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Practicas de Biologa Agosto Diciembre 2011 Bilogo y M. en C.

Armando Silva Pacheco


PRIMERA SESION DE LABORATORIO

Normas generales de uso del laboratorio

Para el desarrollo de las prcticas es conveniente tener en cuenta algunas normas elementales que deben ser observadas con toda escrupulosidad. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Antes de realizar una prctica, debe leerse detenidamente para adquirir una idea clara de su objetivo, fundamento y tcnica. Los resultados deben ser siempre anotados cuidadosamente apenas se conozcan. El orden y la limpieza deben presidir todas las experiencias de laboratorio. En consecuencia, al terminar cada prctica se proceder a limpiar cuidadosamente el material que se ha utilizado. Cada grupo de prcticas se responsabilizar de su zona de trabajo y de su material. Antes de utilizar un compuesto hay que fijarse en la etiqueta para asegurarse de que es el que se necesita y de los posibles riesgos de su manipulacin. No devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados sin consultar con el profesor. No tacar con las manos y menos con la boca los productos qumicos. Todo el material, especialmente los aparatos delicados, como lupas y microscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus mecanismos. Los productos inflamables (gases, alcohol, ter, etc.) deben mantenerse alejados de las llamas de los mecheros. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, se har al bao Mara, nunca directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas se debe tener mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama. Cuando se manejan productos corrosivos (cidos, lcalis, etc.) deber hacerse con cuidado para evitar que salpiquen el cuerpo o los vestidos. Nunca se vertern bruscamente en los tubos de ensayo, sino que se dejarn resbalar suavemente por su pared. Cuando se quiera diluir un cido, nunca se debe echar agua sobre ellos; siempre al contrario: cido sobre agua. Cuando se vierta un producto lquido, el frasco que lo contiene se inclinar de forma que la etiqueta quede en la parte superior para evitar que si escurre lquido se deteriore dicha etiqueta y no se pueda identificar el contenido del frasco. No pipetear nunca con la boca. Se debe utilizar la bomba manual, una jeringuilla o artilugio que se disponga en el Centro. Las pipetas se cogern de forma que sea el dedo ndice el que tape su extremo superior para regular la cada de lquido. Al enrasar un lquido con una determinada divisin de escala graduada debe evitarse el error de paralaje levantando el recipiente graduado a la altura de los ojos para que la visual al enrase sea horizontal. Cuando se calientan a la llama tubos de ensayo que contienen lquidos debe evitarse la ebullicin violenta por el peligro que existe de producir salpicaduras. El tubo de ensayo se acercar a la llama inclinado y procurando que sta acte sobre la mitad superior del contenido y, cuando se observe que se inicia la ebullicin rpida, se retirar, acercndolo nuevamente a los pocos segundos y retirndolo otra vez al producirse una nueva ebullicin, realizando as un calentamiento intermitente. En cualquier caso, se evitar dirigir la boca del tubo hacia la cara o hacia otra persona. Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo despus de haberlos calentado con el fin de evitar roturas. Los cubreobjetos y portaobjetos deben cogerse por los bordes para evitar que se engrasen.

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10. 11. 12. 13. 14. 15.

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SEGUNDA SESION
El Microscopio ptico compuesto

PARTES DE UN MICROSCOPIO PTICO

Sistema ptico o OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del objetivo. o OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta. o CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin. o DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador. o FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador. Sistema mecnico o SOPORTE: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo. o PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin. o CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular, .. o REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos. o TORNILLOS DE ENFOQUE: Macromtrico que aproxima el enfoque y micromtrico que consigue el enfoque correcto.

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO PTICO Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogi correctamente en el uso anterior, ya debera estar en esas condiciones. 2. Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas. 3. Comenzar la observacin con el objetivo de 4x (ya est en posicin) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparacin es de bacterias. 4. Para realizar el enfoque: a. Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo macromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a travs del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacin pudindose daar alguno de ellos o ambos. b. Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparacin con el macromtrico y, cuando se observe algo ntida la muestra, girar el micromtrico hasta obtener un enfoque fino. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparacin y por ello es fcil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersin si se observa una preparacin que ya se enfoc con el objetivo de inmersin. Empleo del objetivo de inmersin: . Bajar totalmente la platina. a. Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habr que echar el aceite. b. Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre ste y el de x40. c. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz. d. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de inmersin. e. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente. f. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersin y la preparacin es mnima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande. 1.

g.

h.

i.

Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se manchara de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operacin desde el paso 3. Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revlver. En este momento ya se puede retirar la preparacin de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersin en posicin de observacin. Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel especial para ptica. Comprobar tambin que el objetivo 40x est perfectamente limpio.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES 1. 2. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posicin de observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda. Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y daen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el microscopio. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pauelos especiales para ptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasar el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden daar las lentes y su sujecin. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico, micromtrico, platina, revlver y condensador). El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la mirada a la preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se est observando a travs del ocular. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algn lquido, secarlo con un pao. Si se mancha de aceite, limpiarla con un pao humedecido en xilol. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin prctica y, al acabar el curso, encargar a un tcnico un ajuste y revisin general de los mismos.

3. 4. 5.

6. 7.

8. 9.

TERCERA SESION
Observacin de epidermis de cebolla

MATERIAL

Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Cubeta Agujas enmangadas

Pinzas Escalpelo Verde de metilo actico o azul de metileno Cuentagotas Cebolla

TCNICA 1. 2. 3. 4. 5. 6. Separar una de las hojas interna de la cebolla y desprender la tenue membrana que est adherida por su cara inferior cncava. Depositar el fragmento de membrana en un porta con unas gotas de agua. Pon el porta sobre la cubeta de tincin para que caiga en ella el agua y los colorantes. Si es preciso, estirar el trozo de epidermis con ayuda de dos agujas enmangadas. Escurrir el agua, aadir una gotas de verde de metilo actico (o azul de metileno) sobre la membrana y dejar actuar durante 5 minutos aproximadamente. No debe secarse la epidermis por falta de colorante o por evaporacin del mismo! Con el cuentagotas baar la epidermis con agua abundante hasta que no suelte colorante. Colocar sobre la preparacin un cubreobjetos evitando que se formen burbujas y llevarla al microscopio. Observa la preparacin a distintos aumentos, empezando por el ms bajo. Identifica las distintas clulas del tejido epidrmico y las de las hojas del bulbo de cebolla.

RESULTADOS El resultado de esta prctica debe ser semejante a lo que muestran las siguientes fotos obtenidas con microscopio ptico:

Aspecto general de la epidermis o Epidermis de cebolla en fresco x150 o Epidermis de cebolla azul de metileno x150 Tambin se pueden llegar a ver determinadas partes de las clulas o Nucleo x600 o Nucleo x1500 o Nucleo con retculo endoplasmtico x1500 o Retculo endoplasmtico x600

Epidermis de cebolla en fresco 150x

epidermis de cebolla azul de metileno 150 x

Ncleo 600x

ncleo 1500x

Ncleo con RE

RE 600x

CUARTA sesin

Preparacin de un frotis bacteriano


Se denomina frotis a la extensin que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo ms posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparacin es muy difcil obtener una imagen clara y ntida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los mtodos habituales de tincin que permiten la observacin al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijacin de una extensin bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfologa y bacteriana y las posibles agrupaciones de clulas que pudiera haber.

REALIZACIN DEL FROTIS 1. Colocar una pequea gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mnima gota de agua, que resulta suficiente. 2. Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones aspticas, una pequea cantidad del cultivo bacteriano en medio slido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensin homognea que quede bastante extendida para facilitar su secado. Si la muestra se toma de un cultivo en medio lquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensin bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos. 3. Esperar hasta que el lquido se evapore o acelerar su evaporacin acercando el porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaucin de no calentar demasiado el porta pues las clulas pueden deformarse o romperse. FIJACIN DE LAS BACTERIAS AL PORTAOBJETOS 4. Por calor: Pasar tres veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos. Dejar enfriar el porta entre los pases. 5. Con metanol (para bacterias procedentes de medio lquido). Aadir unas gotas de metanol sobre la extensin completamente seca. Golpear el portaobjetos por su canto con cuidado contra la mesa de trabajo para retirar de inmediato el exceso de metanol. Esperar a que el metanol se evapore completamente. Una vez realizado el frotis y fijadas las bacterias, las preparaciones pueden ser observadas al microscopio, aunque carecen de contraste. Lo normal es continuar con el proceso de tincin. TINCIN DEL FROTIS BACTERIANO

