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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE DURANGO

CAMPUS LOS MOCHIS

LIC. EN NUTRICIN

GUA DE MICROBIOLOGA GENERAL

Ing. Oscar Cota lvarez

INDICE

UNIDAD I

1.1 ANTECEDENTES DE LA MICROBIOLOGA

Microbiologa, ciencia que estudia los organismos de tamao microscpico, entre los que se incluyen las bacterias, los protozoos y los virus, as como ciertos hongos (levaduras) y algas unicelulares de pequeo tamao. Microbiologa, el estudio de los organismos microscpicos, deriva de 3 palabras griegas: mikros (pequeo), bios (vida) y logos (ciencia) que conjuntamente significan el estudio de la vida microscpica.

La microbiologa comprende un conjunto de disciplinas relacionadas, entre las que destacan la bacteriologa, la virologa y la parasitologa. Estudia, no slo la morfologa de los microorganismos, sino tambin su modo de vida, su metabolismo, su estructura molecular, sus propiedades patognicas y sus caractersticas antignicas (aquellas que pueden provocar una respuesta del sistema inmunolgico).

La microbiologa surgi como ciencia tras el descubrimiento, gracias al perfeccionamiento del microscopio, de los microorganismos. El naturalista holands Antoni van Leeuwenhoek fue el primero en describir, en 1683, estos organismos (a los que bautiz como animlculos), que observ con la ayuda de un microscopio construido por l mismo.

Fue a partir de la segunda mitad del siglo XIX cuando los conocimientos de la microbiologa avanzaron de forma notable, gracias, por una parte a Louis Pasteur (considerado el padre de la microbiologa moderna) y, por otra, a Robert Koch (descubridor del agente responsable de la tuberculosis o bacilo de Koch). Este desarrollo se vio particularmente estimulado por las implicaciones de la

microbiologa en el estudio de muchas enfermedades. De este modo, los trabajos de estos dos investigadores y de sus discpulos permitieron descubrir numerosos microorganismos patgenos, proporcionando las bases para el control diversas enfermedades.

Adems, Pasteur, durante una conferencia pronunciada en la Sorbona en 1864, estableci un principio fundamental para el avance de las investigaciones: los microorganismos, como los restantes seres vivos, no aparecen de manera espontnea, sino a partir de grmenes existentes en el medio (fue el final de la teora de la generacin espontnea que, durante 200 aos, haba generado una gran controversia). Pasteur describi tambin el origen bacteriano de los procesos de fermentacin y de muchas enfermedades infecciosas. Cuando se descubrieron los organismos microscpicos, los cientficos intentaron incluirlos en los dos reinos establecidos por Aristteles (reino Animal y reino Vegetal): en efecto, aunque Leeuwenhoek los consider a todos animales pequeos, pronto se confirm que algunos posean caractersticas vegetales (por ejemplo, actividad fotosinttica). Sin embargo, la clasificacin en uno los dos reinos se hacan imposibles para cierto nmero de microorganismos que posean a la vez caractersticas animales y vegetales. Fue a finales del siglo XIX cuando el bilogo alemn Ernst Haeckel agrup a las bacterias en un reino aparte, el reino Mneras.

Por otro lado, diversas experiencias permitieron ampliar considerablemente los conocimientos sobre la estructura de las bacterias. As, Hans Christian Joachim Gram (1853-1938) puso a punto el mtodo de coloracin que lleva su nombre y que permiti descubrir la existencia de dos grandes tipos de bacterias: bacterias Gram positivas (con una pared gruesa de peptidoglicanos) y bacterias Gram negativas (con una pared fina). Cuando se les aplica la tincin de Gram, las primeras aparecen de color prpura mientras que las bacterias Gram negativas son incoloras o rojizas.

A finales del siglo XIX y comienzos del XX, diversos microbilogos como el ruso Serguei Winogradsky, considerado el fundador de la ecologa microbiana moderna, emprendieron las investigaciones sobre el metabolismo de las bacterias (estudios iniciados por Pasteur). Winogradsky estableci que las bacterias funcionan segn dos modelos: la aerobiosis, que se basa en el consumo de oxgeno; y la anaerobiosis, que permite a las bacterias vivir en un ambiente desprovisto por completo de oxgeno. Winogradsky descubri las bacterias quimiosintticas, puso de manifiesto la participacin de los microorganismos en el ciclo de la urea y fue uno de los primeros en estudiar las bacterias simbiticas.

El estudio de los virus se desarroll especialmente en el primer tercio del siglo XX. En efecto, a pesar de que en el ao 1905 varios microbilogos haban demostrado que las enfermedades vricas conocidas se deban a agentes patgenos minsculos y no a las toxinas, los virus siguieron siendo invisibles; y su naturaleza, desconocida, hasta la dcada de 1930. En 1935 el bioqumico estadounidense Wendell Stanley logr aislar y cristalizar un virus: el del mosaico del tabaco. En 1938 se observaron por primera vez los virus gracias a la invencin del microscopio electrnico. Despus, en las dcadas de 1960 y 1970 se descubrieron numerosos virus y se determinaron sus caractersticas fsicas y qumicas.

Posteriormente, las investigaciones microbiolgicas se sirvieron de diversas tcnicas innovadoras, como el microscopio electrnico de barrido o las tcnicas de secuenciacin del cido desoxirribonucleico (ADN). Gracias a todos estos avances, los microorganismos se clasificaron en funcin de su estructura molecular, incluyndolos en tres reinos. De este modo, las bacterias forman el conjunto de los procariotas, es decir, organismos en los que el material gentico, en forma de ADN, se encuentra libre en el citoplasma y no incluido en un ncleo: pertenecen al reino Mneras. Los restantes organismos unicelulares se clasifican como eucariotas (en los que el genoma est incluido en el ncleo celular). Entre estos eucariotas unicelulares se distinguen los que pertenecen al reino Protistas (grupo que engloba a los protozoos y algas unicelulares) y los que pertenecen al

reino Hongos (las levaduras). Los virus constituyen un mundo aparte, ya que no pueden reproducirse por s mismos, sino que necesitan parasitar una clula viva para completar su ciclo vital. Por ltimo, el descubrimiento de los priones por Stanley Prusiner y su equipo en 1982 ha abierto una va de estudio dentro de la microbiologa. Los priones, simples protenas desprovistas de material gentico, suscitan numerosos interrogantes sobre su funcionamiento y modo de transmisin.

1.2 RAMAS DE LA MICROBIOLOGA

Las ramas ms importantes de la microbiologa son: la virologa, parasitologa, micologa, y bacteriologa. Cada una de esas ciencias se encarga del estudio la diversidad del microorganismo, metabolismo, reproduccin, taxonoma fisiologa. y la

1.3 CLASIFICACIN

DE

LOS

MICROORGANISMOS

SEGN

SUS

PARMETROS FSICOS

Por su requerimiento de oxigeno

Otro aspecto a tener en cuenta en la clasificacin de bacterias es la necesidad de oxgeno para poder vivir. Dependen en buena medida de la disponibilidad de las enzimas eliminadoras de perxidos y superxidos.

Aerobias

estrictas:

Dependen

de

O2

para

su

crecimiento.

Anaerobias estrictas: se desarrollan en ausencia total de O2, utilizan aceptores finales distintos del oxgeno: CO2, H2 y N2, o poseen metabolismo estrictamente fermentativo.

