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Introduccin Para realizar un anlisis y que los resultados de este sean apreciables y representativos de un gran total o lote, es preciso

seleccionar una muestra de laboratorio representativa correcta del total, debido a que dentro de esta muestra se hallan distribuidos los constituyentes, es decir, las sustancias que trataremos de determinar, adems de una preparacin correcta para luego realizar el anlisis. Para la obtencin de un anlisis valido, es necesario que la muestra de laboratorio refleje lo mejor posible la composicin del lote o de una poblacin mayor. La preparacin de la muestra es el paso del anlisis que mayor tiempo ocupa, debido a la gran tendencia a cometer errores. En este laboratorio se obtendr una muestra correctamente, para luego realizar el anlisis correspondiente, en este caso de una muestra de alimento de cereal (zucaritas). Para el anlisis se aplico el mtodo de pulverizacin, a fin de que la muestra de laboratorio tenga la misma composicin que la muestra bruta, adems de la homogenizacin. Se aplicara el mtodo del cuarteo, en donde se divide en cuatro partes, A, B, C, D, y se eliminan las partes opuestas A y C o B y D, repitiendo esta operacin hasta obtener una porcin que contenga todos los elementos presentes en el lote. Finalmente nuestra muestra ser tratada con acido para la extraccin del analito en el estado de agregacin ms adecuado. Objetivos Preparacin y obtencin de la muestra para su posterior anlisis. Diferenciacin y reconocimiento de una muestra para anlisis. Aplicar uno de los mtodos ms habituales para la descomposicin y disolucin de las muestras. Entender sobre el orden y aplicacin de diferentes tratamientos para muestras de laboratorios distintas, en el caso de este informe una muestra de cereal zuacaritas Preparacin y obtencin de la muestra para su posterior anlisis. Fundamentos Tericos Muestra: Es una pequea porcin seleccionada para examinar, de una cantidad de material muyo mayor. A la hora de recoger la muestra esta ha de ser representativa de una mayor. Su composicin debe reflejar lo mejor posible una porcin representativa de todo el material. Dentro de esta muestra se hallan los constituyentes, es decir las distancias que trataremos de determinar. Una manera de distinguir los mtodos se basa en el tamao y

en la concentracin de la muestra. Segn el porcentaje de constituyentes en la muestra hablamos de: -Constituyentes principales: Mayor al 1% del total. -Constituyentes Secundarios: 0,1 % del total. -A nivel de traza: Menor al 1% del Total. -Ultra Traza: A nivel de ppm. Segn el tamao hablamos: - Macroanlisis: Mayor a 100 mg. - Semimacroanlisis: 10 100 mg. - Microanlisis: 1 10 mg. - Ultra microanlisis: Menor a 1mg. La Muestra a analizar debe ser homognea, si su composicin es la misma en todas partes. Mientras ms Homognea la muestra del error de muestreo se reduce. A menudo el muestreo es lo ms difcil de todo el procedimiento analtico, y la que limita la exactitud de todo procedimiento. El muestreo es el proceso de seleccin del material representativo que se va a analizar. Tcnicas de Muestreo: Muestreo de Slidos: Si el material para analizar es homogneo, basta con tomar una muestra suficiente para poder efectuar las determinaciones necesarias y para conservar una parte con la que se puede comprobar un dato, en caso de duda o de inconformidad con los resultados originales. Si el material es homogneo, el tamao de la muestra depender de la cantidad de dicho material y de la variacin del tamao de sus partculas; cuanto mayor sea el numero de masas individuales, mas grande deben ser la muestra. Para preparar las muestras se toman pequeas porciones de diferentes secciones horizontales y verticales del material, que se trituran y se mezclan; por el mtodo del cuarteo. Durante el muestreo es necesario tener cuidado para prevenir errores debido a la contaminacin, oxidacin, cambio de humedad y perdida de partculas voltiles y de poco peso.

