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2. Explicar el diseo experimental: Cul es el propsito de cada tubo?Ser necesario ms de un tubo control?

Demostrar que a mayor cantidad de enzima su actividad enzimtica aumenta y puede ser inhibida por algn compuesto en especfico. Demostrar que donde no hay enzima no hay producto

3. Por qu es importante determinar si la actividad vara linealmente con la concentracin de la enzima? Es importante debido a que las pruebas enzimticas se hacen en una alcuota de solucin pero la actividad debe referirse al volumen total de la solucin o del peso de la enzima.

4. La desviacin de la linealidad de la actividad es el resultado de algn factor limitante. Explique ello.

Se debe a que estos factores limitantes como el Ph, la temperatura afectan a la actividad enzimtica, es por eso que sufre una desviacin y a la velocidad de reaccin no es directa a la concentracin de enzima, es decir, que para que permanezca los factores no pueden agotarse, la concentracin de enzima se mantiene constante y se va incrementando la concentracin del sustrato.

5. Defina cintica enzimtica. La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones qumicas que son catalizadas por las enzimas. Es el campo de la bioqumica que se encarga de la medicin cuantitativa de los ndices de reaccin catalizados por enzimas, y del estudio sistemtico de factores que afectan estos ndices. Muestra tambin el orden en el que se unen sustratos y el orden en el que los productos son liberados.

6. Describa los diversos parmetros cinticos que son considerados en el estudio de las enzimas.

Km (constante para cada enzima) = concentracin de S a la que la V0 es Vmx. Es una medida de la


afinidad del enzima por S. Cuanto menor es Km, mayor es la afinidad del enzima por S.

Kcat

(constante para cada enzima) = nmero de recambio = nmero de molculas de sustrato

convertidas en producto por molcula de enzima y unidad de tiempo, en condiciones de saturacin de sustrato. Vmx = Velocidad mxima terica = la velocidad cuando todos los centros activos estn ocupados con sustrato (nunca alcanzada en realidad) Unidad de enzima = cantidad de enzima que transforma 1 u mol de sustrato por min = una forma comn de expresar la velocidad. Actividad especfica = unidades por mg de protena total de la preparacin enzimtica. En el caso de enzimas en suero: unidades/ L

7. A qu se denomina velocidad inicial de reaccin? Se define como la velocidad de incremento de productos en funcin del tiempo cuando la concentracin del producto es baja, es decir a tiempos prximos a cero. Es casi proporcional a la concentracin del sustrato.

1. Cul es el significado de Km? Es aquel que demuestra mediante su valor la afinidad de la enzima y el sustrato, ya que a menor valor de Km mayor afinidad y viceversa. KM es la [S] a la cual la mitad de los centros activos estn ocupados. KM es la Medida de estabilidad del complejo ES.

2. Todas las enzimas presentan el mismo valor numrico de KM? El valor de KM para cada enzima es diferente, depende de cada sustrato y de factores ambientales tales como pH, temperatura y fuerza inica Tambin por definicin el valor de KM da idea de la afinidad del enzima por el sustrato: A menor KM, mayor afinidad del enzima por el sustrato, y a mayor KM, menor afinidad. Este hecho tiene fcil explicacin si tenemos en cuenta que KM se define como (k2+k3/k1), donde las reacciones 2 y 3 destruyen el complejo ES, mientras que la reaccin 1 lo forma. As, si KM es grande, el complejo ES es inestable pues predomina la tendencia a destruirlo (poca afinidad hacia el sustrato), y si KM es pequea, el complejo [ES] es estable, ya que predomina la tendencia a formarlo (gran afinidad hacia el sustrato).

3. Cul es el significado de un KM ALTO Y UN KM bajo? Como ya lo mencione anteriormente A un KM alto menor afinidad de enzima - sustrato y a un KM bajo mayor afinidad de enzima -sustrato.

4. A que se denomina velocidad mxima en una reaccin enzimtica? Es el nmero de recambio de una enzima, que es el nmero de molculas de sustrato convertidas en producto por unidad de tiempo por una molcula de enzima cuando esta est talmente saturada de sustrato.

5. A qu se denomina velocidad inicial de reaccin enzimtica?


Se define como la velocidad de incremento de productos en funcin del tiempo cuando la concentracin del producto es baja, es decir a tiempos prximos a cero. Es casi proporcional a la concentracin del sustrato.

7. En qu unidades se expresa el KM? La unidad de Km es: micromoles (M)

8. Qu importancia tiene la determinacin del KM de una enzima?


Es una caracterstica muy importante para la funcin biolgica de la Enzima, ya que as podemos saber cmo trabaja una enzima a diferentes concertaciones de sustrato [S].

9. Qu parmetros deben conocerse para determinar del KM de una enzima? Enzima Sustrato Temperatura (T) pH Tiempo Cofactor

Tubos #1 #2 #3 #4 #5 #6 #7 #8

10. Cmo deben tabularse los datos para calcular el KM por el mtodo de Lineweaver- Burk? 1/ Sustrato 1/Velocidad [S]1 V1 [S]2 V2 [S]3 V3 [S]4 V4 [S]5 V5 [S]6 V6 [S]7 V7 [S]8 V8

Para la grfica en el eje de las x va la inversa de la concentracin de sustrato y el eje de las y la inversa de la velocidad.