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Crecimiento microbiano y su control

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1. FISIOLOGIA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO El crecimiento microbiano se refiere al crecimiento poblacional, no al aumento del tamao de los microorganismos. Para cuantificar el crecimiento, se necesita saber la velocidad de crecimiento tomando en consideracin el cambio en el nmero de clulas por unidad de tiempo. * A travs de la velocidad de crecimiento de un cultivo, se conoce cuantas generaciones van. * Al tiempo necesario que le toma a un microorganismo duplicar su poblacin se le conoce como: tiempo de generacin. Crecimiento La divisin de Fisin Binaria, Generacin. El como se ve en

la clula bacteriana se produce por un proceso asexual llamado y el tiempo que tarda en dividirse (duplicar) se llama tiempo de crecimiento de un cultivo se produce en 4 fases en el tiempo, tal y el grfico siguiente.

a. Fase de Latencia Los organismos estn adaptndose al ambiente (poca o ninguna divisin). Estn sintetizando ADN, ribosomas y enzimas por descomposicin de nutrientes, para ser usados posteriormente para el crecimiento. b. Fase de crecimiento exponencial (Logartmica) La divisin se produce en una proporcin constante (tiempo de Generacin) pero vara con las distintas especies, con la temperatura y los medios. En este momento las clulas son muy susceptibles a los inhibidores. c. Fase Estacionaria La muerte y la divisin de los organismos estn en equilibrio. La muerte es debida a la reduccin de nutrientes, cambios de pH, desechos txicos y reduccin de oxgeno. Las clulas son ms pequeas y tienen menos ribosomas. En algunos casos las clulas no muere pero no estn multiplicndose. d. Fase de Muerte o Declinacin La poblacin est muriendo en forma geomtrica as hay ms muertes que aparicin de nuevas clulas. Las muertes son debidas a los factores de la fase estacionaria adems de las enzimas lticas que se liberan cuando se lisan las bacterias.

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Temperatura Los Microorganismos tienen una temperatura ptima para crecer y en ella su tiempo de generacin es el ms breve posible. En funcin de esos requerimientos de temperatura pueden clasificarse como: Psicrfilos (0-20C) Mesfilos (20-40C) Termfilos (40-90C) La mayora de las bacterias son mesfila, especialmente las patgenas humanas que requieren 37C PH La regulacin del pH interno de los microorganismos se realiza mediante un sistema de transporte de protones localizado en la membrana citoplsmica y que, bsicamente, es una bomba de protones ATP-dependiente. El rango de pH ptimo para el desarrollo de los microorganismo est entre 5 y 8, pero los hay que pueden vivir en condiciones extremas acidfilos (pH 1-5) neutrfilos (pH 5-9) alcalfilos (pH 9-10) Algunos datos tiles * Regularmente las bacterias prefieren pH s de 6 a 8. * Las levaduras crecen bien a pHs de 4.5 a 6. * Los hongos filamentos soportan pHs ms cidos que las levaduras, pudiendo ms crecer en rangos que van desde los 3.5 hasta los 4. Elementos imprescindibles para la nutricin bacteriana Agua Se usa para disolver materiales que han de ser transportados a travs de la membrana citoplsmica. Carbono Requerido para la construccin de todas las molculas orgnicas. Los auttrofos usan carbono inorgnico (CO2) como fuente de carbono, mientras los hetertrofos usan carbono orgnico. Organismo Fuente Carbono Fuente Energa Quimioauttrofos CO2 Compuestos Inorgnicos Quimiohetetrofos Compuestos Orgnicos Compuestos Inorgnicos Fotoauttrofos CO2 Luz Fotohetertrofos Compuestos Orgnicos Luz Nitrgeno Obtenido de un fuente inorgnica, por ej. Nitrgeno gas (N2), Nitrato (NO3), Nitrito (NO2), Amonaco (NH3), o de fuente orgnica, por ej. Protenas, descomposicin de aminocidos. Muchos organismos usan gas nitrgeno por fijacin de nitrgeno para producir amonaco. Oxgeno

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Requerido para la respiracin aerobia y para la produccin de energa. Los Organismos pueden clasificarse de acuerdo a sus requerimientos respiratorios: Aerobios Obligados, Microaerfilos, Anaerobios Facultativos, Anaerobios Obligados y Anaerobios Aerotolerantes. 2. MEDICIN DEL CRECIMIENTO MICROBIANO Mtodos para el conteo de microorganismos viables Asa 1 Cuenta en calibrada placa Miles y Mirsa Filtracin

.Nmero ms probable (NMP) Mtodos para el conteo de microorganismos totales Recuento Cuenta de Breed microscpico Cmara de Neubauer Cmara de Prettof Hausser Turbidimetra Mtodos para el conteo de microorganismos viables Estos mtodos se basan en poner en evidencia la presencia de los microorganismos vivos. Requieren al menos 24 horas para el cultivo y la interpretacin de resultados. Se emplean medios de cultivo general, enriquecido selectivo y diferencial dependiendo de los microorganismos a cuantificar. ASA CALIBRADA La utilizacin de agujas o asas calibradas permite tomar volmenes pequeos, que son inoculados en la superficie del agar mediante la tcnica de siembra masiva. MILES Y MISRA Involucra la preparacin de diluciones seriadas de una suspensin bacteriana. Las placas son divididas en sectores separados. Se inocula cada sector una gota empleando una Pipeta Pasteur calibrada o bien micropipetas inoculando 0.02mL. Las placas se incuban de 18 a 24 horas a la temperatura adecuada (37C FILTRACIN La membrana de celulosa retiene a los microorganismos en su malla con poros de 0.25-0.45mm. Esta membrana se transfiere a un medio de cultivo para el desarrollo de colonias. NMERO MS PROBABLE (NMP) Tambin llamada tcnica de dilucin en tubo, proporciona una estimacin estadstica de la densidad microbiana presente con base a que la probabilidad de

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obtener tubos con crecimiento positivo disminuye conforme es menor el volumen de muestra inoculado. MTODOS PARA EL CONTEO DE MICROORGANISMOS TOTALEs Estos mtodos se basan en poner en evidencia la presencia de los microorganismos vivos y muertos los cuales no se pueden distinguir. CMARAS DE PETROFF-HAUSSER Y DE NEUBAUER Limitaciones: 1 Es muy tedioso, no es prctico para un gran nmero de muestras. 2 No es muy sensible, se necesitan al menos 106 bacterias/mL para que sean observadas al microscopio. 3 No distinguen clulas vivas de muertas. 4 CUENTA DE BREED 1 Muestra a evaluar (directa o diluida) 2 Microscopio 3 Objetivo micromtrico 4 Asa calibrada o micropipeta 5 Portaobjetos 6 Colorantes de Gram u otros colorantes. NEFELOMETRA (TURBIDIMETRA) La turbidez producida por el crecimiento microbiano de microorganismos unicelulares puede ser medida de acuerdo a la capacidad de absorber la luzLongitud de onda (l) 1 Bacterias 540nm 2 Protozoarios 580nm 3 Levaduras 600nm 3. DETERMINACIN DE LA MASA CELULAR A veces es ms importante estimar la masa celular que el numero, como son proporcionales se determina un parmetro para estimar uno de otro. El crecimiento de una poblacin o cultivo bacterianos se puede expresar en funcin de: Aumento de masa del cultivo Aumento del nmero de clula

MEDIDA DE LA MASA La medida de la masa de los constituyentes de la clula bacteriana es utilizada frecuentemente como base para la medida de una actividad metablica, o de un constituyente metablico o qumico. MTODOS DIRECTOS En estos mtodos se requieren preparaciones limpias, sin partculas extraas. Determinacin del peso hmedo Se obtiene a partir de una muestra en suspensin que es pesada tras su separacin mediante filtro o centrifugacin,

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para ello, el tubo se tara antes y luego se elimina el sobrenadante y se pesa el sedimento. Determinacin del peso seco Se obtiene por el secado de un volumen de cultivo bacteriano en un horno a 105C toda la noche hasta obtener un peso constante. Determinacin del nitrgeno total: Es una tcnica que permite determinar indirectamente la masa de una poblacin bacteriana. Existen distintas tcnicas para determinar la cantidad de nitrgeno que contiene una muestra en relacin al compuesto que se quiera determinar Determinacin de un componente caracterstico Consiste en determinar la cantidad de peptidoglicano, ADN, ARN, protenas, , ATP,. el ms usado es el ATP, porque juega un papel crucial en el metabolismo y est presente en altas concentraciones , adems todos los seres vivos tiene ATP y no est presente en las clulas muertas, tambin se puede fcilmente extraer y medir de la clula. Se realiza en tres etapas: 1. Toma de muestras 2. Extraccin. 3. Anlisis. MTODOS INDIRECTOS Medida de consumo de nutrientes o de produccin de algn metablico por unidad de tiempo. Consumo de oxgeno, Consumo de dixido de carbono, Produccin de cidos y Liberacin del C14 a partir de procesos radiactivos. Mtodos turbidimtricos (pticos). Son muy usados en la prctica cotidiana del laboratorio. La base comn de estos mtodos consiste en la medicin de la cantidad de luz dispersada o transmitida a travs de un cultivo bacteriano. a) Espectrofotmetro: Este aparato es de uso habitual en cualquier laboratorio de Microbiologa o Bioqumica. Mide la densidad ptica (D.O.), es decir la absorbencia (una medida de la luz transmitida a travs de la suspensin). b) Nefelmetro: Es un aparato similar al anterior, pero el dispositivo sensor est situado en ngulo recto respecto de la direccin de la luz incidente, y lo que se mide es pues, la luz dispersada directamente por la preparacin. Posee mayor sensibilidad que el espectrofotmetro. 4. DETERMINACION DE NMERO DE CELULAS El clculo del nmero de clulas que existen en una suspensin se puede llevar a cabo mediante el recuento celular (microscopa, nmero de colonias), masa celular (peso seco, medida del nitrgeno celular, turbidimetra) o actividad celular (grado de actividad bioqumica con relacin al tamao de la poblacin).

