PROBLEMARIO 1.

Usted inocul un matraz que contena 97 ml de caldo BHI, con 3 ml de una suspensin de bacterias que contiene 13500 bacterias por mililitro. Se hizo una cuenta viable despus de 18 horas de incubacin de la siguiente manera: se hicieron diluciones decimales utilizando 0.15 ml como alcuota de cada tubo en placas de agar cuenta viable. Despus de incubar las placas, se observ que en aquellas de la dilucin 10-7 haba 248 colonias y en la dilucin 10-8 haba 26 colonias. a. Cuntas bacterias haba en el inoculo? b. Cuntas UFC/ml se obtuvieron despus de incubar el matraz de BHI? 2. Se inocul un matraz de 250 ml conteniendo 50 ml de medio de cultivo, con 5 ml de una suspensin de 9.5 x 108 bacterias/ml, se incub durante 12 horas alcanzando una concentracin final de 1.12 x 109 bacterias/ml. Al seguir el crecimiento por nefelometra, se observ que la fase Lag dur 115 minutos, si el cultivo alcanz el nmero m calcular:} a. Cuntas bacterias haba en el inculo? b. Cul fue el tiempo de duplicacin de la bacteria? 3. En un experimento en el que se sembr Enterobacter aerogenes procedente de un cultivo anaerobio en un medio conteniendo sulfato de amonio y glucosa, con aireacin suave, a 37C, se hallaron los resultados que se expresan a continuacin. La cantidad inoculada fue de 2 x 106 bacterias por ml. Tiempo 400 150 200 250 280 310 340 370 (min) No. 812.7 Bacterias 14.1 38.9 104.7 190.6 346.7 616.5 794.2 (106/ml) a. Determinar grficamente el tiempo de generacin medio del microorganismo en las condiciones citadas b. Si existe o no un perodo de induccin (adaptacin) y en caso afirmativo calcular su duracin. 4. Enterobacter aerogenes se sembr simultneamente en tres medios diferentes: peptona y dos medios qumicamente definidos que contenan, respectivamente, glucosa y cido ctrico como nicas fuentes de carbono. La inoculacin en cada uno de los casos fue de 3 x 105 bacterias por ml. Transcurridas 4.5 horas se hicieron los respectivos recuentos en cada cultivo obtenindose para la peptona el valor de 9732 x 106, para la glucosa 41.11 x 106 y para el citrato 1.427 x 106 bacterias/ml. El cultivo de citrato fue el nico que manifest fase de induccin cuya duracin fue de 90 minutos y las bacterias de cada cultivo estaban todava en la fase logartmica de crecimiento. a. Cul fue el tiempo de generacin medio para el microorganismo en cada cultivo? b. Hacer comentarios acerca de los resultados obtenidos. 5. En un medio de cultivo conteniendo glucosa y amonio se sembraron 2.5 millones de Enterobacter aerogenes por ml, al principio sin aireacin. Transcurrido cierto tiempo se hizo pasar una corriente de aire a travs del cultivo hasta que ces el crecimiento. Con los datos que se expresan ms adelante,

a. Calcular el tiempo de generacin medio del microorganismo durante el crecimiento con y sin aireacin b. Calcular el tiempo despus de la inoculacin durante el que se insufl aire. 370 Tiempo (min) 100 130 160 190 220 250 280 310 340 No. Bacterias (106/ml) 13.8 23.44 39.81 66.07 117.5 223.9 436.5 812.8 1122 1148

6. Escherichia coli se cultiv en un medio que contena 0.5g por litro de fructosa como nica fuente de carbono que se agot a los 538 minutos. El nmero de bacterias sembradas fue de 5 x 10 4 por mililitro. Si la relacin entre crecimiento estacionario y concentracin de fructosa es lineal hasta 0.80 g/l de azcar, calclese: a. a qu concentracin de azcar, la poblacin microbiana alcanza 3.2 x 108 bacterias por ml? b. Cul es el tiempo de generacin medio del microorganismo en este medio? c. Qu tiempo transcurrir hasta que cese el crecimiento en presencia de exceso de fructosa si se siembra la misma cantidad de bacterias? Hay que suponer que la discontinuidad en la proporcionalidad existente entre el crecimiento total y la concentracin de fructosa es muy marcada. 7. Se sembraron 5 x 105 Escherichia coli por ml, en un medio de cultivo que contena 0.25 g de glucosa y una cantidad desconocida de galactosa. No hubo fase de induccin y las bacterias crecieron con un tiempo de generacin medio de 40 minutos consumiendo glucosa. Cuando sta se agot las bacterias se adaptaron a la galactosa creciendo con un tiempo de generacin medio de 45 minutos hasta alcanzar una poblacin estacionaria de 3.08 x 108 bacterias/ml transcurridas 6 horas 30 minutos de la inoculacin. a. Determinar la duracin de la fase de adaptacin entre los dos ciclos de crecimiento, as como la concentracin de galactosa presente en el medio, habida cuenta que la relacin entre poblacin estacionaria y concentracin de azcar es una funcin lineal hasta 0.9 g/l de cualquier azcar a cuya concentracin la poblacin estacionaria es de 3.7 x 108 bacterias/ml

NOTA: Entregar el presente problemario el da del examen TOTALMENTE resuelto, indicando operaciones y planteamiento. M. en C. Graciela Gonzlez Lugo