VALIDACIN INTERNA DEL MTODO ESPECTOFOTOMTRICO POR ADECUACIN, PARA LA DETERMINACIN DE CROMO (VI) EN AGUAS RESIDUALES

Dannis A Cascaret Carmenaty*, Rosa M Prez Silva** Isabel Aguilera**, Orlindes Calzado Lamela*

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*Facultad de Ciencias Naturales, Universidad de Oriente, **Centro de Estudios de Biotecnologa Industrial, Universidad de Oriente

z Resumen La validacin de mtodos de ensayos constituye una premisa para la realizacin de servicios cientficos tcnicos y una garanta de la calidad de los resultados a reportar. El objetivo de un anlisis qumico es generar resultados correctos y confiables Uno de los aspectos ms importantes para conseguir este propsito es la validacin de ensayos. En el presente trabajo se realiza la validacin de un mtodo espectrofotomtrico para la determinacin de cromo (VI), mediante los siguientes parmetros: linealidad, exactitud, lmites de deteccin y de cuantificacin. Durante el estudio, se utiliza un patrn de referencia interno, se realizan ensayos de recuperacin de muestras, y se demuestra la exactitud en la determinacin al residual estudiado a travs de un contraste de hiptesis, demostrndose que no existen diferencias significativas para un 95 % de confiabilidad entre la media experimental y la reportada. Palabras clave: validacin, cromo, mtodo espectrofomtrico. z Abstract A premise for the realization of scientific technical services and guaranty of quality of aftermath constitutes the validation of methods of essays to yield. The objective of chemical analysis is to generate correct and reliable aftermath and one of more important aspects to get this purpose is the validation of essays. In the present work accomplishes the validation the spectrometric method of determination of chromium (VI) itself of parameters: During the study, an employer of internal reference utilizes himself, they sell off essays of recuperation of signs and the exactness in the determination is demonstrated to the residual gone into through a contrast of hypothesis, Demonstrate that significant differences for a 95 % of dependability among the experimental stocking and the facade do not exist through. Keywords: validation, chromium, spectrometric method. z

Introduccin

Estudios recientes se han ocupado de la repercusin negativa de los metales pesados en los diversos ecosistemas y la salud del ser humano. Hoy en da se conoce mucho ms sobre los efectos de estos elementos, cuya exposicin est relacionada con problemas de salud como retraso en el desarrollo, varios tipos de cncer, daos en los riones, e incluso con casos de muerte. De ah,

la importancia que tiene el estudio de los metales pesados en el medio ambiente, lo cual est dado por su alta toxicidad, alta persistencia y rpida acumulacin por los organismos vivos. Sus efectos txicos no se detectan fcilmente a corto plazo, aunque s puede haber una incidencia importante a corto y mediano plazo. Estos son difciles de eliminar del medio, de ah la necesidad de contar con mtodos de ensayos rpidos para el monitoreo y control de los mismos en el medio ambiente.

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Existe un gran nmero de metales pesados que se encuentra de forma habitual en los medios contaminados por la actividad industrial, entre los ms recalcitrantes y dainos se encuentra el Cr (VI), que si bien es til en aleaciones, en la elaboracin de pinturas, pigmentos para el cemento, caucho y otras aplicaciones, es altamente perjudicial y se acumula fundamentalmente en ambientes acuticos, provocando desequilibrio en los diferentes ecosistemas, donde puede contribuir a la aparicin de enfermedades en los humanos /1/. El grupo de Qumica de Medio Ambiente del Departamento de Qumica y el Centro de Estudios de Biotecnologa Industrial de la Universidad de Oriente, entre sus lneas de investigacin establece la remediacin de ambientes contaminados con metales pesados, siendo una de las tareas por abordar el montaje y validacin de mtodos de ensayos rpidos, confiables, econmicos y sencillos que permitan el control de los metales pesados; por lo que este trabajo tiene como objetivo realizar la validacin por adecuacin de la determinacin espectrofotomtrica de cromo (VI) para ser utilizado en muestras de aguas residuales industriales. z

Mtodos de anlisis

La determinacin de la concentracin de cromo (VI) se realiz mediante el mtodo espectrofotomtrico. El protocolo a seguir para la determinacin de iones cromo (VI) requiere de una curva de calibracin en el intervalo de 0,1-1,0 mg dm -3 de cromo (VI), preparadas a partir de una disolucin patrn de concentracin igual a 5. mg dm -3.

