TERAPIA GNICA

Q.F. JAVIER MARTINEZ CARRERAS

Clulas, cromosomas, genes

Las secuencias concretas de informacin en el ADN se llaman genes.

Todas las caractersticas heredadas son controladas por los genes. A veces, un solo gen est asociado con un rasgo determinado

Terapia gnica
Tcnica teraputica mediante la cual se inserta un gen funcional en las clulas de un paciente humano para corregir un defecto gentico o para dotar a las clulas de una nueva funcin.

Finalidad transf. gen: restablecer una funcin celular que estaba abolida o defectuosa, introducir una nueva funcin o bien interferir con una funcin existente.

CONSIDERACIONES EN LA TERAPIA GENICA

- Conocer y entender la causa de la enfermedad

- Conocer la estructura y funcin del gen a introducir

- Eficiencia de la transferencia del gen en clulas blanco - Control de la expresin del gen

- Prevencin y control de la respuesta inmune

- Riesgo de efectos secundarios (ej: uso de vectores virales) - Ensayos en animales

- Ensayos clnicos

TIPO TERAPIA GENICA FUNCION TIPO CELULAR

1.- TG CELS. GERMINALES: MODIFICAR OVULOS Y ESPERMATOZOIDES DESCENDENCIA. CORREGIR DEF. ENF. CONGENITAS (ACTUAL NO, TECNOLOG. Y ETICOS) (tecn. Sea eficaz y segura)
2.- TG SOMATICA: MODIFICAR CELS. NO GERMINALES NO TRANSM. DESCENDENCIA FUNCION ESTRATEGIA APLICADA

1.- EX-VIVO
2.- IN- VIVO

Transferencia del Gen

Infeccin in vitro de clulas Ex vivo:
se modifica las celulas del paciente en el laboratorio antes de reintroducirlas (ej. hepatocitos, fibroblasto, celulas hematopoyeticas, etc.) In vivo: el vector se trasfiere directamente al paciente (inyectable, respirado)

Seleccin de las clulas corregidas Consideraciones: - Riesgo de efectos secundarios - Eficiencia de la transferencia de genes - Expresin contnua del gen terapetico

Estrategias de Terapia Gnica In vivo

MATERIAL GENETICO INTRODUCE DIRECTAMENTE EN CELS ORG, NO EXTRACCION NI MANIPULACION IN VITRO

VENTAJA: > SENCILLEZ

INCOVENIENTE: GRADO CONTROL SOBRE TODO EL PROCESO DE TRANSFERENCIA ES < CELS. TRANSDUCIDAS NO SE AMPLIFICAN
DIFICIL CONSEGUIER ALTO GRADO ESPECIALIDAD TISULAR

Estrategias de Terapia Gnica Ex vivo

CELS EXTRAIDAS AISLADAS, CRECIDAS EN CULTIVO SOMETIDAS AL PROCESO DE TRANSFERENCIA EN VITRO SELECCIONADAS CELS. TRANSDUCIDAS INTRODUCEN DE NUEVO EN PACIENTE

VENTAJAS: ELECCION CELS A TRATAR MANTIENE ESTRECHO CONTROL SOBRE TODO EL PROCESO EFICACIA TRANSDUCCION GENETICA DESVENTAJAS: > COMPLEJIDAD Y COSTO (protocolos) IMPOSIBLE TRANSDUCIR TEJ NO CRECEN EN CULTIVO

CONTAMINACION (manipulacin)

Estrategias de Terapia Gnica In situ

Aplicacin en cncer Vectores suicidas

Falta de vas seguras y eficaces para implantar los genes correctores Escaso rendimiento Los genes se pierden por muerte celular

Requisitos para un sistema de transferencia de genes

Seguridad y eficiencia Capacidad de funcionar en clulas que no se dividan Garantizar la estabilidad de expresin del gen teraputico Produccin fiable y rentable.

