retrasarse hasta los 2 aos. Desde el punto de vista bioqumico presenta una deficiencia en la enzima Biotinidasa, la cual tiene como funcin la recuperacin de biotina, vitamina soluble del complejo B, de la va de degradacin de las carboxilasas Piruvato CoA-, Propionil CoA-, bMetilcrotonil CoA- y Acetil CoA-. A consecuencia de esto, los pacientes pueden presentar aciduria orgnica, cetoacidosis metablica e hiperamonemia moderada. El diagnstico neonatal se efecta midiendo la actividad de Biotinidasa en sangre entera colectada en papel de filtro, pudiendo detectarse deficiencias absolutas o parciales de la misma, segn si su actividad es < 10 % o de un 15-30 % respectivamente. El patrn de herencia es autosmico recesivo y la incidencia estimada es de 1:45.000. El tratamiento se realiza administrando por va oral dosis farmacolgicas de biotina de 5 a 20 mg/da, con lo cual es posible evitar la instalacin de los sntomas. 6. Enfermedad de Orina de Jarabe De Arce: La Enfermedad de Orina de Jarabe de Arce, conocida tambin como MSUD (Maple Syrup Urine Disease) o Leucinosis, es un error congnito del metabolismo de los aminocidos de cadena ramificada producida por una deficiencia en la decarboxilacin oxidativa de los cetocidos correspondientes a estos 3 aminocidos. El patrn de herencia con que se transmite es autosmico recesivo, en tanto su incidencia es variable encontrndose datos en la bibliografa que oscilan entre 1:185.000 nacidos vivos en individuos anglosajones y 1:60.000 nacidos vivos en individuos latinos. La enfermedad posee 5 formas fenotpicas de presentacin que se describen a continuacin: Forma Clsica: es la de mayor inters por la severidad de su cuadro clnico y por ser la ms comn de todas. La misma se caracteriza por un cuadro de encefalopata de comienzo neonatal, con rechazo de la alimentacin y somnolencia alrededor de los 10 das de vida que progresa rpidamente al coma sin causa aparente. Posteriormente, se instala un cuadro neurolgico de severidad progresiva que conduce al paciente a la muerte cuando no se realiza un diagnstico precoz e inicio inmediato del tratamiento adecuado. Como dato particular, y simultneamente con el cuadro antes descripto, el beb presenta un olor caracterstico en piel y orina que se asemeja a azcar quemada o jarabe de arce. Desde el punto de vista bioqumico se caracteriza por un defecto en la enzima Deshidrogenasa de los cetocidos de cadena ramificada (actividad 0-2 %), el FACULTAD DE MEDICINA - E.A.P. MEDICINA HUMANA
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_____________________________________________________________________ incremento de Val, Leu e Ile en sangre y orina, la presencia de Alo-Ile, y la excresin urinaria de los correspondientes cetocidos. Forma Intermitente: su forma de presentacin es ms leve, y las crisis metablicas recurrentes se desencadenan por infecciones o despus de una ingesta importante de protenas. Los individuos afectados por esta forma pueden ser sanos durante su primera infancia e incluso hasta antes de la adolescencia. Durante los perodos de crisis se encuentran niveles aumentados de Val, Leu e Ile, mientras que en los perodos intercrticos el cuadro clnico-bioqumico es absolutamente normal. A pesar de esto, y de acuerdo con el grado de severidad observado durante las crisis se pueden presentar secuelas neurolgicas importantes. Forma Intermedia: se caracteriza por un cuadro clnico menos severo que la forma Clsica. Los individuos afectados presentan retraso de crecimiento y retardo mental en ausencia de tratamiento. Bioqumicamente se caracteriza por presentar una actividad enzimtica residual de 3 a 30 % con una elevacin persistente de Val, Leu e Ile. Forma Respondedora a Tiamina: se presenta en pacientes con un cuadro clnico similar a la forma intermedia, pero a diferencia de aquella requiere para su tratamiento adems de la restriccin dietaria de Val, Leu e Ile, la administracin de dosis variables de tiamina. Forma Deficiente en Subunidad E3: es una forma muy poco frecuente que afecta a una de las 3 subunidades de la enzima Deshidrogenasa de los cetocidos de cadena ramificada. Se caracteriza por presentar un cuadro similar al de la forma intermedia pero acompaado de acidosis lctica. Con respecto al tratamiento la nica alternativa posible de es mediante la restriccin dietaria de protenas y ms especficamente de los aminocidos de cadena ramificada, siendo su efectividad dependiente de la precocidad con que se implemente el mismo. Las normas recomiendan iniciarlo antes de los 10 das de vida para asegurar la ausencia de secuelas neurolgicas.
