ESTUDIO FITOQUMICO DE LOS COMPUESTOS FENLICOS PRESENTES EN EL LTEX DE Brosimum alicastrum MACHINGA

RESUMEN El estudio fitoqumico del ltex de la especie Brosimum alicastrum machinga perteneciente a la familia Moraceae, proveniente de la ciudad de Tingo Mara (660 m.s.n.m), provincia de Leoncio Prado del departamento de Hunuco. Se obtuvo el ltex por incisiones en la corteza del tronco del rbol de machinga, el uso tradicional comn le asigna propiedades antiinflamatorias y para problemas reumticos. Para empezar la investigacin el ltex fue sometido a un anlisis fsico-qumico, ensayos de solubilidad y marcha fitoqumica, luego se hicieron tres extracciones con solventes de diferente polaridad: metanol, diclorometano y hexano, separndose los extractos mediante filtracin al vaco y decantacin. Con los extractos metanlico, diclorometnico y hexnico se hicieron anlisis cromatogrficos en capa fina (CCF) analtica para detectar el nmero de metabolitos secundarios y compuestos fenlicos presentes en cada fraccin. El extracto diclorometano permiti aislar un compuesto fenlico que mediante espectroscopia UV visible y reacciones de desplazamiento, fue identificado como 4,7- dihidroxi flavona, del extracto metanlico se aislaron 5 fracciones que correspondan a compuestos fenlicos que al ser analizados por espectroscopia UV visible se demostr que no correspondan a flavonoides, posiblemente podra tratarse de fenoles simples o de fenilpropanoides. La fraccin hexnica contena dos sustancias no fenlicas. Palabras clave: Brosimum alicastrum, ltex, visible, compuestos fenlicos, flavona. espectrofometra UV

SUMMARY The phytochemical study of the latex of Brosimum alicastrum "Machinga" belonging to the family Moraceae, from the town of Tingo Maria (660m.s.n.m), Leoncio Prado province of Huanuco. Latex was obtained by incisions in the bark of the tree of Machinga, used by traditional medical practitioners for the rheumatic treatment y with antiinflammatory properties. To begin the investigation, the latex was subjected to physical and chemical analysis, solubility tests and phytochemical, then made three extractions with solvents of different polarity: methanol, dichloromethane and hexane extracts separated by vacuum filtration and decanting. With the methanol extracts, dichloromethane and hexane were thin-layer chromatographic analysis (TLC) analytical to detect the number of secondary

metabolites and phenolic compounds present in each fraction. The dichloromethane extract allowed to isolate a phenolic compound using UV-visible spectroscopy and displacement reactions, was identified as 4 ', 7 - dihydroxy flavone, were isolated from the methanol extract 5 fractions corresponding to phenolic compounds to be analyzed by UV-visible spectroscopy showed that did not correspond to flavonoids, phenols possibly could be simple or phenylpropanoids. The hexane fraction contained two phenolic substances. Key words: Breadnut, latex, UV visible spectrophotometry, phenolic compounds, flavone. INTRODUCCIN La selva amaznica de Per es una de las zonas con mayor diversidad biolgica del planeta. Es tan grande la variedad de especies que estimndose en promedio ms de 2.000 especies de rboles y ms de 3.000 de plantas, muchas de esas especies se encuentran an sin ser estudiadas adecuadamente, siendo estas utilizadas en forma emprica por sus bondades teraputicas en el cuidado y restauracin de la salud mediante el uso tradicional. Dentro de este contexto, el ltex extrado de los troncos posee productos naturales de gran valor e importancia (1,2, 3,4, 5). Brosimum alicastrum Sw. machinga es una de las especies arbreas ms estudiadas en las zonas tropicales, debido principalmente a su gran variedad de usos (madera, alimento, medicinas). Una de las caractersticas propias del gnero Brosimum es la gran cantidad de ltex presente en la corteza de los troncos, otorgndole una gran capacidad regenerativa en sitios perturbados y terrenos abandonados (6,7). El ltex pegajoso que se torna rosceo al contacto con el aire permitndole diferenciarse del resto de rboles. Entre los metabolitos presentes, generalmente contienen sustancias en suspensin tales como gomas y muclagos, almidn, alcaloides, compuestos fenlicos, flavonoides, terpenoides, entre otros (8). La importancia de la fitoterapia en nuestros das pone de manifiesto la necesidad de investigar sobre las propiedades farmacolgicas de numerosas plantas que an no han sido del todo estudiadas e investigadas en extenso como es el caso del Brosimum alicastrum Sw. muy usada en la Medicina Tradicional, para el tratamiento de diversas dolencias como problemas reumticos, inflamatorios, digestivos entre otros.

