Universidade de Aveiro Ano 2009

Departamento de Biologia

Jos Manuel Neto Santos

Utilizao de invertebrados bentnicos em ecotoxicologia sedimentar

Universidade de Departamento Biologia Aveiro Ano 2008/ 2009

Jos Manuel Neto Santos

Utilizao de invertebrados bentnicos em ecotoxicologia sedimentar

Dissertao apresentada Universidade de Aveiro para cumprimento dos requisitos necessrios obteno do grau de Mestre em Toxicologia e Ecotoxicologia, realizada sob a orientao cientfica do Doutor Victor Quintino, Professor Auxiliar do Departamento de Biologia da Universidade de Aveiro e da Doutora Rosa Freitas, Investigadora Auxiliar do Laboratrio Associado CESAM da Universidade de Aveiro.

Dedico este trabalho minha mulher e ao meu filho, pelo tempo que de mim renunciaram.

O jri
Presidente

Professor Doutor Antnio Jos Arsenia Nogueira

Universidade de Aveiro

Vogal- Arguente Principal

Doutora Susana Patrcia Mendes Loureiro

Universidade de Aveiro

Vogal- Orientador

Professor Doutor Victor Manuel dos Santos Quintino

Universidade de Aveiro

Vogal- Co- Orientador

Doutora Rosa de Ftima Lopes de Freitas

Universidade de Aveiro

Agradecimentos

Quero deixar por escrito, o reconhecimento e o agradecimento sincero aos meus Orientadores, Professor Doutor Victor Quintino e Doutora Rosa Freitas.

palavras-chave

Anfpodes, Corophium, toxicidade sedimentar, ensaio agudo, ensaio crnico

resumo

Os ensaios de ecotoxicologia sedimentar so uma ferramenta importante para a avaliao dos ecossistemas marinhos e estuarinos. A fauna bentnica ser das que primeiro se recente com os excessos de poluio, devido ao seu habitat natural se localizar no meio sedimentar, local ecologicamente bastante frgil e que ao ser afectado, trar implicaes importantes a todos os diferentes estratos que constituem o ecossistema. Neste trabalho, realizada uma reviso bibliogrfica sobre ensaios de ecotoxicologia sedimentar procurando dar nfase a um dos seus principais intervenientes: os anfpodes, em particular do gnero Corophium. Por outro lado, tentamos traar uma panormica geral sobre a forma como esta questo est a ser lidada por diferentes pases, com apresentao de alguns casos de estudo de Portugal.

keywords

Amphipods, Corophium , sediment toxicity, acute bioassay, cronic bioassay

abstract

Sediment ecotoxicological tests are an important bioassessment tool for marine and estuarine ecosystems. The benthic fauna is often the first to be affected by excesses pollution, the sedimentary habitat is ecologically fragile and when affected, will bring important implications for all other ecosystem strata. This work presents a literature review on the subject of sediment ecotoxicological tests, with emphasis in one of its key players, the amphipods, namely of the genus Corophium. The work gives an overview on how this issue is being handled in different countries, and presents case studies group relative to Portugal.

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ndice Pag.
1.Introduo____________________________________________________________9

2. Avaliao ecotoxicolgica dos sedimentos__________________________________11 2.1 A importncia da avaliao da qualidade dos sedimentos______________________11 2.2 Ensaios de toxicidade: organismos-teste___________________________________13 2.3 Ensaio agudo vs ensaio crnico _________________________________________17 2.4 Conceitos a ter na utilizao de ensaios de toxicidade________________________18 2.5 Uso simultneo de multiplos descritores da Qualidade Sedimentar)_____________21 3. Utilizao de anfpodes em ensaios de toxicidade nas ltimas duas dcadas________25

4. Concluso____________________________________________________________51

Bibliografia_____________________________________________________________53

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1. Introduo
Nos ltimos anos, a qualidade dos ambientes marinhos, estuarinos e de guas doces, tornou-se foco de ateno, havendo hoje em todo o mundo interesse na sua conservao e na recuperao dos locais sujeitos a presses antropognicas. Esta recente preocupao coincidiu com o facto de os sedimentos marinhos serem reconhecidos como um dos maiores reservatrios de substncias txicas (entre outros, Chapman, 1995; Chapman, 2004; Adams, 2005), o que levou ao desenvolvimento de diversos mtodos de avaliao da sua qualidade. Pela bibliografia consultada podemos perceber que estes mtodos tm-se revelado extremamente teis na avaliao dos nveis de contaminao e do seu significado ecolgico nos diferentes ambientes aquticos, funcionando como instrumentos importantes para a proteco e conservao dos ecossistemas e tambm da sade pblica (Chapman, 1995; Silva et al., 2004; Castro et al., 2006; R et al., 2007). A deteco de efeitos txicos a um nvel de organizao biolgica abaixo do organismo pode servir como um sinal de alerta precoce para os potenciais efeitos nos nveis superiores. A bioacumulao num elo inferior da cadeia alimentar, pode levar sua captao e a possveis efeitos txicos que se podem manifestar em qualquer elo da cadeia at ao consumidor final. Se se poder estabelecer uma relao entre um efeito ao nvel da populao e a bioamplificao de contaminantes, ento ser de implementar uma aco preventiva (Hellou et al., 2008). Nos ecossistemas aquticos a macrofauna bentnica desempenha um importante papel. Como principais consumidores secundrios, estes organismos representam um importante elo de ligao entre os produtores primrios e os nveis trficos mais elevados (Allaby, 1999). Constituem tambm uma importante fonte de alimento para peixes e crustceos (Allaby, 1999) e podem melhorar a qualidade da gua uma vez que grande parte dos organismos pertencentes macrofauna bentnica se alimenta por filtrao das partculas em suspenso (Holand, 1990). As populaes bentnicas esto representadas em diversos grupos taxonmicos que, de uma forma geral, se relacionam com todos os aspectos do habitat aqutico, nomeadamente ao nvel das diferentes estratgias de alimentao, dos modos reprodutivos, das suas caractersticas especficas de vida e da tolerncia fisiolgica s condies ambientais. A maioria dos organismos bentnicos tm mobilidade limitada no podendo desta forma evitar a presso ambiental a que podero

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estar sujeitos. Como resultado, as respostas de algumas espcies servem como indicadores, privilegiados, de mudanas na qualidade dos ambientes aquticos e, mais concretamente, das alteraes introduzidas nos sedimentos onde residem (EPA, 1992). Pelos motivos atrs referidos, vrios investigadores (Chapman et al., 1987; Defew et al., 2002; Borja et al., 2003; Belan, 2003; Silva et al., 2004; Reiss e Krncks, 2005; Bigot et al., 2006; Castro et al., 2006; Scarlett et al., 2007; Picone et al., 2008, entre outros) tm utilizado invertebrados bentnicos em estudos cujo objectivo se centra na avaliao da qualidade dos sedimentos nomeadamente no que diz respeito aos efeitos biolgicos e ecolgicos associados ao seu grau de contaminao. Pela bibliografia consultada, fcil perceber que os testes de toxidade sedimentar efectuados em laboratrio constituem uma ferramenta importante que juntamente com outras, como por exemplo a anlise qumica dos sedimentos ou a avaliao da estrutura da comunidade bentnica autctone, contribuem para uma avaliao mais abrangente dos problemas relacionados com o meio ambiente. Deste modo possvel atravs das amostra sedimentares recolhidas, averiguar se houve alteraes e se essas alteraes se devem ou no, presena de txicos nos sedimentos (Chapman, 2007). objectivo do presente trabalho, fazer uma anlise sumria sobre a situao do emprego da fauna bentnica, nomeadamente o uso de anfpodes, nos testes de avaliao do estado do ambiente sedimentar.

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2. Avaliao ecotoxicolgica dos sedimentos

2.1 A importncia da avaliao da qualidade dos sedimentos
A contaminao dos ecossistemas marinhos devida principalmente a actividades antropognicas e particularmente significativa em ambientes costeiros (Power e Chapman, 1992). Estes ltimos so afectados por inmeras fontes de perturbao, tais como descargas de efluentes urbanos e industriais, contaminantes transportados por rios e esturios e enxurradas sobre terrenos agrcolas. Deste modo a avaliao da qualidade dos sedimentos uma componente importante na avaliao da qualidade dos ambientes aquticos, uma vez que os sedimentos, geralmente, funcionam como um grande reservatrio de contaminantes (Power et al., 1991; Lamberson et al., 1992; Chapman, 1995; Chapman, 2004; Adams, 2005), com concentraes muito superiores s existentes na coluna de gua (Chapman, 1986). O acumular de compostos txicos, bem como um aumento da matria orgnica nos sedimentos , frequentemente, traduzido em alteraes da estrutura das comunidades da fauna bentnica (Pearson e Rosenberg, 1978; Quintino et al., 1989; Silva et al., 2004; Castro et al., 2006). Portugal, quer por legislao interna, quer por legislao comunitria, est obrigado ao cumprimento de leis que visam a proteco e salvaguarda dos ambientes aquticos, como exemplo o Decreto-Lei n 236/98 que Estabelece normas, critrios e objectivos de qualidade com a finalidade de proteger o meio aqutico e melhorar a qualidade das guas em funo dos seus principais usos. Relativamente avaliao da qualidade dos sedimentos convm esclarecer algumas definies comummente utilizadas, mas muitas vezes usadas de forma incorrecta. Assim, definies atribudas a sedimentos de referncia e a valores iniciais dos sedimentos, variam entre os programas de investigao e mesmo entre investigadores. Para evitar esta confuso, a definio destes dois sedimentos precisa de ser claramente indicada para cada estudo. Alguns investigadores utilizam estas definies indiferentemente, enquanto outros definem sedimentos de referncia como o modelo ou os melhores valores para se proceder comparao com outros sedimentos, enquanto que os valores iniciais dos sedimentos so definidos como um sedimento histrico existente na rea e que se encontra isento de influncias antropognicas. Apesar de estas duas definies no representarem o mesmo, elas no se excluem mutuamente, um sedimento de referncia pode representar valores

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iniciais do sedimento e estes, por sua vez, tambm podem ser usados como um sedimento de referncia (Chapman et al., 2002). Em avaliaes tpicas de sedimentos, nos testes de toxicidade feita a comparao com o sedimento de referncia, ou com uma condio tida por referncia. Do ponto de vista tcnico, um sedimento de referncia seria aquele no qual estariam ausentes todos os produtos qumicos que poderiam causar problemas (ou seja, um sedimento no contaminado, mas por outro lado, idntico ao que se quer testar). Isto permitiria uma avaliao em relao ao ou aos produtos qumicos presente(s) no sedimento que representavam um perigo efectivo. No entanto, tal situao ideal raramente existe em condies naturais (Chapman et al., 2002). Avaliaes efectuadas com recurso ao sedimento de referncia so, por definio, apenas estimativas do perigo, calculadas tomando como base comparaes de dados estatsticos. Quando essas comparaes so feitas, elas devero ser adequadas avaliao que se pretende realizar. Por exemplo, um porto no deve ser comparado com uma rea protegida, a menos que se tenha tomado a deciso de eliminar esse porto e tornar a rea protegida (Chapman et al., 2002). Contudo, a extrapolao dos resultados dos testes para o ambiente e ao mesmo tempo, a medio do sucesso ou o fracasso de decises de gesto, pode exigir a utilizao de diferentes parmetros de avaliao, uma vez que o que est para ser protegido e o que avaliado, muitas vezes diferente, devido essencialmente, a consideraes de carcter prtico. Esses parmetros de avaliao so seleccionados numa fase inicial do problema relativo a uma avaliao do risco ecolgico (EPA, 1992) e reflectem uma componente ecolgica (por exemplo, espcies) ou uma funo a ser protegida e, quando adequado, so expressos ao nvel da populao (Chapman et al., 2002). Seria desejvel a existncia de um mecanismo que permitisse testar hipteses de risco que relacionassem, de forma clara, a ligao existente entre o agente agressor e o impacto negativo. Isto na maioria dos casos no fcil de fazer, mas uma das formas de se obter sucesso neste tipo de abordagem, considerar como componente fundamental formulao das hipteses, a identificao dos agentes agressores que representem risco potencial (Chapman et al., 2002). ainda importante referir que, se por um lado os dados fornecidos pela comunidade bentnica residente juntamente com os dados sobre toxicidade de sedimentos so essenciais para analisar dois critrios de causalidade fundamentais: (1) consistncia da

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associao entre factor de impacto e efeito(s), e (2) gradiente (no tempo ou no espao) da relao entre a dose e a concentrao (Chapman, 2007), por outro lado, a avaliao do risco ecolgico (ERA), necessita de dar resposta a duas questes igualmente importantes, em relao aos sedimentos: - Quais so os agentes agressores presentes nos sedimentos que motivam preocupao, e se eles representam situao de perigo para os receptores ecolgicos avaliados? - Qual a probabilidade de estes agentes agressores afectarem negativamente esses receptores ecolgicos? Refira-se ainda que a bioacumulao de contaminantes nos tecidos dos organismos em contacto com o sedimento tambm motivo de preocupao, tanto sob o ponto de vista da sade humana como da componente ecolgica (Power e Chapman, 1992). Posto isto, podemos afirmar que os parmetros do ensaio de toxicidade devem ser ligados s hipteses de risco especfico que relacionam os factores de impacto a possveis perigos, e os resultados desses testes devero ser interpretados no contexto da populao ou da comunidade que estamos a tentar analisar e proteger. Embora a significncia estatstica possa ter um papel de algum relevo, na avaliao do risco de contaminantes existentes nos sedimentos, ela no deve servir de suporte directo quantificao do risco ecolgico. Da que em matria de avaliao dos sedimentos, as decises devam ser tomadas com base na magnitude e extenso dos impactos adversos estabelecidos, previamente, nos parmetros de avaliao, e no apenas, na simples observao dos resultados obtidos em testes de toxicidade (Chapman et al., 2002).

