VARIABILIDAD GENÉTICA La variabilidad genética se refiere a la variación en el material genético de una población o especie, e incluye los genomas nuclear

, mitocondrial y ribosomal, además de los genomas de otrosorgánulos. La variabilidad genética nueva puede estar causada por mutaciones, recombinaciones y alteraciones en el cariotipo (el número, forma, tamaño y ordenación interna de loscromosomas). Los procesos que afectan la variabilidad genética son la selección natural y la deriva genética. Nos permite explicar por qué los organismos aunque sean de la misma especie, no son iguales entre sí. La variabilidad es la materia prima de la evolución. Para que la selección natural pueda actuar sobre un carácter, debe haber algo que seleccionar, es decir, varios alelos para el gen que codifica ese carácter. Además, cuanta más variación haya, más evolución hay. R.A. Fisher demostró matemáticamente que cuantos más alelos existan para un gen, más probabilidad hay de que uno de ellos se imponga al resto (se fije). Esto implica que cuanta más variabilidad genética exista en una población, mayor será el ritmo de la evolución. Esto se conoce como Teorema fundamental de la selección natural de Fisher, que establece que: El ritmo de aumento en adaptación de un organismo en cualquier momento es igual a su variación genética en adaptación en ese momento.

Sistemas de transformación vegetal. Principios de los Sistemas de transferencia genética en plantas. Antes de elegir un sistema de transformación vegetal, es importante establecer un protocolo de cultivo de tejidos y de regeneración de las plantas. Este protocolo es parte integral de la mayoría de las estrategias de transformación y es generalmente el aspecto más exigente de las mismas. La clave para integrar exitosamente las técnicas de cultivo de tejidos dentro en una estrategia de transformación es la obtención de un sistema de regeneración rápido y eficiente. No todos los protocolos de regeneración son compatibles con todas las técnicas de transformación. Mientras una gran variedad de estrategias de regeneración y transformación son aplicables a muchos cultivos, se requieren protocolos muy particulares y específicos para la modificación de determinadas especies. En términos generales, algunos protocolos son claramente más eficientes que otros. Por ejemplo, la regeneración de embriones maduros a partir de embriones somáticos es el método más adecuado para la regeneración de especies monocotiledóneas. Aplicaciones de la transferencia genética de plantas que incrementa la variabilidad genética. Establecer una buena estrategia de regeneración y cultivo de tejidos es primordial antes de implementar una técnica de transformación. Primero, hay que identificar el tejido o células de las que se puede regenerar una planta, establecer los agentes de selección apropiados, las hormonas requeridas, los medios de cultivos adecuados para desarrollar una regeneración eficiente de plantas enteras y fértiles. Una vez establecidos estos parámetros hay que realizar las construcciones genéticas, y recién entonces determinar el sistema más

(Ver imagen en anexos). pero no es heredable por la progenie. Transferencia con whiskers de carburo de silicio. Tipos de Vectores Vectores Co-integrados: cuando plasmido de E. La expresión estable permite la integración del ADN foráneo al genoma vegetal y la consiguiente transmisión a las siguientes generaciones. surgidos como alternativa para transformar especies monocotiledóneas que no son hospedantes naturales de Agrobacterium: • • • • Transferencia por bombardeo de partículas o biobalística.apropiado para la introducción del material genético y establecer los principales parámetros del procedimiento correspondiente. Los sistemas de trasferencia pueden dividirse en dos grupos: Sistemas basados en vectores biológicos: • • Transferencia mediada por Agrobacterium Transferencia basada en virus vegetales. Vectores de transformación. La expresión transitoria ocurre durante un período corto de tiempo (pocos días) o hasta culminar el ciclo de vida de la planta. el Dna foráneo de coli se integra en los bordes de su T-DNA por recombinación homologa dando lugar a: Plasmido con región vir y el TDNA con el Dna foráneo. Sistemas de transferencia directa de ADN: Sistemas basados en transferencia física. Transferencia por microinyección. Este último más pequeño y manipulable para introducir genes foráneos entre bordes. Los métodos de transformación desarrollados permiten la expresión transitoria o la expresión estable del ADN introducido. Transferencia por cationes divalentes y/o electroporación.coli se transfiere en agrobacterium. Plásmidos con información esencial para replicarse. (Ver imagen en anexos). transferirse e integrarse y posibilitar expresión de genes foráneos en genoma de la célula vegetal. Vectores Binarios: plásmido Ti desarmado con solo región vir y en un segundo plásmido bordes de l T-DNA con origen replicación funcional en ambas bacterias. La transformación de plantas se refiere al evento de introducir e integrar ADN foráneo en células vegetales y regenerar plantas transgénicas. .

