Práctica 1

Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae

UNIVERSIDAD POLITECNICA DE PACHUCA

LABORATORIO DE FISFER
0

FERMENTACIONES INDUSTRIALES

PRÀCTICA 1: “Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae”

M. en C. Jorge Álvarez Cervantes

GRUPO: 27265

INTEGRANTES Hernández Hernández Yenni Leidy Luna Valdez María Ofelia Marcelino Pérez Gabriel Reyes Mata Silvia Denisse Sánchez Martínez Rosa Gloria

FIRMA

MAYO – AGOSTO 2013

FECHA DE ELABORACION DE LA PRÁCTICA: 22 DE MAYO DE 2013 FECHA DE ENTREGA DEL REPORTE: 29 DE MAYO 2013

Ingeniería en Biotecnología

Fermentaciones Industriales

Clark. Existen varias rutas. su presencia implica el desarrollo del microorganismo y la producción del compuesto fundamental biomasa. el proceso de producción del metabolito de interés se desarrolla en ausencia de oxigeno. Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales . El pH más favorable para ella se encuentra entre 3-5 y 4-5. Madigan et al. glicerol.  Esteroides: cortisona. 1 En la fermentación aerobia. por lo que controlar la presencia de oxígeno para incrementar la producción (Pares Arras. metionina. Son diversos los productos que se pueden obtener de una fermentación tales como:  Alcoholes y solventes: acetona. Esteptomiciana. valina. sino también por la posibilidad de manipular el proceso. y en el que el ATP se produce normalmente por fosforilación a nivel del sustrato (T. & P. láctico.Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae INTRODUCCIÓN La fermentación es el catabolismo anaerobio de un compuesto orgánico en el que el compuesto sirve tanto de donador de electrones como de aceptor como de aceptor de electrones. dióxido de carbono y agua. testosterona.  Ácidos orgánicos: acético. riboflavina. penicilina. Stanier. Los procesos se pueden denominar. itacónico. ya que ello ayuda a determinar que compuestos se obtendrá.3-butanodiol. 2. neomicina. Prescott. hidrocortisona. 2002). butanol. más específicamente hongos. Mientras que la fermentación anaerobia. 2009). crecen bien en un medio constituido por aun azúcar. triptófano. etanol. 2005). fumárico. (García Garibay. fosfatos y extracto de lavadura. V. 2009). glucónico. Es de gran importancia conocer las rutas bioquímicas de degradación de compuestos orgánicos. Madigan. (M.  Aminoácidos: lisina. Martinko. lo cual conlleva cambios químicos en las sustancias orgánicas (Y. el aceptor final de electrones es el oxígeno. sin embargo únicamente las más relevantes son la dela glucolisis (Vía Embden-Meyerhof-Parnas). en este proceso los microorganismo producen mucho menor energía que los aerobias y por suplir sus necesidades de energía metabolizan mayor cantidad de azucares. Dunlap. 2002). por tanto elaboran más metabolitos. El proceso de fermentación es producido por acción de las enzimas. 2005) Las levaduras son organismos vivos. fermentación aerobia y anaerobia. cítrico. el ciclo de Krebs que ayudan a transportar electrones durante el metabolismo aerobio y la cadena respiratoria (T. los productos finales son sustancias orgánicas. etc. También es posible clasificar a las fermentaciones por la presencia o ausencia de oxigeno molecular durante el proceso. M.  Antibióticos: bacitracina. vegetales microscópicos de una sola célula.

2005). dándole parte de su sabor y el color dorado del horneado (García Garibay. PROCEDIMIENTO: 1) Activación de la levadura Se pesan 9g de levadura Se activa en 90 ml de H2O a 37°C Levadura activada a 37°C Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales . Lo hacen mediante la enzima amilasa (otras enzimas: glucosidasas y amiloglucosidasas). OBJETIVO 2 Determinar el sustrato (carbohidratos) a que la levadura Saccharomyces cerevisiae metaboliza más rápidamente teniéndola a diferentes temperaturas (ambiente y 37 °C) y al mismo tiempo entender el cambio que sufren las moléculas de los carbohidratos. La mayor parte de los azúcares que desdobla la levadura los utiliza la propia levadura para vivir y desarrollarse. y otra parte quedan en la masa del pan. METODOLOGÍA MATERIALES  5 vasos de precipitado de 50 ml  2 vasos de precipitados de 600 ml  1 vaso de precipitados de 150 ml  Termómetro  16 tubos de fermentación  1 vidrio de reloj  1 probeta de 100 ml  1 parrilla de calentamiento  1 gradilla  1 espátula  1 propipeta  5 pipetas de 10 ml REACTIVOS      90 ml Agua destilada 60 ml Lactosa 60 ml Almidón 60 ml Sacarosa 60 ml Glucosa MICROORGANISMOS 9g de Sacharomyces cerevisiae.Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae En la elaboración del pan las levaduras transforman el almidón (un azúcar complejo) en glucosa. HIPÓTESIS La fermentación que se llevará a cabo dependerá directamente del tipo de carbohidrato. su asimilación por el microorganismo y las distintas temperaturas a las que se someterán.

Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae 2) Fermentación de Glucosa 1 Glucosa Se toman 15 ml de glucosa Se vacía 15 ml de glucosa en 4 tubos Se agrega 5 ml levadura 2 tubos a temperatura ambiente 2 tubos a 37 ºC Mezclar 5 ml de levadura en los 4 tubos con glucosa Medir el CO2 en cm (la burbuja que se formó) 5 minutos después Repetir medición a 0. 30 y 45 minutos Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales . 15.

30 y 45 minutos Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales . 15.Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae 3) Fermentación de Almidón 2 Almidón Se toman 15 ml de almidón Se vacía 15 ml de almidón en 4 tubos Se agrega 5 ml levadura 2 tubos a temperatura ambiente 2 tubos a 37 ºC Mezclar 5 ml de levadura en los 4 tubos con almidón Medir el CO2 en cm (la burbuja que se formó) 5 minutos después Repetir medición a 0.

15. 30 y 45 minutos Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales .Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae 4) Fermentación de Sacarosa 3 Sacarosa Se toman 15 ml de sacarosa Se vacía 15 ml de sacarosa en 4 tubos Se agrega 5 ml levadura 2 tubos a temperatura ambiente 2 tubos a 37 ºC Mezclar 5 ml de levadura en los 4 tubos con sacarosa Medir el CO2 en cm (la burbuja que se formó) 5 minutos después Repetir medición a 0.

30 y 45 minutos Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales .Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae 5) Fermentación de Lactosa 4 Lactosa Se toman 15 ml de lactosa Se vacía 15 ml de lactosa en 4 tubos Se agrega 5 ml levadura 2 tubos a temperatura ambiente 2 tubos a 37 ºC Mezclar 5 ml de levadura en los 4 tubos con sacarosa Medir el CO2 en cm (la burbuja que se formó) 5 minutos después Repetir medición a 0. 15.

Ambiente Tubo D a temp.6 0..1 Saccharomyces cerevisiae en Glucosa 10 9 8 7 CO2 (cm2) 6 5 4 3 2.5 Cantidad de CO2 producido (cm2) a 37 °C tubo B 0 2.5 4.6 1. sacarosa 10%. Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales .6 8.2 9.6 7.1 3.1 7.5 2 1 0 0 0 0.1 3 5.2 3.1 7.2 9. GLUCOSA Cantidad de CO2 producido (cm2) a 37 °C tubo A 0 0.4 5 Tiempo (minutos) 0 5 15 30 45 Cantidad de CO2 producido (cm2) a temperatura ambiente tubo D 0 0.9 Cantidad de CO2 producido (cm2) a temperatura ambiente tubo C 0 0.Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae RESULTADOS En la presente practica se llevó a cabo la fermentación de azucares (glucosa 10%. lactosa 10% y almidón 10%) por la levadura Saccharomyces cerevisiae en diferentes temperaturas que fueron a temperatura ambiente y a 37 °C. Tabla 1.2 1.4 5.9 Tubo A a 37 C Tubo B a 37 C Tubo C a temp.3 3 5.5 7.3 1.7 4.3 10 1.Producción de CO2 a dos diferentes temperaturas en determinado tiempo.3 5.7 0.5 4.1 4. Ambiente 20 30 40 50 Tiempo (minutos) Figura 1.5 8. Tiempo y producción de CO2 por Saccharomyces cerevisiae al metabolizar glucosa.