2.2 Ensaios de toxicidade: organismos-teste

Os organismos bentnicos pertencentes endofauna vivem nos sedimentos que podem variar da vasa areia e cascalhos, podendo habitar tanto em esturios como noutros ambientes marinhos ou em gua doce (King et al., 2006). A maioria destes habitats alberga um grande nmero de organismos bentnicos, incluindo aneldeos, moluscos e crustceos. Todos estes organismos possuem mecanismos que lhes permitem enterrar-se nos sedimentos (Allaby, 1999). A U. S. Environmental Preotection Agency (U. S. EPA) tem mostrado que o maior potencial de impacto ambiental ocorre sobre o ambiente bentnico, dado que os organismos bentnicos vivem enterrados no sedimento e por causa disso,

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esto expostos aos contaminantes (associados ao sedimento) durante longos perodos de tempo. Devido ao facto de as comunidades bentnicas poderem ser afectadas estrutural e funcionalmente pela qualidade do sedimento, geralmente de forma previsvel, a avaliao da estrutura da comunidade bentnica, constitui um instrumento valioso para aferir da qualidade dos sedimentos e dos seus efeitos sobre uma grande quantidade de componentes biolgicos do ambiente marinho, estuarino e dos ecossistemas de gua doce. A utilizao da fauna bentnica de forma sistemtica e coerente, com objectivo de controlo, monitorizao e avaliao da qualidade dos sedimentos, tem j mais de 30 anos. De facto diversos estudos tm demonstrado que os macroinvertebrados bentnicos, como grupo, so muitas vezes o melhor instrumento de avaliao da qualidade dos sedimentos. Historicamente, as comunidades bentnicas tm sido utilizadas como indicadores sensveis e eficazes dos impactos da poluio sobre os ecossistemas marinhos e estuarinos. Alm disso, estas comunidades tm-se revelado extremamente teis em estudos relativos eficcia da gesto de ambientes aquticos. Adicionalmente, informaes sobre as alteraes na populao bentnica e nos parmetros da comunidade devidas s caractersticas dos sedimentos, podem ser usadas para distinguir variaes naturais de mudanas devidas actividade humana (Holand, 1990). Existe uma base de dados substancial sobre o tipo de respostas destes animais em relao a xenobiticos, nutrientes e outras perturbaes fsico-qumicas (Burton, 1992). No entanto, e apesar do que atrs se disse, h investigadores, tal como Moiseenko (Moiseenko et al., 2008), que entendem, sobretudo quando se trata de poluio existente na gua, que os peixes em comparao com os invertebrados so mais sensveis a um maior nmero de txicos e constituem um bom teste prtico na avaliao do estado dos ecossistemas. Nestes estudos de toxicidade sedimentar, dada preferncia a determinado tipo de animais como por exemplo, os bivalves, os poliquetas e os anfpodes: Os bivalves so um grupo extremamente bem sucedido e diversificado. So animais exclusivamente aquticos que, tal como os anfpodes, podem ocorrer em ambientes de salinidade diversa como gua salgada, doce ou salobra. A maioria das espcies bentnica sendo que existem bivalves ssseis que se fixam ao substrato atravs do bisso, uma segregao fibrosa, enquanto que outras espcies vivem enterradas nos fundos arenosos. As espcies que vivem soltas, podem deslocar-se atravs de propulso

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conseguida por expulso de gua sob presso (Allaby, 1999). Alguns investigadores utilizam-nos em ecotoxicologia sedimentar, entre outros, Ruiz et al. (1994) e Quintino et al. (2008). Os poliquetas incluem cerca de 8.000 espcies aquticas. A grande maioria das espcies tpica de ambiente marinho, mas algumas formas ocupam ambientes de gua salobra. Os poliquetas distribuem-se desde a zona intertidal at profundidades que ultrapassam os 5000 metros. A classe Polychaeta geralmente dividida em dois grupos: Errantia e Sedentaria. Como o prprio nome indica, os poliquetas errantes tm vida livre seja nadando na coluna de gua ou como organismos bentnicos mveis. A maioria das espcies deste grupo predadora de pequenos invertebrados ou detritvora. Os poliquetas sedentrios esto adaptados para viver permanentemente em tubos escavados no substrato ou fixos a rochas. So na maioria dos casos organismos detritvoros ou filtradores (Allaby, 1999). So tambm usados pelos investigadores de ecotoxicologia sedimentar como o caso, entre outros, de Belan (2003) e Quintino et al. (2008). Os anfpodes possuem uma relevncia ecolgica bastante grande uma vez que se trata de um dos principais componentes da biomassa e da diversidade, em ambientes caracterizados por um leque de salinidades muito variadas (R, 1996). Eles so uma fonte primria de alimento para peixes e outros animais que se alimentam tambm de vegetais e de detritos (Allaby, 1999). Por outro lado, existe uma base de dados substancial sobre o tipo de respostas destes animais em relao a diversas perturbaes fsico-qumicas (ASTM, 2003). De uma forma geral, as melhores espcies para avaliar a toxicidade dos sedimentos devem fornecer uma indicao adequada dos perigos ligados aos agressores qumicos existentes no sedimento. Os anfpodes so reconhecidos como a escolha mais acertada para a avaliao de toxicidade de muitos sedimentos, e os resultados obtidos nos testes podem ser correlacionados positivamente com alteraes nas comunidades bentnicas (Swartz et al., 1994; Long et al., 2001; R et al., in press). Poucos grupos taxonmicos cumprem todos os critrios necessrios para a realizao de bioensaios com sedimentos (ver seco 2.4), no entanto, os anfpodes revelaram-se extremamente teis no alcanar dos objectivos propostos para os diferentes ensaios, sendo por isso, comummente utilizados em testes de toxicidade nos sedimentos (Costa et al., 1996; R, 1996; Peters e Ahlf, 2005; King et al., 2006; Heuvel-Greve et al.,

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2007; Melo e Nipper, 2007; Prato et al., 2008). So organismos abundantes, componentes importantes das comunidades bentnicas estuarinas e marinhas, esto amplamente distribudos, vivem em contacto directo com os sedimentos, so tolerantes a uma vasta gama de diferentes variveis ambientais e so adequados para o manuseamento e cultura em laboratrio (Casado-Martinez et al., 2007). No entanto, deve referir-se que a sensibilidade de cada espcie aos sedimentos contaminados, depender do tipo de comportamento que possui (escavador, tipo de alimentao e taxas de filtrao), do tipo de exposio ao txico (dissolvido na gua vs no sedimento vs no alimento), fisiologia orgnica (assimilao e efeitos txicos) e a fase da vida (juvenis vs adultos) (King et al., 2006). Os trabalhos de Prato e seus colaboradores (2008) realizados com anfipodes, alertam para o facto de uma boa espcie a ser utilizada em ensaios de toxicidade, alm de satisfazer os critrios necessrios investigao experimental, como ter um curto ciclo de vida e ser sensvel aos contaminantes existentes nos sedimentos, deve tambm ser tolerante em relao s variveis ambientais abiticas, como por exemplo a temperatura. Dentro dos anfpodes, o gnero Corophium dos mais utilizados em ensaios de toxicidade sedimentar. um animal relativamente pequeno, podendo alcanar comprimentos mximos na ordem dos 12 mm (com excluso das antenas), atingindo a maturidade sexual com comprimentos da ordem dos 5 mm (Percy, 1999). Por outro lado, sabe-se atravs de estudos experimentais com Corophium, que a temperatura, a salinidade e o tipo de sedimento afectam a sobrevivncia, a maturao sexual e o nmero de recmnascidos (R, 1996; Prato et al., 2008). Os estudos efectuados com este organismo mostram que no s extremamente abundante e prolfico em numerosos tipos de meio aquticos, como parece ser tambm uma das estruturas fundamentais para o funcionamento sustentado de todo o ecossistema em que se insere (Percy, 1999). Corophium volutator pertence a este gnero e um exemplo duma espcie utilizada em ensaios de toxicidade para avaliao do sedimento, estando o seu uso generalizado e regulamentado, caso dos EUA e Canada, mas tambm na Europa (SETAC Europe, 1993 e ISO 16712, 2005). Em relao utilizao de anfipodes em testes de toxicidade sedimentar, ainda importante referir que alguns autores salientam que o facto de se utilizarem animais selvagens, colhidos directamente do leito sedimentar, pode estar ligado a vrios inconvenientes importantes: os animais esto sujeitos flutuao e variabilidade sazonal

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da populao (entre outros, R, 1996); devido contaminao existente no local de amostragem pode ocorrer que o organismo-teste seja tolerante a determinado tipo de contaminantes (Traunspurger e Drews, 1996). Da Peters e Ahlf (2005), entenderem que para a execuo deste tipo de bioensaio se torna importante o cultivo destes organismos sob condies padronizadas de laboratrio, mostrando ser possvel a cultura em laboratrio de C. volutator. Note-se, no entanto, que j em 1996, R, no seu estudo sobre a cultura laboratorial de C. multisetosum, defendia o mesmo.

2.3 Ensaio agudo vs ensaio crnico

Embora os ensaios de toxicidade no sejam considerados como indicadores precisos dos efeitos ambientais so, em todo caso, considerados como o melhor mtodo disponvel para integrar os vrios efeitos dos contaminantes (Long et al., 2001). Em termos de durao do teste relativamente ao ciclo de vida das espcies em estudo, os ensaios agudos so aqueles que abrangem um perodo de tempo relativamente mais curto, quando comparados com os ensaios crnicos ou de ciclo de vida completo, pois so estes onde a exposio ocorre durante a maior parte do ciclo de vida dos organismos, permitindo mesmo que este se complete durante o tempo do ensaio. A falta de protocolos para a exposio crnica e de ciclo de vida completo (crescimento e reproduo) foi reconhecida durante os anos 90 (Lamberson et al., 1992), em particular para o sistema estuarino (Chapman e Wang, 2001). por esta razo que no surpreende que a maioria das avaliaes da toxicidade de sedimentos ou as primeiras abordagens de avaliao de risco ecolgico nos sedimentos contaminados, ainda usem respostas aliceradas essencialmente em testes de toxicidade aguda (Ingersoll et al., 1997; Long et al., 2001). Estudos recentes indicam que na abordagem de avaliao biolgica dos sedimentos, onde se inclua uma fase inicial de anlise ecotoxicolgica exaustiva, no devemos confiar exclusivamente no tipo de resposta aguda, embora esta seja obtida a partir de testes laboratoriais com procedimentos mais simples e rpidos (Castro et al., 2006). De igual forma, Scarlett et al. (2007), alertam para a necessidade de ter presente que o emprego exclusivo de testes agudos, embora muito teis para a identificao de produtos qumicos altamente txicos, no servem para testar eventos vitais tais como a reproduo e a muda, durante os quais a sensibilidade aos txicos pode estar aumentada. Alm disso, os

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sedimentos marinhos e estuarinos so mais susceptveis de conter contaminantes txicos em quantidades moderadas, que podem no causar uma mortalidade aguda significativa, mas influenciarem de forma muito substancial, por exemplo, o crescimento e a reproduo. De facto, embora os ensaios agudos sejam uma ferramenta vlida e normalizada (ISO, 2005), os ensaios crnicos so considerados mais sensveis s perturbaes induzidas no sedimento e podem, assim, proporcionar um maior grau de proteco ambiental. Efeitos subletais, como a reproduo ocorrida com baixas concentraes do contaminante, podem tambm ser utilizados para prever efeitos mais subtis ao nvel da populao. Este facto torna os ensaios crnicos ecologicamente mais relevantes sendo, ao mesmo tempo, uma ferramenta til para a avaliao do risco em cenrios realistas de exposio ambiental (Heuvel-Greve et al., 2007). Heuvel-Greve et al. (2007) por exemplo, demonstram que com os parmetros crescimento e reproduo, o ensaio crnico que levaram a cabo, incrementou 7 a 18 vezes a sensibilidade amnia e aos nitritos quando comparado com o ensaio agudo padronizado (10-dias, mortalidade). Actualmente, comeam a surgir testes onde a fronteira entre teste agudo e teste crnico se encontra mais esbatida, podendo um teste agudo possuir caractersticas tpicas de um teste crnico e vice-versa.