e) son útiles para estudiar función y regulación génica. ya que no son necesarias secuencias particulares. El rango natural de hospedantes de Agrobacterium se constituyó en un importante factor limitante en los primeros intentos por transformar monocotiledóneas y algunas dicotiledóneas que no eran susceptibles a la bacteria. El bombardeo de micropartículas es el más ampliamente utilizado. ya que en este tipo de métodos la expresión transitoria suele ocurrir en forma muy temprana. la abrasión con fibras de carburo de silicio y la microinyección. como las de la región vir o los bordes del plásmido Ti. Ventajas: a) Son considerados universales porque. Es decir. que su expresión no será dependiente de la interacción vector-hospedador. permiten transferir ADN desnudo sin la mediación de vectores biológicos. la permeabilización de membranas celulares inducida por corrientes eléctricas (electroporación) y/o por tratamientos químicos con policationes (PEG. b) La inserción de múltiples copias del transgén es más frecuente que en el caso de los sistemas basados en vectores biológicos. se desarrollaron métodos alternativos de transferencia de ADN basados en procedimientos de naturaleza química. PVP) o fusógenos lipídicos.Los diferentes métodos desarrollados para la transformación genética de plantas pueden agruparse en dos clases principales de acuerdo con el mecanismo utilizado para la transferencia de ADN. En una clase se encuentran aquellos métodos basados en la utilización de vectores biológicos. c) Las construcciones son más simples y pequeñas. como sucede en la transformación mediada por Agrobacterium. como el Agrobacterium o los virus vegetales. Estas dos cuestiones implican que en la transformación directa existe una mayor probabilidad de ocurrencia del silenciamiento génico. al no incluir organismos vectores. Desventajas: a) Pueden conducir a una alta frecuencia de re-arreglos del transgén. conocidos como de transferencia directa. fisicoquímica. d) es más fácil la co-transformación con dos o más genes. las células transformadas generalmente contienen secuencias fragmentadas del transgén y del vector en varios sitios del genoma. tanto a nivel transcripcional como post-transcripcional. como así también actividad de promotores. aquellos que consisten en la transferencia directa del ADN. y en otra clase. se incluyen métodos tales como el bombardeo con micropartículas (biobalística). pueden aplicarse a cualquier especie. El transgén puede ser transcripto en el núcleo y traducido en el citoplasma independientemente de su integración al genoma nuclear. En consecuencia. Entre estos últimos. independientemente de su susceptibilidad a la infección por parte de los mismos. . Los métodos de transferencia directa presentan diversas ventajas y desventajas al ser comparados con los métodos mediados por vectores biológicos. Estos nuevos métodos. o mecánica. b) No requieren la eliminación de las células del organismo vector de los tejidos o plantas transgénicas.