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Mtodos directos: -Recuento del nmero de clulas en una cmara Thoma -Peso seco celular -Determinacin de nitrgeno o de protenas totales -Determinacin de DN Mtodos indirectos: Recuento de colonias en placa Recuento sobre filtro de membrana Consumo de oxgeno Liberacin de dixido de carbono Concentracin de un enzima constitutivo Decoloracin de un colorante Incorporacin de precursores radiactivos Medida de la turbidez

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PESO SECO CELULAR ABSORCIN

El peso seco (contenido de slidos) de las clulas bacterianas que se encuentran en una suspensin se obtiene por el secado de un volumen en un horno a 105C hasta peso constante. Cuando un haz de luz paralelo (colimado) golpea una partcula en suspensin, parte de la luz es reflejada, parte es diseminada, parte es absorbida y parte es transmitida. Turbidimetra. Concentracin celular bacteriana expresada en unidades de peso seco (g/ml-mg/ml).

PESO SECO PESO HMEDO

Se obtiene a partir de una muestra en suspensin que es pesada luego de la separacin de las clulas por filtracin o centrifugacin. Es una tcnica til para grandes volmenes de muestra. RECUENTO DIRECTO MEDIANTE CONTADORES ELECTRNICOS Esencialmente un contador electrnico consta de dos cmaras que estn separadas por un material que no conduce la corriente, en este material no conductor hay un orificio de un tamao similar al de las clulas a ser contadas. Las limitaciones de este mtodo son las siguientes: Se cuentan clulas vivas y muertas. Las suspensiones deben estar libres de partculas diferentes a los microorganismos que estamos contando por que el aparato no puede distinguir entre una u otra.

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RECUENTO DIRECTO AL MICROSCOPIO Se determina directamente el nmero de clulas contndolas al microscopio con la ayuda de cmaras especiales que albergan un volumen conocido de liquido (Hemocitmetros, Cmara de PetroffHausser). Presenta algunas limitaciones: No se pueden distinguir las clulas vivas de las clulas muertas. Las clulas muy pequeas son difciles de contar. La precisin es difcil de lograr 5. PARMETROS REPRESENTATIVOS DEL CRECIMIENTO MICROBIANO Los microorganismos, como seres vivos que son, necesitan condiciones adecuadas de temperatura, humedad y presencia de nutrientes para desarrollarse. Cuando estas condiciones son ptimas una sola bacteria puede producir ms de 2 millones en 7 horas ya que cada microorganismo se divide en 2 cada 20 minutos. Temperaturam La mayora de los grmenes capaces de producir enfermedad en el hombre crecen mejor a temperaturas prximas a los 37 C, que es la temperatura normal del cuerpo humano, por ello son capaces de crecer dentro de nuestro organismo y producirnos enfermedad. Las altas temperaturas producen la muerte y destruccin de los

microorganismos, as a 65 C mueren gran parte de los grmenes patgenos y a 100 C se destruyen prcticamente todos los grmenes. Humedad El agua es un elemento indispensable para la vida, incluida la de los microorganismos, cuanto mayor sea el contenido en agua de un alimento ms fcil ser que crezcan en l los grmenes, contaminndolo y alterndolo. Acidez (pH) El pH es una medida de la acidez de un medio, un medio neutro es aquel que tiene un pH de 7, los medios cidos son los que tienen valores de pH inferiores a 7, mientras que los que tienen pH superior a este valor se dice que son bsicos o alcalinos.

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La mayora de los grmenes crecen mejor en medios que tengan un pH prximo a la neutralidad. Los mohos son capaces de crecer en medios cidos (pH 3-4). Por ello en los alimentos cidos (tomate, ctricos etc.) crecen preferentemente los mohos y son los que se encargan de su deterioro. Nutrientes Los grmenes para multiplicarse requieren nutrientes, de los que son ricos los alimentos y por ello es fcil el crecimiento microbiano. Los distintos tipos de microorganismos requieren distintos tipos de nutrientes, los hongos (mohos y levaduras) tienen mayor necesidad de azcares y otros hidratos de carbono por ello crecen mejor en alimentos dulces y ricos en hidratos de carbono (frutas, pasteles, hortalizas, etc.). Las bacterias necesitan ms protenas y si bien, necesitan azucares, concentraciones muy altas de azcar impide su crecimiento, por ello las bacterias crecern mejor en alimentos con altos contenidos en protenas y bajos en azucares (carnes, huevos, leche) 6. CRECIMIENTO MICROBIANO EN CULTIVO DISCONTINUO: MODELO DE INCREMENTO DE LA POBLACIN CRECIMIENTO DE UN CULTIVO DISCONTINUO: Es el crecimiento de microorganismos en un volumen fijo de nutrientes que continuamente es alterado hasta su agotamiento por el crecimiento. Se realiza sin intercambio de materia con los alrededores. el proceso se denomina biorreactor o fermentador. BIORREACTOR O FERMENTADOR: El mismo provee todos los servicios que son necesarios para el cultivo, tales como mezclado, termostatizacin, suministro de oxgeno, entradas para adicin de nutrientes, control del pH, etc. Para un componente cualquiera del cultivo, incluida la biomasa, se puede plantear el siguiente balance de materia en el biorreactor. Donde

V = es el volumen de cultivo F1 = es caudal de alimentacin F2 = el de salida

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Ci1 = la concentracin del componente en la alimentacin

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Ci =la concentracin en el caudal de salida, la que, si el cultivo est bien mezclado, se puede asumir idntica a la que hay dentro del biorreactor. Los restantes trminos rfi y rci = se refieren a la velocidad de formacin y consumo del componente respectivamente. 7. LA CURVA DE CRECIMIENTO El crecimiento microbiano se define como un aumento de los constituyentes celulares que puede dar como resultado -un aumento en el nmero de clulas ej.: cuando el microorganismos de reproduce por gemacin o fisin binaria aumento en el tamao de la clula ej.:

Los microorganismos cenocticos llevan a cabo divisiones del ncleo que no van acompaadas de divisin celular se diferencian cuatro fases. Crecimiento equilibrado Los componentes celulares se sintetizan a una velocidad constante unos con respecto a otros ej.: durante la fase exponencial de crecimiento Crecimiento no equilibrado La velocidad de sntesis de los componentes celulares varia de forma relativa (unos componentes respecto a otros) Tiene lugar en una gran variedad de condiciones ej.: modificaciones en los niveles de nutrientes (de un medio pobre a un medio rico o de un medio rico a uno pobre) o cambios en las condiciones ambientales.

Fase Lag Las clulas sintetizan nuevos componentes ej.: material ya presente que se deba reponer o aumentar en concentracin ej.: material, no existente anteriormente, empleado para adaptarse al medio o nuevas condiciones de crecimiento

Duracin variable: en algunos casos es muy corta y en otros est ausente Fase exponencial ( logartmica) La velocidad de crecimiento es constante . En esta fase la poblacin es ms uniforme desde el punto de vista qumico y

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propiedades fsicas Ejemplo de crecimiento exponencial las clulas se dividen y doblan su nmero a intervalos regulares. Fase estacionaria El nmero total de clulas viables permanece constante puede ser que clulas metablicamente activas dejen de reproducirse puede ser que la velocidad de divisin sea la misma que la de muerte

Posibles razones que determinan la entrada a la fase estacionaria Limitacin, carencia, de nutrientes Disponibilidad de oxgeno limitada Acumulacin de productos txicos Densidad poblacional crtica Fase de muerte La muerte celular se define como la prdida irreversible de la capacidad de dividirse Las clulas se mueren exponencialmente En algunos casos la velocidad de muerte es lenta debido a la acumulacin de clulas resistentes 8. CONTROL FSICO DEL CRECIMIENTO MICROBIANo El calor El tratamiento por calor es simple, barato y efectivo. Posiblemente es el mejor mtodo si el material a tratar no se daa por las altas temperaturas. La ventaja del calor es que penetra a travs del objeto y puede matar todos los microorganismos presentes en el mismo, mientras que otros mtodos, como la luz ultravioleta y los agentes qumicos, esterilizan slo las superficies. La esterilizacin puede realizarse mediante calor seco o calor hmedo. La pasteurizacin es un tratamiento especial que limita el crecimiento microbiano, pero no es un mtodo de esterilizacin. Todos los tratamientos por calor matan porque desnaturalizan las protenas. El calor seco mata principalmente porque aumenta los procesos de oxidacin que inactivan las macromolculas; sin embargo, el calor hmedo desnaturaliza las protenas porque rompe los enlaces que dan lugar a las estructuras secundaria, terciaria y cuaternaria de las mismas La autoclave es ms efectiva que la ebullicin porque utiliza presiones que elevan la temperatura de ebullicin del agua. A una presin de 1 atmsfera (funcionamiento habitual de la autoclave) se alcanza una temperatura de 121 0C.