2.4 Conceitos a ter em conta na utilizao de ensaios de toxicidade

Vrios so os conceitos que devero ser tidos em considerao na preparao e execuo do ensaio de toxicidade. Entre os mais relevantes esto os que dizem respeito amostragem e armazenamento. Manter a integridade de uma amostra de sedimentos durante a sua remoo, transporte, armazenamento e testes em laboratrio extremamente difcil. Qualquer ruptura desse ambiente complica as interpretaes dos efeitos do tratamento, factores causais e comparaes in situ (ASTM, 1990). Trabalhos realizados por Melo e Nipper (2007), colocam em destaque a questo relativa ao acondicionamento e utilizao das amostras de sedimento, pois diversos factores, como por exemplo, a actividade bacteriana e a degradao de compostos orgnicos podem alterar, substancialmente as condies originais da amostra, influenciando assim, os resultados obtidos no estudo. A manipulao de amostras, preservao e tcnicas de armazenamento, tm de ser concebidas de forma a minimizar eventuais alteraes na composio da amostra, evitando

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ou retardando os processos qumicos e/ou actividade biolgica e evitando a sua contaminao. Deve ser recolhido suficiente volume de amostra para se poder fazer as anlises necessrias, criando o respectivo stock de amostras para eventual anlise posterior (por exemplo, para a repetio de ensaios). As amostras devero preencher completamente o recipiente de armazenamento, no permitindo a entrada de ar. Se a amostra for congelada, deve ser tida em considerao a respectiva expanso. O sistema de marcao dos recipientes onde so colocadas as amostras, deve ser testado antes de ser utilizado no campo, cuidando para que possa resistir imerso, secagem e congelao sem se soltar ou tornar ilegvel (USEPA / USACE, 1991). A escolha dos recipientes de amostra deve considerar o tipo de sedimento, tempo de armazenamento, degradao qumica e de composio da amostra. Dado que as primeiras horas so as mais crticas quanto a possveis alteraes na amostra, as etapas de preservao devem ser iniciadas rapidamente, aps a colheita dos sedimentos. A preservao, seja por meio de refrigerao, de congelao, ou adio de produtos qumicos, deve ser realizada no campo, assim que possvel. Se as tcnicas de preservao no poderem ser executadas no campo, as amostras devem ser conservadas de forma a manterem a sua integridade (ASTM, 1990). Verificou-se que os sedimentos podem ser armazenados a 4 C, sem alteraes significativas na toxicidade. A concluso dos testes dever ocorrer idealmente dentro de um perodo de armazenamento correspondente a duas semanas, mas o tempo de armazenamento vai depender das caractersticas tanto dos sedimentos como dos contaminantes (ASTM, 1990). O sedimento para as amostras de testes biolgicos deve ser crivado numa malha de 1mm, para remover todos os organismos vivos do sedimento antes do ensaio. Outros elementos retidos, no crivo, juntamente com os organismos, tais como fragmentos de conchas, cascalho, e detritos, devero ser registados e descartados evitando a presena de organismos indgenas no sedimento teste. A abundncia de organismos teste ou taxonomicamente semelhantes no sedimento a testar tornam a avaliao dos efeitos difcil de interpretar. Alm disso a presena de organismos pode afectar negativamente a sobrevivncia dos organismos teste (ASTM, 1990). As amostras de sedimentos para uso em ensaios devem ser bem homogeneizadas antes de as utilizar. A heterogeneidade dos sedimentos pode tornar por vezes difcil a

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interpretao dos resultados laboratoriais, por grande variabilidade de respostas intra sedimentos, ( R, 1996). R (1996), refere ainda que de primordial interesse o conhecimento da sensibilidade de adultos e jovens a variveis naturais como a temperatura, salinidade e teor em finos do sedimento para que possam ser determinados os limites de tolerncia da espcie para estes factores. Desta forma poder-se-o determinar as condies mais apropriadas para a preparao e realizao dos ensaios de toxicidade. Relativamente aos ensaios crnicos, R (1996) chama ateno para o facto de ser importante salientar que, em ensaios de rotina de ciclo de vida completo, a experincia do operador, quer na manuteno de culturas quer na manuteno e finalizao do ensaio, de primordial importncia, pois pode reflectir-se nos resultados obtidos. Assim, enquanto que a experincia do operador pouco determinar os resultados de toxicidade sedimentar aguda, considera-se que os ensaios de ciclo de vida completo requerem experincia prvia, antes de se obterem resultados reprodutveis e coerentes. Esta autora refere ainda preocupaes relativas ao ensaio crnico, nomeadamente: - os anfipodes recm-nascidos devem ser manipulados com muita ateno de maneira a que sejam afectados o menos possvel; - s devem ser inoculados os anfipodes que nadam com vigor e no apresentam qualquer sinal de perturbao; - antes de serem inoculados devem ser recontados para evitar erros de contagem; - ao renovar a gua esta deve estar mesma temperatura que a do ensaio para evitar choques trmicos; - o alimento seco no deve acumular-se sobre o sedimento nem a camada de gua deve estar com cor verde ou turva; - a renovao de gua no deve fazer perturbaes no sedimento. Tal como foi brevemente mencionado (seco 2.2), ao desenvolver um protocolo para o bioensaio de sedimentos marinhos e estuarinos, bastante importante a escolha da espcie-teste a utilizar. Para tal desejvel que a espcie que se vai utilizar possua uma srie de propriedades, nomeadamente (ASTM, 2003; King et al., 2006): (a) ampla tolerncia a diferentes graus de salinidade; (b) alta sensibilidade ao comum dos contaminantes existentes nos sedimentos; (c) alta taxa de sobrevivncia sob as condies de controlo;

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(d) ocupao dos micro habitats no ou preferencialmente, abaixo do interface sedimentosgua, para assegurar a mxima exposio aos contaminantes existentes nos sedimentos; (e) baixa sensibilidade para os sedimentos naturais variveis, tais como a dimenso das partculas orgnicas e contedos, para permitir testar uma ampla variedade de tipos de sedimento; (f) ampla distribuio geogrfica para aumentar a amplitude de sua aplicao como um teste que utiliza espcies animais; (g) facilidade de recolha, tratamento e manuteno em laboratrio; (h) importncia ecolgica nos sistemas estuarinos; (i) capacidade de ser cultivada ou em alternativa que esteja disponvel no campo durante todo o ano. No obstante as limitaes e cuidados a ter na utilizao da macrofauna bentnica em estudos de toxicologia sedimentar, as vantagens da utilizao de comunidades bentnicas para determinar a qualidade sedimentar, esto directamente relacionadas com a sua capacidade de fornecer uma base ecolgica para a avaliao da qualidade dos sedimentos trata-se efectivamente, de uma avaliao fundamentada na experimentao (Quintino et al., 1989; Costa et al., 1996; Castro et al., 2006).

2.5 Uso simultneo de mltiplos descritores de qualidade sedimentar

A avaliao do estado ecolgico dos sedimentos tende a ser muito especfica para cada caso ou situao, exigindo contudo, a necessidade de serem criados procedimentos genricos (Chapman et al., 2002), que possibilitem a uniformizao de critrios, nomeadamente quanto ao uso e escolha da fauna bentnica que utilizada nessa investigao. O conceito de Trada da Qualidade Sedimentar (TQS), conforme originalmente desenvolvido h cerca de 20 anos por Chapman, envolve trs componentes independentes: qumica dos sedimentos (para determinar a contaminao qumica), toxicidade dos sedimentos (bioensaios sedimentares para determinar a toxicidade), e estrutura da comunidade bentnica (para determinar o estado da fauna residente presumivelmente mais exposta aos contaminantes existentes no sedimento). As duas primeiras componentes foram consistentemente includas em todos os exemplos conduzidas at data, no entanto

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a ltima componente foi modificada para "alterao das comunidades residentes" e, em alguns casos, foi mesmo substituda ou excluda. Noutros casos, componentes suplementares foram adicionadas Trada da Qualidade Sedimentar (Chapman e Hollert, 2006). Combinando informaes sobre a caracterizao fsica e qumica dos sedimentos, da estrutura da comunidade bentnica e dos testes de toxicidade nos sedimentos, a TQS fornece uma abordagem abrangente e holstica para avaliar a magnitude de uma resposta biolgica. Em particular, a introduo de testes de toxicidade nos sedimentos, fornece mais evidncias directas e conclusivas sobre os efeitos biolgicos dos contaminantes presentes nos sedimentos e isto complementa e refora as informaes provenientes das comunidades residentes e da contaminao existente nos sedimentos (Chapman, 1990; 1996). Normalmente, a aplicao da TQS para avaliao dos efeitos associados presena de contaminantes no sedimento, procura fazer a integrao das 3 componentes j citadas e do melhor juzo profissional dado por especialistas. Actualmente, no existe nenhum mtodo universalmente aceite para o tratamento e interpretao dos dados referentes trada, nem existe uma classificao que tenha por base uma abordagem com o o uso simultneo de mltiplos descritores de qualidade sedimentar (Chapman et al., 2002; Long e Sloane, 2005; Wenning et al., 2005). Cada estudo ou monitorizao usa uma abordagem desenvolvida atravs da prpria experincia de cada investigador. A mais valia da TQS reside na abordagem peso-das-evidncias que utiliza, e na sua capacidade de discernir os efeitos toxicolgicos directos, das variaes naturais das caractersticas do habitat (Chapman, 1996). Atravs desta abordagem, possvel deduzir uma relao causal entre a contaminao qumica e as perturbaes ocorridas nas comunidades locais. Assim, a TQS fornece um bom exemplo de um instrumento de avaliao integrada que inclui os dados obtidos no campo. No entanto, para melhorar o mtodo, as medidas de bioacumulao tm de ser levadas em considerao (Chapman e Wang, 2000). Quer isto dizer, que a avaliao toxicolgica dos sedimentos dever ser encarada numa perspectiva muito mais abrangente do que a inicialmente prevista por Chapman aquando da criao da TQS. Idealmente, as abordagens ao problema e a avaliao dos resultados, tero de ser efectuadas tendo por base que o estudo do ambiente

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sedimentar, dar um contributo que ter de ser integrado num estudo mais alargado do ecossistema. A ttulo de exemplo sobre a forma como actua uma avaliao do tipo TQS, refirase o trabalho Silva et al. (2004) onde mostram, acerca de um dado local sada do Esturio do Tejo, que o local foi consistentemente contaminado pelo elevado teor de HPA (Hidrocarbonetos policiclicos aromticos), que pode ser a causa do empobrecimento da sua comunidade bentnica e dos efeitos na sobrevivncia e desenvolvimento das larvas do ourio-do-mar, bem como sobre a sobrevivncia e reproduo do teste com anfpodes. So aqui evidenciados os principais agentes de perturbao que afectam este local: a existncia de altas quantidades de HPA que provocam alteraes fsico-qumicas no ambiente (1 alterao da TQS); maus resultados nos testes de toxidade sedimentar traduzidos em maus resultados nos parmetros sobrevivncia e desenvolvimento e reproduo dos animais utilizados nos testes (2 alterao da TQS); empobrecimento na quantidade e qualidade da fauna bentnica existente na zona (3 alterao da TQS) (Silva et al., 2004). Embora existam normas gerais para interpretao e integrao dos dados da trada, muitas vezes os especialistas divergem sobre a importncia dessas normas. A maior fonte de incerteza est relacionada com o potencial de alterao da composio da comunidade da endofauna poder ser afectado por factores fsicos e de habitat e a incapacidade de distinguir essas alteraes dos efeitos provocados por contaminantes (Bay et al., 2007). Vrios passos so recomendados para reduzir o grau de incerteza associado integrao e interpretao dos dados da TQS. Em primeiro lugar, elementos-chave da estratgia de avaliao, tais como o peso relativo de cada componente, a forma como mltiplas componentes so combinadas (por exemplo atravs de classificaes ou de enquadramentos lgicos), e os critrios para determinar a avaliao final, devero ser estabelecidos durante a concepo do estudo. Em segundo lugar, a comparabilidade entre os estudos pode ser melhorada fornecendo orientao sobre os mtodos especficos de medio da qumica dos sedimentos (por exemplo, lista de analitos, limites de deteco, como so usadas as directrizes de qualidade dos sedimentos), da toxicidade dos sedimentos (por exemplo, mtodos de ensaio, limites de classificao da toxicidade), e estado da comunidade bentnica (por exemplo, quais as mtricas ou ndices a utilizar, os critrios para determinar os efeitos). Por fim, a incerteza na avaliao da qualidade dos sedimentos