Es común el uso de policationes tales como polietilenglicol (PEG). . La obtención de protoplastos requiere la incubación de tejido vegetal en un medio suplementado con enzimas fúngicas pectocelulolíticas para digerir las paredes celulares. la densidad de protoplastos y la composición del buffer de cultivo. diseño y componentes. Se han determinado las condiciones óptimas para la transformación de células de distintas especies. polivinil alcohol (PVA) y DEA-dextrano que actúan como fusógenos e incrementan la endocitosis del ADN debido a que sus cargas positivas interaccionan con las cargas negativas del ADN y de la membrana plasmática. Los protoplastos se obtienen siguiendo los pasos mencionados en la transparencia anterior. pero la disponibilidad de protocolos de regeneración de plantas enteras a partir de protoplastos resulta una limitante en la mayor parte de los casos. La transformación por electroporación ha sido documentada en una amplia variedad de especies y tipos de tejidos. en tanto que las pectinasas digieren la matriz de pectina que mantiene adheridas a las células. El uso de enzimas disponibles comercialmente posibilitó el aislamiento de protoplastos de prácticamente cualquier tejido vegetal. con el objetivo de optimizar la transferencia de ADN a protoplastos. siendo necesario en algunos casos el agregado de hemicelulasas. Las paredes celulares representan barreras físicas significativas para la transferencia de ADN. permitiendo así el pasaje de ADN a la célula. se incuban luego en una solución buffer conteniendo el ADN (plásmido con el gen de interés y el gen de selección) y son expuestos a pulsos eléctricos de alto voltaje y de duración variable. incluyendo la intensidad del campo eléctrico. siempre que el mismo no esté lignificado. los protoplastos deben ser aislados y lavados. Luego de la digestión. la que consiste en exponer a las células vegetales a intensos campos eléctricos para provocar la apertura de poros y promover la captura del ADN.Vectores de transformación. se utilizan distintas técnicas que incrementan la permeabilidad de las membranas plasmáticas. Por otro lado. mientras que los protoplastos. constituyen un tipo de explanto blanco más apropiado. los tratamientos con Ca2+ y calor pueden incrementar la precipitación del ADN. Las celulasas y hemicelulasas degradan la pared celular. Además del uso de fusógenos. Se basa en la permeabilización de las membranas plasmáticas de los protoplastos para favorecer el ingreso del material genético. Un método alternativo para permeabilizar las membranas celulares y facilitar el ingreso del ADN es la electroporación. El campo eléctrico causa la formación de poros reversibles en la membrana plasmática. Método por electroporación. a electroporación sola no produce altas tasas de transformación. por tratarse de células desprovistas de paredes celulares. pero la eficiencia puede incrementarse acoplándola al uso de policationes como el polietilenglicol (PEG). El alterar estas características mediante la biotecnología de plantas puede hacerse empleando algunos métodos de transferencia directa de AND como los siguientes: Método por permeabilización.

La presión de turgencia de las células vegetales suele dificultar también el procedimiento de inyección. La microinyección es un método de transferencia directa. b) Puede aplicarse virtualmente a cualquier tipo de célula. Petunia sp. anticuerpos.Método por microinyección. f) Permite la introducción no sólo de ADN sino también de cromosomas dentro de las células. proteínas y material genético es ampliamente utilizada por los biólogos a pesar de sus desventajas relacionadas con la inserción de microcapilares. Las células microinyectadas se dejan recuperar en una gota de medio suspendida en una cámara húmeda y. Durante la transferencia de ADN. La microinyección fue ideada principalmente para la transformación de grandes células animales. el sellado de la membrana plasmática alrededor de la herida provocada por la punta de la pipeta (alrededor de 0. Además. La microinyección presenta varias ventajas: a) Requiere pequeñas cantidades de ADN. Esta técnica se utilizó por primera vez en células animales durante los años 40. son cultivadas in vitro para regenerar plantas. en la mayoría de las células vegetales y en algunos casos de animales la alta presión celular exacerba los problemas de sellado. mediante el cual se inyecta ADN en las células utilizando pipetas microcapilares de vidrio bajo control microscópico. se han obtenido plantas transgénicas de Nicotiana tabacum. células en suspensión y estructuras multicelulares vegetales. En células pequeñas. d) Permite regular el número de moléculas a transferir. su aplicación a la transformación de plantas ha sido muy limitada hasta el presente debido a las dificultades para penetrar la pared celular mediante micropipetas e inyectar el núcleo celular (generalmente la vacuola celular ocupa un volumen preponderante).. constituye un método muy aplicable al estudio de funciones celulares y de la fisiología de plástidos. La microinyección de fluorocromos. Sin embargo. Sin embargo. La microinyección de protoplastos requiere inmovilizar a los mismos en gotas de alginato. Utilizando este método. e) Puede monitorearse a las células blanco durante y después de la transferencia de ADN. como las huevas de los peces. La técnica requiere de un micromanipulador y se realiza bajo microscopio. se han desarrollado protocolos para microinyectar ADN en protoplastos. cada célula es inmovilizada con una pipeta succionadora. cuando se hizo posible la generación y manipulación de microagujas. después de la penetración de la pipeta la presión celular se distiende porque los líquidos celulares son forzados a entrar al capilar.7 m de diámetro) es a menudo incompleto. cultivos embriogénicos. Por todas estas características. c) Permite la inyección conjunta de ADN con otras moléculas biológicamente activas. Brassica napus y Hordeum vulgare. polilisina o agarosa. y su uso se extendió posteriormente a las células vegetales. . posteriormente.

