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Insecticidas biolgicos en el control de insectos plaga: agrcolas, forestales, de almacn y urbanas en Mxico

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1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.

Partes: 1, 2 Resumen Introduccin y Antecedentes Microbios usados como insecticidas biolgicos Tipos de toxinas producidas por B.th. Medios de cultivo para el crecimiento y produccin de B.th. Condiciones de crecimiento de B. th para la formacin del complejo espora/cristal Conclusin Literatura citada

Resumen
En Mxico como en el mundo la produccin de alimentos de origen agrcola requiere de proteccin contra plagas y enfermedades que la limitan y/o destruyen, mediante la aplicacin de pesticidas qumicos (PQ), que si bien los controlan, tambin causan contaminacin ambiental y en consecuencia deteriorando la calidad de vida humana. El objetivo de esta breve revisin es mostrar el potencial de los insecticidas microbianos para minimizar la aplicacin de PQ a favor de un ambiente sano y una agricultura sustentable. Palabras clave. Pesticida, ambiente, contaminacin, salud, microbios.

Introduccin y Antecedentes
La agricultura actual enfrenta el reto de mantener un alto nivel produccin de alimentos, por ello se aplican pesticidas qumicos que los protegen, pero que contaminan el ambiente y disminuyen la calidad de vida humana (1-3). El control biolgico es el empleo de microorganismos entomopatgenos que enferman o intoxican con sus productos a insectos plaga (IP): agrcolas, pecuarios, forestales y urbanos, para evitar su ataque y/o causarles la muerte (4-6).

Microbios usados como insecticidas biolgicos


Los microorganismos comunes en el control biolgico de IP pueden ser: bacterias, hongos y virus. Entre los gneros de bacterias ms conocidos: Bacillus thuringiensis (B.th) es uno de los ms importantes por su espectro de eliminacin de IP en cualquier ambiente, mientras que entre los hongos los gneros: Beauveria, Metarhizium, Paecilomyces tienen un amplio mercado por su especificidad y efectividad contra de IP. Mientras de los virus del tipo baculovirus son una alternativa para eliminarlos, cuando bacterias u hongos no son los recomendados, segn se muestra en el cuadro 1 que seala una amplia diversidad de opciones viables para la regulacin de IP en cultivos agrcolas, donde es posible sustituir parcial o totalmente

los PQ, adems se incluye el control de insectos vectores (IV) de enfermedades infecciosas humanas, como los mosquitos que transmiten: paludismo, dengue, fiebre amarilla, etc., de alto riesgo para la poblacin de comunidades rurales y urbanas (7-9). Cuadro 1. Microbios como insecticidas biolgicos de insectos plaga: agrcolas, forestales, de almacn y urbanos. Microorganismo entomopatgeno/entomotxico Bacillus thuringiensis Beauveria bassiana Metarhizium anisopliae Paecilomyces fumosoroseus Ordenes de insectos plaga (IP) ejemplos: Lepidpteros, colepteros, dpteros. Palomillas, gusanos, mariposillas. Plagas de cultivos agrcolas e invernaderos: chapulines, mosquita blanca. Termitas y cucarachas IP de invernaderos y mosquita blanca.

Referencias (1, 5, 10). En Mxico la produccin de insecticidas biolgicos se realiza por organizaciones pblicas y privadas, aunque obviamente las ltimas son las ms importantes, en especial las transnacionales, las que generan y comercializan: hongos entomopatgenos como: Beauveria, Metarhizium, Paecilomyces, para estados de intensa actividad agropecuaria como: Colima, Guanajuato, Oaxaca y Sinaloa. En el caso de las pblicas el nivel produccin no es industrial, pues se trata de proyectos de investigacin asociados con el control biolgico de IP (1,10). Entre las compaas privadas Agrobionsa comercializa B. th y Beauveria en Culiacn, Sinaloa, el dominio del mercado depende trasnacionales como Abbott-Dupont con el 30-40% del total de ventas, en tanto Sandoz alcanza el 20%, Termo Trylogy el 15% , mientras que Ecogen y Mycogen el 10%, segn se presenta en el cuadro 2 (4,6,9). Los insecticidas biolgicos se usan en Mxico desde hace 56 aos, su aplicacin se incremento significativamente en 1990, en un principio el gobierno federal constituyo los Centros Regionales de Reproduccin de Organismos Benficos (CREROB), en ese mismo ao, stos se transfirieron a asociaciones de productores agropecuarios, lo que aumento su aceptacin y uso (23). Respecto a su valor econmico en Mxico, laindustria de los insecticidas biolgicos ocupan apenas una pequea fraccin del mercado mundial con un 7.5%, en comparacin con el nivel de venta de los PQ, de porcentaje mayoritario, la expectativa es que crecer dada la mejor conciencia ecolgica del pblico, consumidor de productos vegetales y de las ganancias de los productores agrcolas que usan PQ. En 1995 en Mxico la aceptacin y empleo de insecticidas biolgicos creci entre un 15-20%, para la proteccin de cultivos agrcolas de gramneas como el maz, el algodn, en hortalizas, y en leguminosas. Incluso con la introduccin de plantas transgnicas B.th, que contienen el gen llamado Cry que codifica para la dendotoxina de esta bacteria, con el que son parcialmente tolerantes a IP, pero sujetas a una controversia ambiental, que no sucede con los productos a base de B.th(20-22).

