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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA Resumen La rama humoral del sistema inmune especfico est diseada para

eliminar a patgenos extracelulares y evitar la diseminacin de los intracelulares aprovechando que estos ltimos se transmiten de clula a clula a travs de los fluidos extracelulares. Ello se consigue mediante la produccin de grandes cantidades de anticuerpos especficos frente a cada agente forneo. 1. Los anticuerpos, por s mismos no suelen eliminar ms que a ciertos virus o inactivar toxinas bacterianas. 2. En la mayor parte de los casos, la eliminacin efectiva del patgeno suele deberse a la induccin de las funciones efectoras de los anticuerpos, que dependen de la porcin constante de las cadenas pesadas: a. activacin del complemento por la ruta clsica, que puede conducir a lisis del patgeno QUIMIOTAXIS de fagocitos opsonizacin de fagocitos b. Opsonizacin de fagocitos por inmunocomplejos (Ag-Ac) c. Citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC): el anticuerpo se une a receptores para Fc en la superficie de clulas NK y macrfagos. Podemos resumir el proceso en tres apartados interconectados: 1. el linfocito TH virgen reconoce a su pptido antignico (procesado) enclavado en el surco de MHC-II, en la superficie de una clula presentadora de antgeno (APC). Ello provoca la activacin y proliferacin clonal de los linfocitos TH. 2. Por otro lado (paralelamente), la clula B reconoce al antgeno nativo por medio de su BCR (con mIg), lo que desencadena la endocitosis y procesamiento endosmico de dicho antgeno. Algunos de los pptidos resultantes se "exportan" y se muestran en el surco de molculas MHC-II del propio linfocito B. 3. El TH activado (resultante de la fase #1) interacciona ahora mediante su TCR con el complejo {epitopo-MHC-II} del linfocito B. En este contacto entre
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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA ambas clulas tiene lugar un intercambio de seales qumicas que conduce a la activacin, proliferacin clonal y diferenciacin de las clulas B en dos subclones hermanos: uno de clulas plasmticas secretoras de anticuerpos, y otro de clulas B cebadas de memoria.

RESPUESTA PRIMARIA Y RESPUESTA SECUNDARIA Fases de la respuesta: 1. fase lag (de retardo): es el tiempo que se tarda en la seleccin de un clon especfico de clulas B y en la produccin de clulas plasmticas secretoras de Ac y de clulas B de memoria 2. aumento exponencial (hasta un pico mximo) 3. meseta 4. declive En total la respuesta puede durar desde unos das a varias semanas, dependiendo de la persistencia del antgeno. En la respuesta primaria primero se produce IgM, y luego IgG, siendo en ella la contribucin global de la IgM ms importante. En cambio, en la respuesta secundaria se produce mucha mayor cantidad de IgG que de IgM. Las clulas B de memoria quedan en reposo (G0) durante muchos aos (incluso persisten durante toda la vida). La respuesta secundaria posee una serie de importantes diferencias cualitativas y cuantitativas con respecto a la respuesta primaria: Diferencias cuantitativas: se inicia ms rpidamente (menor fase lag) alcanza ms intensidad (100 o 1000 veces mayor) dura ms tiempo, como se comprueba por la fase de meseta ms prolongada y su declive ms lento

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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA Diferencias cualitativas: ocurre cambio de clase, producindose preferentemente IgG, aunque tambin IgA e IgE Tiene lugar la maduracin de afinidad por hipermutacin somtica y seleccin "darwiniana" de los linfocitos con receptores de mayor afinidad.

FASES DE LA INDUCCIN DE LA RESPUESTA HUMORAL

1. Un linfocito TH virgen o de memoria entra en contacto con una APC, que le presenta un pptido antignico enclavado en su MHC-II; ello provoca la activacin y proliferacin clonal del linfocito TH. 2. Por otro lado, la clula B (virgen o de memoria) reconoce al antgeno nativo, pero interaccionando con otro epitopo diferente al que reconoci el TH. Acto seguido internaliza este Ag y lo procesa, presentando algunos de los pptidos resultantes en sus molculas MHC-II. 3. El linfocito TH cebado del paso #1 reconoce por su TCR a la combinacin especfica pptido-MHC-II en la superficie del linfocito B del paso #2, formndose el llamado conjugado T H:B. En dicho conjugado, el linfocito coadyuvante suministra dos tipos de seales qumicas al linfocito B: el TH expresa en su membrana la molcula CD40L (=CD154) secreta citoquinas. 4. Estas seales son transducidas ("reemitidas") al interior del linfocito B, lo que provoca cambios en el patrn de expresin gnica. Las protenas producidas por estos genes inducidos provocan la proliferacin clonal del linfocito, y finalmente la diferenciacin hasta clulas plasmticas secretoras de anticuerpos y clulas B de memoria. (La clula B que no reciba estas seales del TH quedar anrgica). Fase 1: activacin y proliferacin del linfocito TH

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El antgeno nativo puede viajar por s solo a un rgano linfoide secundario, o bien puede ser transportado (y eventualmente procesado) por una clula presentadora profesional (APC): clulas de Langerhans de la piel captan el antgeno, viajan por los vasos linfticos como clulas "a vela", y al llegar al ganglio se convierten en clulas dendrticas interdigitantes. clulas dendrticas intersticiales de los tejidos macrfagos/monocitos.

En el rgano linfoide secundario la APC presenta algn epitopo a un linfocito TH en reposo, interaccionando ambas clulas de la forma estudiada en el tema anterior: seal #1: unin del TCR al epitopo enclavado en MHC-II de la APC seal #2 (coestimulatoria): unin del CD28 del TH a la B7 de la APC. Adems, la APC secreta citoquinas como la IL-1 y la IL-6.

Todo ello provoca la activacin y proliferacin de T H, por el mecanismo autocrino dependiente de la IL-2 que el propio linfocito secreta. De esta forma se producen grandes cantidades de clulas TH, lo cual va a permitir que algunas de ellas tengan posibilidades de interaccionar luego con clulas B que presenten el mismo epitopo enclavado en el mismo tipo de MHC-II. Fase 2: El linfocito B reconoce especficamente al antgeno nativo NOTA: la clula B es una magnfica presentadora de antgeno, que a diferencia del macrfago posee la capacidad de internalizar y procesar solamente el antgeno especfico para el cual est preparada por su mIg. De hecho es capaz de procesar antgeno a concentraciones de 100 a 10.000 veces menores de las requeridas por el macrfago.