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pode ser reduzida atravs da melhoria da formao dos indivduos na interpretao dos dados (Bay et al., 2007). Recentemente, a bioamplificao (aumento da concentrao de alguns contaminantes orgnicos atravs da cadeia alimentar), foi formalmente inserida como uma componente primria adicional TQS, resultando efectivamente, numa Ttrada da Qualidade dos Sedimentos (Grapentine et al., 2002; Chapman e Anderson, 2005). No entanto, embora outros autores tenham sugerido que a TQS deva ser expandida para incluir outros componentes, no houve qualquer anlise formal de como e por que razo, tal expanso dever ocorrer (Chapman e Hollert, 2006). Estes autores questionam-se sobre a possibilidade de esta se tornar numa Ttrada, numa Pentada ou mesmo numa Hxada: No conceito da TQS, nunca houve a inteno de a limitar a apenas trs componentes especficos. Pouco tempo aps o seu desenvolvimento, Chapman (1986) realizou um estudo TQS no qual substituiu a anlise histopatolgica executada em peixes do fundo, pela avaliao da composio da comunidade da endofauna bentnica. Para Chapman (1989), a TQS, na sua essncia, uma ferramenta que correlaciona componentes, no sendo, por si s, um instrumento de sentena definitiva (Chapman e Hollert, 2006). Uma componente adicional que no foi, tanto quanto sabemos, aplicada ou proposta para a TQS, a determinao da diversidade gentica e de quaisquer alteraes que possam ser relacionadas com os contaminantes existentes nos sedimentos. Chapman e Hollert (2006), defendem que a diversidade gentica pode ser uma importante componente relativa futura viabilidade das populaes. Os dados referentes comunidade bentnica tm muitas limitaes, mas, devidamente analisados, mantm-se como a componente de avaliao ecologicamente mais relevante sobre possveis impactos na fauna. De facto, a mais convincente prova relativa degradao induzida pela poluio, continua a ser fornecida pela incluso da anlise da fauna bentnica na TQS (McPherson et al., 2008).

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3. Utilizao de anfpodes em ensaios de toxicidade nas ltimas duas dcadas

Na Amrica do Norte, a equipa formada por Chapman e Long (1983), conclui nos seus trabalhos, que os testes de toxicidade sedimentar so parte integrante dos estudos de monitorizao de poluio marinha e devem ser usados simultaneamente com estudos qumicos e ecolgicos como parte de um estudo mais completo. Percebendo que os mtodos isolados apresentam certas limitaes, os testes de toxicidade sedimentar tm sido utilizados dentro de avaliaes integradas, das quais se destaca a Trada da Qualidade de Sedimento (TQS) (Chapman e Hollert, 2006) que consiste no uso sinptico de anlises qumicas, testes de toxicidade e estudo da comunidade bentnica. Este mtodo integrado tem sido usado com sucesso tendo obtido resultados muito consistentes (Quintino et al., 2001; Silva et al., 2004; King et al., 2007; Melo e Nipper, 2007). Com a difuso do uso dos testes de toxicidade sedimentar e da sua comprovada utilidade, novos mtodos foram adaptados para diversas espcies. Hoje, os testes de toxicidade de sedimento tm sido amplamente utilizados (entre outros, Bat e Raffaelli, 1998; Chapman et al., 2002; Peters e Ahlf, 2005; Castro et al., 2006; Heuvel-Greve et al., 2007; King et al., 2007; R et al., 2007; Scarlett et al., 2007). Bat, (2005) num artigo de reviso, d particular ateno utilizao de anfpodes em bioensaios padronizados com o objectivo de avaliar a toxicidade existente em sedimentos marinhos e estuarinos. Estes testes constituem uma forma conveniente de avaliar no s a sensibilidade da comunidade bentnica, como tambm reflectem a biodisponibilidade de um contaminante, o que por vezes difere bastante da sua quantidade total determinada atravs de mtodos de anlise qumica. Para este autor, o emprego de anfpodes revela-se particularmente til nas contaminaes por metais pesados, pois possuem caractersticas prprias, como por exemplo: distribuio geogrfica alargada e facilidade de cultivo em laboratrio, que constituem mais valias importantes quando se pretende elaborar protocolos de bioensaios sedimentares. A nvel mundial, organizaes como o American Society for Testing and Materials (ASTM) e a International Organization for Standardization (ISO), fizeram o reconhecimento do extraordinrio potencial dos anfpodes como organismos-teste, ao

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recomendarem a sua incluso nos diferentes protocolos elaborados para bioensaios com sedimentos marinhos e estuarinos (Bat, 2005; ISO, 2005; ASTM, 2008). Neste captulo e com o objectivo de destacar o emprego de anfpodes na toxicologia sedimentar, utilizamos uma amostra constituda por 33 trabalhos cientficos que em comum tm o facto de utilizarem anfpodes durante a realizao das suas experincias. Por outro lado, parece-nos igualmente importante e no esquecendo a limitada dimenso da nossa amostra, estabelecer uma perspectiva de carcter globalizante (nomeadamente, referenciando o contributo dado por investigadores de diferentes pases), sobre o que se tem feito em matria de toxicidade sedimentar durante as duas ultimas dcadas. A Tabela 1 surge com o objectivo de, relacionando vrios aspectos ligados toxicologia sedimentar, se constituir como um elemento comparativo de acesso rpido a dados relevantes presentes nestes estudos. Daquilo que se tem feito ao longo das duas ltimas dcadas podemos comear por destacar a situao na Amrica do Norte (nomeadamente Canad e EUA), onde notria a importncia dos trabalhos realizados pelo canadiano P. Chapman que foi um dos principais responsveis pelo desenvolvimento dos mtodos e anlises envolvidos nos estudos de toxicidade sedimentar. Dele temos estudos que mostram, por exemplo, o uso da SQT na avaliao dos impactos provocados pela poluio (Chapman, 1990); critrios para a qualidade ambiental (Chapman, 1991), onde o autor aponta para a implementao de medidas e de possveis solues tendentes a aumentarem a qualidade ambiental; o papel da ecotoxicologia na avaliao do impacto ambiental (Chapman, 1993), a importncia dos estudos de qualidade ambiental no dia-a-dia das sociedades (Chapman, 2006); estudos especficos sobre a abordagem Peso das Evidncias para sedimentos e efluentes (Chapman, 2006), onde o autor alerta para a necessidade do emprego de testes que avaliem os impactos ao nvel das comunidades animais residentes, como forma de mais eficazmente avaliar qual o real efeito provocado nos locais atingidos; introduo a novas perspectivas no campo da ecotoxicologia do comportamento das espcies aquticas (Chapman, 2007), onde nos fornecida uma viso dos caminhos futuros que a ecotoxicologia poder traar. Para a Amrica do Norte, esto ainda referenciados na Tabela 1, os estudos de Hellou et al. (2008), no Canad, que utilizando C. volutator, estudaram a utilizao de um mtodo qumico no letal na avaliao de sedimentos (baseado no estudo do

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Tabela 1. Descritores ecotoxicolgicos e caractersticas dos ensaios sedimentares consultados

Legenda: Sed- Sedimento; HD- Horas dia; HN- Horas noite; A- ensaio agudo; C- ensaio crnico; (Descritores: I- Imobilizao; M- Mortalidade;

C- crescimento; R- reproduo; E- emergir do sedimento; Ce- capacidade de se enterrar; B- bioacumulao; Cto- comportamento)
Espcie Tipo teste Temp. C 4 semanas 171 sed 15 16HD 8HN Durao teste Sed./ gua Salinidade Foto periodo pH

Q\de Q\de N N indiv. Descritores Data gua sedi/to rplicas Colocado

Autor(es)

C. volutator

8.1 10 cm

2 cm

20

M;C;R

2007

HeuvelGreve et al.

C. orientale

96h-LC 50 16 2 gua 10-dias LC50 150.1 96h-LC 50 10-dias MFB-48h mtodo automtico

36 1

24HD

500ml

20

2008

Lera et al. 12HD 12HN

C. volutator

sed

33

1.5L

8 cm

30

2008

Mayor et al. gua + sed 8.0 500ml 200ml 0.1

C. orientale

162

35 Bioban + gua + sed

24HD

3-4

20 - 25

2008

Picone et al.

C. volutator

151

12HD 12HN

Kirkpatrick

Cto

2006

et al.

C. volutator

A C

10-dias 28-dias

152

sed

7.5 a 8.5

200ml

M;C

2007

Allen et al.

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C. volutator

A C 152 sed 1.0L

10-dias 28-dias

253 psu

12HD 12HN

7.0 9.0

160ml

30

M;C;R

2007

Scarlett et al.

C.volutator

10-dias

15

sed

35

24HD

800ml 150ml

20

2001

Grant e Briggs

Gammarus aequicauda Microdeutopus gryllotalpa A 48h 20 sed 96h-LC 50 10-dias 151 10-dias 21-dias

16HD 8HN

400ml

10

2004

Cesar et al.

Gammarus locusta

gua sed

33

12HD 12HN

1cm

3-5

20

1996

Costa et al.

C. multisetosum

A C

22

18 s/u

1-5

20

M;C;R

2006

Castro et al.

C. volutator

15

12HD 12HN

800ml 1-2cm

100

2008

Hellou et al.

C. volutator

10-dias

111

sed

32

16HD 8HN

2cm

20

M;E;Ce

1998

Bat e Raffaelli

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Ampelisca brevicornis A 10-dias 181 sed 35 s/u 1.0L 10-dias 96h-LC 10; 15; 20; 25 36 12HD 12HN gua sed 7.8 800ml 0.3

luz natural

3cm

20

2007

CasadoMartinez et al.

C. insidiosum

2cm

4-5

20 - 25

2008

Prato et al.

C. insidiosum 20 15 22 gua sed gua sed 252

10-dias

15

sed

30

24HD

800ml 200ml

20

2007

Guerra et al.

C. multisetosum

96h 10-dias

18-20 s/u 9 s/u

14HD 10HN

800ml 200ml

5 - 25

2007

R et al.

Tiburonella viscana

48hLC50 10-dias

342 ppt

24HD

7.9 a 750ml 8.5

2cm

15 - 20

M;E

2007

Melo e Nipper

C. multisetosum

A C

10-dias 21-dias

15 22

sed

20

M;C;R

2004

Silva et al.

Tiburonella viscana

48h-LC 50

252

gua

24HD

350ml

3-5

10

2003

Abessa e Sousa,

- 30 -

Tiburonella viscana

10-dias

252

sed

24HD

750ml

2cm

10

2006

Cesar et al.

Hyalella azteca

10-dias

250ml 100ml

10

1996

Poretti et al.

Rhepoxynius abronius C. volutator Bathyporeia sarsi A 10-dias 151 141 101 Grandidierella japonica A 96h-LC50 20 Mandibulophoxus mai Haustorioides indivisus Haustorioides koreanus Monocorophium acherusicum A 10-dias 20 Hyalella azteca A 10-dias

2cm

10 - 20

M;E;I

1992

van den Hurk et al.

30psu

30

2005

Lee et al.

30psu

20

M;E

2005

Lee et al.

202

sed

16HD 8HN

160ml

70gr

10

2000

Riddick e Dunn

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Ampelisca brevicornis A 0 3 15 25 36 0 3 15 25 36g/Kg 10 15 18 20 gua sed 10-dias 191 sed

12HD 12HN

800ml 200gr

20

2008

MoralesCaselles et al.

Gammarus aequicauda

A C

10-dias 28-dias 96h LC50 15 18 20 gua sed

8.30 800ml

2cm

3 4 5

10 20 40

M;C

2005

Prato e Biandolino

Monocorophium insidiosum

A C

10-dias 28-dias 96h LC50

8.3 800ml

2cm

3 -5

10 20 40

2006

Prato e Biandolino

Gammarus aequicauda C. insidiosum A

96h LC50 10-dias

16 2

gua sed

36

500ml + 750ml

2cm

20

2006

Prato et al.