6. Cubrir el frotis con abundante colorante y dejarlos actuar durante el tiempo que indique el protocolo de cada tincin concreta. Suele oscilar entre 1 y 5 minutos. En ocasiones el colorante tie slo en caliente, por lo que el tiempo que dure su actuacin se deber sostener el portaobjetos con unas pinzas sobre la llama del mechero para que humee el colorante, pero teniendo mucho cuidado de que no llegue a hervir ya que se producira la destruccin de las clulas. 7. Lavar la preparacin con agua para eliminar el colorante. Esta operacin se realiza inclinando el portaobjetos y aplicando el chorro de agua en su parte superior de manera que resbale sobre el frotis, pero sin que vaya dirigido directamente sobre l, pues podra arrastrar parte del frotis consigo. Eliminar la mxima cantidad de agua de los portaobjetos golpendolos por su canto con cuidado contra la superficie de la mesa de trabajo. 8. Secar el porta presionando entre dos papeles de filtro, pero en ningn caso se debe frotar el porta. 9. Observar la preparacin al microscopio llegando hasta el mximo aumento. Si se quiere montar de forma definitiva no se debe usar ahora el aceite de inmersin. MONTAJE DEFINITIVO DE LA PREPARACIN La tcnica siguiente es de aplicacin para cualquier preparacin microscpica que se desee montar de forma definitiva. Se anotar en un extremo del portaobjetos el contenido de la preparacin, la fecha y, en su caso, el nombre del alumno. 10. Pasar sucesivamente los portaobjetos por las siguientes soluciones mantenindolos un mnimo de 5 minutos en cada bao. La serie de alcoholes puede modificarse en funcin de la disponibilidad de los reactivos, pero el objetivo es que la preparacin quede totalmente deshidratada. Escurrir bien el reactivo antes de introducirlo en el siguiente bao. a. Alcohol de 70 b. Alcohol de 95 c. Acetona pura d. Acetona-xilol (1:1) e. Xilol Montar la preparacin. Emplear blsamo de Canad, euparal o algn medio de montaje sinttico. Utilizar preferiblemente cubreobjetos de 22x22 mm

QUINTA SESION

Observacin de bacterias
OBJETIVOS 1. Realizar una tincin simple de bacterias procedentes de distintas muestras naturales. 2. Realizar dos tipos de fijaciones bacterianas y saber en qu casos se recomienda una u otra. 3. Observar la morfologa bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos de agrupaciones que existen. 4. Practicar con el microscopio al mximo aumento y con el correcto empleo del aceite de inmersin. MATERIAL

Mechero Bunsen o de alcohol Asa de siembra o aguja enmangada Pinzas Portaobjetos Muestras bacterianas de origen natural: yogur, vinagre, sarro dental, suelo, etc.

Colorantes para tincin: a) Solucin de cristal violeta al 1% b) Solucin de safranina al 0,5% c) Azul de metileno al 1% Microscopio y aceite de inmersin

BACTERIAS DEL YOGUR El yogur es un producto lcteo producido por la fermentacin natural de la leche. A escala industrial se realiza la fermentacin aadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociacin de dos cepas bacterianas: el Streptococcus termophilus, poco productor de cido, pero muy aromtico, y el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En esta preparacin se podrn, por tanto, observar dos morfologas bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupacin (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Adems, el tamao del lactobacilo (unos 30m de longitud) facilita la observacin aunque no se tenga mucha prctica con el enfoque del microscopio. 1. Realizar el frotis disolviendo una mnima porcin de yogur en una pequea gota de agua. 2. Fijar con metanol para eliminar parte de la grasa. 3. Teir con un colorante cualquiera de los arriba indicados durante 1-2 minutos. 4. Observar al mximo aumento del microscopio. BACTERIAS DEL VINAGRE El vinagre es una solucin acuosa rica en cido actico resultante de la fermentacin espontnea del vino o de bebidas alcohlicas de baja graduacin. La acetificacin del