Los mtodos de muestreo se pueden clasificar en dos grupos: Muestreo Mecnico y Manual de la cual el primero es ms confiable, de menos costo y el muestreo continuo, intermitente y errtico. El primero consiste en tomar porciones del material que se encuentra en movimiento mediante una banda transportadora. El intermitente consiste en separar una porcin de cada determinado nmero de unidades de material, para formar una muestra. En el errtico se toman muestras sin orden, y se emplea exclusivamente para materiales homogneos. Muestreo de lquidos: Cuando se trata de lquidos homogneos, cualquier porcin que se tome es representativa, pero si se trata de emulsiones y suspensiones es necesaria agitar perfectamente antes de tomar la muestra. Si la cantidad de material es muy grande y no se puede agitar fcilmente se puede tomar la muestra a varias profundidades del recipiente. Muestreo de Gases: Para muestrear un gas se emplea pipetas especiales. Antes de introducir la muestra en la pipeta, es necesario hacer un vacio de aproximadamente de 1mm de mercurio para evitar contaminacin del gas con el aire. Mtodo del Cuarteo El mtodo del cuarteo consiste en ir reduciendo la muestra compuesta hasta obtener el tamao adecuado, de la siguiente manera: Homogenizar de manera exhaustiva la muestra bruta. Esto se puede lograr utilizando una mezcladora o hacerlo de forma manual. Dividir la muestra en cuatro partes. Se requiere extender la muestra sobre una superficie y dividirla en cuatro cuadrantes numerados. Separar los cuadrantes inversos, y el resto de la muestra se retira. Este proceso se repetir hasta lograr una cantidad razonable para el anlisis. Tratamiento de la Muestra - Homogenizacin: Se trata de un lquido, un polvo fino o una suspensin, si es un slido se debe pulverizar.

- Disolver la muestra para analizar. -Mineralizar para eliminar residuos orgnicos. - Eliminar los interferentes. - Pre concentracin. Pre Tratamientos de la muestra Descomposicin Destruccin de la materia orgnica, el proceso de mineralizacin de la muestra se lleva a cabo por dos vas, por mineralizacin hmeda y por mineralizacin seca y fusin. Errores en el Muestreo Errores Humanos -Debido a la manipulacin de la muestra. -Absorcin por las paredes del recipiente o superficie de las herramientas. -En proceso de secado, evaporacin y mineralizacin. -Salpicaduras en el proceso de agitacin y preparacin de la muestra. Variacin en la composicin qumica en la muestra - Prdida o Absorcin de agua. - Procesos de Hidrlisis. - Procesos de Oxidacin - Procesos de fermentacin o microbiolgicos. Aparatos y Reactivos Aparatos Mortero de porcelana Esptulas

Balanza Analtica (Denver Instrumental Company AA200) Crisol de Porcelana Mufla Pinzas para crisol Pipetas Soporte Universal Embudo Papel filtro Matraz de Aforo 100 ml Mechero Bunsen Trpode y Rejilla Botella Plstica 250 ml Cereal (zucaritas) Reactivos Etanol (Chemix) Acido Clorhdrico 2M (37% Sigma-Aldrich) Acido Clorhdrico Concentrado Desarrollo Experimental o Procedimiento La obtencin de la muestra ser a partir de un cereal. La muestra la obtendremos de la marca de cereal Kellogs zucaritas. Con ayuda de un mortero de porcelana, se precede a pulverizar el cereal convirtindolo en polvo fino. Luego de pulverizar la muestra, procedemos a realizar el mtodo de muestreo,

