Trabajo científico

Recogida de muestras para el laboratorio ¿Qué, cómo, cuál, cuánto?
Paloma Chaves Sanz
Directora técnica del laboratorio APG Rodriguez San Pedro 10 28015 Madrid

Obtención
La primera pregunta que nos planteamos cuando tenemos que hacer un análisis de sangre es ¿qué tipo de aguja debo emplear, en que tipo de tubo tengo que recogerlo, qué cantidad de sangre se necesitará? El uso de palomillas o agujas y el distinto calibre de las mismas, lo mismo que el volumen de las jeringuillas y la elección de la vena dependerá en ocasiones del tamaño del animal al que vamos a extraer la sangre. La cantidad de sangre extraída dependerá también de las pruebas que solicitemos al laboratorio. La aguja rosa es de 18G (la más gruesa), la amarilla de 20G, la verde de 21G, la azul de 23G y la naranja de 25G de insulina (la más fina). (Fig. 1)

Figura 2 ¿Qué tubo elijo?

Figura 3 Código Internacional de colores para recogida de tubos (Norma ISO 6740)

Figura 1¿Qué calibre de aguja, que jeringuilla, qué cantidad? Dependerá del tipo de animal.

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de la glucosa GRIS Sin anticoagulante Bioquímica Inmunología ROJO En cuanto a los tubos.8%: 1vol.4 Tubos de EDTA 15   . El tubo de tapón gris lleva fluoruro sódico y se utiliza para determinación de glucosa. Actúa como anticoagulante por ser quelante del calcio de la muestra. sangre Hemostasia Coagulación AZUL Fluoruro Sódico Inhibe glucólisis 2-4mg/ml Conservador de la glucosa Deter. litio y amonio se utiliza para perfiles bioquímicos. Fig. Li. Tubo de tapón lila lleva EDTA sódico o potásico se usa para la realización de hemogramas y estudio de células y parásitos hemáticos. 3. Tubo de tapón verde lleva heparina sodio. Anticoagulante Modo de acción Cantidad/ ml sangre Ventajas Inconvenientes Utilización Color tapón EDTA Na o K Quelante Calcio Inhibe paso protrombinatrombina 1-2 mg/ml Conserva morfología células sanguíneas Conserva pH sanguíneo Interfiere determinaciones bioquímicas Hemograma Parásitos hemáticos LILA Heparina Na.Recogida de muestras para el laboratorio ¿Qué. potasio. Tubo de tapón azul lleva citrato sódico y se utiliza para pruebas de coagulación. (Figura 3). cómo.citrato/ 9 vol. La concentración de la muestra debe ser de 1-2 mgr/ml de sangre. Con él obtenemos suero para pruebas de bioquímica. Hemograma El tapón lila corresponde al anticoagulante EDTA (etilendiaminotetra-acético) en forma de sales de sodio o potasio (Fig. hormonas e inmunología. Li. Tubo de tapón rojo no lleva ningún tipo de anticoagulante.K.Chaves P. cuánto? . El EDTA es el anticoagulante que mejor conserva las células sanguíneas.NH4 20 U/ml Desaconsejable hematología Conserva factores lábiles coagulación algunas horas Desaconsejable en otras determinaciones bioquímicas Perfiles bioquímicos VERDE Citrato sódico Quelante calcio Sol. Esto lo conseguimos añadiendo la cantidad de sangre que nos indica el tubo.4). cuál. existe un Código internacional de colores para recogida de tubos (norma ISO 6740). Dependiendo del color del tapón el anticoagulante será diferente y se utilizará para distintos fines.