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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA Como sabemos, la clula B en reposo posee molculas de mIgM y mIgD asociadas con cadenas Iga e Igb , constituyendo el complejo receptor especfico BCR. Aunque la clula B no es una clula fagoctica, puede internalizar antgenos tan grandes como del tamao de ciertos virus. Ello se produce por endocitosis mediada por receptor (siendo el receptor el BCR). El antgeno entra a la ruta endoctica, donde se degrada hasta pptidos, algunos de los cuales pueden ser colocados en el surco de sus molculas MHC-II. (Mientras tanto, la clula B est renovando continuamente sus receptores BCR, lo que le permite seguir captando especficamente ms molculas o partculas antignicas). Pero al mismo tiempo, el hecho de que se est produciendo unin del antgeno con BCR (con entrecruzamiento de dos complejos BCR por una misma molcula antignica) supone el inicio de una ruta de transduccin intracelular de seal: las colas citoplsmicas de las cadenas Iga /Igb inician una cascada de fosforilaciones y desfosforilaciones, donde estn implicadas varias protentirosnquinas (PTK) como Lyn, Fyn y Blk. Al cabo de unos 30 segundos se han fosforilado muchas protenas celulares (por rutas en buena parte an desconocidas), que finalmente conducen a la activacin de la fosfolipasa C (PLC). A partir de aqu se activan las rutas ya estudiadas del inositol-trifosfato (IP3) y del diacilglicerol (DAG); la primera conduce a la

calcineurina/calmodulina, y la segunda a la activacin de la protenquinasa C (PKC). Ambas colaboran en la activacin de una serie de genes tempranos que codifican factores de transcripcin (como el AP1, c-Myc, etc). En la fase siguiente, los productos de estos genes van a tener un papel destacado. 12.3.4 Fase 3: Formacin del conjugado TH:B e intercambio de seales La clula TH cebada especfica reconoce ahora, por medio de su TCR, la configuracin peculiar del pptido especfico enclavado en el MHC-II, en la superficie del linfocito B; es decir, el linfocito B est actuando como clula presentadora para el TH. Tras este contacto inicial se forma el conjugado T H:B en el que ambas clulas
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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA dejan entre s un estrecho espacio intercelular. En esta fase se producen importantes cambios en el linfocito TH: reorganiza el aparato de Golgi y el centro organizador microtubular, de modo que aparecen microtbulos del citoesqueleto orientados hacia el lado que mira a la clula B. Ambas caractersticas tienen que ver con el hecho de que se van a secretar citoquinas en esa direccin. Las molculas de membrana de la clula T se concentran en la zona de contacto intercelular:

TCR+CD3+CD4 van a participar en contactos con MHC-II+pptido de B LFA-1 har contacto con ICAM-1 de B CD28 se ligar con la B7 del linfocito B (pero esto no es imprescindible si el linfocito TH est ya "armado"). Esta reorientacin implicar una mayor avidez en la unin entra ambas clulas, permitiendo que este contacto dure ms tiempo, lo cual facilitar las seales que necesita el linfocito B: CD40L y citoquinas, como veremos a continuacin. Fase 4: Efecto de las seales del linfocito TH sobre la clula B Los dos tipos de seales del linfocito T H (CD40L y citoquinas) van a provocar que el linfocito B sufra una serie de notables cambios. Algunas de estas molculas qumicas provocan que el linfocito B salga de reposo y entre a ciclo celular (seales de competencia); otras molculas hacen que el linfocito B progrese a lo largo del ciclo celular (seales de progresin) y/o que se diferencie. Las molculas CD40L que el linfocito TH expresa en su superficie se unen a las de CD40 del linfocito B (que ya estaban preformadas). Esto provoca una seal para que el linfocito B sintetice y ensamble en membrana receptores para diversas citoquinas (lo cual ocurre a las 12 horas del contacto inicial del Ag con
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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA la mIg). Entonces, el linfocito B, que hasta este momento estaba en reposo (G0), puede entrar por fin en el ciclo celular (G1). Estamos pues, ante una seal de competencia, que participa en la activacin del linfocito B. Las citoquinas secretadas direccionalmente por el linfocito T H se concentran en bolsas distribuidas en la zona de estrecho contacto intercelular. Cada citoquina va a unirse a su receptor correspondiente situado en la superficie de la clula B, provocando una serie de respuestas en dicha clula: La IL-4 (junto con la IL-1 secretada por macrfagos) actan como seales de competencia (favorecen la transicin G0 G1). Posteriormente, la misma IL-4 sirve ya como seal de progresin (que favorece el avance del ciclo celular: G1 S M), con lo que empieza laproliferacin clonal. Otras citoquinas que colaboran en la proliferacin son la IL-2 y la IL-5 (esta ltima en ratn, pero no en humanos). La diferenciacin requiere IL-6, as como de nuevo IL-4, IL-5, IL-10 e IFN-g . En esta diferenciacin se producen dos subclones: uno de clulas plasmticas secretoras de anticuerpos, y otro de clulas B de memoria.

Esta respuesta de los linfocitos B frente a antgenos timo-dependientes se caracteriza por: tener memoria inmunolgica, poseer maduracin de la afinidad conforme pasa el tiempo, experimentar cambio de isotipo.

Respecto de este ltimo punto, se sabe que diferentes citoquinas o combinaciones de citoquinas tienden a inducir preferencialmente ciertos cambios de isotipo. Veamos algunos ejemplos en el ratn:

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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA la IL-4 tiende a provocar cambio a IgG1, y luego a IgE; el factor de crecimiento tumoral beta (TGF-b ) provoca cambio a IgG2b y a IgA; El interfern gamma (IFN-g ) induce cambio a las subclases IgG2a e IgG3.

Parece ser que la base de esta induccin de cambios de clase estriba en que las correspondientes citoquinas inducen de alguna forma un cambio en la estructura de la cromatina de las regiones S (de switch, cambio de clase) situadas en el lado 5 de cada gen CH concreto, promoviendo la recombinacin especfica que ya estudiamos en el tema 7 (Gentica de los anticuerpos).

12.4 RESPUESTA HUMORAL IN VIVO La respuesta humoral se desencadena en distintos rganos dependiendo de la va de entrada del antgeno: si el antgeno entra por la sangre, va a parar al bazo; si entra por tejidos, es captado por algn ganglio linftico regional; si se introduce por los epitelios internos, suele ir a parar a tejido linfoide asociado a mucosas (MALT).

En este apartado vamos a describir cmo se sucede la respuesta humoral en una de estas localizaciones: el ganglio. Recordemos que el ganglio est diseado para atrapar y retener antgenos que llegan por alguno de los vasos linfticos aferentes. El antgeno puede llegar solo, en forma soluble, o bien transportado por clulas "a vela" (que como se recordar es la forma que adoptan las clulas de Langerhans de la piel al pasar a la circulacin linftica), o por clulas dendrticas intersticiales de los tejidos, o por macrfagos. Por su lado, los linfocitos pueden acceder al ganglio por dos rutas distintas: por los linfticos aferentes, o desde la sangre, por extravasacin pasando a travs
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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA de las vnulas de endotelio alto (HEV) postcapilares. 12.4.1 Respuesta primaria: Interacciones iniciales: tienen lugar en la paracorteza. Las clulas dendrticas interdigitantes, con sus largos procesos de membrana, interaccionan simultneamente cada una con unos 200 linfocitos TH, presentndoles pptidos procesados en el surco del MHCII, con lo que se provoca una gran activacin y proliferacin clonal de esos linfocitos. Por su parte, los linfocitos B en reposo internalizan antgeno especfico, y lo procesan. Las clulas TH activadas interaccionan con las clulas B, induciendo en stas las primeras fases de la activacin. Algunas de estas clulas B de la paracorteza siguen su activacin, proliferacin y diferenciacin hasta clulas plasmticas secretoras de IgM e IgG, con lo que se suministra una primera descarga de anticuerpos circulantes. Luego migran a la mdula sea. Pero otras clulas B se quedan a mitad de su activacin, y emigran a la corteza, a los folculos primarios, donde van a seguir una ruta especial que da origen a los centros germinales de los folculos secundarios. Eventos en el folculo secundario: El folculo secundario suministra un microambiente especial en el que las interacciones entre clulas B y clulas dendrticas foliculares van a conducir a la generacin de grandes cantidades de clulas B y clulas plasmticas con anticuerpos de alta afinidad (por maduracin de afinidad tras hipermutacin somtica). Veamos los acontecimientos: Cuando la clula B "a medio activar"(procedente de la paracorteza) entra en el folculo primario comienza a dividirse activamente: estas clulas B en rpida proliferacin se denominan centroblastos, y son
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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA ellas las que dan lugar al centro germinal del folculo, que ahora se llama folculo secundario. Los centroblastos se caracterizan por su rpida divisin (una vez cada 6 horas) y porque carecen de inmunoglobulinas de membrana (mIg). La zona basal oscura del centro germinal est llena de centroblastos, todos ellos descendientes de un solo linfocito B (o unos pocos). Es decir, se estn produciendo grandes cantidades de centroblastos todos descendientes de una clula B, por lo tanto todos tienen la misma especificidad antignica que el linfocito B "fundador" que originalmente internaliz el Ag que ha dado origen a la respuesta. Es en esta fase de centroblastos donde ocurre la hipermutacin somtica de las