C. multisetosum

96h

15 1

sed

36 72 108s/u

14HD 10HN

190ml

10ml

2008

Quintino et al.

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Monoporeia afnis

24h

4.50.2

sed

6s/u

luz natural

70ml

10

70

2008

Wiklund et al.

C. multisetosum Microdeutopus gryllotalpa A 10-dias 20 gua sed 35 18HD 6HN

600ml 200ml

10

2009

Sanz-Lzaro e Marn

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comportamento evidenciado pelos animais quando sujeitos a ambientes controlados, constitudos por sedimentos de referncia aos quais se juntam, de forma calculada, sedimentos da amostra a testar, proporcionando assim, a existncia de ambientes com graus diferenciados de concentrao aos quais os animais reagem tambm de forma diversa) e de Riddick e Dunn (2000), nos USA, que utilizaram a Hyalella azteca, na avaliao de sedimentos de zonas hmidas ribeirinhas. Relativamente Europa e para Portugal a tabela 1 destaca alguns trabalhos desenvolvidos no incio da dcada de 90 na Universidade de Aveiro com C. multisetosum, para fazer a avaliao ecotoxicolgica de sedimentos marinhos e estuarinos (R, 1996). Estes trabalhos so mais tarde desenvolvidos com novos estudos da mesma equipa, onde se mostra o elevado potencial do C. multisetosum para a utilizao em testes de toxicidade aguda e crnica em meio estuarino (Quintino et al.; 2001; Silva et al., 2004; Castro et al. 2006; R et al., 2007; in press). Ainda para Portugal, referncia na Tabela 1 a Costa et al. (1996) que usando Gammarus locusta avaliou o potencial de um novo teste para uso em toxicologia. No mbito dos trabalhos efectuados em Espanha, na tabela 1 destacam-se os trabalhos desenvolvidos por Csar et al. (2004) com a utilizao dos anfpodes Gammarus aequicauda e Microdeutopus gryllotalpa, na avaliao da toxicidade dos sedimentos na zona costeira mediterrnea; por Casado-Martinez et al. (2007) na avaliao da sensibilidade de anfpodes a dragados usando Ampelisca brevicornis; Morales-Caselles et al. (2008), que usando a mesma espcie, fizeram a avaliao de sedimentos marinhos aps um importante derrame de petrleo; por fim referenciado o trabalho de Sanz-Lzaro e Marn (2009), onde so testadas, utilizando C. multisetosum e Microdeutopus gryllotalpa, duas reas estuarinas europeias em relao contaminao com crude. Os estudos realizados em Itlia indicam preponderncia para duas espcies de anfpodes, C. orientale e C. insidiosum. O primeiro foi utilizado por Lera et al. (2008), para verificar as variaes de sensibilidade ao txico de referncia CdCl2 e SDS, e por Picone et al. (2008) que o utilizou para avaliar a sua sensibilidade a substncias puras. A segunda espcie aparece nos estudos de Guerra et al. (2007) com o objectivo de verificar o impacto das dragagens em zonas costeiras lagunares, e tambm nos de Prato et al. (2008), que avaliam o efeito da temperatura nos testes agudos de toxicidade. Desta investigadora e da sua colaborao com outros investigadores, encontramos ainda referenciados os

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trabalhos com Gammarus aequicauda (Prato e Biandolino, 2005), com o objectivo de avaliar o potencial da espcie para utilizao em testes de biotoxicidade; com Monocorophium insidiosum (Prato e Biandolino , 2006), cujo objectivo foi o mesmo do trabalho anterior; com Gammarus aequicauda e Corophium insidiosum (Prato et al., 2006) cujo objectivo foi o de avaliar o potencial das duas espcies para testes de avaliao de sedimentos. Este conjunto de trabalhos mostra que nos pases do sul da Europa, as opes em relao a espcies-teste tm sido diversificadas, enquanto que nos pases do norte da Europa, a escolha foi mais uniforme. Esta informao resumida na Tabela 2 (pag. 35), a qual fornece a relao entre as espcies de anfpode com os pases descritos ao longo da nossa amostra. Esta situao poder ser explicada pelas indicaes fornecidas na norma ISO 16712 (2005), que no seu anexo B, sugere critrios de escolha quanto ao tipo de anfpode a utilizar em estudos de toxicidade aguda. Pases como a Holanda, a Alemanha, a Inglaterra ou a Esccia, fazem uma escolha clara no tipo de anfpode a utilizar: C. volutator (consta da lista do anexo B da norma ISO 16712, 2005). Neste panorama, a excepo acontece mais a norte com a Sucia, onde Wiklund et al. (2008), utiliza o Monoporeia afnis com objectivo de fazer avaliao comportamental em relao a uma espcie invasiva. Na Alemanha, Kirkpatrick, et al. (2006), testavam a capacidade de C. volutator como biomonitor; na Holanda, HeuvelGreve et al. (2007), avaliam a eficcia da espcie num teste crnico; no Reino Unido, Hurk et al. (1992), fazem uma comparao entre trs espcies de anfpodes em testes de toxicidade, utilizando para alm de C. volutator, Rhepoxynius abronius e Bathyporeia sarsi; Grant e Briggs (2001), procuraram avaliar as respostas da espcie a metais e hidrocarbonetos; Scarlett et al. (2007), estudaram um mtodo para avaliar com a espcie a toxicidade crnica de sedimentos marinhos e estuarinos; Allen et al. (2007), propem-se testar a toxicidade de um composto qumico, o Ivermectin; Mayor et al. (2008), fazem uma avaliao toxicolgica aos tratamentos no aquacultura e Bat e Raffaelli (1998), fazem uma avaliao da toxicidade de sedimentos atravs de bioensaio com a mesma espcie. Para outras zonas do globo terrestre, referenciado na tabela 1, a Amrica do Sul, atravs do Brasil e a sia, atravs da Coreia Sul.

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Tabela 2: Utilizao das espcies de anfpodes pelos pases da amostra

Alemanha

Pas ---------------Espcie
C.volutator C.orientale C.multisetosum C. insidiosum Gammarus aequicauda Gammarus locusta Microdeutopus gryllotalpa Ampelisca brevicornis Tiburonella viscana Hyalella azteca Rhepoxynius abronius Bathyporeia sarsi Grandidierella japonica Mandibulophoxus mai Haustorioides indivisus Haustorioides koreanus Monocorophium acherusicum Monocorophium insidiosum Monoporeia afnis Echinogammarus meridionalis

Espanha

Holanda

Portugal

Esccia

Canada

9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9

9 9 9 9 9 9

9 9

Sucia

Coreia

Brasil

Itlia

USA

UK

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No Brasil, as primeiras pesquisas a respeito de toxicidade de sedimentos marinhos foram realizadas por Nipper et al. (1990). Tal como na Europa do norte, tambm aqui parece haver preferncia por determinado tipo de anfpode: Tiburonella viscana. A comprov-lo temos trabalhos de Abessa e Sousa (2003), que avaliaram a sensibilidade do anfpode ao dicromato de potssio, de Csar et al. (2006), que fizeram a avaliao dos sedimentos provenientes dos esturios de Santos e S. Vicente de Melo e Nipper (2007), que analisam a praticabilidade do uso da espcie em testes de toxicidade sedimentar. Na Coreia do Sul, os trabalhos referenciados na Tabela 1, indicam Lee et al. (2005), onde os investigadores estudam a espcie Grandidierella japonica em testes de toxicidade aguda com metais pesados; Lee et al. (2005), realizam no mesmo ano um outro trabalho para eleger, de entre 4 espcies de anfipodes- Mandibulophoxus mai,

Haustorioides indivisus, Haustorioides koreanus e Monocorophium acherusicum, os mais indicados para serem utilizados em testes de toxicidade.

Apesar de vrios investigadores considerarem que o ensaio agudo menos sensvel do que o ensaio crnico e como tal, menos susceptvel de promover a proteco do ambiente (Castro et al., 2006; Heuvel-greve et al., 2007), a maioria dos trabalhos referenciados na tabela 1 usaram ensaios agudos tal como o ilustrado na Figura 1.

82%
Agudos Cronicos

18%

Figura 1 Dados sobre a percentagem de utilizao de Ensaios Agudos e Crnicos.

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A Tabela 1, mostra tambm algumas variveis abiticas, como a temperatura; a salinidade, o fotoperodo, o pH, consideradas nos vrios ensaios. A propsito de algumas destas variveis, como por exemplo a temperatura e a salinidade, R et al. (in press) mostram ser primordial o seu conhecimento e a determinao dos limites de tolerncia da espcie para estes factores, de forma a determinar as condies apropriadas em que os ensaios de toxicidade devem ser realizados. Prato et al. (2008), mostram tambm a importncia de um leque de temperaturas (10, 15, 20 e 25 C) na realizao dos ensaios com C. insidiosum. Segundo os autores a temperatura um importante factor no controlo do metabolismo dos anfpodes e pode tambm, interagir com a toxicidade provocada por metais pesados, concluindo que o objectivo do trabalho da sua equipa, seria o de melhorar a metodologia do ensaio, estabelecendo um possvel intervalo de temperatura ptima para ser utilizado nos testes de toxicidade com esta espcie. Relativamente salinidade pretende-se que as espcies-teste a utilizar nos ensaios de toxicidade de sedimentos, possuam uma tolerncia alargada em relao a esta varivel, podendo desta forma, ser utilizadas em experincias com graus de salinidade bastante diferentes. O nmero de indivduos utilizado por rplica e a quantidade destas, foi tambm includo na Tabela 1 para podermos inferir um procedimento padro em relao a estas variveis. Pelos estudos consultados, podemos observar que a mdia do nmero de rplicas aproxima-se das 5 por ensaio e a mdia do nmero de indivduos utilizado, rondou os 20 por rplica. Os descritores ecotoxicolgicos utilizados nos trabalhos includos na nossa anlise, foram os que se seguem: mortalidade; crescimento; reproduo; imobilizao; emergir do sedimento; capacidade de escavador; bioacumulao; comportamento. Com os trs descritores ecotoxicolgicos clssicos dos testes de toxicidade sedimentar, mortalidade, crescimento e reproduo, podemos fazer logo a distino entre teste agudo e teste crnico, pois no teste agudo apenas se procede avaliao do parmetro da mortalidade (da a ideia de que se trata de um teste demasiado redutor em relao obteno de resultados), ficando os dois restantes parmetros, crescimento e reproduo, apenas acessveis nos testes crnicos. O ensaio crnico assim considerado por muitos autores, como mais completo do que o ensaio agudo (Lamberson et al., 1992; R, 1996; Chapman e Wang, 2001; Castro et al., 2006; Scarlett et al., 2007; Heuvel-Greve et al., 2007).

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A imobilizao, o emergir do sedimento e a capacidade de escavador, so parmetros avaliados por observao directa do tipo de comportamento que os animais manifestam perante determinadas situaes que ocorreram durante o teste a que foram sujeitos (Hurk et al., 1992; Bat e Raffaelli, 1998; Lee et al., 2005). Os hbitos comportamentais observados nestes animais, no se esgotam com os parmetros que acabamos de referir, existindo outros que podem ser utilizados em testes de toxicidade, como por exemplo, os referidos por Kirkpatrick et al. (2006), a propsito de um ensaio que pretendia testar o comportamento de C. volutator em relao ao pesticida Bioban, chegando a equipa deste autor, concluso que a espcie em causa parece ser apropriada para este tipo de experincias de avaliao comportamental em testes de toxicidade sedimentar. Finalmente, resta-nos referir a Bioacumulao, outro dos descritores

ecotoxicolgicos utilizados que est relacionado com a medida da massa corporal, tal como se encontra descrito no trabalho de Hellou et al. (2008).

Numa anlise mais detalhada sobre a Tabela 1, comeando pela escolha da espcie que foi considerada nos diferentes estudos, pretendem os respectivos autores que esta seja representativa da macrofauna bentnica uma vez que esta desempenha um importante papel nos ecossistemas de guas doces, estuarinas e marinhas, nomeadamente ao nvel trfico, nas interaces com outros animais presentes no ecossistema, mas tambm, no que se relaciona com a qualidade da gua, (Allaby, 1999). Por outro lado, o facto da macrofauna possuir mobilidade limitada, faz com que sejam indicadores privilegiados das mudanas ocorridas no ambiente (entre outros EPA, 1992). A opo pela ordem dos anfpodes, acontece no s pela sua relevncia ecolgica, mas tambm porque existe uma base de dados substancial sobre o tipo de respostas destes animais em relao a xenobiticos, nutrientes e outras perturbaes fsico-qumicas que podem ocorrer nos sistemas aquticos (Burton, 1992). O destaque dado ao gnero Corophium, surge porque para alm de satisfazer os critrios necessrios investigao experimental em toxicologia sedimentar, alia muitas das propriedades consideras desejveis, por exemplo: curto ciclo de vida; sensibilidade aos contaminantes existentes nos sedimentos e tolerncia em relao s variveis ambientais

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abiticas, como por exemplo a temperatura e a salinidade (Burton, 1992). A preferncia pelo gnero Corophium ilustrada na Figura 2.