vino es producida por bacterias aerbicas del cido actico, principalmente Acetobacter aceti, aunque tambin Gluconobacter. Se trata de bacilos rectos con flagelos polares. 1. Tomar con una aguja enmangada una pequea porcin de madre de vinagre natural o de la telilla que se forma sobre la superficie de los vinos agriado. 2. Extender la muestra en el portaobjetos con una gota de agua y hacer el frotis. 3. Dejar secar y fijar con calor. 4. Teir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar. BACTERIAS DEL SARRO DENTAL El sarro dental es un depsito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes. Est constituido principalmente por restos proteicos, sales minerales y bacterias junto con sus productos metablicos. La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las condiciones que se den en el momento de hacer la preparacin, pero suelen abundar bacterias saprfitas, pudindose observar gran variedad de morfologas: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos. 1. Con una aguja enmangada tomar una pequea porcin de sarro dental y disolverla en una gota de agua sobre el portaobjetos. 2. Dejar secar y fijar con calor. 3. Teir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar. BACTERIAS DEL SUELO La variedad de bacterias que pueden aparecer en una muestra de suelo es prcticamente infinita, muchas de ellas no cultivables en los laboratorios y algunas, incluso, desconocidas para los microbilogos. Para recoger la muestra y hacer el frotis basta con dejar parcialmente enterrado en vertical un portaobjetos en la tierra de una maceta o de un jardn. Despus de varios das, las bacterias se habrn adherido al vidrio y slo habr que fijarlas por calor y teirlas con un colorante cualquiera. Previamente hay que limpiar los bordes del portaobjetos, as como la parte que no se va a teir. Foto de distintos tipos de morfologa bacteriana (x1500)

SEXTA SESION
Observacin de clulas sanguneas

MATERIALES Microscopio Portaobjetos Mechero de alcohol Lanceta estril Cubeta de tincin

Frasco lavador Alcohol absoluto Hematoxilina Eosina

TCNICA 1. 2. 3. Con la lanceta estril realizar una puncin en un pulgar. Depositar una gota de sangre en la parte central de un portaobjetos. Colocar un portaobjetos como indica el dibujo y deslizarlo sobre toda la superficie del porta de manera que se pueda obtener una fina pelcula de sangre.

4. 5. 6. 7. 8. 9.

Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tincin y aadir unas gotas de alcohol absoluto y dejar que el alcohol se evapore para fijar la preparacin. Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos. Evitar la desecacin del colorante agregando ms lquido. Lavar la preparacin y aadir unas gotas de eosina dejndola actuar 1 minuto. Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante. Dejar secar aireando el porta o bien al calor muy lento de la llama del mechero. Observar al microscopio.

OBSERVACIN MICROSCPICA (foto) Al microscopio se vern con un dominio predominante los glbulos rojos, hemates o eritrocitos teidos de color rojo por la eosina (foto). No tienen ncleo y son ms delgados por el centro que por los bordes. Los glbulos blancos o leucocitos se identifican fcilmente por la presencia de ncleo, teido de morado por la hematoxilina. Hay varias clases de leucocitos: 1. 2. 3. Linfocitos (foto): de tamao aproximado al de los glbulos rojos, tienen un solo ncleo que ocupa casi todo el glbulo. Monocitos: son los leucocitos mayores, poco frecuentes normalmente, ncleo grande, redondo, son los ms mviles y su funcin principal es la fagocitosis. Polimorfonucleares (foto): ncleo fragmentado o arrosariado. Pueden ser eosinfilos, con abundantes granulaciones teidas de rojo por la eosina, neutrfilos y basfilos.

Las plaquetas no son visibles ya que precisan una tcnica especial de tincin.