Preparacin de la curva de calibracin

1- Se pipetea una alcuota de la solucin estndar 5 mg /L de 0,5; 1, 2, 3 ,4 y 5 mL para preparar soluciones cuyo intervalo de concentracin va desde 0,1-1,0 mg/L. 2- Se acidifica adicionando 5 gotas (0,25 mL) de cido fosfrico y 2 de cido sulfrico (conc); se utiliza un pH- metro para ajustar el pH de la solucin entre 1,0 0,3 unidades para el desarrollo ptimo del color; segn el Standard Methods the Examinations of Water and Wastewaters es entre 1,6-2,2 unidades. 3- Adicionar de 2 mL de solucin de 1,5 difenilcarbazida en acetona, y esperar 5-10 min para el desarrollo del color rojo-violeta. 4- Lectura de la absorbancia a 540 nm en cubetas de 1 cm; se corrige la lectura de la absorbancia realizando la diferencia de absorbancia del agua destilada contra el blanco. 5- Se grafica la absorbancia en funcin de la concentracin de las soluciones de cromo (VI).

Mtodos experimentales

Las determinaciones se realizaron en un espectrofotmetro Gnesis-10 UV-visible a 540 nm con pozo de luz 1 cm. Toda la cristalera y el equipamiento utilizado en el anlisis fue verificado y calibrado por la Oficina Territorial de Normalizacin de la provincia Santiago de Cuba. Los reactivos empleados fueron de calidad puro para anlisis.

Soluciones:
Solucin stock: Disolver en un matraz aforado de 100 mL 141,4 mg de dicromato de potasio en agua y diluir a 100 mL 1,0 mL= 500 mg de Cr. Solucin estndar: Diluir 1 mL de la solucin stock un matraz aforado de 100 mL 1 mL = 5 mg de Cr. Solucin de 1,5-difenilcarbazida: Disolver en matraz aforado de 50mL 250 mg de 1,5-difenilcarbazida en acetona y enrasar.

Tratamiento de la muestra
Si la muestra lquida presenta slidos en suspensin, debe ser filtrada para eliminar interferencias, y el anlisis debe realizarse dentro de 24 h de colectada la muestra. La porcin de ensayo objeto de anlisis recibe el mismo tratamiento que los patrones. La concentracin de cromo (VI) presente en la muestra se determina por interpolacin.

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Parmetros determinados para la validacin del mtodo

Los parmetros de calidad del ensayo utilizados fueron evaluados segn NC "Gua para la validacin de ensayos qumicos", y los trabajos realizados por Aguilera y col. /11-13/, los cuales se relacionan a continuacin: Linealidad: Es la capacidad del mtodo analtico para obtener resultados directamente proporcionales a la concentracin o cantidad del analito en rango definido. De la solucin patrn de referencia interno de cromo (VI) de 5 mg dm-3 se toman las alcuotas correspondientes para obtener concentraciones de 0,1; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1,0 mg dm-3, y se realiza el procedimiento para un tamao de muestra (n= 10).

Precisin: Se determina mediante el clculo de las desviaciones estndar y tpica relativa (% de coeficiente de variacin), de los resultados obtenidos del anlisis de las muestras a tres niveles de concentracin, utilizando el programa Statgraphics Plus 5.1 para (n = 10). Exactitud o veracidad: Se evala mediante un ensayo de recuperacin para n= 10, y se realiza mediante la determinacin del analito a una muestra de concentracin conocida a la que se le ha adicionado una cantidad de patrn interno que debe corresponder con la cantidad del analito presente en la muestra. Se calcula el por ciento de recuperacin del analito por la siguiente ecuacin:

donde: CMCA: Cantidad de muestra con analito. CMSA: Cantidad de muestra sin analito. CA: Cantidad aadida. Lmite de deteccin: Es la cantidad o el contenido del analito que corresponde a la seal de medicin ms baja que con cierta confianza, puede ser interpretada estadsticamente. Se evala como tres veces la desviacin tpica estndar de veinte muestras blanco. Lmite de cuantificacin: Es la cantidad ms baja de analito en una muestra que puede ser cuantitativamente determinada con cierta confianza. Se evala como diez veces la desviacin tpica estndar de veinte muestras blanco. z Resultados