Corophium Outros anfipodes

23%

77%

Figura 2 Dados comparativos sobre a utilizao do Corophium e de outros anfpodes, em ensaios de toxicidade sedimentar.

Na Figura 3 est representada a percentagem de utilizao de determinado anfpode, na nossa amostra constituda por 33 trabalhos. Desta Figura facilmente conclumos que a espcie mais utilizada C. volutator seguido de C. multisetosum. Uma

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palavra para referir o parmetro Outros, que constitudo pelos anfpodes que apenas foram referidos uma nica vez ao longo da nossa amostra, a saber: Rhepoxynius abronius; Gammarus locusta; Bathyporeia sarsi; Grandidierella japonica; Mandibulophoxus mai; Haustorioides indivisus; Haustorioides koreanus; Monocorophium acherusicum;

Monocorophium insidiosum; Monoporeia afnis; Echinogammarus meridionalis.

Hyalella azteca 6%

Outros 3%

Tiburonella viscana 9%

C. volutator 29%

Ampelisca brevicornis 6%

Microdeutopus gryllotalpa 6% C. orientale 6% Gammarus aequicauda 9% C. multisetosum 17%

C. insidiosum 9%

Figura 3 Dados comparativos sobre a utilizao de diferentes espcies de anfpodes, em ensaios de toxicidade sedimentar.

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Quanto s diferentes espcies de Corophium utilizadas, a Figura 4 d-nos uma imagem da sua distribuio percentual pelo n de trabalhos consultados.

C. orientale 11%

C. multisetosum 26%

C. volutator 47%

C. i nsidiosum 16%

Figura 4 Dados comparativos sobre a utilizao das diferentes espcies de Corophium, em ensaios de toxicidade sedimentar.

A ttulo de exemplo apresentamos alguns trabalhos que nos do uma ideia mais concreta sobre o estado actual do uso de C. multisetosum em testes de toxicidade sedimentar em Portugal.

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O desenvolvimento de ensaios ecotoxicolgicos em Portugal com o anfpode C. multisetosum ilustrado nomeadamente, por trabalhos de Quintino et al. (2001) e R et al. (2007) que abordam o uso de C. multisetosum em ensaios de toxicidade aguda, avaliando a sua sensibilidade a efluentes resultantes da indstria da cortia e lixiviados de limalha de ferro. A resposta da espcie analisada num ensaio agudo s com gua, e com sedimento estuarino. Dada a grande tolerncia da espcie ao tipo de sedimento, nomeadamente ao teor em finos, bem como salinidade da gua, foi tambm utilizado para avaliar a toxicidade aguda de sedimentos recolhidos num canal da Ria de Aveiro. Nos testes com efluentes, a sensibilidade de C. multisetosum foi afectada pelo aumento da concentrao de ambos os efluentes em teste, traduzindo-se num aumento da mortalidade. O anfpode foi mais sensvel aos lixiviados de limalha de ferro, como se pode verificar pelo LC50 muito inferior ao obtido com o efluente da indstria da cortia (Figuras 5 e 6).

Corophium multisetosum - LC50 = 15.74% effluent [14.327; 17.292] Gammarus chevreuxi LC50 = 14.91% effluent [14.136; 15.723] Daphnia magna LC50 = 11.93% effluent [11.126; 12.789] 100

Sobrevivncia (%) Survival (%)

80 60 40 20 0 0 5 10 15 20 25 Effluent Concentration(%) Concentrao do efluente (%) 30

Figura 5 - Reduo de sobrevivncia de C. multisetosum, G. chevreuxi e D. magna quando expostas a concentraes crescentes de efluente da industria da cortia . LC50 valores com limite de confiana de 95%. Adaptado de R et al. (2007)

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Sabellaria alveolata LC50 = 2.27% effluent [1.261; 4.093] Corophium multisetosum - LC50 = 1.56% effluent [0.940; 2.600] Daphnia magna LC50 = 0.75% effluent [0.691; 0.806] 100

Sobrevivncia (%) Sobrevivncia (%) Survival (%)

80 60 40 20 0 0 2 6 8 10 Effluent Concentration(%) Concentrao do efluente (%) 4 12 14

Figura 6 - Reduo de sobrevivncia de C. multisetosum, S. alveolata e D. magna quando expostas a concentraes crescentes de lixiviados de limalha de ferro. LC50 valores com limite de confiana de 95%. Adaptado de R et al. (2007)

Quanto sobrevivncia de C. multisetosum quando exposto aos sedimentos teste, obtidos na Ria de Aveiro, os ensaios decorreram a 15 e a 22 C. A sobrevivncia foi menor nos locais 5, 7 e 8, a 22 C e no local 7 a 15 C. Estes locais so constitudos por vasa com reduzido teor de oxignio e alto contedo orgnico (R et al., 2007) e coincidem nomeadamente, com os locais nos quais a comunidade de macrofauna residente apresentou os mais baixos valores de riqueza em espcies. Foi tambm nestes locais (5, 7 e 8) que um ensaio de desenvolvimento larvar com Paracentrotus lividus apresentou a mortalidade mais elevada e desenvolvimento anormal tambm mais elevado (Figura 7).

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Corophium multisetosum
100

Sobrevivncia 90% Survival 90%

Survival(%) Sobrevivncia (%)

80 60 40 20 0 CS S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9
15C

S10
22C

Sedimentos Sediments

Figura 7 - C. multisetosum: sobrevivncia mdia ( desvio padro) nas dez amostras de sedimentos teste e no controlo de qualidade (CS), a 15 C e 22 C (n = 3, para cada um dos sedimentos). * Significncia estatstica quando comparado ao controle (p <0,05). Adaptado de R et al. (2007)

Acima de tudo, os autores deste trabalho, defendem que C. multisetosum apresenta vantagens relativamente aos outros organismos-teste por exemplo ao nvel da maior capacidade de adaptao a diferentes salinidades, (R et al., in press) quando utilizado em teste de toxicidade aguda, demonstrou um alto potencial para identificar em meio estuarino, tanto a contaminao da gua como a contaminao do sedimento. Este estudo mostrou assim, grande consistncia entre o resultado do ensaio com C. multisetosum e os outros descritores do estado de afectao dos sedimentos superficiais (R et al., 2007) A apresentao mais detalhada das condies de realizao dos ensaios de toxicidade aguda, bem como a sensibilidade de C. multisetosum a variveis naturais (granulometria do sedimento, salinidade) so mencionadas em R et al. (in press). O estudo apresenta ainda questes relacionadas com a manuteno das culturas do anfpode, bem como a resposta a um txico de referncia (Cloreto de Cdmio). Com a metodologia,

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mencionada, o trabalho apresenta ainda os resultados de uma exposio de C. multisetosum a uma bateria de sedimentos recolhidos entre 1997 e 2006 sada do esturio Tejo. Em relao ao comportamento do anfpode com o txico de referncia podemos afirmar que os resultados revelam uma tendncia generalizada, para valores mais baixos de LC50 medida que aumenta a temperatura, o que talvez signifique um relacionamento directo entre aumento de metabolismo e a elevao da temperatura, como pode ser observado na Tabela 3.

Tabela 3. Cloreto de cdmio valores de LC50 (mgCd2 + / l) para C. multisetosum em ensaio de 96 h em gua. Adaptado de R et al. (in press).

LC50 (mgCd2+/L) 0.71 0.47, 0.58 0.23, 0.25 0.27, 0.33 0.34 0.31

Condies bioensaio Bioassay conditions

Temperatura; Salinidade Temperature; Salinity

15 1C; 18 1 15 1C; 2 1 18 1C; 2 1 22 1C; 2 1 22 1C; 2 2 22 1C; 2 3

1- Ensaios realizados com anfpodes cultivados em laboratrio; 2- Ensaio realizado com anfpodes oriundos de uma cultura laboratorial com dois anos ininterruptos; 3- Ensaio realizado em simultneo com o 2, com anfpodes colhidos no campo.

Quanto s variveis naturais, o estudo salienta a elevada tolerncia da espcie em relao salinidade, com uma amplitude de valores que o privilegiam na sua utilizao em testes de toxicidade em meio estuarino. Ainda assim, os autores no aconselham a realizao de testes em situaes extremas de reduzida salinidade e temperatura elevada, como pode ser comprovado pelos baixos valores de sobrevivncia evidenciados na Tabela 4 (R et al., in press) J no tocante ao teor em finos na constituio do sedimento e apesar de C. multisetosum apresentar tambm a uma grande tolerncia, o incremento da sensibilidade na populao adulta em relao ao aumento da temperatura, recomenda baixas

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temperaturas para os testes realizados com sedimentos de elevado teor em finos Tabela 4 (R et al., in press).

Tabela 4. Percentagem de sobrevivncia mdia ( desvio padro) do C. multisetosum em exposio aguda a uma gama de salinidades e de temperaturas em gua intersticial pobre em oxignio (n = 9, para todos os tratamentos) e a sedimentos preparados com diferentes contedos em partculas finas a diferentes temperaturas (n = 6 para todos os tratamentos). O controlo negativo corresponde a uma concentrao 50% da gua do mar. O controle dos sedimentos representa 1,8% de contedo em partculas finas, expresso como uma % do total de sedimentos, peso seco. Adaptado de R et al. (in press)

Sobrevivncia mdia anfpode (% sd) Mean amphipod survival (% sd)

15C 18C 22C

Negative control 95.0 4.33 97.8 3.63 94.4 5.83 0.0 81.1 18.33 78.9 31.90 18.9 27.25 0.2 83.9 11.67 86.1 13.87 75.0 31.92 0.4 92.2 4.41 87.8 8.33 62.2 41.01 0.8 88.3 12.75 81.7 16.58 90.0 6.12 1.6 88.3 9.01 78.3 16.20 85.6 12.36 3.2 86.7 14.58 87.2 10.64 86.1 7.82 6.25 92.2 6.67 92.2 6.67 98.3 3.54 12.5 97.8 3.63 90.0 7.50 91.7 6.12 25.0 94.4 5.27 92.2 7.55 95.0 6.61 50.0 90.6 5.83 89.5 8.08 92.8 4.41 100.0 78.9 9.28 82.8 11.49 83.9 10.83 -------------------------------------------------------------------------------------------------------Contedo em finos do sedimento (%) Sediment fines content (%) Controlo sedimento Control Sediment 93.3 4.08 94.2 4.92 91.7 5.16 2.1 94.2 5.85 95.0 4.47 95.8 4.92 3.8 89.2 9.70 92.5 2.74 92.5 5.24 7.5 89.2 4.92 86.7 9.83 94.2 2.04 14.5 95.8 5.85 90.8 5.85 85.8 8.61 27.3 91.7 5.16 90.8 5.85 83.3 8.76 56.5 81.7 10.33 88.3 5.16 67.5 12.14 77.8 85.8 8.01 91.7 2.58 86.7 4.08 97.0 85.8 8.01 83.3 2.58 83.3 11.25

Concentrao gua do mar (%) Seawater concentration (%) Controlo negativo

R et al. (in press) apresentam ainda os resultados de uma exposio aguda a sedimentos naturais, do esturio do Tejo. Os autores chamam a ateno para o facto de, no perodo do estudo, haver diferenas significativas de valores de descritores ambientais e biolgicos nos intervalos: 1997 a 2000 e 2001 a 2006. Estes dois intervalos de tempo so separados pelo Inverno de 2000-2001, particularmente rigoroso em matria de cheias e tempestades costeiras, que teriam originado alteraes importantes no sedimento superficial, sobretudo ao nvel do tamanho das partculas e da concentrao de

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componentes orgnicos, o que pode ser constatado na Tabela 5, onde evidente a diminuio de PAHs e de PCBs, o aumento da riqueza em espcies (S), bem como a diminuio da mortalidade de C. multisetosum nos testes de toxicidade aguda.