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Al manejar una autoclave hay que tomar ciertas precauciones y comprobar que se llega a la temperatura correcta La pasteurizacin La pasteurizacin es un tratamiento por calor especial para controlar los microorganismos de la leche, productos lcteos, vino y cerveza, La pasteurizacin no esteriliza porque el calentamiento se realiza a bajas temperaturas. Pero aunque el procedimiento no mata todos los microorganismos presentes, s destruye a la mayora de los patgenos y de los microorganismos que causan el deterioro rpido de los alimentos. Adems, la pasteurizacin produce un dao mnimo en el producto. El fro La baja temperatura, por s misma, no mata los microorganismos. De hecho, slo se utiliza para impedir su desarrollo durante un perodo limitado de tiempo. Si se mantiene la temperatura por debajo de la que permite el crecimiento, la mayora de los microorganismos morirn lentamente; cuanto ms baja sea la temperatura, ms lentamente se producir la muerte. Una excepcin a esta regla es el fenmeno de choque frio, que consiste en someter un cultivo en crecimiento a un enfriamiento rpido y repentino; muchos microorganismos morirn inmediatamente. El efecto letal del choque fro vara dependiendo del microorganismo, del medio en el cual est creciendo y de la velocidad a la que se efecte el enfriamiento. Por ejemplo, si un cultivo de Escherichia coli que crece en un medio rico a 37 0C sufre un enfriamiento repentino hasta 50C, morirn ms del 90 por ciento de las clulas. A pesar de todo, ni el fro ni la congelacin son mtodos de esterilizacin. Existen algunas excepciones, Listeria monocitogenes, que produce la listeriosis, una enfermedad del sistema nervioso transmitida por los alimentos, crece bajo refrigeracin. Pero la mayoria de los psicrfllos se multiplican muy lentamente en el frigorifico y no constituyen un riesgo para la salud, aunque con el tiempo producen la alteracin de los alimentos. Las radiaciones Algunos tipos de radiacin electromagntica matan los organismos vivos, incluidos los microorganismos. Las radiaciones se clasifican de acuerdo con su longitud de onda; desde los rayos csmicos en el extremo de las longitudes de onda cortas, pasando por la luz visible en el centro del espectro, hasta las ondas de radio en el extremo opuesto de las longitudes de onda largas. En general, la luz visible y la radiacin de longitud de onda ms larga no son significativamente letales.. Las radiaciones que pueden matar directamente las bacterias son todas de longitud de onda ms corta que la de la luz visible. Dichas radiaciones son la luz ultravioleta (UV), radiacin con una longitud de onda de 10 a 400 nm (nanmetros) y la radiacin ionizante, que tiene una longitud de onda ms corta, hasta de unos 0,001 nm. Si stos no funcionan, la clula muere. Uno de estos mecanismos es la fotorreactivacin. La fotorreactivacin depende de una enzima que se activa en presencia de luz visible, de longitud de onda

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comprendida entre los 420 y los 540 nm. Por tanto, los experimentos con luz ultravioleta deben realizarse en una habitacin con luz tenue. En la prctica se utilizan dos formas de radiacin ionizante para matar a los microorganismos: rayos X, de longitudes de onda de 0,1 a 40 nm y rayos gamma, de longitudes de onda de 0,001 a 0,1 nm. LOS TIPOS DE GERMICIDAS Y SUS MECANISMOS DE ACCIN Los germicidas se utilizan de acuerdo con su estructura qumica y con su actividad. Los 6 tipos principales son: el fenol y los compuestos fenlicos; los alcoholes; los halgenos y el perxido de hidrgeno; los metales pesados; los agentes surfactantes; y los agentes alquilantes. Los germicidas pueden ser bacteriostticos o bactericidas, dependiendo de su actividad. El fenol El fenol, que Lister denomin cido carblico, ha sido utilizado como germicida durante un largo perodo de tiempo. El fenol y los compuestos fenlicos son poderosos agentes desnaturalizantes, especialmente el fenol (el ms activo). Estos compuestos inactivan protenas celulares vitales, incluidos los enzimas. Compuestos fenlicos Los cresoles son un tipo de fenoles que se utilizan comunmente en la desinfeccin domstica y en los hospitales. El o-fenilfenol es el compuesto ms representativo de este grupo; su nombre comn o ms familiar es Lysol. El hexaclorofeno es un compuesto clorado muy efectivo como antisptico. Permanece en la piel dando lugar a una teccin antimicrobiana de larga duracin. Antes se utilizaba como ingrediente de jabones y de lociones, particularmente en hospitales, donde se utilizaban para controlar las infecciones por estafilococos en los recin nacidos. Los alcoholes Los alcoholes son compuestos que poseen un grupo hidroxilo ( OH). Estos compuestos matan a los microorganismos porque alteran los lpidos de sus membranas; tambin desnaturalizan las protenas. El principal inconveniente de los alcoholes es que no destruyen a las endosporas. Los halgenos y el perxido de hidrgeno Los halgenos, iodo y cloro, son agentes oxidantes. Estas sustancias inactivan los enzimas porque oxidan sus grupos funcionales, particularmente los grupos sulhidrilo ( -SH). Los agentes ms activos y potentes atacan los grupos amino ( -NH 2) y los grupos hidroxilo ( -OH). El iodo se utiliza como antisptico y el cloro como desinfectante. El cloro se utiliza como desinfectante en diversas formas: cloruros, hipocloritos, cloraminas inorgnicas y cloraminas orgnicas. Los metales pesados Las sales de los metales pesados reaccionan con los grupos sufihidrilos ( -SH) de las protenas "envenenando" las enzimas y, por tanto, matando las clulas microbianas. Las sales de mercurio y plata se han

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utilizado en medicina durante muchos aos. La sal de mercurio cloruro mercrico se utiliz antiguamente como antisptico, pero en la actualidad ha dejado de emplearse debido a su gran toxicidad Los agentes surfactantes Los surfactantes son compuestos que poseen un grupo hidroflico (amante del agua) y otro grupo hidrofbico (que repele el agua) . Los jabones y los detergentes son surfactantes. Estos compuestos limpian gracias a la formacin de emulsiones, permitiendo que el material oleoso (y el material que se encuentra embebido en el mismo) sea eliminado mediante el lavado con agua. Los agentes alquilantes El formaldehdo, el glutaraldehdo y el xido de etileno son agentes alquilantes, lo que significa que alquilan o unen cadenas cortas de carbono (grupos alquilos) a las enzimas, inactivndolas y matando las clulas. Tratamientos para el control de los microorganismos Tratamiento Efecto Modo de Aplicaciones accin MTODOS FSICOS Calor Calor seco Esteriliza Desnaturaliza Se utiliza en el laboratorio protenas para esterilizar material seco que pueda resistir la temperatura elevada y el material que resulta daliado por la humedad. Calor Esteriliza Desnaturaliza Se utiliza en el laboratorio hmedo protenas para esterilizar lquidos y material que se pueda estropear por las altas temperaturas empleadas en la esterilizacin mediante calor seco. Tambin se emplea en las conservas enlatadas Pasteurizaci Mata ciertos Desnaturaliza Elimina los patgenos y n microorganismo protenas disminuye la contaminacin s de la leche, vino, cerveza y otros productos de consumo diario (la leche condensada y la evaporada estn esterilizadas). Fro Hace ms lento o detiene el crecimiento microbiano Disminuye la velocidad de las reacciones qumicas Conserva los productos perecederos, incluidos los alimentos y los microorganismos.

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Radiaciones Luz UV Rayos X Rayos gamma Filtracin

Esteriliza Esterilizan

Daa el DNA Expulsa electrones de los tomos Elimina fsicamente las clulas

Elimina microorganismo s celulares

Se utiliza en el laboratorio para esterilizar superficies. Se utilizan para esterilizar material de plstico y la superficie de frutas y verduras. Se utiliza en el laboratorio para tratar medios de cultivo, antibiticos y otras sustancias sensibles al calor; tambin para conservar algunas bebidas.

Desecacin Evaporacin o calor Sublimacin o liofilizacin (criosecado ) AGENTES QUMICOS Fenoles

Mata muchos microorganismo s Detiene el crecimiento microbiano

Distorsiona las membranas Detiene la mayora de las reacciones qumicas

Se utiliza para conservar alimentos Se utiliza en el laboratorio para conservar cultivos, protenas y sangre. Tambin para fabricar caf instantneo y otros alimentos.

Compuesto s fenlicos

Matan la mayora de los microorganismo s Matan la mayora de los microorganismo s Matan la mayora de los microorganismo s Matan microorganismo s Mata muchos microorganismo

Desnaturalizan protenas Desnaturalizan protenas y alteran la membrana plasmtica Desnaturalizan protenas y alteran la membrana plasmtica Oxidan compuestos bioqumicos esenciales Oxida compuestos

Germicidas

Desinfectantes, antispticos.

