TÍTULO DE LA PRÁCTICA: Hidrólisis de la sacarosa. OBJETIVOS: General: Realizar la hidrólisis de la sacarosa. Específicos: Obtener sacarasa a partir de levadura.

(Saccharomyces cerevisiae) Determinar los diferentes parámetros cinéticos en la hidrólisis de la sacarosa. Aplicar los conceptos aprendidos en clase.

MATERIALES PROTECCION PERSONAL: Mandil. Guantes. Vestimenta apropiada.

MATERIALES Y INSUMOS: Incubadora (37ºC) Espectrofotómetro. Celdas para espectrofotómetro Centrífuga Plancha de calentamiento. Morteros. Vasos de precipitación de 50 mL. Tubos para centrifuga. Pipetas 10 mL. Peras. Micropipetas de 1000 uL.

REACTIVOS: Levadura Levapan deshidratada 170 g. 200 g Sacarosa (Azucar de mesa). Agua destilada Iodo (lugol).

PROCEDIMIENTO: (todo este procedimiento se debe realizar 4 veces) Marcha del trabajo: Pesar 8 g de levadura en un mortero y mezclar con 16 mL de agua destilada hasta obtener una mezcla homogénea (10 minutos). Llevar a centrifugación por 10 minutos a 3500 RPM. Separar el sobrenadante. Por diferencia de peso obtener el peso total aproximado de la enzima (enzima encontrada en el sobrenadante). Realizar este proceso 4 veces.

1. 2. 3. 4. 5.

6.05 0.15 0. Kcat y compare los resultados. utilice los tres métodos de linealización para calcular Km. 0. con estos.02 M. 0. 0. A tiempo 0. Coloque 1mL de sobrenadante en 5 vasos de 25 mL (a.05 M. posteriormente realizar 4 disoluciones de sacarosa a 0. Preparara 250 mL de solución de sacarosa 2M. d. 8.5 M 7.15 M y 0.02 0.02 M. e).15 M y 0. 0. Vmax. Repetir el ensayo para cada concentración de sacarosa (0. 7.5 M). Medir la absorbancia a 620 nm para cada una de las muestras. RESULTADOS: Tubo [So] (M) 0 0. 5. c. .5 0 (min) 2(min) - Absorvancia (nm) 5(min) 7 (min) 11(min) - Velocidad (µmol/L/min) A B C D E REPORTE DE RESULTADOS: Determinar los valores de la tabla antes dada. b. 11 minutos respectivamente para cada concentración de sustrato. 2.05 M.

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