indicando: • • • • • • Los datos del animal: Nombre. Evitaremos así un posible error preanalítico que puede complicarse en el laboratorio. Mirad en el tubo siempre la señal hasta donde hay que llenarlo de sangre. NO   16 . Determinación que se solicita. Tipo de muestra. Si el volumen de sangre es menor se nos producirán: Hemólisis. la sangre puede salirse y no os podéis imaginar lo que cunde una gota de sangre (Fig. Datos de la clínica o veterinario que la remite. Se puede hacer un hemograma con 0. edad. (Figura 11) Si además acompañamos a las muestras identificadas de un protocolo facilitaremos mucho el trabajo al laboratorio. Breve historia clínica. Métodos Una vez obtenida la muestra de sangre quitamos la aguja de la jeringuilla y solo con esta introducimos la sangre en el tubo correspondiente. Tratamientos empleados.10). sexo. os llevará unos segundos más y hacedlo como si fuera un tubo de tapón hermético (Fig. 9) en un sobre y no podéis imaginaros como llega el tubo o tubos que le acompañan al laboratorio pues sigue goteando. Figura 10 Por favor quitad el tapón. Figura 7 El tubo de la izquierda tiene poco volumen de sangre y el de la derecha demasiada por lo que se ha formado un coágulo. falsas disminuciones del hematocrito. 8). Figura 9 Figura 5 SI Figura 6 Figura 8 NO Si añadimos un volumen distinto de sangre al indicado en el tubo tendremos problemas. Tapamos con el tapón e invertimos suavemente varias veces (cinco o seis) para que la sangre se mezcle bien con el anticoagulante. Identificación Es importantísimo identificar los tubos con los datos del animal al que realizaremos el análisis antes incluso de depositar la sangre en él. raza. VCM y falsos aumentos de CCMH.5 a 1 ml de sangre. Si el volumen de sangre es mayor al del tubo se nos coagulará la sangre. (Figuras 5 y 6). En caso de usar tubos Tapval podemos quitar la aguja e introducir en émbolo por el orificio superior (Fig. crenación de los hematíes. Nunca bruscamente como si fuera una coctelera. es muy cómodo pero si lo vamos a remitir al laboratorio.Trabajo científico Excepcionalmente podemos hacer un hemograma en tubos con otro tipo de anticoagulante como por ejemplo Heparina litio pero conserva peor la morfología celular y se producen con más frecuencia todavía agregados plaquetarios.

NO Pruebas de bioquímica Las podemos hacer prácticamente todas en suero. Si el volumen de sangre es menor se nos producirán: Hemólisis. en plasma también siempre que el anticoagulante no interfiera en la prueba. La extracción de sangre extravasada puede producir hemólisis y agregación plaquetaria (Fig. creación de los hematíes (Fig. Crenación de hematíes Figura 16 NO Si el volumen de sangre es mayor al del tubo se nos coagulará la sangre. Agregados plaquetarios. Las plaquetas deben determinarse lo antes posible para evitar agregados. 16). Fig. Hay una serie de factores a considerar Un animal estresado puede presentar Híperglucemia. VCM y falsos aumentos de CCMH. neutrofilia madura y/o linfocitosis. falsas disminuciones del hematocrito.13. 15). Hemólisis NO La contaminación con el líquido de fluidoterapia producirá una dilución de la muestra e incluso contaminación de la misma si el fluido lleva potasio produciendo hiperkalemia (Fig. Figura 12 Fig. 15. 14. 18 . 13 y 14) Figura 10 SI Fig. JAMÁS introducir en el congelador. Los frotis sanguíneos deben realizarse como máximo dos horas después de haber obtenido la muestra y fijarlos en metanol durante dos minutos una vez secos. Produciremos hemólisis si usamos agujas de bajo calibre y jeringas de alto volumen (Figura 12).Trabajo científico La contaminación con un exceso de antiséptico puede producir hemólisis debido al alcohol. Conservación: Lo ideal son dos horas desde la obtención de la muestra a temperatura ambiente o 24 horas en nevera a 4º C para no alterar los valores del hemograma.