Leer ms: http://www.monografias.com/trabajos69/insecticidas-biologicos-control/insecticidas-biologicoscontrol.shtml#ixzz2W9lsySVM

Centros Regionales de Reproduccin de Organismos Benficos (CREROB)

Taxonoma de Bacillus thuringiensis (B.th)


Segn el manual de Bergey (2001) B.th es una bacteria Gram positiva aerobia estricta, heterotrfica, que forma una espora por clula vegetativa y simultneamente un cuerpo llamado paraesporal o cristal de protena, de morfologa variada: cubos, rombos, amorfos, como se muestran en la figura 2, tambin conocida como d-endotoxina que intoxica a los diferentes ordenes de IP, de acuerdo con su estructura molecular (1012). III.1 Distribuccin de B.th en el ambiente. Las esporas B.th se recuperan de: suelo agrcola, virgen, de hojas de plantas, de insectos, de granos y de fabricas de alimentos para animales a base de productos vegetales, pueden ser reservorios de las esporas de B.th, su identificacin se inicia con la deteccin del cristal al microscopio de luz, como se muestra en la figura 1, cuando crece en caldo nutritivo, adems de su perfil bioqumico y el antgeno flagelar, aspecto clave para la taxonoma de las variedades reconocidas hasta la actualidad, tambin existe la dependiente del origen gentico sus caractersticos cristales (13-15).

Figura 1. Microfotografa al microscopio de luz 100 X de Bacillus thuringiensis var kurstaki con su cuerpo paraesporal en caldo nutritivo a 40 h de incubacin. . Figura 2. Microfotografia al microscopio electrnico de cristales de d-endotoxina de Bacillus thuringiensis var kurstakii en caldo nutritivo.

Tipos de toxinas producidas por B.th.


En las diferentes estadios de su ciclo biolgico Bth sintetiza 3 tipos de toxinas: en el vegetativo Iy II genera 2: una a-exotoxina o fosfolipasa C y la Y-exotoxina, durante III al VI de la esporognesis produce la dendotoxina codificada por genes plasmdicos (1,9,11). La a-exotoxina, ha sido poco investigada perose reporta con actividad toxica contra Galleria mellonella, aunque tambin lo es para mamferos. Qumicamente la Y-exotoxina o thuringiensin, es toxica, porque causa la inhibicin de la RNA polimerasa por competicin con el ATP, la Y-exotoxina se supone, que es una seal molecular en B.th en el control de la transcripcin de genes relacionados con la esporulacin, es un derivado de nucletido de adenina unido a glucosa y con un cido fosfoalrido, txico para la mosca domestica, aunque teratognica para animales de laboratorio (12,14,17). La d-endotoxina es la ms estudiada de las producidas por B.th tiene naturaleza proteica, con un peso molecular de 1.34X105 Daltons, constituida por 18 de los 20 aminocidos, en su estructura tridimensional tiene un 20% de a-hlice, 35% de lamina Y-plegada y el 45% es desconocido (16-18). IV.1 Mecanismo de accin del cristal de B.th en IP. Cuando un cristal o protoxina es ingerido se activa en su intestino el pH alcalino entre 7.5 a 8.0 y por las proteasas digestivas especficas, que lo convierten en una toxina activa, con una masa molecular de 68Kda. La protena txica se inserta en la membrana de las clulas epiteliales del intestino medio del IP y causa un canal inico con prdida de ATP, 15 min despus el metabolismo celular se detiene e inicia la deshidratacin que ocaciona su muerte (19-21).

Medios de cultivo para el crecimiento y produccin de B.th.


En la produccin del complejo espora/cristal es necesario cultivar B.th en medio de crecimiento a base de subproductos del maz hidrolizado como el almidn y dextrinas, al igual que jugo de agave y melaza de caa que contiene fructosa, se obtienen excelentes resultados para la esporulacin y de calidad txica del cristal (6,17,22). La melaza de caa contiene diferentes azucares de bajo peso molecular, que B.th utiliza como fuente de C de bajo costo, que tienen un efecto positivo sobre la toxicidad de la d-endotoxina, mientras que la harina de pescado (combinacin de azucares, protenas, vitaminas y minerales), como lo es la semilla de algodn, de soya, de garbanzo, de haba, de cacahuate y de lenteja, tambin es posible con el lquido de remojo de maz; los residuos de levadura, la sangre de res, de suero de leche, son materiales nutricionales que estimulan

la sntesis de la d-endotoxina con alta actividad insecticida (3,6,13). Mientras que se usan factores de crecimiento para mejorar la calidad txica del cristal de B.th como: el extracto de levadura: una fuente de vitaminas del complejo B, ya que su carencia retrasa la esporulacin y la formacin de cristales en consecuencia la toxicidad del complejo espora/cristal se reduce considerablemente (7,14, 20). Cuadro 3. Sustratos naturales usados como medios de cultivo para la produccin de complejo espora/cristal de Bacillus thuringiensis.