separando en una hoja de papel 4 partes desechando dos de ellas, esto se debe realizar hasta obtener aprox. 5 gramos de muestra. Se debe pesar en la balanza granataria, y luego en la balanza analtica para as anotar el peso exacto que se obtuvo de muestra. La muestra se coloca en el crisol y se humedece con etanol. Utilizando el mechero Bunsen, el trpode y la rejilla para crisol, quemamos la muestra primero a una llama baja de color naranjo, esto se logra manteniendo la entrada de aire del mechero completamente cerrada, y luego el colorearse negra la muestra, se aumenta la llama abriendo la entrada de aire y obtenindose una llama de color azul. La muestra quemada la llevamos con pinzas a la mufla, en donde fue colocada durante 45 minutos a una temperatura aproximada a 700 a 800 C, y luego se deja enfriar. Una vez frio el crisol, se adicionan a 5 ml de acido clorhdrico de concentracin 2M, filtrando la muestra. Se debe aforar la solucin en un matraz de aforo de 100 ml con HCL al 1%. Finalmente se agitara y se homogenizara para luego guardarla en una botella plstica. Clculos y Resultados La muestra al ser pesada en la balanza granataria peso 5.46 gramos y luego se llevo a la balanza analtica en la que finalmente se obtuvo 5.0021 gramos de muestra problema (cereal zucaritas) Preparar HCl 2 M. Densidad= = 1.19 g/ml Porcentaje de pureza = 37 % PM = 36.45 g/mol Volumen 100 mL Molaridad = % pureza ( (10 = 37% ( 1,19 (10 = 12,079 molar PM 36.45 C1 ( V1 = C2 ( V2 12,79 molar ( V = 2 molar ( 100 ml

V = 16,557 ml ( 16,6 ml Prepara HCl al 1% Porcentaje de pureza = 37 % Volumen 1000 ml C1 ( V1 = C2 ( V2 1% ( 1000 ml = 37% ( V2 V = 27,027 ml ( 27 ml Cuestionario 1-Consulte bibliogrficamente los diferentes modos y tipos de obtener el tamao correcto de la muestra para anlisis. En muestreo de slidos la regla general para tomas muestras de una gran cantidad de producto de una cinta transportadora (o de cualquier corriente continua) es: Que el muestreo se debe realizar en intervalos regulares y debe ser fijo en forma y mtodo. Si el montn original es tan grande que el muestreo no se puede hacer del total se debe hacer el muestreo en la cinta transportadora. Si las muestras se han de obtener de reas muy extensas el muestreo se debe realizar en puntos regulares espaciados. En muestreo de gases y sustancias voltiles a menudo se realiza en el muestreo una preconcentracin mediante la cual conseguimos que la materia de inters se transforme en una muestra ms pequea y concentrada. Las sustancias se extraen de una enorme cantidad de matriz. La pre-concentracin se utiliza generalmente cuando es necesario analizar sustancias de la muestra en cantidades de trazas y microtrazas. En muestreo de lquidos se debe tomar un alcuota a distintas profundidades. Posteriormente se coloca la diferentes alcuotas en un recipiente y se procede a agitar el recipiente de manera que la muestra sea lo ms homognea posible. 2-Qu finalidad tiene el cuarteo de la muestra? Este mtodo permite reducir cualquier perturbacin al momento de seleccionar la muestra permite obtener una muestra considerablemente representativa del total, con ello se consigue un mejor anlisis, y que este sea representativo del total. 3-Cul es la finalidad de mojar con etanol la muestra para calcinar? Al mojar la superficie con etanol se tiene un mejor combustin de los compuestos orgnicos presentes en la muestra, se evapora el agua presente y al ser una combustin ms rpida y de mejor calidad se evita evaporizacin de la muestra. Discusin