porciones variables de los genes reordenados de cadenas pesadas y ligeras.(Vase tema 7). Al cabo de unos 4 das los centroblastos dan origen a los centrocitos, clulas ms pequeas que no se dividen, y que vuelven a tener mIg en sus membranas Estos centrocitos ocupan la zona basal clara del centro germinal. Debido a la previa hipermutacin somtica, cada centrocito, aunque miembro del mismo clon, tendr una variante aleatoria distinta de la inmunoglobulina original. Lgicamente, dentro de esta poblacin habr centrocitos con mIg dotada de mayor afinidad hacia el Ag original y centrocitos con mIg de menor afinidad. Es ahora cuando tiene lugar el proceso de seleccin darwiniana de esa poblacin de centrocitos: aquellos que tengan mIg de mayor afinidad sern seleccionados para sobrevivir en base a su capacidad de interaccionar con mayor afinidad con el antgeno nativo dispuesto en la superficie de las clulas dendrticas foliculares:

Parece que las dendrticas foliculares retienen antgeno nativo (solo o formando parte de inmunocomplejos) en las "perlas" (engrosamientos) de sus largos procesos de membrana. Ello lo hacen a travs de sus molculas CD23 (repasar en el captulo 2 los rasgos de estas notables clulas). Ello permite que varios centrocitos interaccionen simultneamente con una misma
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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA clula dendrtica. En principio ("por defecto", dira un informtico) los centrocitos estn programados para morir por apoptosis al cabo de unos pocos das, a menos que sean rescatados por el hecho de que su mIg interaccione con el antgeno retenido en la superficie de las clulas dendrticas foliculares. Los centrocitos con receptores (mIg) de baja afinidad tienen que competir en desventaja con sus "hermanos" de mayor afinidad e incluso con anticuerpos libres de alta afinidad: estos centrocitos con mIg de baja afinidad pueden encontrarse con el hecho de que los determinantes del antgeno estn ya ocupados por receptores de centrocitos de alta afinidad o por anticuerpos. De hecho, conforme pasa el tiempo, la situacin es cada vez peor para estos centrocitos: en una respuesta primaria, el nivel de Ac circulantes al principio es bajo, pero conforme pasan los das sube esta concentracin, de modo que cada vez hay ms anticuerpos que se pueden unir al antgeno desplegado en las membranas de las clulas dendrticas. Esto significa que el "listn" para que un centrocito se una al antgeno se pone cada vez "ms alto": slo lo lograrn los que en la "lotera" de la hipermutacin somtica hayan resultado "agraciados" con mIg de mayor afinidad. El resultado es que todo centrocito que al cabo de unos das no se haya unido por su mIg al Ag en la superfice de la clula dendrtica folicular, al no recibir la seal "rescatadora", muere por apoptosis, y sus restos son destruidos por los macrfagos de cuerpos tingibles. Este es el destino de la inmensa mayora de los centrocitos (90%). Cul es la seal que rescata a los afortunados de la apoptosis y cuya carencia precipita a la mayora a la muerte pogramada? Los centrocitos que tienen mIg de alta afinidad que logran unirse a la clula dendrtica, reciben una seal que induce en ellos la expresin del gen bcl-2, y es esto lo que les salva de la apoptosis. Parece que en este rescate tambin interviene la unin del CD23 de la clula dendrtica
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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA folicular con el CD21 del complejo correceptor del centrocito). Los centrocitos con mIg de baja afinidad, al no unirse con la clula dendrtica, siguen su programacin a la muerte, ya que al no inducirse el gen bcl-2 no producen la seal que interrumpa dicha programacin letal. Tras la seleccin darwiniana, los centrocitos Bcl-2+ se diferencian en la zona apical clara en dos suclones celulares: clulas B de memoria y plasmablastos. Los plasmablastos abandonan el centro germinal y pasan a mdula, donde terminan su diferenciacin hasta clulas plasmticas secretoras de anticuerpos. Las clulas plasmticas carecen de inmunoglobulinas de membrana, y son clulas a trmino, que mueren a las dos semanas. (El hecho de que tengan una vida limitada es un factor que contribuye a que la respuesta inmune est autolimitada). Secretan grandes cantidades de anticuerpos que tienen la misma especificidad que el centrocito correspondiente del que proceden. Los anticuerpos salen por los linfticos eferentes y entran luego en circulacin sangunea, de donde son distribuidos a todo el organismo. Se cree igualmente que la diferenciacin a clulas plasmticas rquiere la interaccin del CD23 de la clula dendrtica folicular con el correceptor de la clula B (formado po CD19, CD21 y CD81). Las clulas B de memoria son clulas en reposo (G0), pero no son iguales que las B vrgenes: expresan ms isotipos en sus membranas (mIgM, mIgG, mIgA, mIgE), que adems son de mayor afinidad que la mIg original; esto implica que ante una segunda entrada del Ag se van a activar a menores dosis, y la respuesta secundaria ser ms rpida. Algunas de ellas se quedan en el folculo, formando parte del manto que rodea al centro germinal; otras abandonan el ganglio por el nico linftico eferente, y recirculan. Poseen una gran esperanza de vida (incluso ms de 40 aos), aunque se desconoce la base de esta notable longevidad. (Existen indicios de que la diferenciacin a clulas de memoria tambin necesita nuevos contactos entre el CD40 del linfocito

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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA B y el CD40L de la clula TH). Respuesta secundaria La respuesta secundaria tiene lugar in vivo de una forma parecida a lo que acabamos de ver, pero existen algunas diferencias que pasamos a comentar: Cuando entra el antgeno por 2 vez (o ulterior) parte de las molculas pueden unirse a anticuerpos persistentes procedentes de la respuesta primaria, de modo que se forman complejos Ag-Ac. Cuando los inmunocomplejos entran a ganglio, se unen a las clulas dendrticas foliculares. Estas clulas "empaquetan" parte de los complejos Ag-Ac en vesculas membranosas denominadas iccosomas, que se van desprendiendo por gemacin a partir de los engrosamientos ("perlas") de los largos procesos de membrana. Las clulas B de memoria generadas durante la respuesta primaria que tengan mIg de alta afinidad compiten eficazmente con los anticuerpos circulantes para unirse con el Ag que forma parte de los

inmunocomplejos de los iccosomas: se unen a estos iccosomas, los engullen enteros, procesan el antgeno y se lo presentan (en surco de MHC-II) a linfocitos TH especficos. Se forma el conjugado TH:B, con lo que la clula B se activa y prolifera (como centroblastos) en el centro germinal, hasta que al 4 o 5 da se diferencia a clulas plasmticas secretoras de anticuerpos. Al igual que en la respuesta primaria, la proliferacin de centroblastos va acompaada de hipermutacin somtica seguida de seleccin

darwiniana sobre los centrocitos resultantes en base a su capacidad de unin al antgeno atrapado en las clulas dendrticas.