Referencias3,7,10.

Condiciones de crecimiento de B. th para la formacin del complejo espora/cristal


En la produccin del complejo espora-cristal de B.th se emplea una fermentacin sumergida o superficial. El medio de cultivo se siembra con un 10% de B.th como inculo: condiciones de ambos proceso: temperatura entre 28 y 32 C, un pH inicial de 6,8-7,2; es importante el suministro de oxgeno por la elevada demanda de B.th en la fase de crecimiento exponencial, pues su carencia o limitacin disminuye el nmero de clulas vegetativas, en consecuencia habr pocas espora y menos dendotoxina (22,23). Mientras que cuando se eleva el suministro de oxgeno en medios de cultivo ricos para B.th, se genera un exceso de espuma que disminuye las clulas vegetativas potenciales productoras de cristales txicos para IP, por lo que es necesario agregar un antiespumante (8,19). a) En la fermentacin sumergida: el inculo se usa en un medio de cultivo enriquecido para suplir la demanda nutricional de B.th (5,10,13) como el siguiente (en %): melaza de remolacha (1); residuos de maz (0.85); carbonato clcico (0.1); harina de maiz (1.0); con base a lo anterior la esporulacin y cristal de la bacteria, alcanzan un valor aproximado de de 5 x 109 esporas /ml, despus de 32 h de incubacin. Otro medio de cultivo para obtener 5 veces ms la cantidad de esporas y cristales de B.th (4,17,18,20)contiene lo siguiente (en %): almidn de maz (6.8); casena (1.94); sacarosa (0.64); extracto de levadura (0.6). b) En la fermentacin superficial Se emplea un medio de cultivo que contiene lo siguiente (en %): dextrosa (1.5); maiz (0.45) fosfato de potasio (0.35); cloruro de calcio (0.01) VI.1 Recuperacin del complejo espora/cristal de B.th. El resultado de la fermentacin o formacin de los principios activos txicos para a IP, se obtienen por tcnicas que aplican: la centrifugacin, la filtracin, la precipitacin o bien una combinacin de los anteriores (12,20,23). VI.2 Bioensayos para medir la calidad txica del complejo espora/cristal de B.th. Se prepara un gradiente de concentracin con el complejo espora/cristal, lo que se mezcla con una la dieta artificial para IP con larvas de diferentes estadios o etapas de crecimiento del gusano cogollero ( Spodoptera frugiperda L) un problema fitosanitario que reduce considerablemente la produccin de maz, las larvas se depositan en recipientes con la dieta, se incuba durante por lo menos 2 semanas 4, posteriormente se determina la concentracin letal media en g. de protena/volumen de la dieta artificial, donde sabremos la cantidad de toxico en la espora que sea letal para el insecto (1,3,13,15).

Conclusin
El control de IP agrcolas, forestales, de almacn y urbanas es una opcin ecolgica para eliminar o reducir el impacto negativo de esta clase de insectos, con la ventaja de que no causa la contaminacin ambiental. Sin embargo la aplicacin de agentes biolgicos, requiere de un conocimiento suficiente de su forma de accin para obtener buenos resultados, en la regulacin de poblaciones de insectos que son un problema, para la salud de humanos y plantas, en especial cuando se pretende minimizar el empleo de PQ y mejorar la calidad de vida humana. Se dedica este trabajo a los promotores del control biolgico en el mundo. Agradecimientos por el apoyo a: Proyecto 2.7 (2009) CIC-UMSNH, y BIONATURA, SA DE CV, MXICO.

Literatura citada
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21. Sthaly, D.p., D.W. Dingman., L.A. Bulla, Jr., and Aronsosn, A. I. 1978. Possible origin and function of the parasporal crystal in Bacillus thuringiensis Biochem. Biophys. Res. Comn. 84:581-588. 22. Valadares, G., Whittome, B., Shore, B., and David, B. 2001. Identification of Bacillus thuringiensis subsp. Kurstaki strain HD-1 like bacteria from environmental and human samples after aerial spraying of Victoria British Columbia, Canada, with foray 48B. Appl. Environ Micribol. 67:1035-1043. 23. Wirth, M.C., Delecluse, A., and Walton, W.E. 2000. Lack of cross-resistence to cry 19A from Bacillus thuringiensis subsp. Jegathesan in culex quinquefasciatus (Diptera:Culicidae) resistant to cry toxins from Bacillus thuringiensis subsp. Israelensis Appl. Environ. Microbiol. 67:1956-1958.

Autor: Morales R. V.* Garay R. B.* Romero H, A.* Juan Manuel Snchez-Yez** *Ingeniera Bioqumica, Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas, Instituto Politcnico Nacional, Carpio y Plan de Ayala, Mxico, D.F. **Microbiologa Ambiental. Instituto de Investigaciones Qumico Biolgicas, Universidad Michoacana de San Nicols de Hidalgo, Morelia, Mich, Mxico.

Leer ms: http://www.monografias.com/trabajos69/insecticidas-biologicos-control/insecticidas-biologicoscontrol2.shtml#ixzz2W9m8yUlT