8 0.4 2.3 0.3 5 6. ambiente 6. Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales .-Producción de CO2 a dos diferentes temperaturas en determinado tiempo.2 4.9 Cantidad de CO2 producido (cm2) a 37 °C tubo B 0 2.2 Cantidad de CO2 producido (cm2) a temperatura ambiente tubo C 0 0.5 1.6 5 CO2 (cm2) 4 3 2 1 0 0 0 10 20 30 40 50 Tiempo (minutos) 2.9 6.6 6.7 3.2 Tiempo (minutos) 0 5 15 30 45 6 Saccharomyces cerevisiae en Sacarosa 8 7 6 5.2 Tubo A a 37 C Tubo B a 37 C Tubo C a temp.2 1.7 6.3 2. SACAROSA Cantidad de CO2 producido (cm2) a 37 °C tubo A 0 2.7 Figura 2.4 4 4. Tiempo y producción de CO2 por Saccharomyces cerevisiae al metabolizar sacarosa. ambiente Tubo D a temp.7 6.Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae Tabla 2.2 3.5 2.5 1.4 Cantidad de CO2 producido (cm2) a temperatura ambiente tubo D 0 0.3 4 4.8 1.5 5 4.4 5.

Tiempo y producción de CO2 por Saccharomyces cerevisiae al metabolizar Lactosa.2 0.2 0.5 0.-Producción de CO2 a dos diferentes temperaturas en determinado tiempo.3 0.4 0.6 Tubo A a 37 C Tubo B a 37 C 0.3 0.35 Cantidad de CO2 producido (cm2) a temperatura ambiente tubo C 0 0 0 0.3 0.2 0.15 0.2 0. LACTOSA Cantidad de CO2 producido (cm2) a 37 °C tubo A 0 0 0.4 0.1 0.1 0.1 0 0 0 0 10 0 20 30 40 50 Tiempo (minutos) Figura 3.35 Figura 3.Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae Tabla 3. Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales .15 Cantidad de CO2 producido (cm2) a temperatura ambiente tubo D 0 0 0 0.5 Cantidad de CO2 producido (cm2) a 37 °C tubo B 0 0 0.4 CO2 (cm2) 0.1 0.-Producción de CO2 a dos diferentes temperaturas en determinado tiempo.. 0.1 0.5 Tubo C (Ambiente) Tubo D (ambiente) 0.2 Tiempo (minutos) 7 0 5 15 30 45 Saccharomyces cerevisiae en Lactosa 0.1 0.

solo que aquí hay una diferencia ya que la galactosa lleva a cabo una serie de trasformaciones que se muestran en la imagen 4 hasta llegar α-D-glucosa-6-fosfato para entrar a la ruta de la glucolisis.6 kJ/mol de lactosa fementada Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales . Etanol/CO2= 477. Sacarosa Sacarosa fosforilasa α-D-glucosa + 1-Pfructosa Al deshacerse el disacárido se obtienen α-Dglucosa + 1-P-fructosa los cuales son introducidos rápidamente a la vía de la glucolisis obteniéndose el doble de productos que con una sola molécula de glucosa. Lactosa Β-Galactosidasa + H2 O (Galactosa + Glucosa) Al igual que la sacarosa pasa lo mismo con la lactosa se obtienen dos monosacáridos que son galactosa y glucosa.8 kJ/mol de glucosa fementada.6 kJ/mol de sacarosa fementada. Tabla 5. Tiempo que tardo la levadura en consumir el Almidón. ALMIDÓN Cantidad de CO2 producido (cm2) a 37 °C tubo A Cantidad de CO2 producido (cm2) a 37 °C tubo B Cantidad de CO2 producido (cm2) a temperatura ambiente tubo C Cantidad de CO2 producido (cm2) a temperatura ambiente tubo D Tiempo (minutos) 8 No se observó producción de CO2 en las dos diferentes temperaturas durante los 45 minutos que duró el experimento por este sustrato. 2. Etanol/CO2= Glucosa 238. 3.Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae Tabla 4. Balance energético de azucares fermentados por levaduras Azúcar Estequiometria Energía libre 1. Etanol/CO2= 477.

galactosa. Transformaciones de la Galactosa para entrar a la vía de la Glucolisis. (M. la cual fue construida con los datos de la Tabla 1 y se observa una mayor eficiencia de fermentación de la Glucosa a 37 °C que a temperatura ambiente al igual que cualquier otro carbohidrato probado en esta práctica ya que se obtuvo hasta 9. maltiotriosa. suero hidrolizado y en algunos casos particulares puede utilizar etanol (Owen P. sacarosa. debido a que es el azúcar que metaboliza preferentemente las levaduras del genero Saccharomyces aunque en algunos casos prefiere fructosa como las levaduras del vino. El rendimiento Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales . 2002) DISCUSIÓN En la Figura 1 se muestra la gráfica de producción de CO2. . Otras fuentes de carbono que puede utilizar Saccharomyces cerevisiae son: maltosa. Prescott.5 cm2 de CO2 resultado de la fermentación de la glucosa en 45 minutos . 1989).Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae 9 Figura 4.

