TÍTULO DE LA PRÁCTICA: Hidrólisis de la sacarosa. OBJETIVOS: General: Realizar la hidrólisis de la sacarosa. Específicos: Obtener sacarasa a partir de levadura.

(Saccharomyces cerevisiae) Determinar los diferentes parámetros cinéticos en la hidrólisis de la sacarosa. Aplicar los conceptos aprendidos en clase.

MATERIALES PROTECCION PERSONAL: Mandil. Guantes. Vestimenta apropiada.

MATERIALES Y INSUMOS: Incubadora (37ºC) Espectrofotómetro. Celdas para espectrofotómetro Centrífuga Plancha de calentamiento. Morteros. Vasos de precipitación de 50 mL. Tubos para centrifuga. Pipetas 10 mL. Peras. Micropipetas de 1000 uL.

REACTIVOS: Levadura Levapan deshidratada 170 g. 200 g Sacarosa (Azucar de mesa). Agua destilada Iodo (lugol).

PROCEDIMIENTO: (todo este procedimiento se debe realizar 4 veces) Marcha del trabajo: Pesar 8 g de levadura en un mortero y mezclar con 16 mL de agua destilada hasta obtener una mezcla homogénea (10 minutos). Llevar a centrifugación por 10 minutos a 3500 RPM. Separar el sobrenadante. Por diferencia de peso obtener el peso total aproximado de la enzima (enzima encontrada en el sobrenadante). Realizar este proceso 4 veces.

1. 2. 3. 4. 5.

15 0. b. 7.02 M. 0. posteriormente realizar 4 disoluciones de sacarosa a 0. 11 minutos respectivamente para cada concentración de sustrato. Kcat y compare los resultados. e). 0. 8.05 0.5 M 7. con estos.5 M).6.15 M y 0. Repetir el ensayo para cada concentración de sacarosa (0.15 M y 0. . Preparara 250 mL de solución de sacarosa 2M. 2. 0.5 0 (min) 2(min) - Absorvancia (nm) 5(min) 7 (min) 11(min) - Velocidad (µmol/L/min) A B C D E REPORTE DE RESULTADOS: Determinar los valores de la tabla antes dada. 5.02 0.05 M.02 M. 0. Medir la absorbancia a 620 nm para cada una de las muestras. Vmax. d. utilice los tres métodos de linealización para calcular Km. Coloque 1mL de sobrenadante en 5 vasos de 25 mL (a. c. RESULTADOS: Tubo [So] (M) 0 0.05 M. A tiempo 0.

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