Alcoholes

Desinfectan superficies, actan sobre la piel, limpian termmetros. Desinfectan superficies, actan sobre la piel, tratamiento del agua. Antisptico de tipo medio para la piel

Halgenos

Perxido de hidrgeno

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s bioqumicos vitales Reaccionan con los grupos sulfihidrilo de las protenas Antispticos de la piel

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Metales pesados Agentes surfactante s Jabn y detergente Sales de amonio cuaternario Agentes alquilantes Formaldeh do y glutaraldeh do xido de etileno

Matan muchos microorganismo s

Eliminan los microorganismo s Matan microorganismo s

Eliminan fsicamente los microorganismos Alteran las membranas

Desinfectan superficies como las mesas de laboratorio; antispticos de la piel Agentes esterilizantes ampliamente utilizados

Matan microorganismo s Mata microorganismo s

Inactivan enzimas mediante la adicin de grupos alquilo Inactiva enzimas mediante la adicin de grupos alquilo

Utilizados para conservar tejidos, preparar vacunas y esterilizar material quirrgico. Gas utilizado para esterilizar material sensible al calor y objetos voluminosos que se utilizan en hospitales.

9. AGENTES ANTIMICROBIANOS Agentes antimicrobianos: Sustancias qumicas sintetizadas parcial o totalmente en laboratorio que son capaces de inhibir el crecimiento y/o destruir microorganismos. Antibiticos: Sustancias qumicas sintetizadas por microorganismos que poseen accin antimicrobiana Desde el punto antimicrobianos de vista prctico existen distintos tipos de

Desinfectantes: slo se aplican a sistemas inanimados y eliminan la carga microbiana total. Sanitizantes: slo se aplican a sistemas inanimados y disminuyen la carga microbiana total.

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Antispticos: reducen y controlan la presencia de microorganismos potencialmente patgenos, slo se pueden aplicar externamente en seres vivos (piel y/o mucosas). Antimicrobianos de uso sistmico: reducen y controlan la presencia de microorganismos que han invadido los tejidos. Actan en el organismo, pudiendo ser ingeridos (va oral), absorbidos por piel (apsitos) y/o inyectados.

Clasificaciones Los agentes antimicrobianos de uso sistmico se pueden clasificar segn su origen, efecto antimicrobiano, espectro de actividad y mecanismo de accin. 1. Origen: Naturales: se obtienen a partir de microorganismos (hongos, Bacterias, etc.). Sintticos: se obtienen totalmente por sntesis qumica. Semisintticos: se obtienen por modificaciones qumicas de antimicrobianos naturales, con el fin de mejorarlos.

2. Efecto: Bacteriosttico: la mxima concentracin no txica que se alcanza en suero y tejidos impide el desarrollo y multiplicacin de los microorganismos, sin destruirlos, pudiendo estos multiplicarse nuevamente al desaparecer el agente antimicrobiano. Sirven para complementar los mecanismos defensivos del husped. Bactericida: su accin es letal sobre los microorganismos, por lo que stos pierden irreversiblemente su viabilidad o son lisados.

3. Espectro de actividad: Amplio: actan sobre un gran nmero de especies microbianas (ej. TETRACICLINA). Intermedio: actan sobre un microorganismos (ej. MACROLIDOS). Reducido: actan sobre un microbianas (ej. POLIMIXINA). nmero nmero limitado de de

pequeo

especies

4. Mecanismo de accin: Inhibicin de la sntesis de la pared celular.

Penicilinas.- Son antimicrobianos generalmente bactericidas que interfieren en la sntesis de la pared celular, debido a que se unen a receptores enzimticos

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situados en la cara externa de la membrana bacteriana que llevan a cabo la transpeptidacin de los polmeros de murena. Cefalosporinas.- Estos antimicrobianos son similares a las penicilinas en relacin a la estructura y modo de accin. Monobactamas.- Las monobactamas son antibiticos -lactmicos monocclicos que interactan con las PBP induciendo la formacin de largas estructuras bacterianas filamentosas. Carbapenemes.- Son antimicrobianos relacionados estructuralmente con los lactmicos. Tienen un amplio espectro de accin. Son activos contra numerosos bacilos Gram negativos, anaerobios y microorganismos Gram positivos. Peptdicos.- Bacitracina.- Es un polipptido que impide el reuso del lpido transportador de la membrana citoplasmtica, por lo que inhibe el transporte del N-Acetil Murmico fuera de la clula. Otros Alteracin de la permeabilidad celular. Polienos.- Son macrlidos y actan selectivamente sobre microorganismos que contienen esteroles en la membrana (hongos, levaduras, micoplasmas, etc). Los polienos se unen a los esteroles provocando que la membrana sea permeable al K+ y a molculas del tamao de la glucosa a causa de la formacin de poros. Polimixinas.- Son polipptidos catinicos y bsicos que actan solamente sobre bacterias Gram negativas. Imidazoles.- Alteran la permeabilidad de la membrana celular provocando la filtracin de iones K+ y compuestos con fsforo. Quinolonas.- Son un grupo de antimicrobianos que interfieren en la sntesis del DNA debido a que bloquean las subunidades A de la DNA girasa que es una enzima que participa en el superenrrollamiento negativo del DNA relajando la tensin producido por un superenrrollamiento positivo. Ansamicinas.Rifampicina (Rifampina) Inactiva selectivamente la RNA polimerasa debido a que se une a sta en forma no covalente, produciendo en la enzima un cambio conformacional que la inactiva. Sulfonamidas.- Son anlogos estructurales del cido paraaminobenzoico (PABA) que es un precursor del cido flico. Diaminopirimidinas.- al igual que las sulfamidas, interfiere con la sntesis de purinas, pirimidinas y algunos aminocidos al bloquear la formacin del cido

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flico. Inhibe a la enzima hidrofolato-reductasa que reduce el dihidrofolato a tetrahidrofolato. Los antimicrobianos de uso sistmico deben reunir las siguientes caractersticas: Deben ser ms bactericidas que bacteriostticos. Deben mantenerse activos en presencia de plasma y lquidos corporales. Es deseable que sean efectivos frente a un amplio espectro de microorganismos. Los microorganismos susceptibles no se deben volver resistentes gentica o fenotpicamente. Deben ser hidrosolubles y liposolubles.

Finalidades del uso de los antimicrobianos Se indican con fines profilcticos o teraputicos de las enfermedades infecciosas. Los antibiticos con fines profilcticos suelen emplearse en distintas situaciones: a) Antes de la exposicin, si se sabe que la persona va a estar expuesta al agente infeccioso con riesgo de morbilidad. Es el caso de la persona con riesgo de endocarditis infecciosa (EI) que va a ser sometida a un procedimiento que frecuentemente origina bacteriemia. b) Despus de una exposicin con riesgo. Un ejemplo es la persona que tuvo contacto con otra que tiene una enfermedad meningoccica. c) Para evitar la recurrencia, como puede ser de las infecciones urinarias o de las faringitis estreptoccicas en aquellos con antecedentes de fiebre reumtica. d) Para prevenir quirrgicos. infecciones en relacin a determinados actos

Cuando la infeccin ya est establecida finalidad teraputica. Con ellos se logra: Reducir la morbi-mortalidad Acelerar la recuperacin del enfermo Interrumpir la cadena de trasmisin.

los

antibiticos

tienen

una

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Cuando el antimicrobiano se usa con fines teraputicos puede suceder que: a) El agente etiolgico est identificado y su sensibilidad sea conocida , b) Se haya decidido iniciar un tratamiento emprico, de una entidad nosolgicamente definida y de probable etiologa bacteriana (neumonitis, cistitis, meningitis, EI), cuyo agente causal no est aun identificado porque no pudo ser aislado o las muestras extradas estn en estudio, c) Se realice un tratamiento emprico por sospecha de infeccin . Esto sucede con el paciente neutropnico febril. 10. FACTORES QUE INFLUYEN EN LA EFICACIA DE LOS AGENTES DE CONTROL MICROBIANO. Caractersticas de un desinfectante ideal Los desinfectantes se diferencian de los antibiticos s en que no posee toxicidad selectiva; generalmente son txicos no solo para microorganismo s parsitos sino tambin para las clulas del hospedador. Muchos de ellos se inactivan por una materia orgnica, pH y otros factores fsicos. Para preparar nuevos agentes antimicrobianos o hacer la valoracin de los desinfectantes para uso prctico, hay que tomar en cuenta los siguientes puntos: * Actividad antimicrobiana Es la capacidad de la sustancia para matar a microorganismo s, en primer requisito. El producto qumico a baja concentracin debe tener un amplio espectro de actividad antimicrobiana es decir matar a muchas clases de microorganismo. *Solubilidad Es la sustancia que debe ser soluble en agua u otros solventes en la cuanta suficiente que permita su uso efectivo. *Estabilidad Deben ser mnimo los cambios que sufra la sustancia a largo de tiempo mientras permanece en un estante y estos cambios no deben dar como resultado una prdida significativa de la accin antimicrobiana. *No ser toxico para las personas y otros animales idealmente, el compuesto debera ser letal para los organismos e inocuo para las personas y animales. *Homogeneidad La preparacin debe ser de composicin uniforme de forma que los ingredientes activos estn presentes en cada aplicacin. Los productos qumicos puros son homogneos, pero las mezclas de materiales pueden carecer de homogeneidad. *No combinarse con material orgnico extrao Muchos desinfectantes se combinan con las protenas u otro material orgnico. Teles desinfectantes se