departamento de Qumica de la Facultad de Ciencias Naturales y el Centro de Estudios de Biotecnologa Industrial de la Universidad de Oriente, se escoge el mtodo para realizar los estudios de validacin y la posible determinacin de los iones cromo (VI) en muestras del residual lquido de la fbrica de piezas de Asbesto Cemento de Santiago de Cuba. Para la evaluacin de la linealidad del mtodo, se determina la recta de mejor ajuste Y = 0,118 3 0,091 2. El coeficiente de correlacin calculado es igual a 0,999 8, demostrando la dependencia lineal que existe entre la concentracin y la seal analtica en el intervalo evaluado. Partiendo de los resultados obtenidos anteriormente, se procedi a la evaluacin de la precisin y exactitud en la determinacin de cromo (VI), con solucin patrn interno en tres niveles de concentracin. Los mismos muestran que existe una buena precisin y exactitud, pues los valores de los coeficientes de variacin (CV) estn por debajo del 10 %, y no se detectan diferencias significativas entre los valores de concentraciones obtenidas y las reportadas para el patrn de referencia interno a un 95 % de confiabilidad de la media, al ser en todos los casos el p- valor mayor que 0,05 (tabla 1).

y discusin

Son muchos los mtodos y tcnicas reportadas para la determinacin de iones cromo (VI), pero dada la sensibilidad y selectividad que tiene el mtodo colorimtrico, y al disponer de un espectrofotmetro en los laboratorios de la seccin analtica del Grupo de Investigacin de Qumica del Medio Ambiente del

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TABLA 1. EVALUACIN DE LA PRECISIN Y EXACTITUD EN LA DETERMINACIN DE CROMO (VI) EN SOLUCIN PATRN DE REFERENCIA POR EL MTODO ESPECTROFOTOMTRICO

Se procede a la determinacin del lmite de deteccin y de cuantificacin. A partir de los resultados obtenidos (tabla 2), se establece que el mtodo puede emplearse en muestras cuya concentracin de cromo (VI) se encuentre por encima de 0,009 mg.dm-3 y cuantifica con exactitud a un 95 % de confiabilidad, para muestras cuya concentracin sea igual o mayor a 0,03 mg.dm-3.

TABLA 2. DETERMINACIN DE LOS LMITES DE DETECCIN Y DE CUANTIFICACIN

Teniendo en cuenta los resultados obtenidos en la evaluacin del mtodo, se procede a la determinacin del contenido de cromo (VI) en

muestras del residual de la fbrica de piezas de Asbesto Cemento de la zona industrial de Santiago de Cuba (tabla 3).

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TABLA 3. EVALUACIN DE LA PRECISIN Y EXACTITUD EN LA DETERMINACIN DE CROMO (VI)

donde: DS- Es la desviacin estndar CV- Es el coeficiente de variacin expresado en por ciento La tabla 3 muestra los resultados en el anlisis del residual, mostrando que el coeficiente de variacin no excede del 10 %, evidenciando la precisin del mtodo. Los resultados del ensayo de recuperacin de la muestra, demostraron la exactitud del mtodo, pues los recobrados alcanzados oscilan entre 93100 %. Cuando se realiza una prueba de hiptesis comparando la media de recobrado para el residual con respecto al 100 % (recobrado terico), no se presentaron diferencias estadsticamente significativas para un 95 % de confiabilidad de las medias, ya que el p- valor es mayor que 0,05; aceptndose la hiptesis de nulidad: (X
terica

3. Es posible utilizar el mtodo estudiado en las determinaciones de cromo (VI) en el grupo analtico del Centro de Estudios de Biotecnologa Industrial y el Departamento de Qumica (CEBI-DQ).

Bibliografa
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-X

experimental

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Conclusiones

1. Se realiz la validacin por adecuacin del mtodo colorimtrico en la determinacin de cromo (VI) en una muestra del residual de la fbrica de piezas de Asbesto Cemento de Santiago de Cuba. 2. La concentracin de cromo (VI) en el residual evaluado es de 1,236 0,020 mg.dm-3, valor que est por encima de la concentracin mxima permisible (0,1 mg.dm -3) segn lo reportado, por lo que el mismo debe ser tratado antes de ser vertido.

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