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UNIDAD V.

- MTODOS DE ESTERILIZACIN Y DESINFECCIN

1. INTRODUCCIN Comprende todos los procedimientos fsicos, mecnicos y preferentemente qumicos, que se emplean para destruir grmenes patgenos. A travs de esta, los materiales quirrgicos y la piel del enfermo alcanzan un estado de desinfeccin que evita la contaminacin operatoria.

AGENTES ESTERILIZANTES FISICOS

1.- Altas Temperaturas A.- Esterilizacin por calor hmedo Autoclave Tindalizacin Pasteurizacin B.- Esterilizacin por calor seco Horno Pasteur Incineracin 2.- Bajas Temperaturas

3.- Radiaciones A.- Radiaciones ionizantes B.- Radiaciones no ionizantes 4.- Filtracin A.- Filtros de membrana

B.- Filtros HEPA 5.- Desecacin

AGENTES ESTERILIZANTES QUIMICOS

1.- Oxido de etileno 2.- Glutaraldehido 3.-Gas-plasma de Peroxido de Hidrgeno

DESINFECTANTES Y ANTISEPTICOS

A.- Inorgnicos 1.- Metales 2.- Acidos y lcalis 3.- Compuestos inorgnicos oxidantes 4.- Halgenos

B.- Orgnicos

1.- Alcoholes 2.- Fenol y compuestos fenlicos

EVALUACION DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE LOS DESINFECTANTES Y ANTISEPTICOS

1.- Tcnica de dilucin en tubo 2.- Tcnica de la placa de agar

3.- Tcnica del coeficiente fenlico

2. DEFINICIONES Y CONCEPTOS.

Agentes quimioteraputicos: Sustancias qumicas empleadas en el tratamiento de enfermedades infecciosas o enfermedades causadas por la proliferacin de clulas malignas.

Agentes teraputicos: Antimicrobianos empleados en el tratamiento de infecciones.

Antibiosis: Fenmeno biolgico en el que existe una detencin o destruccin del crecimiento microbiano debido a sustancias producidas por otro ser vivo.

Antibiticos: Sustancias producidas por un ser vivo que se oponen a la vida de otro ser vivo.

Antimicrobianos: Sustancias que matan o inhiben el crecimiento de los microorganismos (antibacterianos, antifngicos, etc.).

Antisepsia: Operaciones o tcnicas encaminadas a crear un ambiente que impida el desarrollo de los microorganismos e incluso pueda matarlos.

Antispticos: son aquellas sustancias qumicas que previenen el crecimiento o accin de los microorganismos ya sea destruyndolos o inhibiendo su crecimiento y actividad. Se refiere a sustancias que se aplican sobre el cuerpo.

Asepsia: Tcnicas empleadas para impedir el acceso de microorganismos al campo de trabajo.

Desinfeccin: Proceso de destruir los agentes infecciosos.

Desinfectantes: Son aquellas sustancias qumicas que matan las formas vegetativas y no necesariamente las formas de resistencia de los microorganismos patgenos.

Esterilizacin: Es el proceso de destruccin de todas las formas de vida microbiana, includas las esporas.

GERMICIDA: son substancias letales para los grmenes, se clasifican segn su actuacin : Bactericida : eliminan bacterias Bacteriosttico : inhiben el crecimiento de las bacterias Fungicida : Acta sobre los hongos Virucida : Acta sobre los virus Amebicida : Acta sobre las amebas y los protozoos

Microbicidas: Sustancias que matan las formas vegetativas, pero no necesariamente las esporas de un microorganismo (bactericida, fungicida, etc.).

Microbiostticos: Sustancias que inhiben el crecimiento de microorganismos (bacteriostticos, fungistticos, etc.).

3.- MUERTE DE LAS POBLACIONES MICROBIANAS.

Criterio de muerte de un microorganismo: Prdida irreversible de la capacidad de reproduccin en un medio adecuado.

Determinacin de la eficacia antimicrobiana (la muerte de los microorganismos) se utilizan tcnicas que descubran a los sobrevivientes es decir, a los capaces de reproducirse; ya que los incapaces de reproducirse estn muertos. Mediante mtodos cuantitativos de siembra en placa en los que los supervivientes se detectan porque forman colonias.