Anaerobias Facultativas: pueden desarrollarse en presencia o ausencia de O2, aunque predominan en medios anaerbicos . Microaerfilas: slo se pueden desarrollar en presencia de bajas tensiones de O2 (menor del 12% en lugar del 20% que es la atmosfrica) y altas tensiones de CO2.

Por su ptimo de temperatura Segn la temperatura ptima de crecimiento las bacterias se clasifican en:

Termfilas: se desarrollan entre 25 y 80C, ptima 50 y60C

Mesfilas: se desarrollan entre 10 y 45C, ptima 20 y 40C

Psicrfilas: se desarrollan entre -5y 30C, ptima 10 y 20C.

Segn el pH en que se desarrollan Las bacterias se clasifican en:

Acidfilas: Se desarrollan a pH entre 1.0 y 5.0

Neutrfilas: Se desarrollan a pH entre 5.5 y 8.5

Basfilas: Se desarrollan pH entre 9.0 y 10.0

Por su forma de nutricin Segn su metabolismo interno, las bacterias presentan requerimientos

nutricionales diversos y se clasifican en:

Auttrofas quimiosintticas o fotosintticas, Las auttrofas fotosintticas utilizan la luz del sol y el bixido de carbono para fabricar su alimento. Las auttrofas quimiosintticas utilizan compuestos inorgnicos, por ejemplo, el azufre para fabricar su alimento y su fuente de energa es el CO2

Hetertrofas (por absorcin) pueden utilizar fuente de carbono orgnico para su alimentacin

Las bacterias pueden vivir como parsitos afectando los organismos donde habitan, como simbiontes formando parte de la flora bacteriana normal de la piel, cavidades y tracto digestivo del hombre y de los animales y saprofitas la gran mayora, ayudando a la descomposicin de la materia orgnica muerta. 1.4 FASES DE CRECIMIENTO MICROBIANO El crecimiento bacteriano es la divisin de una bacteria en dos clulas hijas en un proceso llamado fisin binaria. Previniendo que no se produzca ningn caso de mutacin las clulas hijas resultantes sern genticamente idnticas a la clula original. De este modo tiene lugar la "duplicacin local" de la poblacin bacteriana. Las dos clulas hijas creadas tras la divisin no sobreviven necesariamente. Sin embargo, si el nmero de supervivientes supera la unidad, en promedio, la poblacin bacteriana experimenta un crecimiento exponencial. La medicin de una curva del crecimiento exponencial de las bacterias en un cultivo ha sido tradicionalmente una parte de la formacin de todos los microbilogos. Los procesos fundamentales empleados para ello son la enumeracin bacteriana

(conteo

bacteriano)

por

mtodos

directos

individuales

(microscopa, citometra de flujo1 ), por mtodos directos y masivos (biomasa), por mtodos indirectos e individuales (conteo de colonias), o por mtodos indirectos y en bloque (nmero ms probable, turbidez, absorcin de nutrientes). Los modelos permiten conciliar la teora con las mediciones.
Fases de crecimiento microbioano

En estudios autoecolgicos, el crecimiento bacteriano en un cultivo de lotes se pueden modelar suponiendo cuatro fases diferentes: fase de adaptacin (A), fase exponencial (B), fase estacionaria (C), y fase de declive (D). A. Durante la fase de adaptacin, las bacterias se adaptan a las condiciones de crecimiento. Es el perodo en el que las bacterias individuales estn madurando y no tienen an la posibilidad de dividirse. Durante la fase de adaptacin del ciclo de crecimiento de las bacterias, se produce la sntesis de ARN, enzimas y otras molculas. As que en esta fase los microorganismos no estn latentes. B. La fase exponencial (a veces llamada fase logartmica) es un perodo caracterizado por la duplicacin celular. El nmero de nuevas bacterias que aparecen por unidad de tiempo es proporcional a la poblacin actual. Si el crecimiento no se limita, la duplicacin continuar a un ritmo constante, por lo tanto el nmero de clulas y la tasa de crecimiento de la poblacin se duplica con cada perodo de tiempo consecutivo. Para este tipo de crecimiento exponencial, representando el logaritmo natural del nmero de clulas frente al tiempo se obtiene una lnea recta. La pendiente de esta lnea es la tasa de crecimiento especfica del organismo, que es una medida del nmero de divisiones por clula y por unidad de tiempo. La tasa real de este crecimiento (es decir, la pendiente de la recta en la figura) depende de las condiciones de crecimiento, que afecta a la frecuencia de los eventos de divisin celular y a la probabilidad de que ambas clulas hijas sobrevivan. Bajo condiciones controladas, las cianobacterias pueden duplicar su poblacin cuatro veces al da. El crecimiento exponencial no puede continuar indefinidamente, sin embargo, porque el medio llega pronto al agotamiento de nutrientes mientras se acumulan los desechos.

C. Durante la fase estacionaria, la tasa de crecimiento disminuye como consecuencia del agotamiento de nutrientes y la acumulacin de productos txicos. Esta fase se alcanza cuando las bacterias empiezan a agotar los recursos que estn disponibles para ellas. Esta fase se caracteriza por un valor constante del nmero de bacterias a medida que la tasa de crecimiento de las bacterias se iguala con la tasa de muerte bacteriana. D. En la fase de declive o muerte, las bacterias se quedan sin nutrientes y mueren. Esta modelo de crecimiento del cultivo bsico en lotes se mantiene y pone su nfasis en los aspectos de la proliferacin de bacterias que pueden diferir de las del crecimiento de la macrofauna. Se hace hincapi en clonalidad, divisin asexual binaria, el breve tiempo de desarrollo en relacin con la replicacin en s, la tasa de mortalidad aparentemente baja, la necesidad de pasar de un estado inactivo a un estado reproductivo y, por ltimo, la tendencia de cepas adaptadas de laboratorio para agotar sus nutrientes. En realidad, incluso en los cultivos por lotes, las cuatro fases no estn bien definidas. Las clulas no se reproducen en sincrona sin una explcita y continua instigacin (como en los experimentos con bacterias forzadasay su fase de crecimiento exponencial a menudo no sigue siempre un ritmo constante, sino que en su lugar poseen una tasa de lenta decadencia, una respuesta estocstica constante ante las presiones simultneas de reproducirse y de permanecer latentes ante la disminucin de las concentraciones de nutrientes y el aumento de las concentraciones de residuos. El cultivo en lotes es el medio de cultivo de laboratorio ms comn en el que se ha estudiado el crecimiento de bacterias, pero es slo uno de los muchos posibles. En condiciones ideales, est espacialmente estructurado y no estructurado temporalmente. El cultivo de bacterias se incuba en un recipiente cerrado con un nico lote de medio de cultivo. En algunos sistemas experimentales, algunos de los cultivos bacterianos se retiran peridicamente y un medio fresco estril se aade. En el caso extremo, esto se lleva a la continua renovacin de los nutrientes. Se trata de un quimiostatO tambin conocido como cultivo continuo. Est espacialmente estructurado y no estructurado temporalmente, en un estado

de equilibrio definido por la tasa de suministro de nutrientes y la reaccin de las bacterias. En comparacin con el cultivo en lotes, las bacterias se mantienen en fase de crecimiento exponencial y la tasa de crecimiento de la bacteria es conocida. Los dispositivos de este tipo son por ejemplo los turbidoestatos y auxoestatos. El crecimiento bacteriano se puede suprimir con bacteriostticos, sin necesidad de matar las bacterias. En un sinecolgico, una situacin similar a la naturaleza, cuando ms de una especie bacteriana est presente, el crecimiento de los microbios es ms dinmico y continuo.