Diferencias entre el suero y el plasma Suero • Riesgo de hemólisis mayor que en suero • Centrifugación tras coagulación • Muestra idónea para la mayoría de pruebas: bioquímicas e inmunológicas • No contiene fibrinógeno Plasma • Riesgo de hemólisis menor que en suero • Centrifugación inmediata • En pruebas bioquímicas posible interferencia con anticoagulante (mínimas con heparina Litio) • Contiene fibrinógeno Fig. cuánto? . Lo ideal es separarlos antes de las dos horas de recogida de la sangre. cuál. 2 días 5 días 1 día 7 días 1 día 7 días 10 días 2 días 1 mes 3 días 2 semanas 2 semanas Varios meses 19 . esto suele ser lo habitual. 17. Tenemos que asegurarnos que el tubo elegido para suero no lleve anticoagulante de ningún tipo. Para inmunología el tubo de elección es el de suero lo mismo que para la determinación de hormonas. Si la sangre no desuera bien. Fig.17).500-3000 rpm durante 5-10 minutos.19 El microtubo de la Fig. centrifugaremos a 2. (18 y 19). 18 se dejó en posición horizontal el de la Fig. 17) pues no interfieren los resultados sin embrago en EDTA interfieren las pruebas enzimáticas (fosfatasa alcalina) y los iones Ca y K. No debemos refrigerarlo antes de su coagulación y retracción del coagulo (de treinta minutos a una hora después de la recogida) pues produciríamos hemólisis. Conservación de suero o plasma Se conserva 3 días a 4º C y congelado a – 20º C durante mucho tiempo Conservación de las muestras Compuesto Albúmina ALT (GPT) AST (GOT) Bilirrubina total Calcio Colesterol Creatinina Fosfatasa alcalina Fósforo inorgánico GGT Glucosa (en FlNa) Potasio Proteínas totales Urea 20 – 25 º C 6 días 1 día 3 días Solo muestra reciente 10 días 6 días 1 día 4º C 6 días 7 días 7 días 10 días 6 días 1 día -20º C Varios meses 1 mes 1 mes 8 meses 4 meses Varios meses 1 mes Varios meses 1 mes Varios meses 6 meses 10%actividad 7 días en 7 d.Recogida de muestras para el laboratorio ¿Qué. 18 Fig. tenemos que dejarlo en posición vertical y a temperatura ambiente Fig. según las norma ISO 6710 (Fig. tubos con tapón verde (Fig. 19 en posición vertical. en los dos se ve el coagulo y su retracción. En el mercado hay tubos sin anticoagulante que no siguen esta norma y hay tapones de todos los colores. Los tubos de suero no llevan ningún tipo de anticoagulante y el tapón es de color rojo. Si la sangre la recogemos en tubo de heparina litio podemos centrifugarla inmediatamente después para la obtención del plasma. Tubos de Heparina Li y sin nada   Manejo de las muestras Si recogemos la sangre en tubo de suero. Las pruebas de bioquímica también pueden hacerse en plasma recogido en un tubo con heparina litio.Chaves P. cómo.

Fig. Para coprocultivos los frascos deberán ser estériles.000 rpm durante 15 minutos. Refrigerar un máximo de 2 horas o congelar a -20 ºC. Centrifugar antes de los 30 minutos de extracción de la sangre a 3. 22 22 . jeringuillas y portas. Análisis de heces Lo ideal son los análisis seriados de 3 a 5 días en caso de diagnóstico de giardias por ejemplo. Usar recipientes adecuados NO USAR BOLSAS DE PLASTICO o PAPEL DE ALUMINIO para remitir las muestras. Fig. Para el urianálisis solo son necesarios 5 ó 10 ml de orina. micción espontánea. 21). que inhibirá las enzimas de la glucólisis y conserva el valor de glucosa durante 24 horas a temperatura ambiente o 48 horas a 4 º C. 20). Conviene indicar la forma de recogida de la muestra: Métodos: Podemos realizarla de dos formas: Punción con aguja fina o punción–aspiración con aguja fina. Para el cultivo bacteriológico se empleará un tubo estéril o la propia jeringuilla de extracción. Las cantidades de sangre serán las correspondientes al volumen de anticoagulante. (9 partes de sangre por 1 de anticoagulante). Si no lo hacemos siguiendo este protocolo no podremos valorar la glucosa pues se produce un consumo de esta por parte de los hematíes.Trabajo científico Determinación de glucosa La sangre la podemos recoger en un tubo de suero. Coagulación Fig. Los portas con las extensiones para las citologías deben ir fijadas en metanol. Urianálisis Recomendamos NO USAR frascos de orina para remitir la muestra al laboratorio. sonda o cistocentesis y especialmente cuando se trate de urocultivos. tubo de tapón gris (Fig. en cuyo caso el frasco o tubo deberá ser estéril. Líquidos orgánicos Se remitirán en dos tubos. Durante el transporte suelen ser frecuentes los accidentes. Se conservan perfectamente de 12 a 24 horas a 4 ºC. 21 Tubos de Citrato sódico   Citologías y biopsias Citologías Materiales: Agujas. Se conservaran a 4ºC excepto la última muestra que se enviará a temperatura ambiente y lo más fresca posible. a no ser que sean herméticos es preferible remitirla en tubos. uno con EDTA para el recuento de células y la citología y otro de suero para pruebas bioquímicas en caso de que se soliciten. 20 Tubos de fluoruro Na La sangre se recogerá en un tubo de citrato sódico. en cuyo caso la deberemos centrifugar en el momento que se haya coagulado o en un tubo con Heparina Litio en cuyo caso deberemos centrifugar inmediatamente o en un tubo de Fluoruro sódico. tubo de tapón azul (Fig.