En la prctica de la esterilizacin: La poblacin microbiana que ha de ser destruida es mixta Los microorganismos difieren en su resistencia a los agentes letales Los factores que se hacen significativos son: o El tamao de la poblacin inicial o La tasa de mortalidad de los miembros ms resistentes de la poblacin

Para asegurar la fiabilidad de los mtodos de esterilizacin se utilizan suspensiones de esporas de resistencia conocida, de forma que proporcionen un amplio margen de seguridad.

4.- CONDICIONES QUE INFLUYEN EN LA ACCION ANTIMICROBIANA

a).-Temperatura: a mayor temperatura mayor accin.

b).-Tipo de microorganismo: las clulas vegetativas en desarrollo son mucho ms susceptibles que las esporas.

c).-Estado fisiolgico de las clulas: las clulas jvenes son ms vulnerables que las viejas.

d).-Ambiente: El calor es ms eficaz en un medio cido que en uno alcalino. La consistencia del material, acuoso o viscoso, influye marcadamente en la penetracin del agente. Las concentraciones altas de carbohidratos aumentan, por lo general, la resistencia trmica de los organismos. La presencia de materia orgnica extraa reduce notablemente la eficacia de los agentes qumicos por inactivar stos o proteger al microorganismo.

5.- AGENTES ESTERILIZANTES FISICOS

1.- Altas Temperaturas.

o Calor: la utilizacin de este mtodo y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de exposicin y la temperatura. o El calor provoca desnaturalizacin de protenas, fusin y desorganizacin de las membranas y/ o procesos oxidantes irreversibles en los microorganismos. o La alta temperatura combinada con un alto grado de humedad es uno de los mtodos ms efectivos para destruir microorganismos.

Hay que distinguir entre: a).- Calor hmedo: mata los microorganismos porque coagula sus protenas siendo ms rpido y efectivo. b).- Calor seco: destruye a los microorganismos al oxidar sus constituyentes qumicos.

Por ejemplo, las esporas de Clostridium botulinum son destruidas:

a).- En calor hmedo: de 4 a 20 minutos a 120 C b).- En calor seco: necesitan alrededor de 2 horas de exposicin al para obtener los mismos resultados.

A.- ESTERILIZACIN POR CALOR HMEDO: produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas.

o Estos efectos se debe principalmente a dos razones: o *El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas son producidas por reacciones que eliminan agua. o El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms elevado que el aire.

1.- Autoclave: Aparato semejante una olla que regula la presin interna y el tiempo. Consta de una caldera de cobre, sostenida por una camisa externa metlica, que en la parte inferior recibe calor por combustin de gas o por una resistencia elctrica, esta se cierra en la parte superior por una tapa de bronce. Esta tapa posee tres orificios, uno para el manmetro, otro para el escape de vapor en forma de robinete y el tercero, para una vlvula de seguridad que funciona por contrapeso o a resorte.

El calor en la forma de vapor a saturacin y a presin es el agente ms prctico para esterilizar ya que proporciona temperaturas superiores a las que se obtienen por ebullicin. Esteriliza a 120 a una atmsfera de presin y se deja el material durante 20 a 30 minutos. El tiempo de exposicin depende del volumen del lquido, de tal manera que para: a).- Volmenes pequeos (hasta unos 3 litros), se utilizan 20 minutos a 120 C; b).- Volmenes mayores. debe alargarse el tiempo de tratamiento.

Funcionamiento:

Se coloca agua en la caldera, procurando que su nivel no alcance a los objetos que se disponen sobre una rejilla de metal. Se cierra asegurando la tapa, sin ajustar los bulones y se da calor,

dejando abierta la vlvula de escape hasta que todo el aire se desaloje y comience la salida de vapor en forma de chorro continuo y abundante.

2.-Tindalizacin: Esterilizacin por accin discontinua del vapor de agua .Se utiliza cuando las sustancias qumicas no pueden calentarse por encima de 100 C sin que resulten daadas. Consiste en el calentamiento del material de 80 a 100 C hasta 1 hora durante 3 das consecutivos. Las esporas resistentes germinarn durante los perodos de incubacin y en la siguiente exposicin al calor las clulas vegetativas son destruidas. Se efecta por medio del autoclave de Chamberland, dejando abierta la vlvula de escape, o sea funcionando a la presin normal. Puede tambin realizarse a temperaturas ms bajas, 56 u 80 para evitar la descomposicin de las sustancias a esterilizar, por las temperaturas elevadas.