Como se puede ver, el centro germinal durante la respuesta secundaria difiere en dos aspectos importantes del de la respuesta primaria: 1. La previa disponibilidad de anticuerpo circulante incrementa la eficacia
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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA de las clulas dendrticas foliculares para atrapar antgeno, lo cual supone una amplificacin de la seal a las clulas B. 2. El anticuerpo preexistente compite con los centrocitos para unirse con el antgeno en la superficie de las clulas dendrticas. Ello asegura que en la respuesta secundaria slo van a contribuir a la produccin de anticuerpos clulas plasmticas procedentes de clulas B dotadas de receptores de mayor afinidad que los de la respuesta primaria. Conforme avanza la respuesta, aumenta la concentracin de anticuerpos al tiempo que disminuye la de antgeno, por lo que se seleccionan centrocitos con afinidades cada vez ms altas, capaces de funcionar con

concentraciones de antgeno cada vez ms bajas. Algunas aplicaciones En las vacunaciones se suele recurrir a la administracin de varias dosis del antgeno inmunizante. Con ello se logra no slo una mejor respuesta secundaria por el hecho de aumentar las clulas B de memoria, sino que se provoca que las clulas B de memoria se diferencien a plasmticas secretoras de anticuerpos de alta afinidad. Si esta estrategia se aplica en inmunizaciones experimentales de animales de laboratorio, de ellos se pueden extraer antisueros de gran avidez, que se usan en ensayos in vitro para pruebas que requieren gran sensibilidad. ANTIGENO Antgeno (Ag). Molcula de procedencia exgena o endgena que resulta extraa al organismo. Puede ser especficamente unida por un anticuerpo (Ac) o por un receptor de clula T (TCR), pero no necesariamente genera una respuesta inmune. Para aquellas molculas que inducen una respuesta inmune, se ha propuesto el trmino de inmungeno (cabe sealar, que el conocimiento de estas diferencias, no ha evitado que ambos trminos continen utilizndose como sinnimos). Algunas molculas pequeas, pueden unirse especficamente a los anticuerpos pero no activan a las clulas B o T (son antgenos, pero no inmungenos). Sin
14 EAPMH CICLO IV

RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA embargo, molculas con bajo peso molecular, por lo general inferior a 4,000 Da, llamadas haptenos, pueden unirse covalentemente con una protena propia de mayor peso (acarreadora o transportadora) y formar un inmungeno. Este mecanismo est presente cuando algunos frmacos, originalmente carentes de inmunogenicidad, ingresan al organismo y la adquieren al unirse a protenas autlogas. Algo similar sucede en el mecanismo involucrado en la dermatitis por contacto: Molculas como el pentadecatecol de la hiedra venenosa o iones metlicos como el cromo o el nquel presentes en aretes u otros accesorios, son haptenos, lo que les permite penetrar fcilmente la piel; estos haptenos se unen con protenas propias y se crean complejos hapteno- acarreador, que funcionan como inmungenos. Los inmungenos son capturados por las clulas de Langerhans y presentados a clulas T en los ganglios ms cercanos, lo que origina, en individuos hipersensibles, una potente respuesta que se manifiesta como una reaccin severa en piel. Superantgeno Sustancia de origen viral o bacteriano, que tiene la propiedadde unir por fuera tanto molculas de MHC II, como de TCR (en individuos que tienen una particular familia de genes de cadena variable beta). Actan como una unin entre las dos y activan alrededor de 30% de los linfocitos, en tanto un antgeno convencional procesado nicamente activa 0.001% de estas clulas. De lo anterior se deriva, que la exposicin a un superantgeno puede conducir a la liberacin masiva de citocinas, lo que puede causar un sndrome clnico similar al shock sptico. Eptopo o determinante antignico. Es el sitio o porcin inmunodominante de un antgeno, a travs del cual se une con un anticuerpo o con un receptor del linfocito T. La valencia de un antgeno, corresponde al nmero de eptopos que contiene. As, un mismo antgeno puede tener eptopos para unirse con anticuerpos o con el receptor de la clula T. Los anticuerpos reconocen a la estructura expuesta, primaria o terciaria, del antgeno nativo y los receptores de
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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA T principalmente a la primaria (proveniente de antgenos, principalmente protenicos, procesados), lo que implica la existencia de dos tipos de eptopos: Lineal. Formado por secuencias de aminocidos continuos y contiguos. Conformacional. Constituido por secuencias de aminocidos continuos o discontinuos y distantes, que se aproximan entre s debido al plegamiento o conformacin tridimensional del antgeno. Inmunogenicidad. Es la potencia o capacidad que tiene una molcula para generar una respuesta inmune y depende tanto de su naturaleza, como de la inherente al individuo en el que acta (receptor). Naturaleza fisicoqumica de la molcula Composicin. Las protenas son las que originan una mejor respuesta, ya que son potentes estimuladoras de las clulas T. A su vez los polisacridos, lpidos y cidos nucleicos casi no se unen a MHC, lo que disminuye su potencia. Peso molecular. Es importante el tamao (superior a 80 KDa), polisacridos de alto peso molecular frecuentemente resultan inmunognicos; sin embargo, existen molculas grandes poco complejas y consecuentemente menos potentes. Por el contrario, otras de menor tamao pero con una gran complejidad estructural (heteropolmeros o protenas con inclusin de aminocidos diferentes o aromticos p.ej. tirosina) son ms efectivas; los lpidos y cidos nucleicos tienen una menor complejidad que las protenas y los carbohidratos. Una molcula procesada por el fagocito es ms inmunognica que en su estado nativo. A su vez, la desnaturalizacin de la molcula puede originar tanto prdida como formacin o exposicin de nuevos eptopos, lo que modifica su inmunogenicidad.