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usan en condiciones en las que hay considerable cantidad de material orgnico *Actividad antimicrobiana A temperatura ambiente y la del cuerpo. No debe ser necesaria elevar la temperatura por encima de los valores que normalmente en el ambiente en donde se va a usar el compuesto. *Capacidad de penetracin A menos que la sustancia pueda penetrar a travs d la superficie, su accin antimicrobiana est limitada al sitio de aplicacin. A veces, por supuesto, lo nico que se requiere es que actu en la superficie. *No ser corrosivo ni teir El compuesto no debe oxidar o estropear de cualquier otra forma los metales, ni debe estropear ni teir los tejidos. *Poder desodorante Quitar los olores mientras desinfecta es un atributo deseable. Idealmente, el propio desinfectante debera ser inodoro o tener un olor agradable. *Capacidad detergente Un desinfectante que dems es un detergente (agente limpiador) tiene la ventaja de que su accin limpiadora mejora la efectividad del desinfectante. *Disponibilidad y costo Debe poderse disponer del compuesto en grandes cantidades. Seleccin de un agente qumico antimicrobiano. Algunos factores que debe en tenerse en consideracin al hacer seleccin de un agente qumico antimicrobiano para su aplicacin prctica son: *Naturaleza del material que se va a tratar Un agente qumico usado para desinfectar utensilios contaminados puede ser muy poco satisfactorio para su aplicacin sobre la piel, es decir puede daar seriamente las clulas de los tejidos. En consecuencia, la sustancia seleccionada debe ser compatible con el material a cual se aplica. *Tipo de microorganismos No todos los microorganismos s son igualmente susceptibles a la accin inhibidora o mortfera de un agente qumico especfico. Por ello debe saberse que el agente seleccionado es efectivo contra el tipo de microorganismo que hay que destruir. *Condiciones ambientales Los factores de temperatura, pH, tiempo, concentracin y presencia de material orgnica extraa, pueden tener influencia sobre la casa y la efectividad de la destruccin microbiana. CAPITULO PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO OBJETIVOS: Reconocer algunos de los medios de cultivo empleados en el aislamiento e identificacin bacteriana.

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Observar las reacciones que producen los microorganismos cuando se cultivan.

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Identificar las bacterias segn sus caractersticas de crecimiento y sus reacciones bioqumicas en los medios estudiados.

INTRODUCCION Las bacterias para su crecimiento deben tener los nutrientes necesarios para desarrollar un nuevo protoplasma y como una fuente de energa. Estos factores de crecimiento o requerimientos para el desarrollo bacteriano estn dados por: Un medio de cultivo adecuado dependiendo de cada bacteria. Una atmsfera que determina la cantidad de oxgeno requerida. pH especfico para cada medio. Temperatura apropiada de crecimiento.

Todo material en el cual los microorganismos pueden reproducirse es un medio de cultivo. Estos medios se preparan sobre una sustancia llamada Agar que se extrae de algas marinas y que no puede ser digerida por las bacterias, pero que da una consistencia suficiente para soportar la adicin de sustancias nutritivas y permitir el crecimiento bacteriano.A este medio base se le pueden agregar nutrientes tales como: Peptona (Protena que sirve como fuente de Carbono y Nitrgeno) Extracto de carne que proporciona protenas y carbohidratos Sueros bovinos Sangre humana, de cordero o de otros animales Vitaminas Minerales Cloruro de sodio Selectivos diferenciales: A este tipo de medios se adicionan reactivos o sustancias qumicas a los medios de cultivo permitiendo la diferenciacin de los distintos tipos de bacterias y la seleccin de determinados gneros o especies

Materiales:

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Cajas con diferentes medios de cultivo Cultivo puro de microorganismos Mechero Asas (redondas, rectas)

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Procedimiento: Sembrar las bacterias, en los diferentes medios cultivo, mediante la tcnica de siembra por agotamiento a partir de los microorganismos puros que encuentra en su sitio de trabajo. Incubar a 37oC durante 24 horas. PASO 1

Se elige el medio de cultivo ke se va apreparar Independientemente ke se vaya a preparar agar o caldo es necesario tener en cuenta la fecha de vencimiento de los medios d cultivo y verificar los componentes del medio antes de preapararlos PASO N 2 Antes de preparar el medio se realizan los clculos pertinentes para el volumen que se quiera. Paso 3: Teniendo los clculos hechos, se procede a pesar la cantidad deseada. Tenga en cuenta el tipo de balanza que esta utilizando. Paso 4: Con una esptula limpia pesar la cantidad deseada. Asegrese que la esptula no contenga restos de otros medios pesados anteriormente. Paso 5: Verificar que el peso que salga en el Display de la balanza sea el nmero que se desea, hallado por medio del calculo. Paso 6: Despus de hidratar con el volumen de agua deseado, se calienta hasta que se disuelva completamente. Paaso7: Se enva el medio al autoclave con cinta indicadora. Paso 8: Los medios de cultivo generalmente se sirven en las cajas, en una cmara de flujo laminar para evitar que se contamine el medio. Paso 9: En su defecto el medio de cultivo se sirve al lado del mechero en las cajas de petri, colocando en cada una de ellas la cantidad necesaria. Todo se realiza de manera asptica.

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Paso 10: Por ltimo se dejan enfriar las cajas para que se solidifique el agar. No se olvide de marcar las cajas de petri con el nombre del medio de cultivo, es muy importante que el marcaje sea correcto para evitar problemas en los resultados. MEDIOS DE CULTIVO DE BACTERIAS PREPARACIN Y COLONIAS DEBACTERIAS OTROS TIPOS DE SIEMBRA

Inoculacin primaria

Estrias en ngulos rectos

Estrias para producir un crecimiento en enrejado.

ESTERILIZACIN

TIPOS DE ESTERILIZACIN

Hmeda, autoclave Seca, horno Gaseosa: xido etileno, formaldehdo o H2O2. Filtracin: membranas de 0.45 y 0.22 m. Es el proceso mediante el cual se destruyen o remueven todos los microrganismos ESTERILIZACIN HMEDA No colocar recipientes completamente cerrados en la autoclave. El vapor debe entrar en contacto con todo lo que se quiere esterilizar. No esterilizar solventes o qumicos corrosivos. Si se esterilizan lquidos, bajar la presin lentamente y dejar enfriar los recipientes dentro de la autoclave. Se esterilizan mejor los lquidos si se dividen en pequeos recipientes que en uno grande (> 1 lt) Temperatura: 121 -123C (250-254F)

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Presin: 15 psi Tiempo: 10-15 min instrumentos* , 20 -30 min lquidos* MEDIOS DE CULTIVO DIFERENCIALES
Nombre del medio TSI Indicado para: Fermentacin de azcares Produccin de gas Produccin de H2 S

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Componentes importantes Lactosa, Sacarosa y Glucosa Sal de Fe y Amonio Tiosulfato sdico Rojo de Fenol (Indicador) Citrato de Sodio Azul de Bromotimol como indicador Urea Rojo de Fenol como indicador Sal de Hierro y amonio Tiosulfato sdico Triptfano Agar suficiente para hacerlo semislido

Citrato de Simmons Agar Urea SIM

Utilizacin del carbono contenido en el citrato de sodio como fuente de carbono para el crecimiento bacteriano Determinar la produccin de la enzima ureasa Produccin de H2 S Produccin de Indol Motilidad de la bacteria

MEDIOS DE CULTIVO BASICOS


Nombre del medio Agar Tripticasa Soya Agar Mueller Hinton MEDIOS DE CULTIVO ENRIQUECIDOS Nombre del medio Agar Sangre Indicado para Para crecimiento de grampositivos y gramnegativos Componentes importantes Base de Agar tripticasa soya Sangre animal o humana Indicado para Base para otros medios Para crecimiento de grampositivos y gramnegativos Mantenimiento de cepas Para la realizacin de antibiogramas por el mtodo de difusin en agar Componentes importantes Casena Harina de soya Cloruro de sodio Agar Extracto de carne Almidn Casena Agar

MEDIOS DE CULTIVO SELECTIVOS DIFERENCIALES Nombre del medio EMB Indicado para Crecimiento de Bacterias gramnegativas Componentes importantes Agar Lactosa Eosina Azul de Metileno

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COLONIAS EN Agar TCBS COLONIAS EN agar MARINO

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PURIFICACIN DE VIBRIOS

CAPITULO CULTIVO DE MICROORGANISMOS CULTIVO DE MICROORGANISMOS

El cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones fsicas, qumicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada. En general, podemos distinguir cultivos lquidos y slidos en funcin de las caractersticas del medio y cultivos discontinuos y continuos en funcin de la disponibilidad de nutrientes en el medio. MEDIOS DE CULTIVO Un microorganismo necesita para crecer nutrientes que le aporten energa y elementos qumicos para la sntesis de sus constituyentes celulares, dependiendo de la fuente de carbono que utilizan, los microorganismos se pueden clasificar en auttrofos si es el CO2 atmosfrico (microorganismos que fotosintetizan) y hetertrofos si utilizan carbono orgnico. La frmula elemental de un microorganismo es, aproximadamente, C4H7O2N lo que supone que los componentes de las clulas son:

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carbono que representa alrededor del 50% del peso seco oxgeno (32%) nitrgeno (14%) fsforo (3%)

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azufre (en torno al 1%) y otros elementos traza entre los que se encuentran Fe, K, Mg, Mn, Co, Mb, Cu y Zn.