3.- Pasteurizacin: La temperatura seleccionada es el tiempo ms corto necesario para matar una suspensin de bacterias a una temperatura determinada. La leche, nata y ciertas bebidas alcohlicas (cerveza y vino) se someten a tratamientos de calor controlado que slo matan a ciertos tipos de microorganismos. La leche pasteurizada no es estril. Mycobacterium tuberculosis es de los microorganismos patgenos ms resistentes al calor que puede transmitirse por la leche cruda y se destruye en 15 minutos a 60 C.

Ventajas del calor hmedo: Rpido calentamiento y penetracin Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo No deja residuos txicos Hay un bajo deterioro del material expuesto Econmico

Desventajas: No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos

Las condiciones a tener en cuenta son: TEMPERATURA Y TIEMPO |TEMPERATURA (C) |TIEMPO DE EXPOSICION | | |MINIMO (minutos) | |121 |20 | |126 |10 | |134 |7 |

Para el vapor de agua saturado, existe la siguiente equivalencia entre Temperatura y Presin: |PRESION* (Kg/ cm2) |TEMPERATURA (C) | |1,1 |121 | |1,5 |126 | |2,2 |134 |

Materiales que se pueden esterilizar con vapor: Material textil Material de vidrio Material de goma Instrumental Quirrgico de acero inoxidable Soluciones acuosas Todo aquel material cuyo fabricante certifique pueda ser esterilizado por vapor Materiales que no se pueden esterilizar con vapor: Sustancias oleosas

Sustancias grasas Polvos Instrumental Quirrgico cromado o niquelado Artculos elctricos sin cobertura espec

Todo material que no tolera la exposicin al calor y a la humedad

B.- ESTERILIZACIN POR CALOR SECO: El calor seco produce desecacin de la clula, es esto txicos por niveles elevados de electrolitos, fusin de membranas. (se utiliza para materiales slidos estables al calor).

La muerte microbiana se produce como consecuencia de mecanismos de transferencia de energa, adems de la oxidacin.

1.- Horno Pasteur: Se utiliza principalmente para esterilizar material de vidrio y otros materiales slidos estables al calor. Para el material de vidrio de laboratorio se consideran suficientes dos horas de exposicin a 160 C. 2.- Incineracin: La destruccin de los microorganismos por incineracin es una prctica rutinaria en los laboratorios. Las asas de siembra se calientan a la llama de mecheros Bunsen. La incineracin tambin se utiliza en la eliminacin de residuos hospitalarios.

3.- Estufas: Doble cmara, el aire caliente generado por una resistencia, circula por la cavidad principal y por el espacio entre ambas cmaras, a temperatura de 170 C para el instrumental metlico y a 140 C para el contenido de los tambores.

Se mantiene una temperatura estable mediante termostatos de metal, que al dilatarse por el calor, cortan el circuito elctrico.

Ventajas del calor seco: No es corrosivo para metales e instrumentos. Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no voltiles. Desventajas:

Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la baja penetracin del calor.

MATERIALES QUE PUEDEN ESTERILIZARSE POR CALOR SECO:

Instrumental Quirrgico cromado Materiales de vidrio, aluminio o porcelana Aceites, parafina, sustancias grasas, vaselina Polvos (talco)

MATERIALES QUE NO SE PUEDEN ESTERILIZAR POR CALOR SECO:

Material textil (algodn, sedas, lino, etc.) Gomas Materiales sintticos Todo material que se altere a la temperatura de trabajo

2.- Bajas Temperaturas. En general, el metabolismo de las bacterias est inhibido a temperaturas por debajo de 0 C.

Sin embargo estas temperaturas no matan a los microorganismos sino que pueden conservarlos durante largos perodos de tiempo. Esta circunstancia es aprovechada por los microbilogos para conservar los microorganismos indefinidamente. Los cultivos de microorganismos se conservan congelados a -70 C o incluso mejor en tanques de nitrgeno lquido a 196 C.

3.- Radiaciones: Su accin depende de: El tipo de radiacin El tiempo de exposicin La dosis

A.- Radiaciones ionizantes: Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos nucleicos, estructuras proteicas, lipdicas y componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos.

Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolbiles (termosensibles) como jeringas descartables, sondas, etc.

Se utilizan a escala industrial por sus costos.