MATERIAL Y MTODOS RECOLECCIN DE LA MUESTRA DE Brosimum alicastrum MACHINGA El ltex fue recolectado en la ciudad de Tingo Mara (660 m.s.n.m.), capital de la provincia de Leoncio Prado, departamento de Hunuco; fueron extradas mediante incisiones hechas verticalmente y no ms de 4 sangras al mismo tiempo en la corteza del tronco. Luego se recolect en un recipiente de vidrio mbar de boca ancha, mantenindolo cerrado hasta el momento de los anlisis correspondientes. EXTRACCIN DE LOS COMPONENTES DEL LTEX DE Brosimum alicastrum MACHINGA La obtencin de los componentes del ltex de machinga se realiz mediante extraccin por solventes en una pera de decantacin, con solventes de polaridad decreciente, asistidos mediante filtracin al vaco y decantacin. Se usaron metanol, diclorometano y hexano. El mtodo consisti en colocar 100g de ltex en un beaker de 250mL, con 100mL de metanol, se agit moderadamente varias veces, luego se procedi a filtrar en un matraz de kitasato al vaco, repitiendo el proceso con 50mL de metanol. Los filtrados se recibieron en un beaker de 100mL que a las 24 horas se torn a una coloracin parduzca, observndose un precipitado oscuro. Obtenindose un residuo blanquecino (torta), pasndose a un beaker de 250mL, se le aadi 100mL de diclorometano y se agit hasta obtener una solucin transparente que fue filtrada al vaco, se repiti el proceso con 50mL de diclorometano, se juntaron los filtrados en un beaker 100mL a temperatura ambiente, el cual a las 24 horas form un precipitado blanquecino escamoso. Al residuo que qued se trat con 50mL de n-hexano que fue decantada aun beaker de 100mL. ANLISIS FISICO-QUMICO Para el anlisis organolptico del ltex de machinga se tom una alcuota y se dispuso en una placa petri para poder distinguir el olor, color y aspecto de la muestra. Se recomienda previa agitacin antes de proceder con los anlisis. SOLUBILIDAD Los ensayos de solubilidad se llevaron a cabo utilizando solventes de diferente polaridad: agua, metanol (MeOH), etanol, diclorometano (DCM), acetato de etilo (AcEt) y n-hexano. Para ello se prepar un juego 7 tubos de ensayos conteniendo cada uno 1mL del ltex con 1mL de cada solvente; el stimo tubo se utiliz como blanco y tubo de comparacin.

CROMATOGRAFA EN CAPA FINA ANALTICA (CCF) Una vez preparadas las placas cromatogrficas se procedi a sembrar con ayuda de capilares las tres extracciones obtenidas a partir del ltex de machinga en una placa de 20 x 20 cm. Se sembr a 1.5 cm de la supeficie, y se sec para colocarlo en el sistema de solventes: diclorometano y metanol en la proporcin 4:1, respectivamente. Posteriormente se procedi a revelar con UV a 254 nm y 366nm de longitud de onda. Seguidamente se revel con reactivo de Dragendorff para determinar alcaloides; tricloruro frrico, grupos fenlicos; y cido sulfrico, flavonoides. Finalmente, se aislaron los metabolitos que lograron separarse a partir de la CCF en viales, utilizndose el metanol como solvente. ESPECTROSCOPIA UV VISIBLE Se utiliz el espectrofotmetro UV visible con arreglo de yodo 8452 HEWLETT PACKARD para realizar la identificacin de las fracciones obtenidas a partir de la CCF. RESULTADOS Caractersticas organolpticas del ltex de machinga: present un color blanquecino rosceo, un olor caracterstico y aspecto semilquido denso y lechoso. Propiedades fsico qumicas del aceite esencial de mua: present una densidad relativa (25 c) de , una rotacin especfica (20 C) de , un ndice de refraccin (20 C) de .

