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TECNICAS DE OBSERVACION EN MEDIOS LIQUIDOS I.

INTRODUCCION: Se puede obtener informacin rpida a travs de la observacin microscpica de la muestra sin teir, para la bsqueda de hongos, bacterias y parsitos. La muestra se suspende en suero fisiolgico, en solucin de KOH, o bien en tinta china. La suspensin en suero fisiolgico permite demostrar la presencia de Tricomonas Treponemas. Para estos ltimos, adems, se recomienda la observacin en campo oscuro. Los medios lquidos favorecen el crecimiento de microorganismos pero no pueden utilizarse para el aislamiento de grmenes y la obtencin de colonias, sino para observar el tipo de respiracin; aerobios estrictos, anaerobios estrictos, mircoaerofilos y anaerobios facultativos. II. OBJETIVOS: Preparar un montaje hmedo y gota pendiente de una muestra microbiana. Ejecutar adecuadamente la tcnica asptica en una preparacin microscpica de una muestra microbiana. Obtener destrezas en la observacin de montaje hmedo gota pendiente de una muestra microbiana. III. MATERIALES: Muestras Biolgicas: Suspensin de Bacillus subtilis (bacterias). Suspensin de Saccharomyses cerevisiae (levaduras). Cultivo fngico (moho). Agua estancada (algas y protozoarios). De vidrio, equipo y otros: Lminas portaobjetos. Lminas con depresin. Pipetas Pasteur. Microscopios compuestos. Mecheros. Azas bacteriolgicas. IV. PROCEDIMIENTO: MONTAJE HUMEDO Flamea una aza bacteriolgica hasta el rojo vivo, frente a un mechero de Bunsen. Espera que se enfri. Con la misma mano, teniendo el aza estril, sin que esta choque con algn objeto, extrae el algodn o

el tapn de un tubo que contiene la suspensin microbiana de Bacillus Subtilis, mientras que la otra mano sostiene el tubo. Luego siempre frente al mechero, extrae una azada de la suspensin y vuelve a flamear el aza y depositarlo en el lugar correspondiente. Coloca la laminilla cubreobjetos encima de la muestra y observa con el objetivo de 10X, luego de 40X, ajustando la intensidad de luz. Esquematiza tus resultados anotando sus formas, tamaos y movimientos. Proceda en forma similar con la suspensin de Saccharomyses cerevisiae. Al concluir la experiencia prctica, quitar la grasa con xilol de las lminas portaobjetos y laminillas. GOTA PENDIENTE Obtener una lamina portaobjeto con una depresin en el centro. Coger una pequea cantidad de grasa de petrleo (o vaselina) con un mondadientes y embalumarlo en los contornos de una laminilla. Colocar la laminilla sobre una toalla de papel, son la grasa hacia arriba. Aspticamente, transferir varias azadas de la suspensin de Saccharomyses cerevisiae, en el centro de la laminilla anterior. Anotar una ligera marca en los bordes de la gota con un lpiz de cera. Colocar la lamina con depresin encima de la laminilla y suavemente verterlo en sentido opuesto; de tal modo que la gota quede suspendida hacia abajo. Examinar con el objetivo de 10X, localizando la marca hecha con el lpiz de cera en la gota. Mover hacia el centro. Reducir la entrada de luz con el iris del diafragma. Observar y anotar, el tamao forma y gemacin de los microbios. Cambia al objetivo de 40X y observar nuevamente anotando el tamao, forma y gemacin de los microbios. Repite el procedimiento con la suspensin de Bacillus Subtilis e infusin de heno observando el tamao, forma y movimiento. V. RESULTADOS: OBSERVACION DE PLACAS EN MONTAJE HUMEDO: OBSERVACION DE PLACAS EN GOTA PENDIENTE: VI. DISCUSION: La observacin microscpica constituye la primera etapa del estudio de los microorganismos y tambin del diagnostico microbiolgico ya que permite conocer algunas caractersticas de los microorganismos, como: forma, disposicin o agrupacin, presencia o ausencia de estructuras (capsulas, esporas, flagelos), movilidad, etc. Segn Michel Pelezar, se usan las tcnicas de montaje hmedo y de gota pendiente porque cuando se observan bacterias; para determinar si son o no mviles es obvio que deben estar suspendidas en un

medio liquido en donde pueden moverse libremente en el caso de ser mviles adems los cambios citolgicos que ocurren durante la divisin celular y la velocidad en que ocurren las divisiones se observan mejor, ya que los organismos deben estar vivos. Por ello en laboratorio este mtodo de examen nos ha permitido observar el microorganismo al estado vivo y evitar las deformaciones artificiales de su morfologa que producen las tcnicas de coloracin. Su aplicacin ms importante se refiere al estudio de la movilidad de los microorganismos. Segn pudimos observar que las clulas de las levaduras son mas grandes que la mayor parte de las bacterias. Las levaduras varan considerablemente de tamao, pudiendo tener entre 1 5 micrmetros de ancho por 5 a 30 micrmetros o mas. Generalmente son ovoides si bien otras son esfricas y otras alargadas. El tamao de las bacterias varia dependiendo de las especies entre menos de 1 um y 250 um; siendo lo mas habitual entre 1 y 10 um. Las bacterias poseen una de las tres formas fundamentales: esfrica, cilndrica o espiral. Las clulas esfricas se denominan cocos y suelen ser redondeadas aunque pueden ser ovoides o elpticas. A las de forma cilndrica se denomina bacilos. Los extremos de estas clulas suelen ser redondeados, rectos, en forma de huso o cuerno. A las de forma espiral o helicoidal se las denominan espirilos y se caracterizan por su forma de sacacorchos. VII. CONCLUSIONES: Se preparo un montaje hmedo y gota pendiente de una muestra microbiana y se observo mayor movimiento de las bacterias en 1 mtodo de la gota pendiente. Se pudo ejecutar adecuadamente la tcnica asptica en una preparacin microscpica de una muestra microbiana. Se pudo observar los microorganismos en su forma natural, como: forma y movimiento. VIII. REFERENCIAS Y BIBLIOGRAFIA: Balbas P. y Bolivar F. 1989. Ingenieria Genetica y Biotecnologa Monografa N 34 de la OEA. Washigton D.C USA. Brock T. 198. Biologa de los microorganimos. Edic. Omega. Barcelona. Espaa. http://www.universia.edu.pe/dev/packdocente/public ----------------------[pic] Genero: Bacillus sp Aumento: 400 Genero: Saccharomyces cerevisiae Aumento: 400 Genero: Bacillus sp Aumento: 400 Descripcin: Las bacterias estn en movimiento.

Genero: Saccharomyces cerevisiae Aumento: 400 Muestra: Cultivo fngico (moho) Aumento: 400 Muestra: Agua estancada Aumento: 400