LOS MEDIOS DE CULTIVO TIENEN DIFERENTES UTILIDADES


- Aislamiento de bacterias presentes en una muestra - Para investigacin e identificacin de bacterias - Para anlisis metablicos y bioqumico de la bacterias Estudios culturales para evaluar caractersticas de las colonias y

poblaciones bacterianas, segn el estado agregativo del medio Para realizacin de estudios de sensibilidad a los antibiticos

(antibiograma) Para preservacin de bacterias (Cepario) Para produccin de vacunas bacterianas Para produccin de toxinas bacterianas

MEDIOS DE CULTIVO REQUERIMIENTOS ENERGTICOS: - Fuentes de carbono - Fuentes de nitrgeno NO ENERGTICOS: - Fuentes de azufre - Fuentes de fsforo - Agua - Iones metlicos - Factores de crecimiento

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- Factores de arranque - Factores inhibidores - Factores solidificantes: agar, gelatina Componentes del medio cultivo Un medio de cultivo debe contener en forma asimilable un fuente nitrgenada (Protenas peptonas), fuente de carbono (Hidratos de carbono lpidos), distintas sales minerales y agua

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En algunos casos debe contener factores de crecimiento para microorganismos exigentes (Ej. vitaminas, sangre, extractos de carne o levadura, etc) De acuerdo al estado agragativo se puede agregar agentes solidificantes (agar o gelatina). Debe ser estril, isotnico, poseer propiedades buffer, un pH ptimo y un potencial xido reductor determinado.

MEDIOS DE CULTIVO CONDICIONES Las condiciones que ha de cumplir un medio de cultivo para que un microorganismo crezca son: * Composicin de nutrientes adecuada a las necesidades del microorganismo * Condiciones fsico-qumicas apropiadas: - Temperatura ptima - Grado de humedad adecuado - pH - Presin osmtica - Presencia o ausencia de oxgeno DISPONIBILIDAD DE NUTRIENTES ADECUADOS Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener, como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas, en muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia inductoras del crecimiento. PRESENCIA (O AUSENCIA) DE OXGENO Y OTROS GASES Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn adecuadamente en una atmsfera sin oxgeno ambiental.

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Segn sus requerimientos de oxgeno los microorganismos pueden ser: Aerobios: requieren oxgeno para crecer. Ej. Mycobacterium tuberculosis. Anaerobios: crecen en ausencia de oxgeno. En presencia de oxgeno su crecimiento cesa, algunos mueren rpidamente. Ej. Especies del gnero Clostridium. Facultativos: pueden crecer en presencia o en ausencia de oxgeno. Ej. Levaduras, enterobacterias. Aerotolerantes: crecen en ausencia de oxgeno, pero la presencia de oxgeno no perjudica su crecimiento. Microaeroflicos: requieren pequeas concentraciones de oxgeno para crecer.

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CONDICIONES ADECUADAS DE HUMEDAD Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las estufas de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar as que se deseque el medio. LUZ AMBIENTAL La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los microorganismos fotosintticos. pH La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. ESTERILIDAD DEL MEDIO Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos medios. MEDIOS DE CULTIVO CLASIFICACIN SEGN SU COMPOSICIN Y ORIGEN: - Empricos o naturales - Sintticos - Semisintticos

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- Complejos SEGN SU CARACTERSTICAS Y USO: - Comunes o bsicos - Enriquecidos - Diferenciales - Selectivos - De transporte MEDIOS DE CULTIVO CLASIFICACIN SEGN SU ESTADO AGREGATIVO: - Lquidos - Semislidos - Slidos

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Los medios slidos o semislidos pueden contener los mismos ingredientes que los medios lquidos, pero poseen adems agentes solidificantes como agar o gelatina. MEDIOS DE CULTIVO CLASIFICACIN Medio sinttico: Son los medios que contienen una composicin qumica definida cuali y cuantitativamente. Medio mnimo: Son los medios que presentan la minima cantidad de nutrientes capaz de permitir el desarrollo de los microorganismos. Medio complejo: Son medios con nutrientes de composicin qumica variable o no establecida. Son mezclas complejas y poco definidas de sustancias. Se preparan a partir de extractos animales, vegetales, etc. MEDIOS DE CULTIVO CLASIFICACIN SEGN SU PRESENTACIN: - Deshidratados o liofilizados - Medios preparados - Medios slidos en placa de petri - Medios slidos en tubo - Medios lquidos en tubo

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- Medios semislidos en tubo - Medios de doble fase en frasco MEDIOS DE CULTIVO CLASIFICACIN Medio enriquecido: Medio que se enriquece con nutrientes y se utiliza para microorganismos exigentes. Agar sangre . Agar Suero.

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Medio selectivo: Medio que permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhibe el desarrollo de otros. Agar sales-manitol o Chapman (permite el crecimiento de ciertos Staphylococcus). Medio diferencial: Permite revelar caractersticas metablicas-fisiolgicas de los microorganismos. Agar Mac conkey (permite visualizar la fermentacin de lactosa por viraje de un indicador de pH). Medios de transporte: Se utilizan para el transporte de muestras biolgicas, manteniendo la viabilidad del microorganismo. Medio de Stuart, Cary y Blair, Amies y Douglas, etc MEDIOS DE CULTIVO Condiciones de cultivo Cuando se desean cultivar bacterias es necesario tomar en cuenta los componentes nutritivos, sales, humedad y las condiciones fsicas como son el pH, el oxgeno, la luz y la temperatura. TECNICASD DE INOCULACION DE ACUERDO AL TIPO DE CULTIVO Se distribuyen en diferentes formas: Tubos de ensayo Matraces o frascos de tapn de rosca Cajas petri CULTIVO EN CALDO Lquido preparado para el desarrollo y estudio de las bacterias y otros microorganismos, muchas vacunas se han conseguido a partir de caldos de cultivo.

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Siembra en superficie

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Las placas no se llevan a incubar directamente, sino que se introducen en una jarra especial en la que exista un ambiente libre de oxgeno, denominada jarra de y suspensin, para crear un ambiente de anaerobiosis en el interior de estas jarras, se utiliza una preparacin comercial que elimina el O2 y desprende CO2. La atmsfera va reducindose y, para verificar que el ambiente es anaerbico, se coloca dentro de la jarra una tira de papel impregnada en un indicador que vira de color.Se incuba a 48 horas a temperatura adecuada. MORFOLOGIA DE COLONIAS EN PLACA

RELACIN HOSPEDERO-PARSITO

1.-ETAPAS DEL PROCESO INFECCIOSO ENTRADA DEL GERMEN

QUE ES LA ENTRADA DEL GERMEN? Presencia de agentes patgenos en la intimidad de los tejidos del husped. Indica la contaminacin, con respuesta inmunolgica y dao estructural de un hospedero, causada

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por un microorganismo patgeno, es decir, que existe invasin con lesin tisular por esos mismos grmenes (hongos, bacterias, protozoos, virus,).

ETAPA DEL PROCESO INFECCIOSO DEL VIRUS. La adhesin o adsorcin.

Es una unin especfica entre protenas de la cpside vrica y receptores especficos de la superficie celular del husped, pero algunos bacterifagos tambin son capaces de adherirse a los flagelos, vellosidades (pili) o cpsulas presentes en la superficie de la bacteria hospedera. La penetracin

Sigue a la adhesin; los virus se introducen en la clula husped mediante endocitosis Mediada por receptores o por fusin de membrana. Esto recibe a menudo el nombre de penetracin vrica. El despojo

Es el proceso en que la cpside vrica es degradada por enzimas virales o del husped, liberando as el cido nucleico del genoma vrico. La replicacin

Implica la sntesis de ARN mensajero (ARNm) vrico en todos los virus con rasgos de ARN positivos, la sntesis de protenas vricas, el ensamblaje de protenas vricas y la replicacin del genoma viral. El proceso de replicacin es esencial para mantener la estabilidad de la informacin gentica contenida en el ADN. Tras el ensamblaje de partculas vricas

A menudo se produce una modificacin pos-traduccional de las protenas vricas. En virus como el VIH, esta modificacin (a veces llamada maduracin), se produce despus de que el virus haya sido liberado de la clula husped. Los virus son liberados de la clula husped por lisis

Un proceso que mata la clula reventando su membrana. Los virus envueltos (como el VIH) son liberados de la clula husped por gemacin. Los virus envueltos (como el VIH) son liberados de la clula husped por gemacin. Durante este proceso, el virus adquiere su envoltura, que es una parte modificada de la membrana plasmtica del husped. ETAPAS INFECCIOSAS DE LA ENTRADA DE UN HONGO. Muchos hongos patgenos muestran una especificidad hacia el rgano al cual se unen, de forma que normalmente no atacan a todas las partes de la planta hospedadora; algunos colonizan partes areas mientras que otros infectan zonas situadas por debajo del suelo. Los hongos patgenos emplean diferentes mecanismos para unirse a la superficie de la planta hospedadora