El lquido no es el nico sistema de laboratorio para el crecimiento bacteriano. Otros entornos espaciales estructurados como los biofilms o superficies de agar presentan modelos de crecimiento adicionalmente complejos.

UNIDAD II

2.1 MICROSCOPA. Microscopio, del griego: "mikro" = pequeo y "scope" = mirar (para mirar cosas pequeas). Un microscopio es un instrumento ptico compuesto de varias lentes que sirve para observar objetos muy pequeos. En el microscopio electrnico, los rayos luminosos del microscopio convencional son reemplazados por un haz de electrones (el aumento puede alcanzar en este caso hasta 100 veces el del microscopio convencional). Aunque la existencia de criaturas demasiado pequeas para ser vistas con el ojo haba sido sospechada desde tiempo atrs, su descubrimiento real est ligado a la invencin del microscopio.

La primera persona que vio los microorganismos con algn detalle fue el constructor de microscopios aficionado Antoni van Leeuwenhoek (1632-1723); este holands us microscopios simples construidos por l mismo (se dedicaba a pulir lentes para fabricar sus microscopios que, como mucho, alcanzaran unos 300 aumentos). En 1677 escribe una carta a la Philosophical Transactions of the Royal Society of London en la que comunicaba sus recientes observaciones con los microscopios de su fabricacin. Desde ese momento, el microscopio ptico se ha transformado en uno de los medios ms importantes para el diagnstico de las infecciones. Aun hoy, a pesar del nfasis en los mtodos rpidos de diagnstico, muchos de los cuales requieren instrumentos complicados o reactivos inmunolgicos, la simple observacin visual de la muestra clnica obtenida de un paciente es la forma ms rpida y especfica de apoyar el diagnstico clnico realizado por el mdico. Microscopio electrnico:

Para estudiar la estructura interna de los procariotas es esencial el uso del microscopio electrnico. En este microscopio se utilizan electrones en vez de rayos de luz, y como lentes funcionan unos electroimanes. Cuando los electrones pasan a travs de la preparacin algunos son difractados creando entonces una imagen que se hace visible en una pantalla sensible a los electrones. La longitud de onda de la radiacin de los electrones es mucho ms pequea que la de la luz visible y, como el poder resolutivo de un microscopio es inversamente proporcional a la longitud de onda utilizada, la resolucin obtenida con el microscopio electrnico es mucho mayor que la conseguida con el microscopio ptico. Mientras que con el microscopio ptico ordinario o el de contraste de fases las estructuras ms pequeas que pueden observarse tienen unos 0,2 m, con el microscopio electrnico pueden verse fcilmente objetos de 0,001 m. Con el microscopio electrnico es posible ver muchas sustancias incluso de tamao molecular. Sin embargo, a causa de la naturaleza de este instrumento slo pueden

examinarse objetos muy delgados: si se est interesado en ver estructuras internas, incluso una sola bacteria es demasiado gruesa para ser observada directamente. Por consiguiente, para preparar muestras para el microscopio electrnico se necesitan tcnicas especiales de cortes ultrafinos. Para seccionar las clulas primero deben ser fijadas y deshidratadas, realizndose habitualmente esto ltimo transfiriendo las clulas a un disolvente orgnico. Despus de la deshidratacin, la muestra es incluida en plstico y en este plstico se cortan secciones finas utilizando un ultramicrtomo, por lo general equipado con una cuchilla de diamante. Una sola clula bacteriana, por ejemplo, puede cortarse en cinco o seis secciones muy finas, que son examinadas despus individualmente con el microscopio electrnico. Para obtener suficiente contraste, las preparaciones se tratan con colorantes especiales de la microscopia electrnica, tales como cido smico, permanganato, uranio, lantano o plomo. Estos materiales estn compuestos por tomos de elevado peso molecular y, por ello, dispersan bien los electrones. Las estructuras celulares teidas con uno de esos materiales presentan un contraste muy aumentado y; por tanto, se ven mejor. Microscopio de contraste de fases: Hace posible visualizar fcilmente pequeas clulas incluso sin teir. Las clulas tienen un ndice de refraccin distinto del medio que las rodea, y esta diferencia puede utilizarse para crear una imagen de mucho mayor contraste que el que puede obtenerse con el microscopio ptico normal. La microscopia de contraste de fases hace posible observar clulas en estado vivo ms fcilmente, ayudndonos as a evitar la creacin de condiciones artificiales tales como las introducidas por la tincin (aparicin de artefactos que interfieren con la correcta visin y alteracin de las estructuras naturales de las clula). En muchos laboratorios de bacteriologa, el microscopio de contraste de fases ha reemplazado prcticamente el microscopio ptico comn como instrumento de investigacin.

Esta tcnica se basa en el hecho de que las diferentes estructuras celulares introducen pequeas variaciones de fase en las radiaciones, retrasndolas ligeramente, siendo estos retrasos diferentes segn el tipo de estructura. Con este microscopio, el bajo contraste existente se refuerza por medio de un sistema ptico especial, que transforma las diferencias de fase, que no son captadas por el ojo humano, en diferencias de amplitud (intensidad luminosa), que s son detectables.

Microscopio de campo oscuro: Se le llama tambin ultramicroscopio y es un microscopio ptico ordinario cuyo sistema condensador ha sido modificado para dirigir la luz a la preparacin desde los lados, de tal modo que slo la luz difractada por la preparacin pasa al ocular y se hace visible. A causa de esta disposicin, la muestra aparece iluminada sobre un fondo oscuro. La microscopa de campo oscuro hace posible la observacin en estado vivo de partculas y clulas que de otra manera estaran por debajo de los lmites de resolucin del microscopio ptico, aunque resulten visibles pocos detalles estructurales. La microscopia de campo oscuro ha sido ampliamente usada en el estudio de pequeas clulas mviles tales como Treponema pallidum, la espiroqueta causante de la sfilis, que es invisible con la microscopa ptica ordinaria.

El microscopio de fluorescencia: Algunos colorantes denominados fluorocromos tienen la propiedad de ser excitados (pasar a un nivel superior de energa) cuando absorben luz ultravioleta (luz de longitud de onda corta). A medida que las molculas excitadas regresan a su estado normal liberan el exceso de energa en forma de luz visible de mayor

longitud de onda que la radiacin excitante. Esta propiedad se denomina fluorescencia. Se han desarrollado mtodos microscpicos modernos que aprovechan la mayor deteccin que posibilita este sistema. Este tipo de microscopios lleva una fuente luminosa que emite radiaciones ultravioleta, en el lmite del espectro visible, que atraviesan el material de la preparacin de de la misma forma en que lo hace un microscopio ptico comn. Las lentes suelen ser de cuarzo ya que el vidrio absorbe la radiacin ultra-violeta. A continuacin del objetivo lleva unos filtros que retienen la radiacin ultra-violeta, que es peligrosa para el ojo humano, dejando pasar solamente la radiacin visible, que no es peligrosa. Hoy da se utiliza mucho un microscopio de fluorescencia en el cual la luz es emitida desde arriba del preparado (epifluorescencia). Un filtro deja pasar luz de la longitud de onda deseada para excitar al fluorocromo y un filtro barrera en el objetivo protege al ojo del observador de la radiacin fluorescente. Los objetos fluorescentes aparecen brillantemente iluminados contra un fondo oscuro, segn el color del colorante usad Microscopio invertido: En el laboratorio de virologa se utiliza muchsimo el microscopio invertido que no es ms que una variante del microscopio convencional que, tal y como indica su nombre, tiene invertida la posicin normal de los objetivos, que estn, en el revlver, por debajo de la platina, mientras que la luz de la fuente de iluminacin, a travs del condensador y del diafragma, llega desde encima de la platina, lo que facilita cierto tipo de trabajos como el control del estado de las monocapas celulares cuando se trabaja con botellas o tubos de cultivo. 2.2 MEDIOS DE CULTIVOS