Exposicin

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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA La cantidad del inmungeno que interacciona con el individuo, es de vital importancia, ya que dosis pequeas o muy elevadas inducen tolerancia o respuestas alteradas. Influye tambin en su efectividad la frecuencia de exposicin a las molculas; se ha visto que es ms efectivo administrar al inmungeno en forma intermitente, con lapsos que permitan la sensibilizacin, as como la adquisicin y el incremento posterior de la memoria inmunolgica. Los intervalos dependern de la naturaleza del inmungeno y de la va de administracin. Hay que recordar que un mayor nmero de inmunizaciones no necesariamente se traduce en un aumento en la cantidad de anticuerpos, ya que una de las caractersticas de la respuesta inmune adaptativa es la autolimitacin. Va de administracin Las vas subcutnea e intradrmica, son las ms potentes.Por el contrario, la va oral es la ruta de ingreso al organismo enla que hay una menor respuesta a las molculas extraas, lo quepodra atribuirse, principalmente, a la actividad que realizanlos linfocitos TH3 ubicados en el aparato digestivo. Estas clulassecretan TGF beta, citocina que adems de ejercer un

efectoantiinflamatorio, induce tolerancia y estimula la produccinde IgA. Su participacin es vital, ya que interviene en el mecanismode tolerancia a los alimentos y simultneamente, proveeal aparato digestivo de un anticuerpo protector. Naturaleza del individuo Factores como la especie, raza, herencia, sexo y edad, inciden

importantemente en la inmunogenicidad de una molcula. Molculas con bajo poder inmunognico se vern potencializadas, si el individuo se encuentra enfermo, desnutrido, sujeto a tratamiento con medicamentos o procedimientos inmunosupresores o bien, sometido a estrs fsico, emocional y/o a contaminantes ambientales. Por el contrario, los efectos de un elemento agresor se minimizan en un organismo con integridad bio-psico-social.

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LOS ANTICUERPOS Los anticuerpos o inmunoglobulinas (Ig) son un tipo de protenas denominadas glicoprotenas3. Funcionan como la parte especfica del denominado complejo receptor de clulas B (BCR) reconociendo al antgeno a nivel de la membrana del linfocito B, y como molculas circulantes secretadas por las clulas plasmticas procedentes de la activacin, proliferacin y diferenciacin de clulas B. Estructuralmente estn formados por dos cadenas polipeptdicas pesadas H (del trmino anglosajn Heavy pesado) y dos cadenas ligeras L (del trmino anglosajn Light ligero) unidas entre s mediante enlaces covalentes. Las cadenas ligeras consisten en una regin variable (VL) y una constante (CL) mientras que las pesadas presentan una regin variable (VH) y tres constantes (CH1, CH2, CH3). Funcionalmente podemos distinguir dos porciones en los anticuerpos: una de ellas implicada en el reconocimiento y unin al antgeno denominada regin Fab (antigenbindingFragment) y otra implicada en las funciones de los anticuerpos y en su vida media en sangre, llamada regin Fc (crystallizableFragment).

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Estructura de un anticuerpo.

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Existen cinco clases diferentes de anticuerpos, que se diferencian entre s por una serie de cambios estructurales que les confieren diferentes funciones en el organismo. Los cinco tipos de anticuerpos se denominan: Ig G, Ig M, Ig E, Ig A e Ig D.

Tipos de inmunoglobulinas y sus principales caractersticas. Mecanismo de accinde los Anticuerpos La principal funcin biolgica de los anticuerpos es unirse a cualquier sustancia extraa o antgeno, que haya entrado al organismo, con el fin de facilitar su eliminacin. Las regiones de un antgeno que son reconocidas especficamente por los anticuerpos se denominan determinantes antignicos o eptopos.Un antgeno puede presentar diferentes eptopos y por tanto provocar la produccin de una amplia gama de anticuerpos por parte de diferentes linfocitos B. Las regiones concretas donde se produce el reconocimiento por parte de un anticuerpo hacia un eptopo concreto, se llaman regiones CDR

(ComplementaryDeterminingRegions). Hay tres regiones CDR (regiones determinantes de complementariedad o hipervariables) denominadas CDR1,
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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA CDR2 y CDR3 y se localizan todas ellas en las regiones o dominios variables de cada cadena (ligera y pesada) del anticuerpo. Las regiones CDR confieren a las inmunoglobulinas una enorme especificidad y diversidad.

Regiones CDR de un anticuerpo responsables del reconocimiento de antgenos Los anticuerpos realizan una doble funcin dentro de la respuesta inmune del organismo cuanto lo invade un agente externo. Por un lado, se unen especficamente a una amplia variedad de antgenosy, por otro lado, se unen a un nmero limitado de molculas y clulas efectoras del Sistema Inmune.

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En el mecanismo de eliminacin de agentes extraos al organismo, los anticuerpos tienencomo funcin el reconocimiento especfico de losantgenos, provocando la respuesta inmune(etapa 3), y el reclutamiento de diferentes clulasy molculas del organismo que sern capaces dedestruir y eliminar al antgeno Un solo antgeno puede presentar diferenteseptopos en su superficie, es decir, puede estimularla produccin de diferentes anticuerpos, cada unode los cuales es especfico para un eptopoconcreto. Una sustancia extraa que

contengadiferentes eptopos al entrar en el organismoprovocar la produccin de anticuerpos procedentesde diferentes clones10 de linfocitos B. Este tipo deanticuerpos con diferente capacidad de reconocer yunirse al antgeno se denominan anticuerpospoliclonales. Mientras que los

anticuerposmonoclonales son especficos para un solo eptopoy estn producidos por un nico clon celular. Gracias a los avances que han experimentadodisciplinas como la Protemica y la Genmica, hasido posible identificar y caracterizar nuevasmolculas que desempean funciones importantesen el desarrollo de ciertas

enfermedadesautoinmunes, vricas e incluso el cncer. Lascaractersticas de los anticuerposmonoclonales hacen de ellos unos agentesteraputicos potentes y prometedores. Anticuerpos Monoclonales Hasta el desarrollo de los anticuerpos monoclonales en el ao 1975, el uso de los anticuerpos en diagnstico y/o terapia se centraba nicamente en la utilizacin de sueros inmunes convencionales. Estos sueros son obtenidos a partir de distintas especies animales y contienen, entre otros muchos
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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA compuestos,una mezcla de anticuerpos producidos por distintos clones de linfocitos B, por lo que se denominan anticuerpos policlonales. Estos anticuerpos reconocen en mayor o menor medida el antgeno pero con distinta especificidad y afinidad cada uno de ellos. En cambio, los anticuerpos especficos para un solo eptopo y producidos por nico linfocito B y sus clones, se denominan anticuerpos monoclonales. Un anticuerpo monoclonal es aquel que reconoce especficamente una parte del antgeno, es decir un eptopo concreto, y que es producido por un clon de linfocitos B. Por todas las propiedades que poseen los anticuerpos, han sido empleados en terapia desde que la FDA11 en 1986 aprob el primer anticuerpo monoclonal para el tratamiento del rechazo del transplante de rin12. Los anticuerpos monoclonales, por tanto, son empleados en terapia para el tratamiento de diversas enfermedades formando la familia de frmacos denominados anticuerpos monoclonalesteraputicos. Debido a la especificidad de unin que poseen los anticuerpos, son empleados en la localizacin y eliminacin de patgenos infecciosos como el virus respiratorio sincitial (VRS). Tambin se utilizan como terapia en la deteccin de clulas concretas del organismo como por ejemplo clulas tumorales, incluso en la inhibicin de procesos inflamatorios. Los anticuerpos monoclonales teraputicos actualmente comercializados junto con sus aplicaciones

teraputicas, tecnologas de produccin y mejora de su efectividad teraputica, sern presentados a continuacin. Principales tecnologas de produccin y mejora de Anticuerpos

Monoclonales El progreso que se ha conseguido en la investigacin sobre el tratamiento de enfermedades como el cncer y las enfermedades autoinmunes mediante el empleo de anticuerpos monoclonales, se debe principalmente a dos avances importantes en la investigacin cientfica.

