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Gua del Laboratorio de Biologa General

Prctica N 4. Fermentaciones Alcohlicas

I. Objetivo Reconocer el comportamiento de la levadura Saccharomyces sp. frente a diferentes tipos de azcares. II. Fundamentos tericos Las levaduras son hongos unicelulares que pueden crecer en presencia o ausencia de oxgeno. Las levaduras son capaces de degradar monosacridos (azcares simples) y oligosacridos (no ms de 12 azcares simples) bajo condiciones anaerbicas (sin oxgeno), usando la va fermentativa. Los polisacridos (con ms de doce unidades de azcares simples) no pueden ser degradados por los hongos. Las levaduras llevan a cabo fermentaciones alcohlicas, es decir el producto final de la degradacin es etanol y el gas dixido de carbono (CO2). Es posible determinar la fermentacin de un azcar de manera cuantitativa midiendo la emisin de dixido de carbono. Existen mutantes de levadura que tienen espectros de fermentacin muy definidos, es decir que slo pueden fermentar ciertos azcares. Con la ayuda de cepas definidas de levaduras, se puede determinar la fermentacin de diversos tipos de carbohidratos. La incapacidad de una levadura de fermentar una muestra de carbohidratos puede deberse a la: - Falta de una enzima que pueda hidrolizar el oligosacrido correspondiente. - Falta de enzimas que puedan fosforilar los monosacridos para hacerlos entrar en la va fermentativa. - Falta de enzimas que puedan isomerizar los azcares fosfatados para lograr que continen por la va fermentativa. III. Material a) Material Biolgico: - Saccharomyces sp (levadura deshidratada para panificacin) b) Material de Laboratorio: - Tubo de fermentacin - Vaso de precipitados de 20 mL - Probeta de 50 mL y 100 mL - Esptulas de metal - Baguetas - Fiolas de 50 mL y 100 mL - Micropipeta - Matraz Erlenmeyer de 20 mL - Jeringa descartable de 50 mL - Manguerita

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c) Reactivos: - Fructosa - Glucosa - Galactosa - Lactosa - Maltosa - Sacarosa - Almidn IV. Procedimiento: 1) Preparacin del extracto de levadura a) Coloque 2 g de levadura deshidratada en 20 mL de agua destilada. b) Agite vigorosamente esta mezcla hasta disolver toda la levadura deshidratada y obtener una mezcla homognea. Esta ser la suspensin base que se utilizar para la fermentacin de los diferentes azcares. c) Anote el color y olor de la suspensin base de levadura. 2) Preparacin de las soluciones de azcares a) Prepare soluciones de los diferentes azcares con las siguientes concentraciones: fructosa, glucosa y sacarosa: 1 M; galactosa, lactosa y maltosa: 0,5 M y almidn al 1 %. b) Indique cules de estos azcares son monosacridos, disacridos y polisacridos. En el caso de los di- y polisacridos, indique cul es su composicin de monosacridos. Indique tambin el color y aspecto fsico de cada azcar. 3) Fermentacin de los azcares a) Mezcle volmenes iguales de solucin de azcar y de suspensin base de levadura. Esta mezcla final debe quedar homognea. b) Con ayuda de la jeringa y una manguerita, llene sin burbujas el tubo de fermentacin con la mezcla final y ponga el tubo a incubar a 35C. Anote el tiempo inicial de incubacin. c) Mida la formacin de gas (CO2) en el extremo superior del tubo de fermentacin cada 5 minutos. d) Presente sus resultados en una tabla junto con una explicacin de sus observaciones. e) Prepare un grfico de tiempo (minutos) vs. volumen (mL) de CO2 producido. Compare los azcares segn su comportamiento fermentativo