Koch realiz sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de patata como soporte nutritivo slido, pero no tard en recurrir al caldo de carne lquido, diseado por Loeffler, al que, en 1881, aadi gelatina, logrando un medio slido transparente ideal para la observacin de la morfologa macroscpica de las colonias microbianas. En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal planas, que se llaman desde entonces placas de Petri, para sustituir a las clsicas bandejas de vidrio cubiertas con campanas que se usaban hasta entonces. Actualmente se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes. Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio.

El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.

La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusin de estractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredientes

Condiciones general:

El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por completo al propio medio.

Disponibilidad de nutrientes adecuados: Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener, como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern necesarias Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones qumicas que tengan lugar. Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparacin de estas sustancias para su aplicacin a los medios de cultivo provocaba la prdida de los factores nutritivos lbiles. Actualmente, la forma ms extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar peptona que, adems, representa una fuente fcilmente asequible de nitrgeno y carbn ya que la mayora de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente las protenas naturales, tienen capacidad de atacar los aminocidos y otros compuestos ms simples de nitrgeno presentes en la peptona. Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade a muchos medios sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento,

generalmente de naturaleza vitamnica. Muy a menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como indicadores de ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.

Consistencia del medio: Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en estado semislido o slido. Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusin de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla. Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad, pero hay tambin gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est ampliamente extendido en el laboratorio. Esterilidad del medio: Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presin como agente esterilizante) Clasificacin de los medios de cultivo Se pueden realizar distintas clasificaciones atendiendo a su estado fsico, composicin, el uso al que se destinan: Por su estado fsico se dividen: Slidos, presentan en su composicin una agente solidificante (AGAR) en proporcin de 12 a 15 gramos por litro.

Semislidos, presentan AGAR en su composicin, pero a una concentracin mucho menor, entre 2,5 a 4 gramos del agente solidificante.

Lquidos, no presenta ningn agente solidificante.

Por su composicin:

Se dividen en empricos, sintticos y semisintticos;

Empricos, en su composicin aparecen sustancias orgnicas sintticas, en su composicin aparecen sustancias qumicas definidas composicin aparecen molculas de naturales hidrolizadas. semisintticos, en su

Segn al uso que se destinen:

Se dividen en: enriquecidos, diferenciales o aislamiento, selectivos e inhibidores, transporte y mantenimiento, uso general, para filtros de membrana.

Enriquecidos, suelen ser medios con un nutriente simple que presentan enriquecedores, tales como sangre de caballo, etc.

Diferenciales o de aislamiento, contienen colorantes, azucares e indicadores para provocar la respuesta bioqumica conocida selectiva e inhibidora, adems de los componentes de los medios diferenciales, contienen en su composicin una serie de agentes que sirven para inhibir la flora acompaante de la muestra a estudiar, y aislar, de esta forma, el microorganismo que se busca.

Transporte y mantenimiento, se utilizan en la recogida, transporte y conservacin de muestras biolgicas. son medios muy reductores que inhiben las reacciones enzimticas autodestructivas dentro de las clulas evitando los efectos destructivos de la oxidacin.

Uso general, son medios que soportan el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos fastidiosos.

Filtros de membrana, son medios que permiten el examen de grandes volmenes con un baja concentracin de microorganismos, la separacin de los microorganismos del medio de cultivo e incluso su cambio de un medio de cultivo a otro, permite el crecimiento sin interrupcin del microorganismo.

Composicin del medio

Los constituyentes ms utilizados en la composicin de los medios de cultivo son: agar, peptona, extracto de carne, extracto de levadura, sangre, plasma, suero, bilis, sales biliares, gelatina, carbohidratos, indicadores, Agar, comercialmente se presenta en grnulos y polvos, la concentracin en la que se encuentra en los medios de cultivo, depender del uso que quiera darse al medio.

Peptona, es un producto de composicin variable, obtenido generalmente de la hidrlisis cida o enzimtica de las protenas vegetales o animales.

Extracto de carne, contiene bases orgnicas solubles, productos de degradacin de las protenas, vitaminas y minerales.

Extracto de levadura, se consigue a partir de levadura de pan o de cerveza y es una fuente de aminocidos y vitaminas del complejo B.

Sangre, las ms utilizada es la de sangre o carnero, tiene que estar libre de agentes antimicrobianos para evitar la inhibicin el crecimiento de los microorganismos. Se debe de comprobar siempre la esterilidad, as como la ausencia de citratos ya que inhiben el crecimiento de estafilococos.

Plasma, se utiliza para emplear la actividad coagulasa de las bacterias, se emplea plasma humano o de conejo.

Suero, se prepara a partir de sangre recolectada sin adicin de anticoagulante, eliminando el lquido que se separa cuando se contrae el cogulo. Bilis, contiene varios cidos biliares, como compuestos conjugados con aminocidos, bilirrubina y biliverdina.

Sales biliares, inhiben el crecimiento de bacterias grampositivas y bacilos en forma de esporas, sin afectar el desarrollo de los bacilos entricos gramnegativos.

Gelatina, protena obtenida mediante extraccin de material colgeno a partir de tejidos animales... Es un agente solidificante pero se emplea poco ya que bastantes bacterias provocan su licuacin.

2.3 ESTERILIZACIN

La esterilizacin es un proceso a travs del que se logra la destruccin total de los microorganismos viables presentes en un determinado material.

Este procedimiento es de gran utilidad dentro del campo farmacutico, ya que existen muchos procesos que requieren la utilizacin de materiales estriles. Entre stos podemos destacar:

La esterilizacin de equipos quirrgicos y otros materiales de uso mdico con el propsito de reducir el riesgo de infecciones en pacientes. El acondicionamiento del material (pipetas, tubos, placas de Petri, pinzas, etc.) que va a ser utilizado en los laboratorios de microbiologa. La preparacin de medios de cultivo que sern empleados con diferentes propsitos (cultivo de microorganismos, control de ambiente, equipos o personal, anlisis microbiolgico de medicamentos, cosmticos, alimentos, etc.)

La descontaminacin de material utilizado.

Clasificacin de los mtodos de esterilizacin:

Existen diversos mtodos de esterilizacin. La seleccin del mtodo a aplicar en cada caso est determinada por el tipo de producto a esterilizar. .

Agentes fsicos

El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor hmedo el cual destruye a los microorganismos por desnaturalizacin de las protenas y el calor seco que destruye a los microorganismos por oxidacin de sus componentes celulares.

El calor es considerado como el mtodo de esterilizacin por excelencia siempre y cuando el material a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir ningn tipo de dao. La radiacin, o emisin y propagacin de la energa a travs de un medio, puede ser utilizada como agente para la eliminacin de microorganismos. As tenemos que las radiaciones ionizantes se pueden utilizar para la esterilizacin de materiales termolbiles, como por ejemplo materiales plsticos, y las radiaciones no ionizantes, como la luz ultravioleta, puede ser empleada en el control de reas cerradas.