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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA El primero de ellos hace referencia a la mejora de las tecnologas de produccin de los anticuerpos y fragmentos de anticuerpos. Sin la consolidacin de estas tecnologas de produccin a gran escala, no habra sido posible la produccin de estas molculas como productos farmacuticos biotecnolgicos. El segundo gran hito destacable se refiere a los avances en la Biologa Molecular que identifican nuevas dianas especficas hacia las cuales dirigir la terapia con anticuerpos monoclonales. Actualmente existe una importante batera de anticuerpos monoclonales teraputicos en diferentes fases de desarrollo e investigacin, algunos de los cuales pueden ser consultados en el Anexo IV del presente Informe. A continuacin se presentan las estrategias actuales ms relevantes, para la produccin y mejora de los anticuerpos monoclonales como agentes teraputicos. Tecnologas de produccin de Anticuerpos Monoclonales Los anticuerpos son producidos por los linfocitos B en el organismo como respuesta a la entrada de un patgeno o sustancia extraa a l. Del mismo modo que ocurre en los seres humanos, los animales tambin combaten agentes externos produciendo anticuerpos en su sistema inmune. Por esta razn tradicionalmente es posible obtener anticuerpos contra un antgeno conocido empleando modelos animales. Las razones por las cuales se utilizan animales y no personas son evidentes. Para producir anticuerpos clsicamente en animales, como el conejo o el caballo (sueros con anticuerpos policlonales), el primer paso consiste en inyectar al animal la sustancia frente a la cual se desea obtener las inmunoglobulinas. Posteriormente es posible extraer y aislar los anticuerpos del suero. Este procedimiento por el cual al cabo de unos das se aislan del suero de los animales los anticuerpos, se denomina inmunizacin. La produccin de anticuerpos a partir de un nico clon de clulas B, es decir monoclonales, no ha sido posible hasta el ao 1975, ao en el que se desarroll la tcnica de generacin de hibridomas. Las estrategias para la produccin de anticuerpos monoclonales pasan inevitablemente por la
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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA seleccin de dianas de inters. Un aspecto importante a tener en cuenta en este paso del proceso, es la dificultad que entraa la seleccin de nuevas dianas teraputicas ya que a menudo las rutas bioqumicas implicadas en la gnesis y progresin de muchas patologas no se conocen, y sin esta informacin es muy difcil o imposible el diseo del anticuerpo teraputico

Dianas teraputicas reconocidas por los anticuerpos monoclonales teraputicos comercializados actualmente Virus. Clulas tumorales. Citoquinas15. Factores de crecimiento. Otros anticuerpos

Uno de los grandes retos para el desarrollo de anticuerpos monoclonales teraputicos se centra en la bsqueda y seleccin de nuevas dianas especficas de las clulas implicadas en el desarrollo de la enfermedad. Por ejemplo, en el tratamiento de ciertos tipos de tumores, el escenario ideal sera conocer molculas o marcadores que se expresen de forma especfica en las clulas tumorales y no en las clulas sanas. Si se dispone de dianas perfectamente caracterizadas, el anticuerpo monoclonal producido ejercera su accin teraputica en aquellas clulas del organismo seleccionadas. Las diferentes tecnologas para la produccin de anticuerpos monoclonales se presentan a continuacin.

SISTEMA DEL COMPLEMENTO

El sistema de complemento est constituido por molculas implicadas principalmente en ladefensa frente a infecciones y clulas tumorales. Parte de los factores del complemento
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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA potencian la inflamacin y la fagocitosis y actan produciendo la lisis de clulas y microorganismos. El complemento es especialmente importante frente a grmenes gram negativosque pueden ser directamente lisados por anticuerpos y complemento.

La mayor parte de los factores del complemento son protenas plasmticas y una pequea proporcin de ellos son protenas de membrana (Tabla 13.1). Muchos de los componentes del complemento (C2, C3, C4, C6, C7, C8, Factor B y Factor I) son polimrficos, es decir que existen diferentes formas allicas que se expresan con distintas frecuencias en poblaciones o razas. El hepatocito es el principal productor de factores del complemento. No obstante, por ejemplo los componentes de C1 son sintetizados por las clulas epiteliales del intestino y del sistema genito-urinario y los adipocitos sintetizan factor D. Se ha observado que los macrfagos activados producen algunos factores del complemento; sin embargo, esto solo tiene importancia, en el foco inflamatorio. Las citocinas inflamatorias (IL1, IL6 y TNF) e IFN-gamma incrementan la sntesis de algunos factores del complemento en el hgado.}

ACTIVACION DEL COMPLEMENTO En la activacin del complemento se pone en marcha una serie de reacciones consecutivas en cascada, de tal forma que a partir de cada una de ellas se genera un producto activo que adems de determinar que la reaccin consecutiva prosiga, puede tener diferentes acciones biolgicas importantes en la defensa del organismo. Se puede ver este conjunto de reacciones en cascada en la figura 13.1. Algunos de los factores del complemento son enzimas con carcter proteoltico, de tal formaque durante el proceso de activacin, algunas molculas son rotas en fragmentos a los quepara identificarlos se les aade letras minsculas (Ej. C3a, C3b). Estos fragmentos poseenimportanes funciones biolgicas y son mediadores de la inflamacin.

La activacin del Complemento por la va clsica

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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA 1.Cuando el Complemento se activa, independientemente de la va

implicada, se desarrollan tres etapas: 1.1.- Formacin de la convertasa de C3: Es una de las etapas de mayor importancia en la activacin del Comlemento, ya que constituye el evento central de la actividad del mismo: la fragmentacin de Complemento3. Las convertasas de Complemento 3 tienen estructuras diferentes en funcin de la va por la cual se activa el sistema. Para el caso de la va clsica, la convertasa de Complemento 3 est formada por un dmero denominado C4b2a. 1.2.- Formacin de la convertasa de Complemento5: Se produce despus que las convertasas de Complemento3 actan y generan los fragmentos Complemento3a y Complemento3b. El fragmento Complemento3b formado se une a la convertasa de Complemento3 para formar la convertasa de Complemento5, es decir, Complemento4b2a3b. 1.3.- Formacin del Complejo de Ataque a la Membrana (CAM): Constituye la etapa final del fenmeno. Se inicia con la formacin de Complemento5b por accin de su convertasa. Una vez formado Complemto5b se inicia la incorporacin progresiva de los componentes finales del sistema, que son Complento6, Complemento7, Complemento8 y Complemento9. El CAM final, ya formado, se designa como Complemento5b-9. El proceso de activacin de la va clsica se inicia con Complemento1, la cual es un complejo trimolecular compuesto por las subunidades denominadas Complemento1q unidad de reconocimiento, Complemento1r y

Complemento1s unidades catalticas. Complemento1q se une al complejo inmunolgico (antgeno-anticuerpo) y sufre un cambio conformacional que da lugar a la activacin enzimtica del Complemento1r asociado, este escinde y activa a Complemento1s. El Complemento1s activado escinde la siguiente protena de la cascada, Complemento4, originndose los fragmentos Complemento4a y Complemento4b. Este ltimo permanece adherido a la membrana celular. Es importante destacar, que una sola molcula de C1s puede generar multiples molculas de C4 activado. C1s tambin acta sobre C2, el cual, es degradado en dos componentes denominados C2a y C2b. El primero de ellos permanece unido a C4b para formar la convertasa de C3 (C4b2a). Por accin de esta convertasa, C3 sufre una ruptura proteoltica generando dos fragmentos, uno
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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA corto llamado C3a y uno largo C3b. La gran mayora de las molculas C3b se unen, por enlaces covalentes, a las membranas celulares, en sitios muy cercanos a la convertasa de C3 y forman un nuevo complejo multimolecular denominado convertasa de C5 C4b2a3b (1,3). La accin de esta convertasa de C5, escinde este compuesto en sus derivados C5a y C5b. El segundo fragmento permanece adherido a la membrana celular donde da inicio a la etapa final de la activacin del C, la formacin del CAM (1,3,5). El siguiente grfico esquematiza la activacin del C a travs de la va clsica:

Esquema de la activacin de la va clsica del Complemento.