Tabela 5. ndices de macrofauna bentnica, sedimentos de compostos orgnicos e descritores de toxicidade aguda estudados no local 19, no perodo 1997-2006. Valores mdios com desvio padro para os perodos antes e depois da cheia. Adaptado de R et al. (in press)

Descritor Descriptor S (0.1 m2) PAH compounds (ng.g-1) PCB congeners (ng.g-1) Acute mortality (%) Mortalidade aguda (%)

Antes Before (1997-2000) Mdia Mean s.d. 17.1 3.94 1175.75 664.752 7.62 3.664 17.0 4.32

Depois After (2001-2006) Mdia Mean s.d. 25.2 4.39 34.20 187.966 5.58 1.521 7.5 3.04

Os resultados obtidos por R et al. (in press), mostram a viabilidade do C. multisetosum como organismo-teste em estudos de toxicidade sedimentar. Segundo os autores, os sedimentos estuarinos podem variar consideravelmente em relao a factores como salinidade, teor em finos e temperatura. A forma mais razovel de proceder para determinar a toxicidade e a biodisponibilidade dos contaminantes dos sedimentos estuarinos, ser testar os sedimentos tal e qual se encontram, utilizando nos testes, animais com grande capacidade de tolerncia s mais variadas condies proporcionadas pelos esturios, sobretudo no que se relaciona com a salinidade e o teor em finos. Com um teste especificamente concebido para as condies existentes nos esturios, o C. multisetosum constitui inquestionavelmente, uma boa opo para a bioavaliao dos sedimentos que a se encontram. Uma nota final para justificar a opo por exemplos de ensaio do tipo agudo realizados na Universidade de Aveiro. Tal tem apenas que ver com o facto de termos ficado um pouco mais familiarizados com este procedimento durante o perodo em que decorreu este mestrado. No entanto, pelo que ficou escrito ao longo deste trabalho, parecenos essencial referir o papel importante dos ensaios crnicos, fundamentais a todo processo de investigao em ecotoxicologia sedimentar, e que so tambm realizados por

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investigadores desta Universidade, como ocaso dos levados a cabo pela equipa do Professor Quintino (Quintino et al., 2001; Silva et al., 2004; Castro et al., 2006, entre outros).

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4. Concluso
Vrios estudos tm mostrado que a utilizao de invertebrados bentnicos em ecotoxicologia sedimentar hoje aceite como uma das formas mais eficazes na avaliao ecotoxicolgica de sedimentos marinhos, estuarinos e fluviais (R et al., in press). Nos ensaios tanto agudos como crnicos, os crustceos anfpodes, tm recebido a preferncia de muitos investigadores j que renem boas qualidades para a execuo desses ensaios. Qualidades como a tolerncia a diferentes graus de salinidade, a sensibilidade a contaminantes existentes nos sedimentos, a ocupao de micro habitats ideais, a ampla distribuio geogrfica, entre outros, fazem deste animais uma das opes mais utilizadas por investigadores de todo o mundo (Chapman, 2007; Prato e Biandolino, 2005; Sanz-Lzaro e Marn, 2009, entre outros). No seio dos crustceos anfpodes, espcies do gnero Corophium, surgem muito referenciadas quer na Amrica do Norte quer na Europa do Norte e do Sul, incluindo o Mediterrneo (amostragem da Tabela 1). A avaliao ecotoxicolgica dos sedimentos, ser melhor realizada por abordagens do tipo peso-das-evidncias, combinando descritores ambientais mltiplos, fsicoqumicos, ecotoxicolgicos, caractersticas prprias do local e das comunidades residentes, incluindo parmetros do habitat e ciclos de vida das espcies relevantes (Schmitt-Jansen et al., 2007). No entanto, devemos ter conscincia de que dificilmente haver avaliaes tcnicas de elevada qualidade, da maioria dos milhares de substncias e da maioria dos tipos de ecossistemas e espcies existentes no mundo, mas os modelos de estudo combinando mltiplos descritores, podem ajudar a uma compreenso geral dos efeitos txicos e dos processos relevantes que podem ocorrer, permitindo assim, fazer uma melhor previso. necessria uma abordagem integrada baseada em protocolos de ensaios laboratoriais, experimentao e acompanhamento no terreno, incluindo sistemas de alerta precoce e modelos de simulao em computador (Chapman, 2007; Schmitt-Jansen et al., 2007). Num futuro prximo, um maior conhecimento sobre os indicadores subletais (biomarcadores) e da relao entre os efeitos agudos e crnicos, devero permitir a existncia de testes com exposies temporais relativamente mais curtas, para a deteco dos agentes stressores, por exemplo, horas ou alguns dias, podendo ser utilizados com fiabilidade na previso de efeitos crnicos. Actualmente, as exposies crnicas (que so

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bastante mais demoradas no tempo) representam uma componente chave na avaliao da sade dos ecossistemas (Burton, 1992). Por outro lado, e reavaliando o que ficou escrito neste trabalho, parece-nos preocupante a crise econmica e financeira que levou ao eclodir de uma recesso mundial, pois esta tender a agravar, num futuro prximo, o esforo necessrio para a prossecuo dos projectos de investigao no campo da ecotoxicologia sedimentar, o que a acontecer, comprometer irremediavelmente, uma boa parte das medidas necessrias

sustentabilidade dos recursos hdricos. Convenhamos pois, e em ltima anlise, que esta ideia da sustentabilidade dos recursos hdricos (elevada categoria de maior desafio da humanidade para este sculo), constituiu o fio condutor, subliminar, presente elaborao deste trabalho. Por ltimo, gostaramos que esta monografia pudesse ser entendida como mais um contributo para o conhecimento e divulgao de uma rea to delicada e complexa, mas ao mesmo tempo cada vez mais essencial, como o da avaliao ecotoxicolgica.

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Bibliografia
Abessaa, D.M.S., Sousa E. C.P.M., 2003. Sensitivity of the Amphipod Tiburonella viscana (Platyischnopidae) to K2Cr2O7. Brazilian Archives of Biology and Tecnology, 46(1): 53-55. Adams, S.M., 2005. Assessing cause and eect of multiple stressors on marine systems. Marine Pollution Bulletin, 51: 649657. Allaby, M., 1999. A Dictionary of Zoology, 2nd edition, published in 1999 by Oxford University Press. Kline Science Library Reference QL9 C66X. Allen, Y.T., Thain, J.E., Haworth, S., Barry, J., 2007. Development and application of longterm sublethal whole sediment tests with Arenicola marina and Corophium volutator using Ivermectin as the test compound. Environmental Pollution, 146: 92-99. ASTM, 1990. Standard guide for colledion, storage, characterization, and manipulation of sediments for toxicological testing. American Society of Testing and Materials. Designation E 1391-90. ASTM, 2003. Standard test method for measuring the toxicity of sediment-associated contaminants with estuarine and marine invertebrates. ASTM Designation: E 1367-03. American Society for Testing and Materials, Philadelphia. Bat, L., Raffaelli, D., 1998. Sediment toxicity testing: a bioassay approach using the amphipod Corophium volutator and the polychaete Arenicola marina. Journal of Experimental Marine Biology and Ecology, 226: 217239. Bat, L., 2005. A Review of Sediment Toxicity Bioassays Using the Amphipods and Polychaetes. Turkish Journal of Fisheries and Aquatic Sciences, 5: 119-139. Bay, S.M., Jirik A., Stanford, A., 2003. Interlaboratory Variability Of Amphipod Sediment Toxicity Tests In A Cooperative Regional Monitoring Program. Environmental Monitoring and Assessment, 81: 257268. Bay, S., Berry, W., Chapman, P.M., Fairey, R., Gries, T., Long, E,. MacDonald, D., Weisberg S.B., 2007. Evaluating Consistency of Best Professional Judgment in the Application of a Multiple Lines of Evidence Sediment Quality Triad. Integrated Environmental Assessment and Management, 3 (4): 491497. Belan, T.A., 2003. Marine environmental quality assessment using polychaete taxocene characteristics in Vancouver Harbour. Marine Environmental Research, 57: 89101. Bigot, L., Conand, C., Amouroux, J.M., Frouin P., Bruggemann, H., Grmare, A., 2006. Eects of industrial outfalls on tropical macrobenthic sediment communities in Reunion Island (Southwest Indian Ocean). Marine Pollution Bulletin, 52: 865880.

- 54 -

Borja, A., Muxika, I., Franco, J., 2003. The application of a Marine Biotic Index to dierent impact sources aecting softbottom benthic communities along European coasts. Marine Pollution Bulletin, 46: 835845. Burton, G.A.Jr., 1992. Sediment Toxicity Assessment. Lewis Publishers. Boca Raton, 457 p. Casado-Martinez, M.C., Forja, J.M., DelValls, T.A., 2007. Direct comparison of amphipod sensitivities to dredged sediments from Spanish ports. Chemosphere, 68: 677685. Castro, H., Ramalheira, F., Quintino, V., Rodrigues, A.M., 2006. Amphipod acute and chronic sediment toxicity assessment in estuarine environmental monitoring: An example from Ria de Aveiro, NW Portugal. Marine Pollution Bulletin, 53: 9199. Cesar, A., Marn-Guirao, L., Vita, R., Marn, A., 2004. Sensitivity of Mediterranean amphipods and sea urchins to reference toxicants. Scientia Marina, 28: 407417. Cesar, A., Pereira, C.D.S., Santos, A.R., Abessa, D.M.S., Fernndez, N., Choueri1, R.B., DelValls, T.A., 2006. Ecotoxicological Assessment Of Sediments From The Santos And So Vicente Estuarine System Brazil. Brazilian Journal Of Oceanography, 54 (1): 55-63. Chapman, P.M. e Long, E.R., 1983. The use of bioassays as part of a comprehensive approach to marine pollution assessment. Marine Pollution Bulletin, 14 (3): 81-84. Chapman, P.M., 1986. Sediment quality criteria from the sediment quality triad: an example. Environmental Toxicology and Chemistry, 5: 957964. Chapman, P.M., Dexter R.N., Long E.R., 1987. Synoptic measures of sediment contamination, toxicity and infaunal community composition (the Sediment Quality Triad) in San FranciscoBay. Marine Ecology Progress Series, 37: 75-96. Chapman, P.M., 1990. The sediment Quality Triad Aproach to Determining PollutionInduced Degradation. The Science of the Total Environment. 97 (98): 815-825. Chapman, P.M., 1991. Environmental quality criteria- what type should we be developing? Environmental Science & Technology, 25 (8). Chapman, P.M., 1993. The role of ecotoxicology in environmental impact assessment. The environmental professional, 139-144. Chapman, P.M., 1995. Ecotoxicology and Pollution-Key Issues. Marine Pollution Bulletin, 31 (4-12): 167-177. Chapman, P.M., 1996. Presentation and interpretation of Sediment Quality Triad data. Ecotoxicology, 5: 327339.

- 55 -

Chapman, P.M., e Wang, F.Y., 2000. Issues in ecological risk assessment of inorganic metals and metalloids. Human and Ecological Risk Assessment, 6: 965988. Chapman, P.M., Wang, F., 2001. Assessing sediment contamination in estuaries. Environmental Toxicology and Chemistry, 20 (1): 322. Chapman, P.M., Ho, K.T., Munns Jr., W.R., Solomon, K., Weinstein M.P., 2002. Issues in sediment toxicity and ecological risk assessment. Marine Pollution Bulletin, 44: 271278. Chapman, P.M., 2004. Indirect eects of contaminants. Marine Pollution Bulletin, 48: 411412. Chapman, P.M., Anderson, J., 2005. A Decision-Making Framework for Sediment Contamination. Integrated Environmental Assessment and Management, 1 (3): 163 173. Chapman, P.M., Hollert, H., 2006. Should the Sediment Quality Triad Become a Tetrad, a Pentad, or Possibly even a Hexad? Journal of Soils and Sediments, 6 (1): 4 8. Chapman, P.M., 2006. Science, politics and ideologyThe Victoria (BC, Canada) sewage issue. Marine Pollution Bulletin, 52: 719721. Chapman, P., 2006. Determining when contamination is pollution Weight of evidence determinations for sediments and effluents. Environment International, 33: 492 501. Chapman, P.M., 2007. Do not disregard the benthos in sediment quality assessments! Marine Pollution Bulletin, 54: 633635. Chapman, P.M., 2007. Introduction to Perspectives: Aquatic Behavioral EcotoxicologyComing of Age. Human and Ecological Risk Assessment, 13: 478 480. Costa, F.O. Correia, A.D., Costa, M.H., 1996. Acute Marine Sediment Toxicity: A Potential New Test with the Amphipod Gammarus locusta. Ecotoxicology and Environmental Safety, 40: 8-87. Defew, E.C., Paterson, D.M., Hagerthey, S.E., 2002. The use of natural microphytobenthic assemblages as laboratory model systems. Marine Ecology Progress Series, 237: 1525. EPA 823-R-92-006 September 1992 Sediment Classification Methods Compendium. Grant, A., Briggs A.D., 2001. Toxicity of sediments from around a North Sea oil platform: are metals or hydrocarbons responsible for ecological impacts? Marine Environmental Research, 53: 95116.