una proteína.) que esté asociada a la presencia o expresión de una característica B (como vigor. y también entre el mayor rendimiento de híbridos de maíz y el ángulo más agudo de inserción de las hojas en el tallo. pues se ha visto que dicha característica se asocia en la mayoría de las poblaciones con la supervivencia. es decir. Gracias al empleo de marcadores ha sido posible mejorar muchas especies que son la base de la alimentación del mundo. Hay dos tipos principales de marcadores: los marcadores morfológicos y los marcadores moleculares. Sin embargo. Los marcadores morfológicos fueron el primer tipo de marcadores que el hombre utilizó. Este tipo de marcadores son muy utilizados para estimar la variación morfológica existente en una población. se han hecho intentos para seleccionar caracteres con utilidad agronómica utilizando marcadores morfológicos (denominados también alelos mutantes en contraposición al alelo normal). el crecimiento y la reproducción. En ocasiones. pues la presencia de A necesariamente implica la de B. hay varias limitaciones para su uso. De hecho. Hay otros muchos ejemplos en los que los mutantes producen al mismo tiempo efectos positivos y negativos en los caracteres a seleccionar. etc. en los árboles de pino podemos usar como marcadores morfológicos el peso o tamaño de las semillas. Se consideran marcadores morfológicos a los caracteres de un individuo que se expresan en un ambiente específico y que el hombre identifica con un objetivo determinado. ¿Qué es un marcador? Un marcador es un carácter o un gen que debido al ligamiento puede usarse para indicar la presencia de otro gen.MARCADORES MOLECULARES Mejoradores Genéticos de Plantas. A lo largo de la historia de la mejora de plantas. se han observado asociaciones entre los caracteres seleccionados y determinados marcadores morfológicos. sin embargo simultáneamente produce efectos desfavorables como son una reducción del rendimiento y un mayor encamado del cultivo. pero es muy probable que en estos casos el incremento de rendimiento no se deba a su asociación directa con los marcadores sino a una causa indirecta como es permitir un aumento de la densidad de plantas y del nivel de fertilización en el cultivo. La posibilidad de usar marcadores morfológicos como una ayuda en la selección de caracteres cualitativos y cuantitativos en plantas fue sugerida por hace ya más de 70 años. etc. tipo de hoja. etc. Otros mutantes como el bm3 del maíz (pigmento pardo en el nervio de la hoja) proporciona un forraje con menos contenido en lignina y por tanto más alto valor nutritivo. resistencia a enfermedades. La importancia de los marcadores radica en que ofrecen la posibilidad de estudiar poblaciones de organismos y seleccionar aquellos que presentan rasgos de interés para el hombre. de las que la principal es precisamente que se basan en las . el uso de marcadores permite seleccionar los individuos aun antes de que expresen el rasgo de interés. cualquier característica A (sea un gen. Marcadores morfológicos. Por tanto la selección con base en marcadores morfológicos ha sido utilizada de forma muy limitada en la mejora genética de plantas. La contribución directa de estos mutantes al carácter seleccionado no está cuantificada. altura. Por ejemplo entre el mayor rendimiento del grano del trigo y la menor talla de las plantas.) puede considerarse como un marcador. Por ejemplo.