2.- Componentes de la va clsica del Complemento: Con la finalidad de establecer la relacin estructura-funcin de los componentes del C, dedicaremos las siguientes lneas para describir, de manera breve, los distintos elementos que constituyen la cascada de esta va de activacin del C. 2.1.- C1: Este componente es una proteasa multimolecular con capacidad para unirse a microorganismos patgenos y convertir una seal de reconocimiento en eventos proteolticos altamente especficos. Tradicionalmente se acepta que el reconocimiento entre C1 y el microorganismo requiere la presencia de anticuerpos de la clase IgGIgM fijados al patgeno (10). Sin embargo, algunos invasores, como las bacterias gram negativas y los virus, pueden ser reconocidos por C1, en ausencia de anticuerpos especficos (11-13). La unidad
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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA de reconocimiento o C1q sufre, tras la unin con el anticuerpo (a travs del fragmento Fc), un cambio conformacional que activa las subunidades catalticas, dependientes de calcio, que estan acopladas a C1q y forman el tetrmero C1s-C1r-C1r-C1s, las cuales tienen actividad de proteasas. El proceso involucra dos pasos, el primero que consiste en la autoactivacin ltica de la proenzima C1r. Este una vez activado convierte a la proenzima C1s en una proteasa activa, responsable de fragmentar las dos siguientes proenzimas del C, a saber, C2 y C4 (3,14,15). La molcula C1q humana consta de tres cadenas diferentes, compuesta de 18 polipptidos, denominados 6A, 6B, 6C, que tienen similitud en su longitud, as como en la secuencia de sus aminocidos (16). En el extremo amino-terminal (N-terminal) se forman uniones disulfuro entre las cadenas A-B y C-C. Esta regin es seguida por una secuencia parecida a la del colgeno y desde ella emergen seis estructuras parecidas a una helice con tres aspas muy prximas entre si. Las helices se unen a un tallo y todo el conjunto adopta la forma de 6 brazos (algunos la llaman en forma de bouquet). Cada brazo terminando en una hlice de tres aspas es denominado modulo C1q y seis modulos juntos forman una molcula de C1q (Unidad de reconocimiento). Esta regin constituye el sitio de unin al fragmento cristalizable (Fc) de las

inmunoglobulinas (1,17-19). Los otros dos constituyentes de C1, C1r y C1s, son serina-proteasas con una organizacin estructural muy parecidas. En la forma de proenzima, C1r y C1s son glicoprotenas de una sola cadena compuestas por 688 y 673 aminocidos (a.a), respectivamente (4,20). La forma activada se genera cuando un enlace entre una arginina y una isoleucina es cortado (Unidad catalitica). Las interacciones entre C1r y C1s son dependientes de calcio y en el modelo estudiado por microscopia electrnica las unidades se ensamblan formando un tetrmero (C1s-C1r-C1r-C1s). En el tetrmero, las regiones catalticas carboxiterminal de ambos C1r se ubican en el centro y las de C1s en los extremos (21,22). Esta disposicin espacial permite el contacto entre las regiones catalticas de C1r y C1s y de esta manera el ltimo puede ser escindido cuando el primero se activa.

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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA 2.2.- C4: Es un complejo formado por tres cadenas polipeptdicas, llamadas , y . La estructura de su cadena se asemeja a la del C3, por la presencia de un enlancetioster. Este componente es codificado en el brazo corto del cromosoma 6 y forma parte de las molculas clase III del complejo mayor de histocompatibilidad. Es el primer componente sobre el cual ejerce su accin C1s activado fragmentandolo, a nivel de la cadena , dando orgen a una porcin pequea C4a y un fragmento grande C4b. Esta protelisis descubre un sitio para la unin con C2, localizado en C4b (23). 2.3.- C2: Esta molcula contiene la subunidad cataltica de la llamada convertasa de C3 de la va clsica de activacin del C. Esta formada por una cadena polipeptdica de 732 a.a y al igual que el C4 es una molcula clase III del complejo mayor de histocompatibilidad (24,25). Los estudios realizados con microscopia electrnica han revelado que C2 presenta tres dominios globulares. Cada uno de esos dominios tiene propiedades funcionales relacionadas con su estructura. Asi encontramos que el dominio N-terminal contiene el principal sitio de unin a la protena C4b y est formada por tres secuencias cortas que se repiten (SCRs). El dominio medio presenta un sitio adicional para la unin de esta molcula, completa o fragmentada, a C4b. El ltimo dominio, el carboxiterminal, representa la porcin cataltica de la molcula, que actua rompiendo a C3. Este dominio tiene homologa estructural con la familia de las proteasas serina (24-26). La molcula C2 es escindida en dos fragmentos, C2a y C2b. El primero permanece unido a la superficie celular, muy cerca de C1 y el segundo queda en la fase fluida .

3.- La activacin del Complemento por la va alterna:

La va alterna es evolutivamente ms antigua que la va clsica, ya que esta presente en organismos inferiores como el erizo de mar. Esta forma alterna de activacin del complemento no requiere de la presencia de complejos antgenoanticuerpo en la superficie del patgeno. El C3, en la fase fluida, sufre una hidrlisis basal y espontnea en presencia del agua formando un intermediario inestable llamado C3i C3H20, el cual tiene una vida media muy corta a menos
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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA que sea estabilizado mediante la unin con el factor B, formando el C3iB. Un nuevo elemento, el factor D, acta sobre este complejo C3iB, especficamente sobre el factor B, degradndolo en Bb y Ba. El Bb sigue unido a C3i (C3iBb) en tanto que Ba es liberado al intersticio. El complejo C3iBb, an en la fase fluida, acta como una convertasa inicial sobre nuevas molculas de C3, las cuales son escindidas en los componentes C3a y C3b. El C3b se une a las membranas de los patgenos y atrae nuevas molculas de factor B y factor D; estas dos ltimas interactan y generan ms componentes Bb, el cual se une de manera estable al C3b recin formado, originando C3bBb. Algunos C3bBb, unidos a la membrana, se asocian con el factor P o properdina transformndose en la convertasa de C3 de la va alterna (C3bBbP) en la fase slida. Esta nueva convertasa genera ms fragmentos C3a y C3b. En este sistema de recambio, transformacin y expansin algunas de las molculas de C3b se unen a algunos dimeros de C3bBb y forman el complejo C3bBb3b, que acta como convertasa de C5. La accin de esta convertasa genera los fragmentos C5a y C5b; este ltimo inicia la secuencia de eventos de la formacin del complejo de ataque a la membrana. La accin de cualquiera de las convertasa de C5, escinde este compuesto en sus derivados C5a y C5b. El segundo fragmento permanece adherido a la membrana celular donde da inicio a la etapa final de la activacin del complemento, la formacin del CAM. El C5a tieneunafuncin similar al C3a.