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2.-ENTRADA Y PROPAGACIN DEL PATGENO EN EL HUSPED

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INFECCIN: Es un trmino clnico que indica la contaminacin, con respuesta inmunolgica y dao estructural de un hospedero, causada por un microorganismo patgeno, es decir, que existe invasin con lesin tisular por esos mismos grmenes (hongos, bacterias, protozoos, virus, priones), sus productos (toxinas) o ambos a la vez.1 2 Esta infeccin puede ser local o sistmica. PRINCIPIOS DE ENFERMEDAD Y EPIDEMIOLOGA A pesar de que el sistema inmune permite controlar las enfermedades transmisibles en la mayora de las personas, stas pueden continuar siendo susceptibles a diversos microorganismos patgenos, de esta manera, para que se pueda mantener la condicin de salud, las defensas del organismo deben ser capaces de controlar los mecanismos de patogenicidad de los microorganismos. El trmino PATOGENICIDAD se refiere a la capacidad de un organismo parsito de causarle dao al husped, mientras que VIRULENCIA es el grado de patogenicidad. La INFECCIN es la invasin o colonizacin del organismo por parte de microorganismos patgenos lo cual puede producir o no dao al husped, mientras que la ENFERMEDAD se presenta cuando el husped es daado de alguna forma por la presencia del agente infeccioso Las infecciones bacterianas no aparentes (infecciones subclnicas) pueden ser de dos tipos: Infecciones durmientes: en las que se puede aislar el microorganismo del paciente. Usualmente se usa el trmino de PORTADOR para designar a aquellas personas que continan diseminado el microorganismo despus de haberse recuperado de la enfermedad. Ejemplo: Infecciones por Salmonellas, Estreptococos hemolticos. Infecciones latentes: en las que no se puede aislar el microorganismo y slo pueden ser reconocidos por mtodos indirectos o cuando aparecen los sntomas de la enfermedad.

La probabilidad que la infeccin por un patgeno d origen a una enfermedad va a depender de: a. La virulencia: Mientras mayor sea la virulencia mayor ser la probabilidad de ste para causar enfermedad. b. El nmero de grmenes patgenos que infecten el husped. c. La resistencia del husped: Mientras mayor sea la resistencia del husped, menor ser La probabilidad de ste de sufrir enfermedad, como consecuencia de la infeccin por el germen patgeno.

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ESTABLECIMIENTO DE UNA INFECCIN O UNA ENFERMEDAD Para que un agente etiolgico llegue a producir una infeccin o una enfermedad, deben producirse una secuencia definida de eventos. Debe haber un reservorio como fuente de patgenos. El patgeno debe ser transmitido al husped susceptible. Se debe producir un proceso de invasin en el que el microorganismo ingresa en el husped y se multiplica. El microorganismo lesiona al husped dependiendo de sus mecanismos de patogenicidad.

TRANSMISIN DE MICROORGANISMOS PATGENOS La transmisin de los agentes causantes de enfermedades infecciosas depende de varios factores: La fuente del agente infectante. El nmero de microorganismos liberados. La resistencia del microorganismo para que se mantenga virulento durante el trnsito al nuevo husped. La frecuencia de contactos efectivos entre individuos infectados e individuos susceptibles. Elevada proporcin de individuos susceptibles.

La transmisin de microorganismos patgenos desde el reservorio de la infeccin hasta un husped susceptible, puede producirse a travs de diferentes vas. TRANSMISIN POR CONTACTO Directo

Muchos agentes son transmitidos de una persona a otra por contacto fsico entre la fuente y el husped susceptible, principalmente a travs de las manos, la boca o durante las relaciones sexuales. En este tipo de transmisin no intervienen objetos intermediarios. Indirecta

Se produce a travs de: Objetos inanimados contaminados (fmites), entre los que destacan: ropas, toallas, pauelos, utensilios para comer, monedas, ropa de cama, inyectadoras, entre otros. Animales infectados. Aerosoles (gotas de saliva) que contienen microorganismos expelidos al toser, estornudar o hablar (menos de un metro de distancia).

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TRANSMISIN A TRAVS DE VEHCULOS Cuando la transmisin se produce a travs del aire, el agua, alimentos contaminados, la sangre y otros fluidos corporales contaminados. TRANSMISIN A TRAVS DE VECTORES Los artrpodos constituyen el principal grupo de vectores que transportan agentes patgenos de un husped a otro. TRANSMISIN A TRAVS DE LA PLACENTA (Transplacentaria) Algunas agentes causantes de enfermedades pueden ser transmitidos por va placentaria de la madre al hijo. Como ejemplo de enfermedades bacterianas transmitidas a travs de la placenta tenemos la sfilis y entre las virales la rubola. PROCESO INFECCIOSO Penetracin Alcance del medio interno rico en nutrientes .Han de atravesar epitelios, con frecuencia gruesos y protegidos. Adherencia especfica a tejidos del husped o entrada en clulas especficas pasivamente o activamente. Reproduccin Propagacin

Vas para nueva infeccin Areos: Tos, estornudo Entricos aguas residuales y ventores mecnico Comportamiento: Rabia Acceso a vectores a otros organismos relacionados trficamente

3.-LA ESPECIFICIDAD TISULAR. Este factor de especificidad se trasmite a travs de un cdigo gentico en el sistema ADN, y ARN, a la estructura celular en su plano molecular y sirve de transporte a los estmulos Existen dos mecanismos para lograr la regeneracin: INDUCTIVO: Se puede verificarse mediante el uso de metanolitos celulares (cidos nucledos, nucletidos, protenas nucleares, protenas de tejidos desnaturalizados); por medio de sustancias qumicas (Colorantes) y por medios traumticos ( radiaciones, ultrasonidos y otros), que liberan sustancias inductoras al contorno llamado mecanismo de repuesto. LA REGENERACION POR MITOSIS: La regeneracin reconstructiva, en el sentido estricto no es un mecanismo de regeneracin tisular, por el solo hecho de que todas las reacciones complejas que tienen lugar en una regeneracin se halla presente, tanto en la regeneracin fisiolgica como en la regeneracin reconstructiva

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Sistema cardiovascular: (Circulatorio. venoso. arterial. hemopoyetico).

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Sistema tegumentario: (El tejido mesenquimatico primitivo genera el tejido


conectivo fibroso de la piel) ..

Sistema muscular: (Constituyen las clulas de los mioblastos). sistema genital: (Precursor de dicho sistema y conforma adems el tejido
intersticial del ovario y de los testculos).

Sistema inmunolgico: El resultante teraputico puede ser muy importante, ya


que el aporte de sustancias y clulas mesenquimatosas primitivas promueven el sistema retculo endotelial,

Sistema ocular: Al sistema ocular el mesodermo le provee adems de la


esclertica y la coroides, la envoltura fibrosa, la tnica vascular que rodea el epitelio de la retina, los vasos de irrigacin y los msculos de sostn extrnsecos.

Sistema auditivo: Al odo el mesnquima primitivo le provee el laberinto seo,


los espacios perilinfaticos, las rampas del conducto coclear y el tejido cartilaginoso flojo. HIDROLISADOS O LISADOTERAPIA. Estas sustancias cumplen bsicamente 3 tipos de actividades: a.- Estructural: conforman la membrana y la estructura sostn de toda clula. b.- Qumica: Actan como catalizadora positiva o negativa en el 100% de los procesos qumicos vitales de la clula, se trata de las enzimas. c.- transporte: acopladas en otros tipos de molculas, actan como caries o molculas guias encargadas de llevar a sitios especficos a estas molculas, aun cuando de atravesar membranas se trate.

En el caso del citoplasma, en ella se producen prcticamente todas las sntesis y


dems hay transporte fluido en forma permanente. En los lquidos inter e intracelulares, el transporte es la actividad por excelencia. todas estas actividades y otras ms, se realizan gracias al carcter coloidal del medio.

Por su constitucin, representan los productos ideales para la restauracin del equilibrio orgnico de la clula, ya que tienen influencia sobre:

El equilibrio acido- base (pH) estimulacin de los procesos de oxidacin y


reduccin. Regeneracin de tejidos y rganos, por el aporte de materiales plsticos. Neutralizador se sustancias toxicas.

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Metabolismo del sistema nervioso y a traves de l, sobre toda la esfera de


relaciones y funciones. La dispersin de los sistemas coloidales del organismo.