Agentes mecnicos

La filtracin permite la remocin de todos los microorganismos presentes en un lquido o un gas retenindolos sobre la superficie de un material.

Agentes qumicos

Algunas sustancias qumicas pueden ser usadas como agentes esterilizantes porque tienen la capacidad de promover una o ms reacciones qumicas capaces de daar los componentes celulares de los microorganismos (protenas, membranas, etc.)

Existen diversas marcas comerciales de medios de cultivo que se utilizan en el laboratorio de microbiologa para diferentes fines.

3.4 TECNICAS DE SIEMBRA EN MICROBIOLOGIA En Microbiologa, todas las manipulaciones deben ser llevadas a cabo de modo que se impida cualquier tipo de contaminacin en el rea de trabajo. Se aconseja que la siembra de todas las muestras a los medios de cultivos se realice bajo una cabina de flujo de aire laminar o en un gabinete de seguridad biolgica, con los protectores de plstico o vidrio para el cuello y la cara, las muestras procesadas se las debe considerar como potencialmente infecciosas y manipularlos adecuadamente. Tambin se deben utilizar guantes de goma o latex biolgicos La mesada de trabajo debe estar equipada con todos los materiales necesarios para efectuar las siembras, tambin se debe contar con todos los medios de cultivos necesarios para realizar las siembras. Las asas deben esterilizarse antes de utilizarlas y enfriarse sobre el agar o el material de vidrio (en zonas estriles) antes de tomar la muestra de microorganismos, con objeto de no destruirlos por calor.

Despus de utilizarlas, las asas se vuelven a esterilizar en todo su permetro las

bocas de los tubos y matraces de vidrio se flamean ligeramente una vez destapadas, antes y despus de la inoculacin.

Durante la inoculacin, los tapones se mantienen en la mano sujetndolos por la parte que no entra en contacto con tubos y matraces.

Los tubos abiertos deben mantenerse en posicin inclinada hacia el frente para que el riesgo de contaminacin sea mnimo.

Las tapas de las placas Petri no deben colocarse nunca sobre la mesa de trabajo boca arriba trabajando con bacterias.

Los pasos de un proceso de aislamiento de una especie microbiana se pueden resumir en los siguientes:

Siembra en placa de la muestra de partida.

Tomar una colonia de la placa una vez incubada y sembrar una segunda placa, en la que todas las colonias que crezcan deben ser idnticas.

A partir de la segunda placa se puede resuspender una de las colonias en medio lquido, consiguindose ya un cultivo puro.

Para la conservacin de los cultivos puros de un microorganismo existen diversos mtodos, el ms simple es la resiembra en tubos inclinados que se mantienen, normalmente refrigerados, durante 3-6 meses.

El equipo necesario para la inoculacin es muy simple. Consta de un alambre, con una punta en ojal, recta o en gancho, y el otro extremo insertado en un mango cilndrico (el conjunto es llamado asa u ansa).

La inoculacin primaria puede hacerse con un asa, hisopo u otro material sobre la superficie del medio agarizado en la placa de petri o sobre caldos de cultivos.

SIEMBRA

Objetivos - Familiarizarse con el manejo de microorganismos y con las tcnicas de aislamiento en placa de Petri. - Obtener colonias separadas, utilizando uno o ms mtodos. - Estudiar la morfologa de cada colonia. Material Asa de siembra, Tubo con cultivo, placas de Petri con medio de cultivo slido y cultivo de microorganismo.

Toma de muestras:

Tcnica de siembra para aislamiento:

Estra mltiple: Con un asa de siembra, previamente esterilizada, se toma una muestra del cultivo de microorganismos y se extiende sobre un rea pequea de la superficie de la placa con agar nutritivo, en forma de estras muy juntas, pero sin hacer presin para no daar el agar. Se flamea el asa, se enfra y despus de rozar la siembra realizada previamente, se extiende de nuevo por otra zona de la placa haciendo nuevas estras. Este proceso se repite sucesivamente, flameando y enfriando el asa al comienzo de las sucesivas siembras en estra. Se lleva la placa a incubar, a la temperatura adecuada, siempre en posicin invertida. Mediante esta tcnica se obtienen colonias aisladas a partir de una muestra que contenga un elevado nmero de grmenes.

Ejemplo de resultado con estra mltiple

Siembra por superficie

Se realiza una descarga y se realiza estra por toda la placa.

Siembra por vaciado

Tcnica de Barry

En una placa de Petri vaca se deposita un pequeo volumen conocido de muestra y a continuacin se aade el medio de cultivo (agar nutritivo) fundido y atemperado aproximadamente a 45C. Se mezclan ambos por rotacin suave de la placa. De esta forma los microorganismos se distribuirn de forma homognea en el medio de cultivo, permitiendo el desarrollo de colonias separadas por todo el agar.

Inoculo a dilucin conocida y con asa de Dygraski (Barry modificada):

Depositar sobre la superficie de una placa con agar nutritivo una gota 0,1 ml de una determinada dilucin del cultivo de microorganismos problema y extenderlo con ayuda del cayado, previamente esterilizado, en todas las direcciones hasta que est completamente seco. Incubar la placa, en posicin invertida, a la temperatura deseada (durante 24, 48 72 horas) segn el tipo de microorganismo. La posicin invertida evitar que el agua de condensacin se deposite sobre la superficie del medio, dificultando la obtencin de colonias aisladas.

Es una tcnica usada para el aislamiento de colonias, que permite igualmente el recuento de bacterias viables en la muestra, si conocemos exactamente la dilucin.

Lectura de placas:

UNIDAD IV 1.1 BACTERIOLOGA En las ltimas dcadas se han hecho importantes avances en el estudio de la ultraestructura bacteriana, logrndose una identificacin bioqumica de muchas fracciones subcelulares; estos avances han permitido ubicar a las bacterias en el reino Procaryotae. El conocimiento de las diferentes estructuras y composicin ha permitido comprender como muchas bacterias se relacionan con el hombre, ya sea como integrantes de la flora normal o como agresoras para el mismo. El conocimiento de la composicin bioqumica de las diferentes estructuras bacterianas, junto al conocimiento del metabolismo bacteriano, permite hoy la comprensin del mecanismo de accin de los diferentes antibiticos. Recientemente, los avances de la gentica bacteriana hicieron posible el desarrollo de tcnicas de biologa molecular con aplicaciones a nivel de la investigacin cientfica y el diagnstico. La observacin al microscopio ptico con distintas coloraciones y de los cultivos bacterianos, tienen un rol importante en la identificacin de las bacterias y su ubicacin taxonmica.

Clula procariota Son clulas sin ncleo, la zona de la clula, donde est el ADN y ARN no est limitado por membrana. Ej. Bacteria.

Actualmente estn divididas en dos grupos:

Eubacterias, que poseen paredes celulares formadas por peptidoglicano o por

murena. Incluye a la mayora de las bacterias y tambin a las cianobacterias. Arqueobacterias, que utilizan otras sustancias para constituir sus paredes celulares. Son todas aquellas caractersticas que habitan en condiciones extremas como manantiales sulfurosos calientes o aguas de salinidad muy elevada.