Tcnicas de insercin gnica

Situacin ideal
Curacin de la enfermedad de por vida, con un solo tratamiento y sin que se produzcan efectos colaterales. Insercin por recombinacin homloga del gen teraputico

Situacin actual
El producto sintetizado por el gen sano corrige la carencia o defecto del producto sintetizado por el gen enfermo. Slo son tratables las enfermedades genticas producidas por un solo gen recesivo.

METODOS DE TRANSFERENCIA DEL ADN EXOGENO A CELULAS

I. Mtodos fsicos-qumicos o Mtodos no virales

VENTAJAS: sencillos de preparar (industrial) No limitado por el numero de genes o tamao de fragmento. Poco txicos. No inmunogenicos. Poco eficiente transduccion cels.

Solo in vitro
- Gene gun

Liposomas
Formacin espontnea Las esferas encierran en su interior un plsmido Lipoplejos: complejo de por ADN-liposomas Dificultad de tamao para vehiculizar gran capacidad Menor eficacia que vectores vricos

II. Metodos Virales (virus de DNA, virus de RNA.)

- Mayor eficiencia de transduccin. + usados

- Mayor riesgo
-Retrovirus : ej.:- Moloney murine leukaemia virus (Mo-MuLV), HIV Adenovirus

Herpes Simplex (HSV)

Virus Adeno-asociados (AAV) Lentivirus

Retrovirus
- Alta eficiencia (son incapaces de replicarse ni producir enfermedad en el paciente tratado).

- Hasta 8 kb
- Integracin al genoma del hospedero (integrar su material gentico dentro del genoma celular de las clulas en divisin de tal forma que su progenie tambin ser portadora del transgn). usan + frecuencia correccin permanente enf. Gen. transferencia gentica ex vivo. inconvenientes -Requiere que la clula est en divisin (Slo se integran en clulas en divisin) Alto riesgo (posibilidad de inducir mutaciones al insertarse al azar en el genoma celular)

Adenovirus
Se puede direccionar al virus hacia un tejido o tipo de clula en particular, acoplando ligandos para receptores especficos. -transducir muchos tipos de clulas humanas, incluyendo las que no estn en divisin, y tienen un perfil de seguridad bueno. - desventaja es su corto tiempo de expresin debido a la eliminacin por el sistema inmune de las clulas transducidas que expresan protenas virales.

BIOMOLECULAS TERAPEUTICAS
Principal requisito para desarrollo de terapias gnicas: Identificacin y caracterizacin de secuencias nucleotidicas que podran estar directa o indirectamente implicadas en procesos patolgicos. Incluyen: genes para tratamiento de enf. Genticas especificas, secuencias utilizadas para conferir nuevas propiedades a clulas para tratamiento de enf.

adquiridas y del cncer

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Una ribozima es una molcula de ARN con capacidad de catalizar la escisin especifica de otras molculas de ARN

Dicha escisin produce un ARN mensajero incompleto e inestable lo cual inhibe la expresin proteica.
Por ejemplo se podra proteger contra virus, bacterias o hongos patgenos eliminando especficamente su RNA. Se est estudiando utilizar las ribozimas frente al virus del VIH, virus herpticos. Cualquier ARN mensajero que codifique una protena asociada a una determinada enfermedad puede escindirse selectivamente mediante ribozima expresados a partir de un vector de transferencia gnica adecuado

Sondas antisentido
Basa utilizacin de oligodesoxinucleotidos (ODN) Son pequeos segmentos de ADN o ARN diseados para evitar la expresin de un gen enfermo o una cadena de RNAm de un gen viral u oncogen Agentes teraputicos antisentido inhiben la sntesis proteica al interferir los procesos de transcripcin y/o traduccin. Retrovirus (SIDA) susceptibles a dicho trat. Pretende evitar la transcripcin inversa de su ARN genmico o traduccin de ARN mensajero codificadores de protenas virales, con el fin de prevenir los procesos de infeccin o de replicacin vrica

ADN triplex Asociacion colineal de tres cadenas de ODN Produce cuando una cadena de ODN se une a la hendidura o canal ancho de una doble hlice de ADN Unin de un ODN formador de ADN triplex a un gen diana puede bloquear la transcripcion del ARN, lo cula anularia su expresion. Estudios preliminares inhibicin de la expresin del oncogen HER-2 por formacin de un triplex dentro de una regin polipurinica. Propuesto a los ODN formadores de triplex para la inhibicin de la expresin del virus del sida.