Rayos gamma: Las radiaciones gamma tienen mucha energa y son emitidas por ciertos istopos radiactivos como es el Co60 pero son difciles de controlar ya que este istopo emite constantemente los rayos gamma en todas direcciones.

Estos rayos pueden penetrar los materiales por lo que un producto se puede empaquetar primero y despus esterilizar. Se aplica a productos o materiales termolbiles y de gran importancia en el campo industrial, como antibiticos, vacunas, alimentos, etc.

Rayos catdicos (Radiacin con haz de electrones): Se usan para esterilizar material quirrgico, Medicamentos y otros materiales.

Una ventaja es que el material se puede esterilizar despus de empacado (ya que stas radiaciones penetran las envolturas) y a la temperatura ambiente.

B.- Radiaciones no ionizantes

Luz ultravioleta: La porcin ultravioleta del espectro incluye todas las radiaciones desde 15 a 390 nm. Las longitudes de onda alrededor de 265 nm son las que tienen mayor eficacia como bactericidas (200 - 295 nm). Se usan para reducir la poblacin microbiana en quirfanos, cuartos de llenado aspticos en la industria farmacutica y la superficie de los objetos contaminadas, en la industria de alimentos y leche. Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos.

4.- Filtracin. Retencin de microorganismos a travs de membranas filtrantes con poros de un tamao determinado.

Los microorganismos quedan retenidos en parte por el pequeo tamao de los poros del filtro y en parte por adsorcin a las paredes del poro durante su paso a travs del filtro debido a la carga elctrica del filtro y de los microorganismos til para materiales como los lquidos biolgicos (suero de animales, soluciones de enzimas, algunas vitaminas y antibiticos) que son termolbiles.

La filtracin se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolbiles; aceites, algunos tipos de pomadas, soluciones oftlmicas, soluciones intravenosas, drogas diagnsticas, radiofrmacos, medios para cultivos celulares y soluciones de antibiticos y vitaminas. No retienen virus ni micoplasmas

A.- Filtros de membrana: son discos de steres de celulosa con poros tan pequeos que previenen el paso de los microorganismos. Existen distintos tipos de filtro dependiendo del tamao de poro. Estos filtros son desechables. Adems de utilizarse en la esterilizacin de lquidos se usan en el anlisis microbiolgico de aguas ya que concentran los microorganismos existentes en grandes volmenes de agua.

B.- Filtros HEPA: Un filtro HEPA (High Efficiency Particulate Air) est compuesto por pliegues de acetato de celulosa que retienen las partculas (incluidos los microorganismos) del aire que sale de una campana de flujo laminar.

5.- Desecacin: Este proceso fsico se utilizaba ampliamente antes del desarrollo de la refrigeracin. La desecacin de las clulas vegetativas microbianas paraliza su actividad metablica. El tiempo de supervivencia de los microorganismos despus de desecados depende de muchos factores, entre ellos la especie microbiana. En general, los cocos Gram (-) son ms susceptibles a la desecacin que los cocos Gram (+). Las endoesporas bacterianas son muy resistentes a la desecacin pudiendo permanecer viables indefinidamente.

6.- AGENTES ESTERILIZANTES QUMICOS. El requerimiento esencial para un agente qumico esterilizante es:

Que sea voltil Txico para los microorganismos, Que pueda ser fcilmente eliminado del objeto esterilizado despus del tratamiento. Estos mtodos provocan la perdida de viabilidad de los microorganismos.

1.- Oxido de etileno: Es un agente alquilante, lquido que hierve a 10,7 C, que se une a compuestos con hidrgenos lbiles como los que tienen grupos carboxilos, amino, sulfihidrilos, hidroxilos, etc. o Es muy peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, y adems cancerigeno. Se usa en la industria para la esterilizacin de placas Petri, jeringas y otros objetos de plstico que se funden a temperaturas superiores a los 100 C. Sirve para esterilizar material termosensibles como el descartable (goma, plstico, papel, etc.), equipos electrnicos, bombas cardiorrespiratorias, metal, etc. Debido a su alto poder de penetracin estos objetos se empaquetan primero y despus se esterilizan. El xido de etileno acta inactivando enzimas y otras protenas que contienen grupos sulfhdricos (R-SH) mediante una reaccin llamada alquilacin (R-S-CH2CH2O-H). Destruye todos los microorganismos incluso virus. Es utilizado en la esterilizacin gaseosa, generalmente en la industria farmacutica.

2.-