Clula procariota

Procariota (Pros = Antes, Karion = Ncleo) es una clula sin ncleo celular diferenciado, es decir, su ADN no est confinado en el interior de un ncleo, sino libremente en el citoplasma. Las clulas con ncleo diferenciado se llaman eucariotas. Procarionte es un organismo formado por clulas procariotas. La celula procariota, tambin procarionte, organismo vivo cuyo ncleo celular no est envuelto por una membrana, en contraposicin con los organismos eucariotas, que presentan un ncleo verdadero o rodeado de membrana nuclear. Adems, el trmino procariota hace referencia a los organismos conocidos como mneras que se incluyen en el reino Mneras o Procariotas.

Estn

metidos

en

los

dominios

Bacteria

Archaea.

Entre las caractersticas de las clulas procariotas que las diferencian de las eucariotas, podemos sealar: ADN desnudo y circular; divisin celular por fisin binaria; carencia de mitocondrias (la membrana citoplasmtica ejerce la funcin que desempearan stas), nucleolos y retculo endoplasmtico.

Poseen pared celular, agregados moleculares como el metano, azufre, carbono y sal. Pueden estar sometidas a temperatura y ambiente extremos (salinidad, acidificacin o alcalinidad, fro, calor). Miden entre 1/10 Mm, posee ADN y ARN, no tienen orgnulos definidos.

Evolucin

Est aceptado que las clulas procariotas del dominio Archaea fueron las primeras clulas vivas, y se conocen fsiles de hace 3.500 millones de aos. Despus de su aparicin, han sufrido una gran diversificacin durante las pocas. Su metabolismo es lo que ms diverge, y causa que algunas procariotas sean muy diferentes a otras.

Algunos cientficos, que encuentran que los parecidos entre todos los seres vivos son muy grandes, creen que todos los organismos que existen actualmente derivan de esta primitiva clula. A los largo de un lento proceso evolutivo, hace unos 1500 millones de aos, las procariotas derivaron en clulas ms complejas, las eucariotas.

Las procariticas, que comprenden bacterias y cianobacterias (antes llamadas algas verdeazuladas), son clulas pequeas, entre 1 y 5 m de dimetro, y de estructura sencilla; el material gentico (ADN) est concentrado en una regin, pero no hay ninguna membrana que separe esta regin del resto de la clula.

Componentes estructurales de los procariontes:

Cpsula o Vaina: es laxa y mulacilaginosa compuesto por polisacrido o polipctidos. No siempre est presente. Es comn en bacterias patgenas (esporas).

Pared celular: en todos los procariotas, estructura de sostn mecnico, presenta poros. Ver ms adelante informacin detallada.

Flagelo: No siempre presente. Su constitucin es de naturaleza proteica. Su funcin para el desplazamiento de algunos de estos organismos en medios hmedos o acuosos.

Membrana Plamtica: Semipermeable y selectiva, compuesta por una capa bilipidica y protenas. Nunca se presenta el colesterol.

Citoplasma: Se trata de un gel, que deja que las estructuras inmersas en l

se muevan fcilmente. Su constitucin es de agua , protenas, iones, lpidos e hidratos de carbono.

Mesosoma: Prolongaciones de la membrana plasmtica hacia el interior del

citoplasma en forma de rulo (abierto: no forma compartimentos) y donde se acumula gran cantidad de corpsculos respiratorios adheridos a ella. Su funcin es muy parecida a lo que se realiza en la mitocondria de los eucariotas: zona relacionada con la respiracin.

Laminillas o lamelas: Se trata de pliegues membranosos que se extienden

desde la membrana plstica hacia el interior (abiertos: no forma compartimentos). Su funcin puede ser muy diversa dependiendo del organismo que se trate, como por ejemplo: presentar pigmentos relacionados con la fotosntesis

(bacteriorodopsina o bacterioclorofla) o partculas captadores de nitrgeno molecular, etc.).

Ribosomas y Poliribosomas: Los ribosomas en los procariontes son de 70 S

(Cada ribosoma est constituido por dos subunidades, llamadas mayor y menor. El tamao de las subunidades suele indicarse en funcin de la velocidad con lo cual sedimenta en un campo centrfugo. La unidad que expresa dicha velocidad se denomina Svedberg (S), y depende no slo del tamao de la partcula, sino tambin de su forma y densidad. Los poliribosomas son un conjunto de ribosomas unidos por una hebra de ARN mensajero. La funcin es de intervenir en la sntesis de protenas.

Plsmidos: Son molculas de ADN en la que la doble hlice se encuentra

formando un crculo cerrado. Es ms pequeo que el ADN comosmico bacteriano, y el hecho de su presencia le transmite a ese individuo caracteres que no se presentan en aquello que no lo portan.

ADN: Tambin conocido como ADN cormosmico, es circular, cerrado,

desnudo (no presenta histonas) y presenta toda la informacin gnica del individuo. Siempre hay una sola hebra o a lo sumo dos (cuando se duplica). Por lo

general el ADN se ubica en un sector del citoplasma que se le llama "zona nuclear". Esta zona es muy cercano a los mesosomas, pues se trata de un lugar donde se desprende mucha energa. Las diferentes estructuras bacterianas que observamos las podemos dividir,

segn sean constantes en las clulas o no, en estructuras permanentes o variables. Dentro de las primeras se destaca: la pared celular, la membrana celular, los ribosomas y el material gentico.

Las estructuras variables son: los flagelos, las fimbrias o pilis, la cpsula y los esporos.

Estructuras variables, son aquellos que existen en algunas bacterias pero no en todas; un mismo grupo bacteriano o una misma cepa bacteriana las puede presentar o no, dependiendo de las condiciones en donde se desarrolle. Las estructuras variables no resultan esenciales para la vida de la bacteria.

Pared celular Ubicada por fuera de la membrana plasmtica, es una estructura vital para las bacterias que la poseen. Los frmacos que bloquean su formacin producen la lisis y muerte de las bacterias susceptibles. Excepto los mycoplasmas todas las bacterias tienen una pared celular que les da forma y las protege de la lisis osmtica. La pared celular de muchos microorganismos patgenos tiene componentes que contribuyen a su patogenicidad. La pared puede proteger a la clula de las sustancias txicas y es el sitio de accin de algunos antibiticos.

Estructura de la pared celular de las bacterias grampositivas

La gruesa pared celular de las bacterias grampositivas est constituida principalmente por peptidoglicano. Se cree que sta gruesa capa de

peptidoglicano es la determinante de que estas bacterias retengan el cristal violeta de la coloracin de Gram. Sin embargo, estas clulas contienen tambin una gran cantidad de cido teicoico: polisacridos que se unen al cido N-acetilmurmico o a los lpidos de la membrana plasmtica. En este ltimo caso se denomina cido lipoteicoico. Tanto los cidos teicoicos como los lipoteicoicos, tienen la funcin de estabilizar la pared celular. Adems los cidos teicoicos tienen un rol en la virulencia de estos microorganismos, porque actan como antgenos de superficie que se unen a receptores especficos en las clulas del husped. La superficie externa del peptidoglicano de las bacterias grampositivas est generalmente cubierta de protenas. Los diferentes grupos de bacterias grampositivas y las diferentes especies difieren en la composicin de sus protenas y de cidos teicoicos; sto es til para la clasificacin serolgica y la identificacin bacteriana. Estructura de la pared celular de las bacterias gramnegativas Si observamos la pared de las bacterias gramnegativas al microscopio electrnico podemos observar tres zonas: la membrana plasmtica, el espacio periplsmico que incluye una fina capa de peptigolicano y la membrana externa. Esta ltima, exclusiva de las bacterias gramnegativas, es una bicapa lipdica que difiere de otras membranas por su capa externa, que est constituida por una molcula