Este tipo de marcadores pueden evaluarse desde que los individuos están en sus primeros estadios de desarrollo. las isoenzimas tienen base genética codominante (es decir. son selectivamente neutrales y están libres de efectos deletéreos (cuando los alelos tienen efectos negativos que imposibilitan la reproducción del genotipo que los posee). que además puede detectarse fácilmente. que consiste en colocar un extracto proteico del material a analizar en los pocillos de un soporte (papel de celulosa o un gel hecho de agarosa o poliacrilamida) que se somete a un campo eléctrico durante varias horas para que se separen las proteínas de acuerdo con su tamaño o carga eléctrica. por lo que es posible realizar inferencias genéticas a partir de los patrones de bandas observados en los geles. las cuales desempeñan la misma actividad pero pueden tener diferentes propiedades Las isoenzimas se identifican mediante el proceso denominado “electroforesis”. (Proteínas . Se habla de marcadores genéticos cuando se transmiten según las leyes básicas de la herencia mendeliana. Los marcadores moleculares corresponden a cualquier gen cuya expresión permite un efecto cuantificable u observable (características fenotípicas). Las isoenzimas fueron descubiertas por Hunter y Markert en 1957 y son diferentes variantes moleculares de una misma enzima presentes en una especie. efectos pleiotrópicos (cuando un gen controla la expresión de más de un carácter en un individuo) y/o epistáticos (dominancia de un gen sobre otro).características morfológicas o expresadas en el individuo (fenotipo). Las diferencias en la movilidad electroforética de las isoenzimas son resultantes de las diferencias en las secuencias del ADN que codifican tales enzimas.Isoenzimas) Los marcadores bioquímicos incluyen a las proteínas y las isoenzimas o aloenzimas y constituyen la primera generación de marcadores moleculares. las cuales son fuertemente influidas por el ambiente en que se desarrollan. que en un individuo diploide es posible visualizar la expresión de ambos alelos). por lo que se ven menos influidos por el ambiente. además de que generalmente sólo se pueden identificar y medir en individuos completos o adultos. Existen dos tipos de marcadores moleculares: los marcadores bioquímicos y los marcadores de ADN. Marcadores de ADN. . accesible y no destructiva debido a que utiliza pequeñas cantidades de material. por lo que es importante destacar que no todos los marcadores moleculares pueden considerarse como genéticos. Marcadores bioquímicos. Marcadores moleculares. y se pueden aplicar usando a todo el individuo o sólo parte de él. el control genético de la mayoría de las isoenzimas es bien conocido. Una vez concluida la emigración de las proteínas por medio del frente de corrida denominado Kohlrasusch. Por otro lado. Estos marcadores tienen la ventaja de que la técnica es relativamente barata. Las proteínas son los productos primarios de los genes y se forman mediante los procesos de transcripción y traducción. Además. el gel es colocado en una solución que contiene los compuestos químicos necesarios (colorantes) para que se lleve a cabo una reacción y se puedan observar posteriormente las isoenzimas en forma de bandas de color en el soporte o gel.