Habindose aplicado los mtodos de obtencin de muestras aprendidas esperamos obtener los mejores resultados, la muestra de laboratorio fue tratada con etanol para evitar la alteracin de la composicin y la prdida de est cuando se somete a altas temperaturas, sin embargo, es inevitable obtener un margen de error producto de situaciones no manejables, como la contaminacin de algn reactivo o aparatos en mal estado, provocando algn tipo de error en los procedimientos aplicados. La contaminacin de la muestra por una mala manipulacin de esta es algo evitable, sin embargo la contaminacin producida en sus traslados, al ser expuesta a algn contaminante voltil presente en el laboratorio es algo muy difcil de evitar. A pesar de haber sido tratada la muestra con etanol otro tipo de contaminacin que podra producirse, es durante el proceso de calcinacin, tambin pudiendo ocurrir perdida de esta por volatilizacin. Es por estas razones que siempre se tendr un margen de error que siempre tendr que corresponder al mnimo. Conclusin A travs de este informe se puede concluir que los objetivos se cumplieron con respecto a la toma y la posterior preparacin de la muestra solida. Esto se pudo realizar a travs de la utilizacin de la tcnica del cuarteo que nos permiti de una manera simple poder obtener la homogenizacin de la muestra y que esta fuera lo ms representativa posible. Posteriormente la calcinacin que se realizo con etanol permiti dejar solo materia inorgnica para el anlisis correspondiente. Por lo tanto los puntos planteados en los objetivos se cumplieron y en el tiempo determinado. Bibliografa 1. Prctico de laboratorio nmero uno, pg. 10-12 2. Harris Daniel C. Analisis qumico cuantitativo, ED revert S.A., 200. Pg

Estandarizacin de procesos analticos


Qumica en ciencias de la salud. Metodologa analtica. Salud pblica. Reactivos analticos. Validacin de tcnicas. Normativa
Pas: Colombia Idioma: castellano Enviado por: 2PACDESG

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ANTECEDENTES. El Laboratorio se realizan procedimientos analticos para la vigilancia de factores de riesgo y eventos de inters en salud pblica a travs de los grupos de trabajo de Vigilancia del Ambiente y el Consumo y Vigilancia de Enfermedades, los diferentes procedimientos analticos generan resultados que son base la para la realizacin de acciones en salud pblica. El Laboratorio de Salud Pblica en busca del proceso de mejoramiento contino esta desarrollando un sistema de aseguramiento de la calidad, operativizado a travs del trabajo conjunto de todos los funcionarios, dentro de este proceso es pilar fundamental la validacin de las tcnicas analticas de acuerdo con los requerimientos de la Norma Tcnica Colombiana NTC ISO 17025, de tal suerte que las pruebas utilizadas cumplan con los diferentes requisitos establecidos para estas. Uno de los mecanismos para la monitorizacin de la eficiencia de estos procedimientos analticos es la ESTANDARIZACION, etapa posterior a la validacin de las tcnicas. . OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

Planear, disear y ejecutar la estandarizacin de las metodologas analticas cuyo montaje ha sido realizado con anterioridad, que son el soporte de los resultados que se emiten en los distintos procedimientos analticos de eventos de inters en salud pblica
o o

OBJETIVOS ESPECIFICOS Reconocer la reformacin de los reactivos analticos en el mbito de la sociedad moderna, obviamente encaminado a enriquecer la forma de ver la qumica en las mltiples ramas de la ciencia. Cumplir con los parmetros de la asignatura y efectuar una depuracin de los temas aseguir. MARCO TEORICO DEFINICION. La estandarizacin es ajustar un mtodo analtico a determinadas normas y formas y comprende las siguientes etapas:

1. Montaje 2. Validacin 3. Clculo de atributos 4. Cartas de Control 1.- Montaje. Es establecer un procedimiento analtico. Etapa de la estandarizacin mediante la cual se definen los atributos del mtodo a ensayar, que incluye los siguientes pasos:

Procedimiento detallado de anlisis, asimilacin del mtodo. Verificacin de equipos, reactivos y elementos de laboratorio. Ensayo de respuesta o seal Concentraciones ms baja y ms alta esperadas encontrar en la muestra Ensayo preliminar de reproducibilidad. 2.- Validacin. La validacin es un proceso netamente experimental, efectuada mediante estudios de laboratorio, que permite evaluar o determinar la conveniencia o capacidad de un esquema analtico particular, cuyas caractersticas de diseo cumplen con los requerimientos metodolgicos y de resultados para la aplicacin analtica propuesta; que involucra el desarrollo de un protocolo, que incluye la estimacin de las medidas de precisin y exactitud aplicables a cualquier mtodo analtico, est o no normalizado. 3.-Clculo de los atributos. Son los que se derivan del proceso de validacin, que identifican al mtodo, dentro de los que podemos citar:

& Lmite de deteccin : mnima concentracin detectable del analito que no puede cuantificarse & Lmite de cuantificacin : valor de la concentracin a partir de la cual tiene significado cuantitativo & Exactitud :es el grado de proximidad entre una medida y el valor verdadero o esperado y est definido por la recuperacin

& Precisin : es el grado de proximidad entre resultados que se efectan repetitivamente y en forma independiente y est relacionada con el coeficiente de variacin & Sensibilidad: corresponde a la mnima cantidad de analito que puede producir un resultado significativo. & Rango til : rango de concentracin comprendido entre el lmite de cuantificacin y el lmite de liealidad ( mximo valor de la concentracin a partir de la cual no tiene significado cuantitativo) 4.- Cartas de Control Es el procedimiento interno que se realiza para verificar que el mtodo validado cumple con los requisitos establecidos, permite llevar un registro diario del procedimiento, siempre que se haga una marcha analtica. METODOS A continuacin se describe la metodologa empleada en el proceso de estandarizacin: Norma Gua Se utiliza la norma GUIA ISO 5725, que fija las pautas para determinar la exactitud de un mtodo de ensayo y sus resultados, tomando como referencia la REPETITIVIDAD Y REPRODUCIBILIDAD, que permite calcular la precisin y exactitud de un mtodo estndar de medida. METODOLOGA

1. ENSAYO PRELIMINAR DE REPRODUCIBILIDAD Una vez que se tiene establecido el mtodo de ensayo, cuya asimilacin se ha llevado a cabo con detalles y se conoce la respuesta o seal que lo caracteriza, hay que definir:

& Concentracin mxima de inters, que se denomina C. & Se prepara una solucin acuosa del patrn, en una concentracin equivalente al 9 % C (0.09C) y otra del 90 % de C ( 0.9C) & Se preparan 10 rplicas del blanco, 10 rplicas de la concentracin baja ( 0.09C) y 10 rplicas de la concentracin alta (0.9C) & Se corren estas soluciones por el procedimiento analtico a ensayar & Se tabulan los datos de las concentraciones y la respectiva seal & Se grafican los datos anteriores, es decir : seal obtenida vs Concentracin & Se calcula la ecuacin correspondiente.

Mediante un programa establecido para la calibracin de mtodos analticos denominado KALIBO, se calculan tanto la ecuacin correspondiente, como los atributos definidos anteriormente, de donde se determina tambin el coeficiente de variacin del mtodo el cual se compara con la literatura. Este coeficiente de variacin de acuerdo a la grfica de HORWITZ, establece los valores que segn las

unidades de concentracin del analito que se determine, fija las pautas para determinar la precisin del mtodo.

2. INTERFERENCIA POR MATRIZ. Una vez que se ha realizado el ensayo preliminar de reproducibilidad, es necesario verificar el comportamiento del analito en la muestra, o matriz de inters. Para ello se requiere: Disponer de dos muestras M1 y M2, cuya concentracin del analito sea lo ms cercana a cero. Adicionar estas muestras con el analito en las siguientes concentraciones: 0.4C y 0.7C, denominadas A1 y A2 respectivamente asi: M1 + A1 = 0.4C M2 + A2 = 0.7C Preparar lo que se denomina un lote de soluciones, que consta de lo siguiente:

& 2 Blancos denominados BK1 y BK2 ( soluciones sin analito) & 1 patrn de concentracin 0.9C & 1 patrn de concentracin 0.09C & 1 Muestra M1 & 1 Muestra M2 & 1 Muestra M1 + adicin 0.4C & 1 Muestra M2 + adicin 0.7 C Se procesan estas soluciones por el procedimiento analtico a ensayar Los datos obtenidos de la seal y la concentracin se grafican y se determina la ecuacin, por el mismo procedimiento que el ensayo de reproducibilidad, Se compara la pendiente obtenida con la del ensayo de reproducibilidad: Si son similares, se dice que el procedimiento analtico no presenta interferencia por matriz, es decir que el analito se comporta de la misma forma en la matriz de inters que en la solucin acuosa.