TABLA 1. Ensayo de solubilidad del ltex de Brosimum alicastrum SOLVENTE agua metanol etanol diclorometano acetato de etilo n-hexano OBSERVACIN SOLUBLE POCO SOLUBLE POCO SOLUBLE INSOLUBLE INSOLUBLE INSOLUBLE

TABLA 2. Cromatografa en capa fina analtica (CCF) de los extractos del ltex de Brosimum alicastrum OBSERVACIN EXTRACTO Triclorur o frrico
COLOR VERDE OSCURO (Grupos fenlicos) COLOR VERDE OSCURO (grupos fenlicos) NOY HAY COLOR

Dragendo rff

cido sulfri co
NO HAY COLOR

UV

METANLICO

COLOR ROSADO

NO HAY FLUORESCENCI A FLUORESCENCI A AZULINA A 366nm FLUORESCENCI A VERDE LIMN DESPUS DE AADIR H2SO4 NO HAY FLUORESCENCI A

DICLOROMETNIC O

NO HAY COLOR

NO HAY COLOR

HEXNICO

NOY HAY COLOR

Anlisis espectrofotomtrico de la fraccin en DCM del ltex de Brosimum alicastrum. (flavonoide) Mediante espectrofotometra UV visible de la fraccins aislada del extracto del latex de Brosimum alicastrum machinga de Tingo Mara, se obtuvieron los respectivos espectros; que al ser comparadas con lo publicado por Mabry TJ. et al 1970 correspondiente a un flavonoide (ver FIGURAS) Fraccin 1. Lecturas en el espectro UV-visible: : 295, 324 nm : 320, 376 nm : 292, 324 nm : 292, 324 nm FIGURA 1. 4,7-dihidroxi flavona y por anlisis de los reactivos de desplazamiento se propone una estructura qumica

FIGURA 2. FRACCIN 1 EN METANOL

FIGURA 4. FRACCION 3 EN METANOL

FIGURA 3. FRACCION 2 EN METANOL

FIGURA 5. FRACCION 4 EN METANOL

FIGURA 6. FRACCION 5 EN METANOL

FIGURA 6. FRACCION DE DICLOROMETANO EN METANOL

FIGURA 7. FRACCIN DICLOROMETANO EN METANOL CON METOXIDO DE SODIO

FIGURA 8. FRACCIN DICLOROMETANO EN METANOL CON TRICLORUO DE ALUMINIO

FIGURA 9. FRACCIN DICLOROMETANO EN METANOL CON TRICLORUO DE ALUMINIO Y CIDO CLORHDRICO

DISCUSIN Segn el espectro en metanol el esqueleto bsico que corresponde esta fraccin es de una flavona, al tratarlo con metxido de sodio hay un marcado efecto bactocrmico tanto en el anillo A como el anillo C, lo que nos indicara que el compuesto tiene hidroxilos libres en la posicin 4 y en 7, al hacer reaccionar con tricloruro de aluminio no se observa efecto bactocrmico que luego al tratarlo con HCl los picos se mantienen, esto nos indica ausencia de hidroxilos libres en la posicin 5, as como ausencia de hidroxilos adyantes o en posicin orto. Por consiguiente se propone la estructura de la figura 1. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS 1. The systematic Identification of flavonoids. T.J.Mabry, K.R.Markham, M.B. Thomas. SPRINGES-VERLAD.Printed in the United States of America. Berlin,1976. Web: 1. Plan de Negocios del Sistema de Informacin de la Diversidad Biolgica y Ambiental de la Amazona Peruana, SIAMAZONA. Villacorta, Edwin J.. Instituto de Investigaciones de la Amazona Peruana (IIAP). 2007. 2. http://siatac.siac.net.co/web/guest/inicio 3. http://www.rngr.net/Publications/ttsm/Folder.2003-0711.4726/PDF.2003-11-12.2112/file 4. http://www.theequilibriumfund.org/page.cfm?pageid=2996 5. http://www.fao.org/nr/land/en/ 6. http://redalyc.uaemex.mx/redalyc/pdf/617/61790102.pdf 7. http://www.fincaleola.com/ojoche_espa.html 8. http://vidaysaludnatural.blogspot.com/2005_10_01_archive.html