PURIFICACION DE UNA PROTEINA A TRAVEZ DE UN MODELO SIMULADO POR COMPUTADORA OBJETIVOS Que el alumno conozca y pruebe a travez de un modelo

simulado los diferentes mtodo de purificacin de protenas a travez de prueba y error. HIPOTESIS Para realizar una purificacin de la protena tenemos que tomar en cuenta sus propiedades fisicoqumicas Al realizar la purificacin de una protena se tienen que tomar en cuenta sus propiedades fisicoqumicas Si conoces las propiedades fisicoqumicas de una protena entocnes podras realizar un buen mtodo de purificacin. El saber algunas de las propiedades de la protena nos ayuda a seleccionar que mtodo de purificacin ser el adecuado. DESARROLLO Se purifico la PROTEINA 9 con las siguientes caractersticas:

Lo primero que se realizo fue un tratamiento con calor a una temperatura de 48C durante dos horas, estas condiciones las escog a partir de las propiedades de la protena, para solo desnaturalizar a las otras protenas que no eran las que quera y poder ir quedndome con mi protena de inters. Despus lo que hice fue un ensayo de la actividad enzimtica para verificar si mi protena segua ah, despus junte todas las fracciones y realice una electroforesis en gel de poliacrilamida y con esto me di cuenta de otras dos caractersticas de mi protena. Tena un punto isoelctrico de 6.8 y un peso molecular entre 20K y 25K. Por lo que prosegu a realizar una filtracin en gel Para mi filtracin en gel me fije en su peso molecular y escog la columna BioGel-P-60 poliacrilamida cuyo rango de separacin para protenas globulares es de 3.000 a 60.000. Escog

esta columna porque el peso de mi protena estaba entre 20 y 25. Debido a que una filtracin en gel separa molecualas de acuerdo as u peso molecular y como mi protena tiene un peso molecular menos, primero saldra todas las de peso molecular mayor y despus las de menos peso entre ellas la protena que me interesa. Despus volv a realizar una electroforesis en gel de poliacrilamida y observe que la protena que quera se encontraba ya sola entre un ph de 6.5 y 7 y las dems se econtraban a pH<5 por lo tanto decidi hacer una cromatografa de intercambio ionico, en donde va a separar las protenas de acuerdo a su carga y tomando en cuenta su punto isoelctrico. Para ese ensayo decidi tomar carboximetil-celulosa a un ph de buffer de 6.8 en un intervalo de 5 a 7 pero me di cuenta que no lograba mucho purificar mucho, por lo que decidi hacer una cromatografa por afinidad en la cual tome un anticuerpo monoclanal inmovilizado MC09A y elui con tris/HCl 2mM, pH 7, estos los tome albitrariamente pero de igual forma no lograba una buena purificacin asi que decidi volver a hacer una cromatografa de intercambio ionico pero ahora con diaminoetil-celulosa a un pH de buffer de 7 en un intervalo de 6 a 7 y con este paso logre purificar por completo mi protena. RESULTADOS