las de reacción de polimerización en cadena (PCR) y las que combinan PCR o sus productos de ADN con la hibridación tipo Southern. Existen varias técnicas para identificar marcadores de ADN. se hibridizan los fragmentos de la membrana con sondas marcadas (radiactiva o no radiactivamente) para visualizar y detectar las bandas hibridadas. Dentro de esta metodología se encuentran los marcadores llamados RAPD (ADN polimórfico amplificado al azar). La hibridación tipo Southern explora las variaciones en la longitud o tamaño de los fragmentos de ADN ocasionadas por la restricción del genoma mediada por una enzima particular (endonucleasa). o reacción en cadena de la polimerasa. están presentes en cualquier estadio del individuo. PCR iniciada con microsatélites (MP-PCR). las que se pueden agrupar en tres categorías: las de hibridación tipo Southern. y por medio de la enzima Taq polimerasa se lleva a cabo la extensión o alargamiento de la molécula iniciadora (cebador). Finalmente. Finalmente. AFLP (polimorfismo de longitud de fragmentos amplificados) y DAF (amplificación de huellas del ADN). los principales pasos del PCR son los siguientes: se extrae el ADN del material a analizar. muy abundantes. Los ciclos se repiten la cantidad de veces que sea necesario. son universales. dentro de las metodologías que combinan la PCR o sus productos de ADN más la hibridación tipo Southern. es una tecnología utilizada para multiplicar (sintetizar) in vitro fragmentos específicos de ADN con la finalidad de detectar una secuencia o gen de interés en el genoma del individuo en estudio. pues son capaces de generar una cantidad virtualmente infinita de marcadores. Dentro de esta técnica se encuentran los marcadores RFLP (polimorfismo de la longitud de los fragmentos de restricción) y los VNTR (secuencias adyacentes que se repiten en número variable). se induce el alineamiento o reconocimiento del cebador con las secuencias blanco complementarias o molde del ADN. estos fragmentos son separados en geles de agarosa. Este proceso se realiza en un termociclador. Marcadores Basados en PCR: la técnica de PCR. En forma general. Son muy ventajosos los marcadores de ADN ya que no son afectados por el ambiente. están los RAHM y RAMPO (amplificación aleatoria del polimorfismo de microsatélites). que se encarga de realizar los cambios de temperatura necesarios para que se desarrollen las etapas o ciclos anteriormente mencionados. que son capaces de reconocer una secuencia blanco para la cual es complementaria. Marcadores ADN / Hibridación: la hibridación consiste en la formación de una molécula de doble cadena mediante el apareamiento o unión de bases complementarias de dos moléculas de una sola cadena. permiten una detección temprana.Los marcadores de ADN constituyen la nueva generación de marcadores moleculares y solucionaron el problema de la carencia de marcadores que tenían las isoenzimas. Se basa en la amplificación de fragmentos de ADN a partir de secuencias de nucleótidos denominadas “cebador” (primer). se requiere poca cantidad de ADN para los análisis y el ADN es muy estable y específico para cada individuo (huella . Esta técnica comprende las siguientes etapas: primero se extrae el ADN del material que deseamos estudiar. Ventajas y aplicaciones de los marcadores de ADN. entre otros. luego se le adicionan enzimas de restricción (endonucleasas). las cuales cortan el ADN en fragmentos de diferente longitud. hasta obtener la cantidad de copias de ADN que se requieran. para después realizar por capilaridad o al vacío la transferencia de los fragmentos a una membrana de papel de nitrocelulosa o de nylon (transferencia tipo Southern). se separa la molécula del ADN en dos hebras (desnaturalización).

si se requiere elaborar el mapa genético de una especie. Los isoenzimas tienen el inconveniente de que su número es limitado. mapeo de características de herencia cuantitativa QTL (Quantitative Trait Loci ) y selección MAS auxiliada por marcadores (Marker Asisted Selection). las sondas en los RFLP). el establecimiento de relaciones filogenéticas entre diferentes individuos y especies. No obstante. Sin embargo. el equipo. los reactivos y las instalaciones de laboratorio y condiciones de seguridad que requiere cada técnica (por ejemplo. Insensibilidad a la influencia y efectos ambientales. y por tanto no tienen una presencia suficientemente densa en todas las regiones del genoma. Por ejemplo. que además se puedan realizar bajo las condiciones del laboratorio que disponemos. por lo que no es recomendable emplear una técnica más costosa o complicada. Ausencia de efectos en el desarrollo de la planta. aunque no siempre es bueno limitarse. Selección de la metodología a