3. VALIDACION DISEO EXPERIMENTAL. Una vez realizados los anteriores procedimientos, los cuales corresponden a la etapa de montaje, se entra de lleno a lo que se denomina la etapa de validacin. De acuerdo a la metodologa adoptada por el INSTITUTO NACIONAL DE SALUD (INS), la mnima cantidad de soluciones a analizar que conforman el diseo experimental son 48, distribuidas en seis (6) lotes, de ocho (8) soluciones cada uno. Si el analito es estable, todas las soluciones pueden prepararse el mismo da, que una vez codificadas en forma aleatoria debe entregarse un lote para ser procesado diariamente y en forma consecutiva por el analista. Si el analito no es estable, se realiza el mismo

procedimiento, pero cada lote debe prepararse diariamente hasta completar el total de soluciones que conforman el set. Una vez que se procesan la totalidad de las muestras que conforman el set, se descodifican las soluciones por parte del Referente de Validacin en presencia del analista responsable. Los datos de concentraciones y la respectiva seal de cada una de las soluciones analizadas se registran en la tabla de captura de datos, para su tratamiento estadstico. De acuerdo a la Norma Guia ISO 5725, dentro de cada lote solamente los blancos se repiten, por lo tanto se habla de repetitividad dentro del lote (r) y adems se reproducen entre los seis lotes o sea que se cumplen condiciones de reproducibilidad ( R). Las dems soluciones solamente cumplen condiciones de reproducibilidad. Los datos obtenidos expresados en unidades de concentracin, son sometidos a tratamiento estadstico, para verificar condiciones de repetitividad y reproducibilidad mediante el anlisis de varianzas y desviaciones estndar entre lotes y dentro de los lotes, cuya desviacin estndar total elevada al cuadrado, o sea la varianza, se comparan con los lmites de confianza establecidos. Cuando los datos analizados se encuentran dentro de los rangos permisibles se dice que se han alcanzado las metas en cuanto a precisin. De otra parte, se hace la diferencia entre las concentraciones de las muestras adicionadas ( M1 + A1 ) y ( M2 + A2 ), de las respectivas muestras sin adicionar M1 y M2, el resultado se conoce como la recuperacin real, el que se compara con la recuperacin terica esperada. Si el valor obtenido est dentro del rango del 95 al 105 %, se dice que el mtodo de ensayo tiene una recuperacin satisfactoria. ( exactitud) Cuando el mtodo de ensayo ha alcanzado las metas en cuanto a precisin y a exactitud, se dice que el mtodo ha sido validado

4. ATRIBUTOS FINALES Con los datos de las seales y las correspondientes concentraciones se construye la funcin lineal final, que por el programa KALIBO nos permite calcular de nuevo los atributos finales del mtodo, definidos en el ensayo de reproducibilidad. Cuando el mtodo validado, presenta los atributos finales, se dice que ha sido estandarizado.

5. CONTROL INTERNO. Para monitorear el mtodo estandarizado se elaboran lo que se denominan las cartas de control, donde una muestra o un patrn son sometidos a 20 ensayos repetitivos , cuyos datos se tabulan y se calculan el valor medio y la desviacin estndar. Se establecen unos lmites de confianza del valor medio ms dos desviaciones estndar y el valor medio menos dos desviaciones estndar, denominados lmites superior e inferior. Una vez se realice una marcha analtica, se corre de la misma forma la muestra o patrn con la que se elaboraron los lmites y se registra el dato obtenido. Los datos obtenidos deben presentar una distribucin normal alrededor de la media. Cuando cinco datos consecutivos presentan tendencia ascendente o descendente alrededor de la media, significa que los datos que se obtengan al utilizar este control en la sexta lectura no podrn reportarse, obligando a revisar la metodologa de anlisis.