obteniendo una máxima producción de CO2 de 6. en la Figura 2 se observa la producción gradual de CO2 conforme trascurre el tiempo con y sin temperatura. Esta no fue tan eficiente como la glucosa. Los datos arrojados en el experimento con Lactosa mostrados en la Figura 3 y Tabla 3 nos dicen que Saccharomyces cerevisiae metaboliza la Lactosa en mínimas proporciones casi nada a 37 °C y mucho menos a temperatura ambiente. en 1989 reporta que Saccharomyces cerevisiae puede fermentar la lactosa.9 cm2 en 45 minutos. Madigan et al. en este caso la enzima que excreto fue una invertasa. Sacarosa fue el segundo carbohidrato en mostrar una buena fermentación a 37 °C.Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae teórico posiblemente obtenido por gramo de glucosa es de 0. pero Owen P.51 g de etanol y 0. el empleo de materiales basados en almidón para la fermentación alcohólica requieren la acción de enzimas extracelulares como las α y β-amilasas (glucoamilasas) y pululanasas (Owen P. donde se hidroliza a glucosa y galactosa. CONCLUSIÒN 10 Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales . 2009). Probablemente no se obtuvieron estos resultados causados por las condiciones de temperatura y pH explicados anteriormente. Madigan et al. . debido q que tiene un sistema lactosa permeasa para transportar la lactosa dentro de la célula. 2009). Otro factor que pudo afectar el experimento fue que no se midió el pH y es indispensable para la formación de subproductos el cual debe estar en un rango de entre 3-6 que son favorables para la actividad fermentaría (T. para que después los monosacáridos (glucosa y fructosa) sean transportados a través de la membrana celular ya sea por transporte activo o pasivo en donde intervienen permeasas producidas constitutivamente o inducibles para después entrar a la vía de Embden-Meyerhof en el caso de la glucosa y para la fructosa a la vía de la pentosas fosfato para después incorporarse a la vía de EmbdenMeyerhof (T. ya que para llevar a cabo la fermentación tuvo que excretar una enzima para poder hidrolizar al disacárido (glucosa y fructosa conforman a la sacarosa). que entran a la vía de la glucolisis. 2009). En el caso del almidón no se observó producción alguna de CO2 con y sin temperatura (37°C) debido a que las levaduras Saccharomyces son incapaces de hidrolizar el almidón y las dextrinas (T.49 g de CO2. 1989). estos datos se visualizan en Tabla 2. Y si el rendimiento quizá no se obtuvo porque no se tuvieron las condiciones óptimas como los son la velocidad de fermentación que aumenta generalmente entre los 15 y los 35 °C y nuestra temperatura utilizada fue de 37 °C. Por lo cual. Madigan et al.

1 etanol y 1 CO2 por una molécula de glucosa fermentativa. La diferencia entre estas fermentaciones inicia desde el microorganismo. En este tipo de fermentación es el ácido pirúvico producto de la glucólisis. Prescott. 1 lactato. mientras que la fermentación láctica es llevada por bacterias. produciéndose CO2 y alcohol etílico (etanol). el que acepta los electrones y se convierte en ácido láctico. crema agria y quesos. si heterofermentativa se obtendrá 1 ATP.Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae CUESTIONARIO 1) Menciona las diferencias entre la fermentación alcohólica y láctica La fermentación láctica ocurre en algunas bacterias y gracias a este proceso obtenemos productos de origen lácteo tales como yogurt. 2010) Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales . durante el ejercicio fuerte y continuo. La acumulación del ácido láctico causa el dolor característico cuando ejercitamos los músculos excesivamente. (M. llamada lactato deshidrogenasa. este ácido pirúvico en condiciones anaeróbicas se descarboxila para transformarse en acetaldehído. Este proceso sucede también en el músculo esqueletal humano cuando hay deficiencia de oxígeno. el cual se reduce a alcohol etílico por acción del NADH2 convirtiéndose así en el aceptor final de los electrones del NADH obtenido en la glucólisis. (Respiracion Celular . En la fermentación alcohólica suceden dos reacciones consecutivas:   11 Ácido pirúvico Acetaldehído CO2 Acetaldehído + NADH+H+ Etanol + NAD+ Este tipo de fermentación ocurre en levaduras. como por ejemplo. CO2 y 2ATP. debido a que la fermentación alcohólica es llevada por levaduras y bacterias. mientras que la fermentación láctica depende si es homofermentativa se obtiene 2 lactatos y 2 ATP. ciertos hongos y algunas bacterias. 2002) Los productos al fin de la fermentación en la alcohólica se obtiene etanol. Las moléculas de glucosa (presentes en la masa) sufren glucólisis originando ácido pirúvico. Se realiza por las bacterias del ácido láctico gracias a la presencia de una enzima.

Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae 12 Figura 5. Fermentación alcohólica 2) En términos evolutivos ¿Cuál de las dos rutas debió surgir primero? La fermentación alcohólica. por lo cual los organismo primitivos surgieron en una atmosfera sin oxígeno. 2008) Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales . desarrollaron un mecanismo bioquímico sencillo y primitivo de producción de energía libre sin necesidad de este elemento. (Macias. Una de las principales características de estos microorganismos es que viven en ambientes completamente carentes de oxígeno (O2). debido a que hace 3. Las levaduras y bacterias causantes de este fenómeno son microorganismos muy habituales en las frutas y cereales y contribuyen en gran medida al sabor de los productos fermentados.500 millones de años la atmosfera de la Tierra contenía muy poco oxígeno. Ruta de la glucólisis Figura 6.

(M. P.). Dunlap. Microbiología. R. M. (2002). Prescott. Cèlulas Eucariotas.) Madrid. Clark. (2002). Biología de los microorganismos (Duodécima Edición ed. S. Congreso de la Investigación. M. obtendríamos ATP. Hernandez. alcohol y CO2. Barcelona:REVERTÉ. Martinko. (2009). Macias. (1989). Recuperado el 28 de Mayo de 2013. (14 de Marzo de 2010). & P. Stanier. Madrid: McGraw-Hill. Calvo Rebollar. D. Recuperado el 28 de Mayo de 2013. Barcelona: PEARSON EDUCACIÓN. W. (Planeta Saber. A. Bioquímica de los microorganismos. (Respiracion Celular . E. S.S. Primera Edición: ACRIBIA.com/celulas_eucariotas/biology/32456/ García Garibay. 2012) BIBLIOGRAFÍA Planeta Saber (2012). Biotecnología alimentaria. Argentina . Owen P. M. Respiracion Celular . (2009).edu/~jvelezg/lab8. (2008).). R. México: Limusa. 2010) 5) ¿En qué parte de una célula Eucariota debe ocurrir la fermentación? En el citosol. etanol y CO2 mientras que en la alcohólica obtenemos ATP.Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae 3) ¿Cuál es el propósito de la fermentación? El propósito de la fermentación es que los microorganismos produzcan metabolitos o biomasa a partir de la utilización de sustancias orgánicas en ausencia o presencia de oxígeno. S. Pares Arras. Madigan. Trad. 13 Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales . B.A. MICROBIOLOGÍA (SEGUNDA EDICIÓN ed. Microbiologia Industrial . Fermentación por Saccharomyces cerevisae de algunos tipos de glúsidos.. L.planetasaber. . (Hernandez. lactato.pdf T. en la cual se oxida parcialmente la glucosa para obtener energía. A. J. A. de http://www.A. mientras que la fermentación láctica es llevada por bacterias.uprm.. Lo que pasaría seria la obtención de productos en la fermentación láctica. Y. Biotecnología de la Fermentación. 2-3. de http://academic. (2005). (2005).. 2009) 4) ¿Qué pasaría si en vez de llevar a cabo la fermentación láctica que nosotros llevamos utilizáramos la fermentación alcohólica? Tendríamos que cambiar el microorganismo por que la fermentación alcohólica es llevada por levaduras y bacterias. La descomposición de los sustratos se llevara a cabo por enzimas producidas por microorganismos para la finalidad. M. V. Barcelona: REVERTÉ.

Práctica 1 Fermentación de carbohidratos por la levadura Sacharomyces cerevisiae 14 Ingeniería en Biotecnología Fermentaciones Industriales .

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