Eritrocitos teidos por eosina

Linfositos

polimorfonucleares: eosinfilos, basinofilos, neutrofilos

SEPTIMA SESION
Observacin microscpica de hongos

OBJETIVOS 1. 2. Realizar preparaciones en fresco y en cinta adhesiva de distintas especies de mohos. Observar la morfologa de los hongos y distinguir entre hifas septadas y no septadas y entre distintos tipos de esporas y las estructuras que las originan MATERIAL

Microscopio Portaobjetos y cubreobjetos (22x22 mm) muy limpios y desengrasados con alcohol Aguja enmangada o lanceta

Trozo enmohecido de fruta o pan o un cultivo de hongos Solucin de lactofenol al azul algodn Cinta adhesiva transparente

PREPARACIN EN FRESCO DE MOHOS

TCNICA 1. Colocar sobre un portaobjetos una gota de solucin de lactofenol no demasiado grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparacin quede demasiado gruesa. Realizar la misma operacin en otro portaobjetos que se usar para lavar la muestra. Tomar el material a observar en una mnima cantidad con agujas finas o lancetas procurando arrancarlo desde la base y disponerlo con cuidado sobre la gota de uno de los portaobjetos. Con esta especie de lavado se consigue desprender el exceso de conidios que casi siempre llenan estas preparaciones y que impiden ver lo que realmente interesa, los conidiforos. Transportar el material con la lanceta a la gota del segundo portaobjetos que ser ya el definitivo. Si se trata de hongos con picnidios (estructuras globosas tapizadas en su interior por los conidiforos), se aplastarn stos ligeramente sobre la gota o se seccionarn con un bistur. Con agujas muy finas se distribuye el material en la gota de manera que no quede amontonado. Colocar el portaobjetos poco a poco y empezando por un lado para evitar que se formen burbujas entre los dos vidrios. PREPARACIN EN CINTA ADHESIVA

2.

3.

4. 5.

TCNICA 1. 2. 3. 4. 5. Colocar sobre un portaobjetos una gota de solucin de lactofenol no demasiado grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparacin quede demasiado gruesa. Cortar un trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2cm. Tocar con el lado adhesivo de la cinta la superficie de la fruta o el pan enmohecidos o el borde de una colonia de hongo de un cultivo. En la zona central de una colonia puede haber una excesiva concentracin de esporas. Pegar la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos. Eliminar el colorante sobrante con un papel de filtro.

RESULTADOS

Moho del tomate: x600 x1500 Aspergillus: x150 x600 (foto a / foto b) Penicillum: x600 x1500

Moho del tomate 600x

moho del tomate 1500x

Aspergillus: moho del pan o tortilla

Moho Penicilium 600x

Penicilium 1500x

OCTAVA SESION

Mitosis en clulas de raz de cebolla


MATERIALES Microscopio Frasco lavador Portaobjetos Mechero de alcohol Cubreobjetos Tijeras Lanceta estril Papel de filtro Cubeta de tincin Vaso de precipitados Aguja enmangada Vidrio de reloj Pinzas Orcena A Palillos Orcena B

TCNICA 1. Llenar un vaso de precipitados con agua y colocar un bulbo de cebolla sujeto con dos o tres palillos de manera que la parte inferior quede inmersa en el agua. Al cabo de 3-4 das aparecern numerosas raicillas en crecimiento de unos 3 o 4 cm de longitud. 2. Cortar con las tijeras unos 2-3 mm del extremos de las raicillas y depositarlo en un vidrio de reloj en el que se han vertido 2-3 ml de orcena A. 3. Calentar suavemente el vidrio de reloj a la llama del mechero durante unos 8 minutos, evitando la ebullicin, hasta la emisin de vapores tenues. 4. Con las pinzas tomar uno de los pices o extremos de las raicillas y colocarla sobre un portaobjetos, aadir una gota de orcena B y dejar actuar durante 1 minuto. 5. Colocar el cubreobjetos con mucho cuidado sobre la raz. Con el mango de una aguja enmangada dar unos golpecitos sobre el cubre sin romperlo de modo que la raz quede extendida. 6. Sobre la preparacin colocar unas tiras de papel de filtro, 5 o 6. Poner el dedo pulgar sobre el papel de filtro en la zona del cubreobjetos y hacer una suave presin, evitando que el cubre resbale. Si la preparacin est bien asentada no hay peligro de rotura por mucha presin que se realice. 7. Observar al microscopio. OBSERVACIN MICROSCPICA (foto x150 / x600) Se realizar a fuertes aumentos. La orcena A reblandece las membranas celulares y la B completa el proceso de tincin. Con la presin sobre el porta de la preparacin se logra una extensin y difusin de las clulas del meristemo de la cebolla. La preparacin presenta el aspecto de una dispersin de clulas por todo el campo que abarca el microscopio. Se observan clulas en diversas fases o estados de divisin celular. Se ven los cromosomas teidos de morado por la orcena. El aspecto reticulado as como el mayor tamao de algunos ncleos corresponde a las clulas que se