utilizar. quizás con un simple análisis de isoenzimas se pueda obtener la información necesaria. equipos sofisticados y un estricto control de la contaminación. la cantidad y precisión de la información requerida es mayor. Co-dominancia. El uso de marcadores moleculares en los análisis genéticos y en el mejoramiento de las plantas ha tenido una difusión extremadamente rápida. Las principales aplicaciones incluyen la obtención de “huellas genéticas” (fingerprinting) genómicas de individuos. Fundamentos y características de los marcadores. por lo que necesariamente se debe recurrir a los marcadores de ADN. Los atributos ideales de un gen marcador son: a) b) c) d) e) f) g) Polimorfismo Herencia mendeliana y no epistasia. Posibilidad de detección en las primeras fases de desarrollo de la planta. depende más bien de los objetivos y necesidades del trabajo. Facilidad en la expresión. También se debe considerar el costo en sí de la técnica que se va a desarrollar. y simplicidad en la identificación y análisis. son relativamente costosos. se debe ser realista y desarrollar las técnicas moleculares más adecuadas para nuestro estudio. variedades y poblaciones. en el caso de RFLP se necesita un depósito de desechos radiactivos). Finalmente. la construcción de mapas genéticos de alta cobertura genómica y la localización de genes de interés económico. la necesidad de personal capacitado. necesitan personal entrenado. La selección de la metodología para obtener los marcadores moleculares no es cosa de moda. el análisis de la estructura y diversidad genética en poblaciones naturales y de mejoramiento y bancos de germoplasma. es decir comportamiento como un gen neutro.génica). Los isoenzimas y los RFLPs son los que más se acercan a estos atributos ideales. para determinar la variación de una población. . Es siempre recomendable analizar qué tanto trabajo previo es necesario para llevar a cabo una técnica (por ejemplo.

Sin embargo. Localización e identificación de genes cualitativos o mayores y también de genes con efectos pequeños afectando a caracteres cuantitativos (los así llamados QTLs). Las distancias genéticas más usadas son la modificada de Rogers utilizada con poblaciones segregantes y la de Nei-Li utilizada con líneas puras e híbridos. aún cuando los costos están reduciéndose progresivamente y nuevas técnicas limpias de fluorescencia pueden sustituir a los isótopos radiactivos. El método es similar al utilizado en las pruebas de paternidad y parentesco en genética humana. continuamente se van descubriendo nuevos marcadores. Uso de los marcadores. Esto permite: a) La clasificación taxonómica de ecotipos o muestras que acceden a los Bancos de Germoplasma como un complemento de los datos morfológicos que han sido utilizados desde los tiempos de Linneaus. Los marcadores de DNA permiten una distinción más precisa de genotipos que los "descriptores" morfológicos requeridos hoy día. Los RAPDs son muy fáciles de analizar (después de la extracción del DNA solo necesitan de 4-6 h. Identificación y distinción de variedades. tienen el inconveniente de que su análisis en el laboratorio es actualmente costoso y frecuentemente necesitan isótopos radiactivos para su resolución. por lo que no es posible distinguir el genotipo homocigótico dominante del heterocigótico. En el genoma del maíz existen actualmente descritos más de 700 marcadores. 4. Establecimiento de relaciones de parentesco o "pedigree" entre líneas o variedades para realizar estudios genéticos. 3. Estimación de distancias genéticas entre poblaciones. En el maíz como en otros cultivos.Los RFLPs son unos buenos marcadores moleculares permitiendo una densidad de mapeo alta en todo el genoma. variedades. Sin embargo estos marcadores moleculares no han sido todavía adoptados por los organismos oficiales encargados de la protección de variedades. líneas puras e híbridos para proteger los derechos del obtentor vegetal en el Registro de Variedades Protegidas. . Esta distinción es imprescindible para realizar la separación de individuos en la generación F2. líneas puras e híbridos. 2. 200 son morfológicos y 70 isoenzimáticos. para amplificación y separación electroforética) y al igual que los RFLPs pueden cubrir densamente el genoma. tienen sin embargo el inconveniente de que no poseen el atributo de co-dominancia. Los marcadores moleculares se han utilizado o se pueden utilizar en los siguientes aspectos de la mejora genética de plantas: 1. especialmente RFLPs y RAPDs. de los cuales aproximadamente unos 450 son RFLPs. b) La asignación de líneas puras a grupos heteróticos con objeto de predecir el valor de los híbridos resultantes del cruce.

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