- 56 -

Grapentine, L., Anderson J., Boyd D., Burton G.A., De Barros, C., Johnson, G., Marvin, C., Milani, D., Painter, S., Pascoe, T., Reynoldson, T., Richman, L., Solomon, K., Chapman, P.M., 2002. A decision-making framework for sediment assessment developed for the Great Lakes. Human and Ecological Risk Assessment, 8: 1641-1655. Guerra, R., Pasteris, A., Ponti, M., Fabbri, D., Bruzzi, L., 2007. Impact of dredging in a shallow coastal lagoon: Microtox Basic Solid-Phase Test, trace metals and Corophium bioassay. Environment International, 33: 469473. Hellou, J., Cheeseman, K., Desnoyers, E., Johnston, D., Jouvenelle, M., Leonard, J., Robertson, S., Walker, P., 2008. A non-lethal chemically based approach to investigate the quality of harbour sediments. Science of the Total Environment, 389: 178 187. Heuvel-Greve, M. van den, Postma, J., Jol, J., Kooman, H., Dubbeldam, M., Schipper, C., Kater, B., 2007. A chronic bioassay with the estuarine amphipod Corophium volutator: Test method description and confounding factors. Chemosphere, 66: 1301 1309. Holland, A.F., 1990. Environmental monitoring and assessment program, near coastal program plan for 1990: Estuaries. Environmental Research Laboratory, U.S. Environmental Protection Agency. Hurk, P. van den, Chapman, P.M., Roddie, B., Swartz, R.C., 1992. A comparison of North American and West European infaunal amphipod species in a toxicity test on North Sea sediments. Marine Ecology Progress Series, 91: 237-243. Ingersoll, C.G., Dillon, T., Biddinger, G.R., 1997. Ecological risk assessment of contaminated sediments. Society of Environmental Toxicology and Chemistry, Pensacola, USA, p. 389. ISO 16712: 2005(E). Water quality Determination of acute toxicity of marine or estuarine sediment to amphipods. King, C.K., Gale, S.A., Hyne, R.V., Stauber, J.L., Simpson, S.L., Hickey, C.W., 2006. Sensitivities of Australian and New Zealand amphipods to copper and zinc in waters and metal-spiked sediments. Chemosphere, 63: 14661476. Kirkpatrick, A.J., Gerhardt, A., Dick, J.T.A., McKenna, M., Berges, J.A., 2006. Use of the multispecies freshwater biomonitor to assess behavioural changes of Corophium volutator (Pallas, 1766) (Crustacea, Amphipoda) in response to toxicant exposure in sediment. Ecotoxicology and Environmental Safety, 64: 298303. Lamberson, J.O., DeWitt, T.H., Swartz, R.C., 1992. Assessment of sediment toxicity to marine benthos. In: Burton, GA (Ed.). Sediment toxicity assessment. Lewis Publishers, Inc., Chelsea, 183-211.

- 57 -

Lee, J.-S., Lee, K.-T., Park, G.-S., 2005. Acute Toxicity of Heavy Metals, Tributyltin, Ammonia and Polycyclic Aromatic Hydrocarbons to Benthic Amphipod Grandidierella japonica. Ocean Science Journal, 40 (2): 61-66. Lee, J.-K., Lee, K.-T., Kim, D.-H., Kim, C.-K., Lee, J.-H., Park, K.-H., Park, G.-S., 2005. Application of Indigenous Benthic Amphipods as Sediment Toxicity Testing Organisms. Ocean Science Journal, 40 (1). Lera, S., Macchia, S., Dentone, L., Pellegrini, D., 2008. Variations in sensitivity of two populations of Corophium Orientale (Crustacea: Amphipoda) towards cadmium and sodium laurylsulphate. Comparison of two populations of Corophium Orientale. Environmental Monitoring and Assessment, 136: 121127. Long, E.R., Hong, C.B., Severn, C.G., 2001. Relationships between acute sediment toxicity in laboratory tests and abundance and diversity of benthic infauna in marine sediments: a review. Environmental Toxicology and Chemistry, 20: 4660. Long, E.R., Sloane, G.M., 2005. Development and use of assessment techniques for coastal sediments. In: Bortone SA, editor. Estuarine indicators. Boca Raton (FL): CRC. 6378. Mayor, D.J., Solan, M., Martinez, I., Murray, L., McMillan, H., Paton, G.I., Killham, K., 2008. Acute toxicity of some treatments commonly used by the salmonid aquaculture industry to Corophium volutator and Hediste diversicolor: Whole sediment bioassay tests. Aquaculture, 285: 102108. McPherson, C., Chapman, P.M., deBruyn, A.M.H., Cooper, L., 2008. The importance of benthos in weight of evidence sediment assessments A case study. Science of the Total Environment, 394: 252264. Melo, S.L.R., Nipper, M., 2007. Sediment toxicity tests using the burrowing amphipod Tiburonella viscana (Amphipoda: Platyischnopidae). Ecotoxicology and Environmental Safety, 66: 412420. Moiseenko, T.I., Gashkina, N.A., Sharova, Yu.N., Kudryavtseva, L.P., 2008. Ecotoxicological assessment of water quality and ecosystem health: A case study of the Volga River. Ecotoxicology and Environmental Safety, 71 (3): 837-850 Morales-Caselles, C., Kalman, J., Micaelo, C., Ferreira, A.M., Vale, C., Riba, I., DelValls, T., 2008. Sediment contamination, bioavailability and toxicity of sediments affected by an acute oil spill: four years after the sinking of the tanker Prestige (2002). Chemosphere, 71: 1207-1213. Nipper, M.G., Badar-Pedroso, C., Jos, V.F., Prperi, V.A., 1990, Marine bioassays and their application in coastal management and biological monitoring. 2. Simpsio da Costa Sul e Sudeste Brasileira-Estrutura, Funo e Manejo, guas de Lindia. 1: 160170.

- 58 -

Pearson, T.H., Rosenberg, R., 1978. Macrobenthique succession in relation to organic enrichment and pollution of the marine environment. Oceanography and Marine Biology Annual Revue, 16: 229311. Percy, J. A., 1999. Sea Pen Communications, Fundy Issues #13, Spring 1999. Peters, C., Ahlf W., 2005. Reproduction of the estuarine and marine amphipod Corophium volutator (Pallas) in laboratory for toxicity testing. Chemosphere, 59: 525 536. Picone, M., Bergamin, M., Alessandra, A.N., Noventa, S., Delaney, E., Barbanti, A., Ghirardini, A.V., 2008. Evaluation of Corophium orientale as bioindicator for Venice Lagoon: Sensitivity assessment and toxicity-score proposal. Ecotoxicology and Environmental Safety, 70: 174184. Power, E.A., Chapman, P.M., 1992. Assessing sediment quality. In: Burton, G.A. (Ed.), Sediment Toxicity Assessment. Lewis Publishers, Chelsea, Michigan, 117. Power, E.A., Munkittrick, K.R., Chapman, P.M., 1991. An ecological impact assessment framework for decision-making related to sediment quality. In: Mayes, M.A., Barron, M.G. (Eds.), Aquatic Toxicity and Risk Assessment, Fourteenth Volume, ASTM STP 1124. American Society for Testing and Materials, 4864. Prato, E., Biandolino, F., 2005. Gammarus aequicauda (Crustacea: Amphipoda): A potential test species in marine sediment toxicity assessment. Aquatic Ecosystem Health & Management, 8(4): 475482. Prato, E., Biandolino, F., 2006. Monocorophium insidiosum (Crustacea, Amphipoda) as a Candidate Species in Sediment Toxicity Testing. Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology, 77: 18. Prato, E., Di Leo, A., Biandolino, F., Cardellicchio, N., 2006. Sediment Toxicity Tests Using Two Species of Marine Amphipods: Gammarus aequicauda and Corophium insidiosum. Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology, 76: 629636. Prato, E., Scardicchio C., Biandolino F., 2008. Effects of temperature on the acute toxicity of cadmium to Corophium Insidiosum. Environmental Monitoring and Assessment, 136: 161166. Quintino, V., Rodrigues A.M., Gentil, F., 1989. Assessment of macrozoobenthic communities in the lagoon of Obidos, western coast of Portugal. Scientia Marina, 53: 645654. Quintino, V., Rodrigues, A.M., R, A., Pestana, M.P., Silva, S., Castro, H., 2001. Sediment alterations in response to marine outfall operation off Lisbon, Portugal: a sediment quality Triad study. Journal of Coastal Research, 34: 535549 (special issue).

- 59 -

Quintino, V., Rodrigues, A.M., Freitas, R., R, A., 2008. Experimental biological effects assessment associated with on-shore brine discharge from the creation of gas storage caverns. Estuarine, Coastal and Shelf Science, 79: 525532. R, A., 1996. Estudo da utilizao de Corophium multisetosum (Amphipoda: Corophiidae) na avaliao ecotoxicolgica de sedimentos estuarinos e marinhos. 1996, MSc thesis, Universidade de Aveiro, Portugal. Re, A., Quintino, V., Rodrigues, A.M., 2007. Acute toxicity testing with the European estuarine amphipod Corophium multisetosum. Hydrobiologia, 587: 8999. R, A., Freitas, R., Sampaio, L., Rodrigues, A. M., Quintino, V., 2009. Estuarine sediment acute toxicity testing with the European amphipod Corophium multisetosum Stock, 1952. Chemosphere, in press. Reiss, H., Kroncke, I., 2005. Seasonal variability of benthic indices: An approach to test the applicability of dierent indices for ecosystem quality assessment. Marine Pollution Bulletin, 50: 14901499. Riddick, M., Dunn, S., 2000. Sediment Assessment in a Wetland Restoration Project. Chowan College, North Carolina Phi. Ruiz, J.M., Bryan, G., Gibbs, P.E., 1994. Bioassaying the toxicity of tributyltin(TBT)-polluted sediment to spat of the bivalve Scrobicularia plana . Marine Ecology Progress Series, 113: 119-130. Sanz-Lzaro, C., Marn, A., 2009. A manipulative eld experiment to evaluate an integrative methodology for assessing sediment pollution in estuarine ecosystems. Science of The Total Environment, 407 (11): 3510-3517. Scarlett, A., Rowland, S.J., Canty, M., Smith, E.L., Galloway, T.S., 2007. Method for assessing the chronic toxicity of marine and estuarine sediment-associated contaminants using the amphipod Corophium volutator. Marine Environmental Research, 63: 457470. SETAC Europe, 1993. Guidance document on sediment toxicity assessment for freshwater and marine environments. In: Hill, I.R., Matthiessen, P., Heinbach, F. (Eds.), Workshop on Sediment Toxicity Assessment, Netherlands, Setac-Europe. Silva, S., R, A., Pestana, P., Rodrigues, A.M., Quintino, V., 2004. Sediment disturbance o the Tagus Estuary, Western Portugal: chronic contamination, sewage outfall operation and runo events. Marine Pollution Bulletin, 49: 154162. Schmitt-Jansen, M., Veit, U., Dudel, G., Altenburger, R., 2007. An ecological perspective in aquatic ecotoxicology: Approaches and challenges. Basic and Applied Ecology, 9 (4).

- 60 -

Swartz, R.C., Cole, .A., Lamberson, J.O., Ferraro, S.P., Schults, D.W., DeBen, W.A., Lee, H.I., Ozretich, R.J., 1994. Sediment toxicity, contamination and amphipod abundance at a DDT and dieldrin contaminated site in San Francisco Bay. Environmental Toxicology and Chemistry, 13: 949962. Traunspurger, W., Drews, C., 1996. Toxicity analysis of freshwater and marine sediments with meio- and macrobenthic organisms: a review. Hydrobiologia, 328: 215261. USEPA/USACE. 1991. Evaluation of dredged material proposed for ocean disposaltesting manual. U.S. Environmental Protection Agency and U.S. Army Corps of Engineers. Wenning, R., Batley, G., Ingersoll, C., Moore, M., 2005. Use of sediment quality guidelines and related tools for the assessment of contaminated sediments. Pensacola (FL): Society of Environmental Toxicology and Chemistry (SETAC). 815 p. Wiklund, A-K E., Vilhelmsson, S., Wiklund, S. J., Eklund, B., 2008. Contaminants and habitat choice in the Baltic Sea: Behavioural experiments with the native species, Monoporeia afnis, and the invasive genus, Marenzelleria. Estuarine, Coastal and Shelf Science, 81 (2): 238-246.