4.- ADHERENCIA Es una unin especfica entre protenas de la cpside vrica y receptores especficos de la superficie celular del husped, pero algunos bacterifagos tambin son capaces de adherirse a los flagelos, vellosidades (pili) o cpsulas presentes en la superficie de la bacteria hospedera. 5.- PENETRACION Capacidad de las bacterias o de sus productos, de introducirse en una clula eucariota, con la posibilidad de atravesarlas, tras la colonizacin. VAS DE PENETRACIN Los patgenos penetran en sus hospederos a travs de tres vas principales directamente por la superficie de la planta, a travs de aberturas naturales o a travs de heridas. Las bacterias son incapaces de penetrar directamente en sus hospederos por carecer de alguna estructura de penetracin directa. Virus, viroides y micoplasmas slo consiguen tener acceso al hospedero a travs de heridas. PENETRACIN DIRECTA Es el tipo de penetracin ms comn de los hongos y nematodes. Los hongos se fijan a la superficie del hospedero a travs del apresorio y lanzan a su interior una pequea hifa denominada peg de penetracin. Esta penetracin es el resultado de fuerzas mecnicas ejercidas por el patgeno sobre la superficie del hospedero. Sumado a la accin de enzimas liberadas por el patgeno. PENETRACIN A TRAVS DE ABERTURAS NATURALES La mayora de hongos y bacterias entran a las plantas a travs de sus estomas, algunas penetran a travs de hidtodos, estigmas y nectarios de las flores y lenticelas. Bacterias, virus, viroides, micoplasmas, nematodes y gran parte de los hongos pueden penetrar en sus hospederos a travs de heridas. Heridas como picadas de prueba o galeras abiertas por vectores de hongos. La abrasin causada por partculas de suelo es suficiente para causar epidemias de Pseudomonas syringae pv glycinea en soja. 6.-COLONIZACION Y CRECIMIENTO DE LOS PARASITOS Colonizacin y crecimiento de las bacterias Capacidad de las bacterias para establecerse y multiplicarse en la piel y/o mucosas del husped en cantidades suficientes que permitan mantener un cierto nmero poblacional; sin que su presencia establezca o determine Respuestas clnicas ni inmunolgicas. Colonizacin y crecimiento de los virus La capacidad de colonizacin de los virus depende de la eficacia con la que sintetizan sus protenas. Colonizacin y crecimiento de los hongos La colonizacin se refiere al proceso en el cual las esporas del hongo se multiplican y se 7.-LOCALIZACION EN EL CUERPO. Los parsitos que viven dentro del organismo hospedador se llaman endoparsitos y aquellos que viven fuera, reciben el nombre de ectoparsitos.

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1.- ENDOPARASITOS: Un endoparsito es un parsito que vive en el interior de su husped. Existen endoparsitos que atacan plantas (endfitos) o animales (endozoos). Se pueden clasificar diferentes tipos de endoparsitos segn el tejido atacado, la fisionoma, etc. Este es el parsito interior ms comn. Muchas enfermedades son provocadas por endoparsitos, entre ellas la malaria y la leishmaniosis. Puede llegar a producir enfermedades en los aparatos reproductores masculinos y femeninos, en los cuales las infecciones pueden ser de un alto nivel de gravedad. En las cavidades internas y tejidos del hospedador habitan los endoparsitos y se clasifican de esta manera: Intestinales, si habitan en el canal alimentario, vescula biliar, hgado y sus conductos. Tambin en la cloaca de reptiles, anfibios y aves. Son viscerales si se localizan en las diferentes vsceras y se subdividen en cavitarios o celozoicos si es que viven en cavidades internas, incluyndose los vasos sanguneos y tisulares como as tambin histozoicos si es que parasitan los tejidos. EJEMPLOS: Virus: VIH, GRIPE., etc. Bacterias: E. COLI, LISTERIA MONOCYTOGENES,

STAPHYLOCOCCUS AUREUS .Nematodos 2.- ECTOPARASITOS: Un ectoparsito es un parsito que vive en la superficie de otro organismo parasitado (husped) como las pulgas y piojos. Algunos ectoparsitos, como las cochinillas en las plantas, o los aradores de la sarna en animales, establecen una asociacin permanente con su husped, a menudo, con una fuerte reduccin anatmica. Otros, como es la regla en los parsitos hematfagos, se desplazan activamente en busca de individuos a los que explotar. Una clase notable de relaciones simbiticas es la de los animales que actan como limpiadores de ectoparsitos. EJEMPLOS: Cochinillas, pulgas, piojos, aradores de sarna. 8.- ENZIMAS QUE PARTICIPAN EN LA INVASION Muchos hongos patgenos muestran una especificidad hacia el rgano al cual se unen, de forma que normalmente no atacan a todas las partes de la planta hospedadora; algunos colonizan partes areas mientras que otros infectan zonas situadas por debajo del suelo. Los hongos patgenos emplean diferentes mecanismos para unirse a la superficie de la planta hospedadora. 9.-DEFENSAS DEL HOSPEDERO 1.-RESPUESTAS DE INMUNIDAD NATURAL

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La inmunidad natural es mediada por factores humorales y celulares generan una serie de reacciones locales y sistmicas que limitan la expansin del parasito una de las repuestas naturales de inmunidad natural es la piel. LA PIEL La piel como barrera fsica es muy efectiva contra muchos parsitos pero no impide el ingreso de aquello que utilizan insectos hematfagos como vectores. Algunos otros parsitos han desarrollado una manera para poder penetrar la piel pero la manera ms efectiva de prevenir los diferentes tipos de parsitos es la higiene. 2.-RESPUESTAS DE LA INMUNIDAD ADAPTIVA El individuo que sufre una infeccin parasitaria establecer una respuesta inmune especfica contra el parasito invasor. En esta respuesta inmune participan anticuerpos y clulas efectoras T. Los mecanismos que permiten actuar a los anticuerpos sobre los parsitos son: NEUTRALIZACION.-Bloqueo de la adherencia parasitaria en la clula hospedera INTERFERNCIA FISICA.- Obstruccin de canales parasitarios OPSONIZACION.- La opsonizacin por anticuerpos es el proceso por el que se marca a un patgeno para su ingestin y destruccin por un fagocito. La ozonizacin implica la unin de una opsonina, en especial, un anticuerpo a un receptor en la membrana celular del patgeno.

ALGUNAS PERSONAS EN CAMBIO CLASIFICAN A LAS DEFENSAS DEL HOSPEDERO DE LA SIGUIENTE MANERA: 1. 2. 3. INESPECIFICA: Defensa frente a la entrada del microorganismo Defensa tras el ingreso del microorganismo ESPECIFICA Defensa ms discriminatoria especializada

10.-REACCIONES A LA INFECCION La evidencia sugiere que las respuestas del hospedero a la invasin por un parsito proceden en la siguiente secuencia: Reaccin de fase aguda, Activacin de los linfocitos Tco precursores (TcoP), Reactivacin de los linfocitos Tco activados (TcoA), Activacin de los linfocitos Tco de tipo 1 o de tipo 2(Tcol o Tco2) Respuesta inmune mediada por clulas o por anticuerpos. Resolucin de la infeccin, cronicidad o muerte del hospedero.

Los parsitos presentan caractersticas que le permiten causar infecciones, que son:

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1.-Resistencia al medio externo: los huevos, quistes o larvas de los parsitos tienen cubiertas proteicas que los hacen resistentes al medio exterior, como a factores climticos, agentes qumicos como la lavandina, etc. 2.-Patogenicidad: se habla de infeccin parasitaria cuando un husped alberga parsitos; a menudo el husped no sufre dao producindose un estado de comensalismo. Si el husped presenta signos y sntomas como consecuencia del parasitismo, se habla de enfermedad parasitaria. Los factores del husped dependen de la edad, la raza, el estado inmunitario (SIDA, desnutricin, enfermedades concomitantes, etc.) Autoinfeccin: puede ser endgena o exgena. Autoinfeccin endgena es cuando el parsito se multiplica dentro del husped y la contaminacin se realiza dentro del mismo. En la autoinfeccin exgena la forma infectante pasa por el medio exterior (zona perianal) en un tiempo muy corto y vuelve al hospedero. Prepatencia: es el tiempo que transcurre entre el momento en que se produce la infeccin en el hospedero y el momento en que ste elimina las formas infectantes. Viabilidad: las formas infectantes deben ser viables y resistentes al medio externo para asegurar la continuidad del ciclo y su permanencia. Longevidad: cuanto ms vive un parsito mayor es la posibilidad de emitir al medio externo las formas infectantes. Fecundidad: el nmero de huevos que se emiten al exterior permite la diseminacin de la infeccin.

MECANISMOS DE ACCION PATOGENA DE LOS PARASITOS Los parsitos afectan al hombre de maneras muy diversas, dependiendo del tamao, localizacin, nmero, etc. Los mecanismos por los cuales los parsitos causan dao al husped son: Mecnicos: los efectos mecnicos son producidos por obstruccin o compresin, el primero sucede con los parsitos que se alojan en conductos del organismo, como en la obstruccin del intestino o vas biliares por Ascaris lumbricoides. Traumticos: los parsitos pueden causar traumatismos en los sitios en donde se localizan por ejemplo Trichuris trichiura, que introduce su extremo anterior en la pared del colon. Bioqumicos: algunos parsitos producen sustancias txicas o metablicas que tienen la capacidad de destruir tejidos, por ejemplo, las sustancias lticas producidas por Entamoeba histolytica. Inmunolgicos: los parsitos y sus productos de excrecin derivados del metabolismo, producen reacciones de hipersensibilidad inmediata o tarda, como sucede en las manifestaciones alrgicas a los parsitos o la reaccin

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inflamatoria mediada por clulas, con formacin de granulomas que se presenta en algunas parasitosis. Exfoliativo: estos mecanismos se refieren al consumo de elementos propios del husped por parte de los parsitos por ejemplo la prdida de sangre por succin, en el caso de las uncinarias.

EVASION DE LA RESPUESTA INMUNE Cuando el parsito penetra en un organismo, ste tratar de eliminarlo y el parsito tratar de evitar el ataque del hospedero mediante el sistema inmunolgico y permanecer dentro del mismo. Se conocen algunos mecanismos mediante los cuales los parsitos eluden la respuesta inmune del husped: Descarte de antgenos altamente reactivos. Depresin de la inmunidad del hospedero. Neutralizacin de los efectores de la inmunidad. Evasin de los efectores de la inmunidad. Produccin de antgenos fugaces. Produccin de antgenos solubles. Desviacin de la inmunidad protectora. variacin antignica

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