encontraban en los procesos iniciales de la divisin mittica. Ver secuencia completa

Observacin al microscopio 150x

600x

Secuencia completa de la meiosis

Test interactivo de autoevaluacin


Nivel: 3 Bachillerato Biologa
Prcticas de laboratorio
Se muestran 20 preguntas.

Asignatura:

Unidades didcticas:

1.

El colorante de contraste de la tincin gram es la safranina Verdadero Falso

2.

Seala la respuesta falsa referida al microscopio ptico A - Se enfoca con el macromtrico y con el micromtrico B - Se gira el revlver para cambiar de objetivo C - La preparacin se pone en la platina D - El condensador se sita entre la preparacin y la lente del objetivo

3.

La amilosa se colorea de azul frente al lugol al reaccionar qumicamente con yodo Verdadero Falso

4.

El objeto de la figura se llama A - Matraz aforado B - Vaso de precipitados C - Matraz kitasato D - Matraz Erlenmeyer E - Matraz de fondo plano

5.

Para qu se puede usar en el laboratorio el sulfato de cobre? A - Hidrlisis de disacridos B - Estudio de coagulacin de protenas C - Identificacin del almidn D - Saponificacin E - Reaccin de Biuret

6.

El cido se echa sobre el agua y nunca al revs Verdadero Falso

7.

El objeto de la figura se llama A - Vidrio de reloj B - Placa Petri C - Cpsula de porcelana D - Mortero E - Vaso de precipitados

8.

El objeto de la figura se llama A - Matraz aforado B - Vaso de precipitados C - Matraz kitasato D - Matraz Erlenmeyer E - Matraz de fondo plano

9.

El objeto de la figura se llama A - Vidrio de reloj B - Placa Petri C - Cpsula de porcelana D - Mortero E - Vaso de precipitados

10.

Para pipetear un lquido se puede utilizar una bomba manual o incluso la boca. Verdadero Falso

11.

El objeto de la figura se llama A - Embudo Gibson B - Agitador C - Embudo Buchner

D - Embudo cnico E - Pipeta aforada

12.

Cuando se quiere diluir un cido se debe echar siempre el agua sobre el cido. Verdadero Falso

13.

Al enrasar un lquido con una determinada divisin graduada, se debe mirar el recipiente desde arriba. Verdadero Falso

14.

Los monosacridos dan positiva la reaccin de Fehling. Verdadero Falso

15.

Seala la respuesta falsa referida al microscopio ptico A - Se enfoca con el macromtrico y con el micromtrico B - Se gira el revlver para cambiar de ocular C - La preparacin se pone en la platina D - El condensador se sita entre la preparacin y la fuente de luz

16.

Las bacterias se deben fijar al porta procurando no matarlas Verdadero Falso

17.

En la tincin gram se usa el lugol como primer colorante Verdadero Falso

18.

Los tubos de ensayo que contienen productos inflamables se deben calentar al bao Mara. Verdadero Falso

19.

Un mordiente es un colorante ms fuerte de lo normal Verdadero

Falso

20.

La distancia interpupilar del observador slo afecta a la observacin en los microscopios binoculares Verdadero Falso

006004

006004027

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