Primer ensayo clnico de TG

Primer Protocolo de Terapia Gnica (1990) Sndrome de Inmunodeficiencia Combinada Severa (SCID)

Defecto en la actividad de la Adenosina Deaminasa (ADA)

Paso inicial proceso degradacin de purinas
Acumulacin ATP intracelular, citotxico a altas conc. critico supervivencias de cels linfoides

Enfermedad gentica
Enfermedad de herencia recesiva
Fibrosis qustica (raza blanca) Enfermedad generalizada que compromete las glndulas exocrinas y sudorparas Causa un defecto en el transporte de cloro en las membranas celulares llevando a la muerte del paciente entre los 10 y 20 aos Las enzimas pancreticas estn disminuidas lo que conduce a la desnutricin y anemia El moco del enfermo esta deshidratado por que no fluye cloro y se retiene el sodio Tratamiento la terapia gnica in vivo Demostrado capacidad vectores adenoviricos para introducir genes en el epitelio pulmonar de modelos animales inicio ensayos clnico en la enf.

Protocolos de Terapia Gnica en Cancer.

Existe hoy posibilidades emplear terapia gnica para tratar y destruir selectivamente las clulas tumorales. Mayora de tratamiento de diferentes formas de cncer Investigaciones en modelos animales sugieren que un mismo gen podra resultar til para varios tipos de cncer

 Objetivo inicial: corregir enfermedades hereditarias monognicas Situacin actual: demostrar la factibilidad del mtodo y su inocuidad La mayora de los ensayos clnicos son en cancerologa Retrovirus ex vivo en el 50 % de los protocolos Adenovirus y vectores sintticos in vivo o in situ Eleccin emprica de dosis de vectores y mtodos de administracin Un solo producto ha sido aprobado en 1998:
Droga antisentido para retinitis por citomegalovirus en pacientes con SIDA (retirado luego por razones comerciales)

Alcance actual

Alcance actual
RNAi: designado el avance cientfico del 2002 es una molcula de ARN que suprime la expresin de genes especficos mediante mecanismos conocidos globalmente como ribointerferencia o interferencia por ARN Gran entusiasmo inicial Inconvenientes relacionados con seguridad Terapia gnica y RNAi siguen manteniendo su potencial de farmacoterapia del futuro Problemas an por resolver: Liberacin gen/nucletico Estabilidad de la expresin Regulacin de la expresin

CONCLUSIN
Mas importante ensayos clnicos de la terapia gnica es la transferencia gnica a seres humanos es factible Los genes pueden ser transferidos a individuos tanto in vivo como ex vivo Todos los vectores utilizados han funcionado Mayora de estudios se han centrado en anomalas hereditarias monogenicas Teniendo en cuenta el numero de ensayos , han sido muy pocos los efectos adversos

Farmacoterapia gnica
Visin de las diferentes estrategias de uso de la Bioqumica y de la Biologa Molecular en el estudio de los mecanismos de accin y en el diseo de frmacos.

Los avances de la investigacin en biologa molecular han demostrado que la mayora de las enfermedades crnicas tienen una base gentica.
Una segunda rea de importancia en terapia gnica es la produccin y administracin de medicamentos para disminuir la expresin de genes nocivos. En este caso, se sintetizan y administran trozos pequeos de ADN, los que entran al ncleo de las clulas humanas y se unen al mensaje gnico (ARN), bloqueando la lectura del mensaje o destruyndolo.

PARTICIPACION DEL FARMACEUTICO

1.- ESPECIALES CARACTER. OBTENCION, ESTABILIDAD, CONSERVACION, DISPENSACION, ADMINIS., RAM Y COSTO 2.- PREVISIBLE COMPETITIVIDAD PROFESIONAL (BIOQUIMICOS, IMNUNOLOGOS, ONCOLOGOS, OTROS) MANEJO DE LOS TRAT.