anfiptica: el lipopolisacrido o endotoxina. Adems de la membrana externa contiene fosfolpidos y protenas que la unen al peptidoglicano. Fundamento de la coloracin de Gram Es probable que la diferencia entre las bacterias grampositivas y gramnegativas se deba a la naturaleza fsica de sus paredes celulares. El peptidoglicano no se tie por s mismo, ms bien parece actuar como barrera de permeabilidad para evitar la prdida de cristal violeta. Durante el proceso de coloracin las bacterias se tien primero con cristal violeta y luego se tratan con yoduro para favorecer la retencin del colorante. En la decoloracin con etanol, se cree que el alcohol contrae los poros de la capa gruesa de peptidoglicano y se retiene el complejo colorante yoduro; as las bacterias adquieren color violeta. Por el contrario, la capa de peptidoglicano de las bacterias gramnegativas es muy fina, con menos enlaces y con poros de mayor tamao. Adems, es posible que le tratamiento con alcohol extraiga suficientes lpidos de la membrana externa como para aumentar su porosidad. Por estos motivos el alcohol elimina ms fcilmente el complejo cristal violeta yoduro en las bacterias gramnegativas. Funciones de la pared celular Otorga rigidez y da forma a las bacterias y las protege de la lisis osmtica. Su importancia clnica deriva de su susceptibilidad a la accin de los antibiticos, dado que stos actan sobre un blanco que no es propio del hombre y que es vital para la vida bacteriana (poseen toxicidad selectiva). Tambin acta como filtro, impidiendo el ingreso de algunas molculas y permitiendo la entrada de metabolitos imprescindibles y agua

Morfologa de las bacterias La microscopa ptica permite reconocer bacterias de distintas formas. Las bacterias esfricas o ligeramente ovoides se denominan cocos. Las bacterias con forma de bastn se denominan bacilos. Los bacilos de corto tamao que pueden confundirse con un coco se denominan cocobacilos. Algunos bacilos tienen extremos afinados y reciben el nombre de bacilos fusiformes, mientras que otros poseen forma de clava o garrote. Los bacilos cortos curvos, con forma de coma reciben el nombre de vibrios. Las bacterias espiraladas se llaman comnmente espirilos cuando son rgidas y espiroquetas si son ms flexibles y ondulantes.

Agrupacin bacteriana

Algunos gneros bacterianos se agrupan de una manera caracterstica. Esta agrupacin se debe a la tendencia de las clulas hijas a permanecer parcialmente adheridas despus de la divisin celular.

Los cocos pueden disponerse: de a pares y se los llama diplococos si se disponen en cadena se llaman estreptococos cuatro clulas esfricas conforman una ttrada en forma de racimo o irrregular se llaman estafilococos en paquetes cbicos se denominan sarcinas

UNIDAD V 5.1 MICOLOGIA Introduccin

La contaminacin fngica de un alimento tiene mucha importancia, no tan slo por su accin deteriorante, que pudre y malogra materias primas y productos manufacturados, sino tambin por la capacidad de algunos hongos para sintetizar gran variedad de micotoxinas, para provocar infecciones y, incluso, para provocar reacciones alrgicas en personas hipersensibles a los antgenos fngicos. Por estos motivos, para conocer la calidad microbiolgica de un producto, es pertinente realizar un recuento de hongos y levaduras.

En

general,

los

hongos

son

microorganismos

eucariotas

pluricelulares

filamentosos, no presentan pigmentos fotosintticos y son quimiohetertrofos aerobios estrictos. A diferencia de las plantas, presentan un bajo grado de diferenciacin en los tejidos. Poseen pared celular contiene quitina un polisacrido que le da rigidez y es responsable de su morfologa y en ocasiones celulosa. Algunos hongos presentan cpsula, formada por polisacridos, con propiedades inmungenas y

antifagocitarias.

La estructura o cuerpo vegetativo de un hongo se denomina talo. El talo est formado por filamentos, o hifas, de unas 5 m de dimetro, que generalmente estn ramificadas. Las hifas son tubos largos que estn formadas por la pared celular de quitina (componentemayoritario) y el citoplasma con sus inclusiones y ncleos con la informacin gentica. En el citoplasma se realiza la actividad bioqumica del hongo.

Las hifas pueden estar separadas en clulas por paredes transversales (septos) en los hongos superiores (Eumicetos), o carecer de paredes en los hongos inferiores (Ficomicetos).

El conjunto de hifas se llama micelio. En el micelio se distinguen dos partes: una que penetra en el medio de cultivo y se extiende por su superficie ( micelio vegetativo), y otra que se proyecta y contiene las esporas (micelio reproductor o areo). Los hongos crecen por el extremo de las hifas (crecimiento apical). Una pequea cantidad de micelio es suficiente para la formacin de un nuevo talo.

Absorcin de nutrientes: Debido a que su pared celular es rgida no pueden englobar los alimentos (pinocitosis, fagocitosis). Los extremos en crecimiento de las hifas expulsan enzimas sobre la materia orgnica en que crecen. Las cadenas de carbohidratos se rompen en compuestos ms sencillos como glucosa o aminocidos, lo suficientemente pequeos como para absorberlos por las paredes de las hifas, hasta el citoplasma del hongo.

Segn el tipo de sustrato nutritivo que empleen se clasifican en:

1. Hongos saprfitos (utilizan materia orgnica muerta) 2. Hongos parsitos (organismos vivos, plantas o animales)

TIPOS DE REPRODUCCIN.

Las formas y mecanismos de reproduccin sexual y asexual son muy variados y constituyen la base de la clasificacin de los hongos.

1. Reproduccin sexual: (Hongos perfectos) Por unin de gametos estado teleomorfo. Zigsporas, Ascsporas, Basidisporas.

Zigomicetos.

Hongos

que

se

reproducen

sexualmente

por

zigosporas.

Constituyen el grupo de Ficomicetos ms evolucionado y mejor adaptado a la vida terrestre.

Eumicetos

(hongos

superiores)

abarcan

los

ascomicetos

los

basidiomicetos. Es caracterstico de los mismos la posesin de un micelio septado y la formacin de conidiosporas. No presentan clulas flageladas.

Setas (hongos erectos): En el momento propicio, y en lugares cercanos a la superficie, las hifas del micelio vegetativo de un hongo basidiomiceto, forman una masa de crecimiento (cuerpo fructifero) de aspecto tisular denominado plectnquimas (setas). Es la parte reproductiva de un conjunto ms amplio. Una vez desarrollado emite esporas de forma variable segn las especies (p.ej. 100.000 esporas/h durante 4-5 das).

2. Reproduccin asexual (hongos imperfectos) Los hongos que tienen reproduccin asexual o desconocida (estado anamorfo) se denominan

Deuteromycetos.

a. Gemacin en levaduras (unicelulares). b. Fragmentacin de las hifas (utilizado para resiembras en laboratorio). c. Esporulacin por germinacin de esporas.

