3.

MAERIALES Y METODOS Medios de cultivo: Agar nutritivo TSI Caldo tripticasa soya (TSB) SIM PCA Tubos de ensayo con tapas autoclaves Autoclave Asa de inoculacin Aguja de inoculacin Hisopos estriles Incubadora Pipetas Asa de Digralsky Inoculos (cepas de bacterias proporcionadas en el laboratorio) Klebsiella pneumoniae Escherichia coli, Salmonella tiphymurium Proteus vulgaris Muestra designada por grupo

Mtodos I) TECNICAS EN SIEMBRA EN CAJA PETRI a) Siembra en placas: TCNICA DE ESTRIADO - Encender en mechero Bunsen. Los siguientes paso se realizaran dentro del rea de seguridad proporcionada por el mechero de Bunsen encendido. - Esterilizar el asa de aro en el mechero, calentndola al rojo vivo. - Coger en poco de la muestra del laboratorio Escherichia vulneris. - Enfriar en asa, alejndole del mechero por unos segundos. - Seguir este procedimiento durante el proceso de inoculacin, al calentar y enfriar el asa. - Inocular la muestra (cepa bacteriana): sembrar en un medio de cultivo solido, haciendo. pequeos zig-zags o estras , siguiendo los procedimientos del laboratorios proporcionados. por la profesora. - Realizar la tcnica formando estras y rayas conjuntamente con rayas en el agar nutritivo. - Incubar a 37 *Cx24 horas. - Reportar los resultados ms sobresalientes de las colonias.

b) TECNICA DEL HISOPADO O PLATEADO - Tomar la muestra de Escherichia vulneris cuidadosamente mediante un hisopo esterilizado. - Extender la muestra en toda la placa que contiene agar nutritivo suavemente sin romper el agar. - Incubar a temperatura ambiente 37*Cx24 horas - Reportar los resultados referentes al crecimiento en toda la superficie del medio de cultivo. II) TECNICAS DE SIEMRA EN TUBOS DE ENSAYO a) TECNICA DE PUNCION O PICADURA - Esterilizar el asa en punta (aguja) al rojo vivo y enfriarla, seguir este proceso durante la inoculacin. - Coger la muestra suavemente sin romper la muestra de Escherichia vulneris. - Sembrar en un tubo de ensayo que contenga un medio de cultivo semislido (SIM) con la tcnica de picadura o puncin sin topa el fondo del tubo de ensayo. - Retirar la aguja y esterilizar nuevamente al rojo vivo y enfriar para evitar contagios. - Incubar a 37*Cx24 horas. - Reportar los resultados referentes a las caractersticas del crecimiento: En la picadura o En y alrededor de la picadura o En todo el medio de cultivo b) TECNICA DE COLA DE PEZ - Esterilizar el asa en punta (aguja) y enfriarla unos segundos, repetir el proceso durante la inoculacin. - Coger la muestra suavemente sin romper la muestra de Escherichia vulneris. - Realizar una picadura en el fondo del tubo. Al extraer la misma, realizar una estra ondulante en la superficie del agar Simon citrato (pico de flauta). - Incubar a 37*Cx24 horas. - Reportar los resultados referentes a las caractersticas de crecimiento en dos partes: En el fondo del tubo (parte vertical) En la superficie del tubo (parte inclinada) c) TCNICA DE INOCULACIN EN MEDIO LIQUIDO - Esterilizar el asa en punta de aro y enfriar unos segundos, repetir este proceso durante la inoculacin para evitar contagios. - Coger la muestra suavemente sin romper el medio de Escherichia vulneris. - Inocular la muestra a ser analizada. Sembrar en un tubo de ensayo que contenga un medio de cultivo lquido (caldo nutritivo) con la tcnica de agitacin. Sin topar el fondo del medio de cultivo.

Incubar a 37*Cx24 horas. Reportar los resultados referentes a las caractersticas encontradas: *natas* en la superficie. Precipitados. Turbidez en todo el medio. Velos o pelculas en suspensin.

III) RECUENTO EN PLACAS DISOLUCION SUCESIVA 1. Pesar aspticamente 10 gramos de la muestra designada de suelo agrcola y colocar en 90 ml de agua de peptona (disolucin 10 a la menos 1) 2. Agitar la muestra 25 veces de manera uniforme con la explicaciones ya dad por la profesora en el laboratorio. 3. Homogenizar. 4. Tomar 1ml de la solucin y llevar a un tubo que contenga 9ml de agua de peptona. 5. Homogenizar utilizando un vortex (disolucin 10 a las menos 2). 6. De la muestra de 10 2 tomar 1ml de solucin y colocar en un tubo de ensayo con 9 ml de agua de peptona. Homogenizar utilizando un vortex (disolucin 10 3) 7. Realizar las disoluciones que sean necesarias dependiendo el tipo de muestra. SIEMBRA POR VERTIDO 1. 2. 3. 4. Preparar el mediod e cultivo y mantenerlo a temperatura de distribucin (45-50*C) Colocar una alcuota (1ml) de muestra en las cajas petri vacias y estriles. Aadir el medio de cultivo sobre la muestra. Realizar movimientos giratorios para homogenizar la muestra con el agar (aun liquido) o usar un agitador de placas 5. Incubar a 37*C x24 horas 6. Reportar los resultados referentes a las caractersticas ms sobresalientes de las colonias encontradas. SIEMBRA POR EXTENSION 1. Depositar sobre el medio de cultivo una alcuota (0,1ml) de la muestra ya obtenida en los tubos de ensayo de la disolucin sucesiva y colocar en el centro de la caja petri con medio de cultivo slido (agar). 2. Luego colocar alcohol en el asa de Digralsky para esterilizar y cerca del mechero secar los restos del alcohol para realizar la inoculacin. 3. Dispersar la muestra ya colocada en el centro de la caja petri con el asa de Digralsky sobre toda la superficie de la caja petri por lo menos 2 veces para asegurar una distribucin uniforme. 4. Incubar a 37*C x 24horas.

5. Reportar los resultados referentes a las caractersticas ms sobresalientes de las colonias encontradas, en especial contar las colonias aisladas sobre el medio de cultivo.