Resultados La siguiente tabla resume los principales datos estadsticos obtenidos en el Programa de Deteccin de Errores Congnitos de la Fundacin Bioqumica Argentina desde el inicio de la deteccin de cada una de las patologas hasta diciembre de 2002. FACULTAD DE MEDICINA - E.A.P. MEDICINA HUMANA
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Resultados Patologa PKU HCP FQ Galactosemia Neonatos Estudiados 1.207.642 1.192.444 289.166 218.811 Casos Detectados PKU: HPA: 65 HCP: 472 FQ: 46 Clasica: Def. parc: sal: Def. Kinasa: 1 Perdedora de HSC 126.831 No Virilizante No clasificada: 1 Absoluta: Parcial: 3 --- 0 --- 0 clsica: simple: Incidencia 531: 1: 18.579 1: 2.526 1: 6.286 51: 261: 1: 218.811 191: 21: 21: 1: 126.831 0--1: 36.927 ----43.762 8.415 6.675 63.415 63.415 22.785
Deficiencia de Biotinidasa MSUD Panel Ampliado
110.781 1.702 613
Porfiria Mal funcionamiento de un grupo de enzimas llamadas porfirinas, que se sintetizan a partir de el acetato y la glicina;las porfirinas ms importantes que existen en la naturaleza son la uroporfirina, coproporfirina y la protoporfirina, esta ltima esta presente en la hemoglobina. La palabra porfiria proviene del griego porphyra, que significa morado o prpura. Las porfirias se pueden dividir en dos grupos porfiria eritropoyetica
Alcaptonuria Esta enfermedad es debida a la ausencia de una enzima del Higado , la oxidasa homogentistica . Como resultado de este deficit , se produce un bloqueo de la conversion del acido homogentisico(2,5-dihidroxifenilacetico), producto del metabolismo de la fenilalanina y la tirosina en acido maleilacetoacetico.
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BIBLIOGRAFA EDUARDO D. P. DE ROBERTIS, J. HIB Y R. PONZIO BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR de DE ROBERTIS Buenos aires, republica argentina - duodcima edicin- segunda reimpresin - editorial EL ATENEO - 26 marzo 1997.
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B. ALBERTS, A. JHONSON, J. LEWIS, M. RAFF, K. ROBERTS, P. WALTER BIOLOGIA MOLECULAR DE LA CELULA Cuarta edicin - 2004 ediciones omega, Barcelona. ALBERT L. LEHNINGER BIOQUMICA / LAS BASES MOLECULARES DE LA ESTRUCTURA Y FUNCION CELULAR. Decimotercera reimpresin, octubre 1989 ediciones omega S.A. Barcelona. impreso en Espaa.
PRINCIPIOS DE BIOQUMICA EDITORIAL MANUAL MODERNO AO: 1989 MXICO. ROBBINS - PATOLOGIA ESTRUCUTURAL Y FUNCIONAL sexta edicin, 2000, Mxico 1475 pp. BIOQUMICA DE HARPER EDITORIAL : EL MANUAL MODERNO
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ejemplos Dehidrogenasas Aminooxidasa Deaminasas Catalasas

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El trmino (K2 K1)/K1 se define como la constante de Michaelis Menten. Km.

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