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Esquema de la activacin de la va alterna del Complemento

4.- La va de las lectinas de unin a manosa en la activacin del complemento: Esta forma de activacin del complemento es parecida a la va alterna en que no necesita la presencia de anticuerpos, de la clase IgGIgM, pero ocurre por un mecanismo parecido a la va clsica, a travs de la escisin de C4 y C2, para luego formar la convertasa de C3. La lectina de unin a la manosa (MBL) pertenece a la familia de las colectinas; esta MBL es capaz de unirse a una gran variedad de hidratos de carbono como manosa, N-acetil glucosamina, L-lactosa, entre otros; presentes en la superficie de muchos microorganismos, principalmente: Bifidobacterium, Candidaalbicans, Staphylococcusaureus, Streptococcus-hemolitico grupo A, Propionibacteriumacnes, Neisseria, Salmonella, Listeria,

Criptococcusneoformans, entre otros. La interaccin entre MBL y el patgeno induce la unin y la activacin de enzimas con actividad proteasa-serina, denominadas serina-proteasas

asociadas a MBL MASP-1 y MASP-2. Al activarse MASP-2 escinde a los componentes C4 y C2, lo que origina la formacin de la convertasa para C3. El
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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA resto de la activacin se corresponde con lo descrito para la va clsica, como lo seala este esquema:

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Los anticuerpos monoclonales constituyen una alternativa prometedora para el tratamiento de enfermedades que afectan a una parte importante de la poblacin mundial y que hoy en da no poseen cura. En la actualidad existen comercializados veinte anticuerpos teraputicos en el tratamiento de algunos tipos de enfermedades autoinmunes, cardiovasculares, tratamiento del rechazo de rganos transplantados, enfermedades pulmonares, infecciosas,

degeneracin macular y ciertos tipos de cncer. Se trata, por otra parte, de un campo en el que la investigacin cientfica es muy activa ya que continan este tipo de lneas de desarrollo, destacando principalmente la generacin de anticuerpos relacionados con la investigacin en enfermedades decreciente Incidencia en la poblacin como son el cncer, SIDA, enfermedades degenerativas e inflamatorias. La gran esperanza que sustentan los anticuerpos teraputicos para el tratamiento de estas patologas se basa en la combinacin de estos agentes con otros frmacos o estrategias teraputicas. Este es el caso de la investigacin para tratamiento de algunos tipos de tumores, en los que se combinan los anticuerpos con agentes como radioistopos y toxinas. En estos casos, los anticuerpos demuestran ser un potente vehculo transportador de otros frmacos directa y especficamente hacia la localizacin deseada.
34 EAPMH CICLO IV

RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA El gran avance y las enormes posibilidades que hoy muestran los anticuerpos monoclonales como agentes teraputicos se sustenta en el

crecientedesarrollo de las tecnologas de produccin ymejora de los mismos. Sin la consolidacin de estas tecnologas a gran escala no habra sido posible la produccin de estas molculas como productos farmacuticos biotecnolgicos.Ligado a este punto, se encuentra una de las carencias existentes en la actualidad que presenta la investigacin en anticuerpos teraputicos como es el elevado coste de produccin asociado a la manufactura de anticuerpos humanos. En este sentido, el desarrollo de nuevos sistemas de expresin de los anticuerpos en bacterias o plantas, representa una gran oportunidad de superacin de esta barrera. Finalmente, el desarrollo de anticuerpos teraputicos debe ir de la mano de la investigacin bsica de enfermedades susceptibles de ser tratadas mediante ellos as como de la necesaria investigacin de dianas especficas de dichas enfermedades. Normalmente, el tratamiento de enfermedades como el cncer, enfermedades autoinmunes, infecciosas, etc., es inespecfico, ya que su administracin no va dirigida a un tejido concreto, al rgano daado o a las molculas implicadas en su proceso desencadenante. Gracias al avance de la Biologa Molecular, entre otras disciplinas, es posible aumentar el conocimiento y caracterizacin de nuevas dianas especficas de determinados procesos biolgicos. Los anticuerpos monoclonales son vehculos teraputicos altamente especficos, que pueden actuar simultneamente como agentes de deteccin, transporte y terapia, al dirigirse especfica y nicamente mediante dianas nicas caracterizadas, a aquellas clulas implicadas en el proceso patolgico y no hacia las sanas. En este sentido, el gran reto y futuro de la terapia mediante anticuerpos monoclonales ser conseguir un trabajo conjunto entre empresas del sector, grupos de investigacin de OPIS, universidades y hospitales.

Referencias
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RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA 1. Ferreira A, Afani S, Lanza B, Aguilln J, Seplveda C. Inmunologa bsica y clnica. Ed. Mediterrneo, Santiago, Chile. 2005. 2. Fainboim L, Geffner J. Introduccin a la inmunologa humana. 5a edicin. Editorial Panamericana, Argentina. 2006. 3. Chapman HA. Endosomal proteases in antigen presentation. CurrOpin Immunology 2006; 18: 78-84. 4. Abbas AK, Lichtman AH, Pillai S. Cellular and molecular immunology. 6th ed. Philadelphia, USA, Saunders Elsevier, 2007. 5. Rosenbaum J, Ronick M, Song X, Choi D, Planck S. T-cell-antigen presenting cell interactions visualized in vivo in a model of antigen-specific inflammation. ClinImmunol 2008; 126: 270-276. 6. Mori L, De Libero G. Presentation of lipid antigens to T cells. ImmunologyLetters 2008; 117: 1-8. 7 .Brekke, O. and Sandlie, I. (2003).Therapeutic antibodies for human diseases at the dawn of the twenty-first century. Nature Reviews, Drug Discovery 2:5262. 8. Colvin, R. B. and Preffer, F. I. (1991). Laboratory monitoring of therapy with OKT3 and other murine monoclonal antibodies.Clin. Lab. Med. 11 (3):693-714. 9. Cortez-Retamozo, V. et al. (2004). Efficient Cancer Therpy with a NanobodyBased Conjugate. Cancer Research 64:2853-2857.
36 EAPMH CICLO IV

RESPUESTA INMUNE HUMORAL MICROBIOLOGIA MEDICA 10.Cox, K.M. et al. (2006). Glycan optimisation of a human monoclonal antibody in the aquatic plant Lemna minor. Nature Biotechnology 24 (12):1591-7. 11. Datamonitor: Monoclonal Antobody Therapies: Sector Analysis Tool. 18 April 2005. 12. European ComissionC(2007)560of26.02.07. Work programme 2007

Cooperation Theme 1: Health. 13. Fox, L. J. (2006). Turning plant into protein factories. Nature Biotechnology 24 (10):1191-3. 14. Fundacin COTEC para la innovacin tecnolgica. (2006). Biotecnologa en la medicina del futuro.

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