punch. Hay otras fórmulas pero esta es la más común. separamos la aguja y llenamos la jeringuilla de aire. Biopsias Materiales: Bisturí. 26 y 27).24). Se enviarán en porta. Sacamos la aguja y la volvemos a introducir en otra dirección y aspiramos de nuevo. 25 No tomaremos muestras de zonas ulceradas pues solo reflejara el proceso inflamatorio. cuánto? . Tamaño El tamaño ideal de la muestra seria de 1cm x 1cm aproximadamente. 24 Fig. cómo. ponemos sobre el porta que contiene la gota otro porta formando una cruz con el anterior y lo deslizamos suave y rápidamente. frascos herméticos.5 cms perpendiculares al eje mayor o tomar varias muestras incluyendo los márgenes de extirpación (Fig.Chaves P. Métodos: Fig. Es decir. Ponemos la aguja de nuevo y vaciamos la jeringa en un porta (Fig. En caso de muestras de mayor tamaño deberemos hacer cortes cada 1. Dejamos secar y fijamos con metanol. 25). Si lo visualizamos nosotros se teñirá con técnicas Romanowsky. Fig.preparaciones de plástico o envueltas en papel absorbente para acolcharlas. 26 23 . Recipientes Existen distintos tipos de recipientes. cuál. En lesiones de gran tamaño la zona central suele estar necrosada/inflamada por tanto debemos ir a los bordes. Hacemos la extensión inmediatamente por el procedimiento de squash o aplastamiento (Fig. Fig. la única condición es que sea hermético y adecuado para la muestra (Fig. 22 Las dos técnicas son muy similares. 22). Formol al 10%: Se prepara con 1 parte de formaldehído al 40%. Lo remitimos al laboratorio sin teñir. Deberá ir perfectamente identificado. 9 partes de agua (también puede substituirse el agua por solución salina fisiológica al 9%). El más común es el formol al 10%. pinzas. La primera es ideal para ganglios pues al ser estos muy frágiles asegura la integridad de las células y en tejidos muy vascularizados para minimizar la contaminación sanguínea. fijador (Fig. 23).Recogida de muestras para el laboratorio ¿Qué. Introducimos la aguja y aspiramos con una jeringuilla de 10 ml. Una vez realizada la aspiración. tijeras. Fijación La fijación de las muestras para oncología se hace por métodos químicos (fijadores).

Datos de la clínica o veterinario que la remite. 4. Localización: Día y hora de la extracción y fijación. Mosby 1. • La muestra no está fileteada en porciones de 1. Meinkoth JH: Diagnostic cytology and hematology of the dog and cat. Ed. American Veterinary publications. 3. Figura 29 • El frasco es de plástico y hermético pero demasiado pequeño para la muestra. Ed. Martínez de Merlo. 27 Volumen de fijador Deberá superar el volumen de la muestra en una proporción 20:1 o 40:1 Se debe sumergir el material en el fijador y no a la inversa para evitar el contacto de esta con las paredes y el fondo del recipiente. edad. Tratamientos empleados y respuestas a estos. Acribia BE Powers “The Pathology of Neoplasia” Small Animal Clinical Oncology 2. sexo. Bush B. raza. Inc 1. Errores Figura 28 • No es aconsejable el uso de frascos de cristal pues durante el transporte pueden ocurrir accidentes. Ed. • No está etiquetado o identificado el frasco Protocolo Las muestras deberán ir acompañadas de un protocolo con: • • • • • • Los datos del animal: nombre. Bibliografía 1. está vacío. Henry J.999 Davidsohn I. Ed. 5.M. evitando que se adhiera.989 CowellRL.008 7. 24 . E. está entera. Weisbrode: “The Histopathology laboratory in Diagnosis of Neoplasia” Por favor recordad que enviáis la muestra a un citólogo o a un patólogo no a un adivino. • No hay fijador en el frasco. Salvat 6ª edición 6.: Diagnóstico clínico por el laboratorio.Trabajo científico Fig. Servet 2. Historia clínica. Si la muestra flotara (pulmón) la sumergiremos totalmente en el fijador. Tayler RD.: Manual del Laboratorio Veterinario de Análisis Clínicos. Ed.: Atlas de citología clínica del perro y el gato.Tayler RD: Diagnostic Cytology of dog and cat.001-WD Saunders Co Cowell RL.5 cms. En formol las muestras no se alteran en semanas o meses. Analíticas si las hubiera. • El volumen del fijador no es el adecuado. Figura 28 NO Figura 29 NO Duración de la fijación Generalmente las muestras están fijadas a las 24-36 horas de haberlas introducido en el fijador. Steven E.B.5 cm. 2. • La muestra no está fileteada en porciones de 1.

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