UNIDAD V 5.1 VIROLOGA Estn entre los organismos replicativos ms pequeos. Son agentes filtrables: atraviesan filtros. No se ven a microscopa ptica. Tamao: 20 a 300 nm de dimetro (tienden a la forma esfrica): < 25 nm (S), 180-200 nm (M), > 250 nm (L). Su genoma est constituido por un solo tipo de cido nucleico (independiente de que puedan sintetizar ARN o ADN). Tiene un obligado requerimiento de crecimiento intracelular y dependencia estructural de la clula hospedadora. Son parsitos estrictos (no se replican si no es en la clula hospedadora). En su estructura encontramos de adentro afuera: Ncleo de ARN o ADN. En algunos casos este material gentico est asociado a protenas, como en los retrovirus (transcriptasa reversa). Cpside: rodeando al ncleo, estructura generalmente proteica. Son unidades repetitivas de protenas llamadas capsmeros. Cada capsmero es igual a otro. Esta es la estructura bsica. En algunos casos hay una envoltura lipdica o de hidratos de carbono que rodea a la cpside. La zona entre la cpside y la envoltura lipdica se denomina tegumento y normalmente est ocupada por hidratos de carbono. En algunos virus se proyectan al exterior unas estructuras llamadas espculas, importantes en la replicacin. Tambin se les denomina peplmeros.

Clasificacin de los virus Lugar donde producen la enfermedad: Neurotrpicos: se multiplican en el sistema nervioso. Enterotrpicos: se multiplican en el sistema digestivo. Tipo de hospedador: animales, vegetales, humanos, bacterifagos. Caractersticas estructurales o de replicacin: tamao, forma, con o sin envoltura y peplmeros, sitio de replicacin (citoplasma o ncleo), tipo de cido nucleico, efecto citoptico que produce. Clasificacin taxonmica: Familia sufijo viridae Ej: herpes viridae. Subfamilia virinae Gnero virus Ej: simplex virus. Subgnero algunas familias Especie no formalmente definidas Ej: virus herpes simple tipo 2. Hoy en da se clasifican de acuerdo a la secuencia de su material gentico.

Criterios epidemiolgicos Entricos: se replican en tracto intestinal (transmisin fecal oral). Como el de la polio, que adems, despus pasa a la sangre. Respiratorios: se adquieren por inhalacin. Se replican en el tracto respiratorio. Algunos pasan a la sangre, como el sarampin, tambin se transmiten por mano, nariz, boca y ojos. Arbovirus: transportados por artrpodos; se replican en los artrpodos hematfagos y son transmitidos por mordeduras a los hospedadores vertebrados. Producen viremia. Oncognicos: gatillan la transformacin celular, pudiendo producir cncer. Adquiridos por contacto directo (incluye contacto sexual). Usualmente infectan tejidos blancos especficos. Ej: papiloma.

Efectos citopticos Alteracin o dao que produce el virus en la clula hospedadora (blanco), el dao depende del tipo de virus, lugar de multiplicacin, carga infectante (nmero de virus que infectan una clula), N de clulas infectadas. Ej: Virus polio intestino diarrea o fiebre sistema nervioso central dao neuronal parlisis Efectos: Ltico: el virus rompe la clula por la gran masa de virus que se produce. Ejemplo: polio, herpes. Hiperplasia: la clula se transforma y multiplica aceleradamente. Ej: verruga. Mixto (ltico e hiperplasia): Ej: viruela. Induce una transformacin y luego se rompe. Formacin de sincicios (herpes): son clulas multinucleadas porque las membranas celulares se funden. Oncognicos: transformacin en clulas malignas. Formacin de cuerpos de inclusin: acumulacin de restos de material sobrante, es intranuclear o intracitoplasmtico (dependiendo de donde se multiplique).

Infeccin y replicacin

Adherencia del virus: los virus reconocen receptores celulares, lo que no significa que las clulas tengan receptores para virus. Esta etapa es reversible. Ej: rabia: acetilcolina; Epstein Barr virus: receptor C3D en celulas B; VIH: molcula CD4 en clulas T. Ingreso a la clula: comienza una etapa irreversible con algunos medicamentos. Existen diferentes formas de entrar a la clula: Translocacin directa a travs de la membrana celular; pasan virus que no tiene envoltura. Los con envoltura lipdica se fusionan con los lpidos de la membrana celular, liberndose la partcula viral al citoplasma. Esto se conoce como viropexia. Captacin de fagosomas: como el virus tiene envoltura, esta se fusiona con la membrana del fagosoma y se libera el virus. Prdida de la cubierta o denudacin o decapsidacin: se libera el cido nucleico. Dependiendo del tipo de cido nucleico hay distintas etapas: ADN: se transcribe a ARN mensajero y se produce sntesis proteica, o puede quedar en el ncleo en estado latente. ARN: depende si es de 1 o 2 hebras y si es de sentido positivo o negativo. Si es de sentido positivo, pasa directamente a ribosomas. Los retroviros en el citoplasma se transforman en ADN, el que va al ncleo. Replicacin: sntesis de ARN mensajero viral, sntesis de protenas, cpsides, cidos nucleico viral. Ensamblaje: las cpsides se forman alrededor del cido nucleico. Liberacin: por yemacin en los virus con envoltura lipdica. Esto hace que el efecto citoptico sea ms leve, aunque la clula finalmente muere.

Cuando ingresa ADN de virus bacterifago tiene 2 vas Va ltica: el ADN ingresa, se apodera de la maquinaria enzimtica, luego viene el ensamblaje, empaquetamiento y lisis. Va latente: el virus queda a estado de profago; la bacteria reconoce el ADN viral como propio. Tambin se conoce como fase lisognica. Hay varias patologas que se dan solo en el estado lisognico.

Patognesis viral Infeccin aguda: en el inicio aparecen los sintomas, los que luego desaparecen junto con los virus. Si hay inmunidad permanente, no habr nueva infeccin, si no deja inmunidad, puede haber reinfeccin con virus exgeno. No quedan individuos portadores ej. V.polio V. Influenza V. Rinovirus. Infeccin persistente: en el inicio aparecen los sntomas los que decaen, y pueden haber reaparicines peridicas. El virus queda en estado de latencia y puede sufrir reactivacines, una o varias ej. V. Herpes. Infeccin persistente crnica o latente: Parecida a la anterior, pero el dao final que se produce, aunque sea lento, ser la muerte. No hay sintomatologas por largo tiempo ej. V. Sida, otros virus presentan sintomatologa, la que disminuye pero se mantiene, hasta causar la muerte, ej. V.hepatitis B, donde los hapatocitos siempre se estn multiplicando y ,por tanto, hay muerte celular. En otros casos de IPC hay aparicin y desaparicin de sintomatologa (repetidas veces) hasta que reaparecen y causan la muerte.

El desarrollo o no de inmunidad depende (siempre hay respuesta inmune) que haya un serotipo; que el virus tenga mutabilidad, de esto depende que hayan o no vacunas. Formas de diseminacin Local: ocurre cuando el virus ingresa y se multiplican solo en el sitio donde ingres. Ej: infecciones respiratorias, infecciones digestivas (rotavirus). No se diseminan a todo el organismo. Sistmico: virus ingresan, se multiplican en ese sitio y hacen viremia, distribuyndose a todo el organismo. Ej. paperas. Nueral: tiene parte de sistmica, ingresa, hace fase virmica, pero su tropismo lo lleva al cerebro. Ej. polio: se multiplica en el sistema digestivo y viaja al sistema nervioso central. Vertical: infeccin de madre a hijo por la placenta en el embarazo.