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UNIVERSIDAD JUREZ DEL ESTADO DE DURANGO FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

PRUEBA DE: COOMBS DIRECTO E INDIRECTO

Inmunologa Itzel Nayar Becerra Alvarado Christian Alan de la Cruz Pez Carmen Carolina Moctezuma Mora Mara Roco Rey Valverde Christian Canales Delgado QBP. Hugo Alonso Rojo

Gmez Palacio, Durango

10 de Junio de 2013

Objetivo Detectar inmunoglobulinas de la complemento (C3d) unidos a los G.R. clase IgG y/o fracciones del

Introduccin. La prueba de antiglobulina o prueba de Coombs con el empleo del suero antiglobulina humana poliespecfico, es la tcnica ms utilizada en inmunohematologa. Los componentes principales del reactivo antiglobulina son los anticuerpos anti-IgG y anti-C3 (C3d/C3dg); la actividad anti-IgA y antiIgM no es imprescindible pero deseable. La presencia de estos anticuerpos permite la deteccin de autoanticuerpos IgM (no aglutinantes) e IgA en la prueba de antiglobulina directa (PAD) para el diagnstico de la anemia hemoltica autoinmune (AHAI) que, en ocasiones, por las dificultades en su deteccin, estn involucrados en la etiologa de la AHAI "Coombs negativa". La prueba de Coombs detecta, como mnimo, entre 200 y 500 molculas de IgG por hemate. El lmite de deteccin para los anticuerpos de los isotipos IgA e IgM no ha sido determinado, probablemente porque no existe consenso para la estandarizacin de los reactivos antiglobulnicos con estas especificidades, por su baja frecuencia, o porque para revelar la presencia de estas inmunoglobulinas en los hemates se prefiere el empleo de mtodos ms sensibles. La prueba consiste en la administracin de un "anti-suero" que contiene anticuerpos dirigidos contra una serie de molculas presentes en la membrana de los eritrocitos; la unin del anti-suero con estos eritrocitos ocasiona una reaccin inmediata de aglutinacin. La prueba de Coombs se utiliza como mtodo diagnstico de enfermedades como las anemias hemolticas, la enfermedad hemoltica del recin nacido y en las reacciones transfusionales. A diferencia de la prueba de Coombs directa, la prueba indirecta se basa en la "incubacin" del suero del paciente con una muestra de sangre tipo O, y posteriormente se procede a administrar el "anti-suero". A diferencia de la prueba directa, en la prueba indirecta se busca la presencia de "anticuerpos" en el suero del paciente y no "anticuerpos" pegados a la superficie de los glbulos rojos. La prueba indirecta se usa para realizar "tipificacin" de grupos sanguneos, pruebas sanguneas cruzadas y como mtodo de rastreo para evitar reacciones transfusionales.

Fundamento: Los anticuerpos y complemento humano son globulinas y adems son

diferentes a otras especies; por lo tanto, se comportan como antgenos cuando se inyectan a otras animales. Si un animal es inyectado con globulinas humanas purificadas o con suero total, este animal elaborar anticuerpos contra ellas, estos anticuerpos tendrn especificidad antiglobulina humana. El suero antiglobulina contra humana las (Suero de Coombs) Si los reaccionar G.R. estn

especficamente

globulinas

humanas.

sensibilizados por las inmunoglobulinas, el suero de Coombs se combinar con ellas.

Materiales, Reactivos y muestras biolgicas Centrifuga Tubos de ensaye Rx de Coombs Solucin salina Pipetas Pasteur Tubo rojo

COOMBS DIRECTO Procedimiento: 1. Lavar los eritrocitos del paciente cuando menos 3 veces en solucin salina 2. Colocar en un tubo de ensayo una a dos gotas del suero de Coombs. 3. Agregar una gota de eritrocitos lavados al tubo de ensayo 4. Mezclar bien con una suave agitacin. Centrifugar 20 seg. a 3,400 RPM 5. Resuspender los eritrocitos para ver aglutinacin macroscpica

Interpretacin: a) Si la prueba de Coombs muestra aglutinacin, se interpreta positiva, significa que hubo sensibilizacin de los G.R. invivo, se seala en cruces, vg. 4 + b) Si no hubo aglutinacin, la prueba es negativa y significa que no existe autosensibilizacin eritroctica. La prueba negativa ser vlida si la prueba control es positiva.

COOMB INDIRECTO Interpretacin: a) Si hay aglutinacin: prueba de Coombs indirecta positiva, presencia de anticuerpos irregulares en el suero. b) Si no hay aglutinacin: Coombs indirecto negativa. Es vlido el resultado si la prueba control de Coombs es positiva, y si esta ltima es negativa, la prueba es invlida. Debe repetirse el procedimiento. c) Procedimiento 1. Lavar G.R. del donante en solucin salina normal con una concentracin al 4%b.Coloque dos gotas del suero del receptor en cada uno de los tubos. 2. Agregue una gota de eritrocitos lavados a cada uno de los tubos de ensayo 3. Mezcle con suave agitacin e incube durante 15 a 60 minutos a 37C 4. Lave los eritrocitos tres veces con una solucin salina normal, decantando tanta solucin como sea posible despus del ltimo lavado 5. Agregue una o dos gotas del suero de Coombs. 6. Mezclar bien y centrifugar y resuspender los eritrocitos. 7. Observar si hay aglutinacin 8. Una reaccin negativa puede ser confirmada por examen

Conclusiones Esta prueba de Coombs es de gran utilidad en el area medica ya que con esta podemos determinar enfermedades como anemia hemoltica autoinmunitaria sin otra causa, leucemia linfoctica crnica u otro trastorno linfoproliferativo, anemia hemoltica inducida por frmacos (muchos frmacos han sido asociados con esta complicacin), eritroblastosis fetal (enfermedad hemoltica del recin nacido), mononucleosis infecciosa, infeccin por micoplasma, sfilis, lupus eritematoso sistmico u otra afeccin reumatolgica, reaccin a transfusin como la ocasionada por unidades de sangre cotejadas de manera impropia, asi como tambin tomar tratamientos para un posible rechazo fetal por combinaciones sanguneas.

Normas NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-003-SSA2-1993 Norma Oficial Mexicana NOM-017-SSA2-1994, Para la vigilancia epidemiolgica.

Bibliografa http://es.scribd.com/doc/57380886/Test-de-Coombs http://www.bvs.sld.cu/revistas/hih/vol26_4_10/hih09410.htm