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UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR FACULTAD DE INGENIERIAS Y TECNOLOGICAS DEPARTAMENTO INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

PROFESOR: EINER GUTIERREZ EXPERIENCIAS No. 5. DETERMINACIN DE FOSFORO EPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN MOLECULAR TOTAL POR

1. OBJETIVOS Comprobar la longitud de onda ptima para el anlisis. Determinar el contenido de fsforo en una muestra orgnica por absorcin molecular.

2. FUNDAMENTOS DE LA TECNICA Cuando las molculas interactan con la energa radiante en la regin visible y ultravioleta, la absorcin consiste en desplazar un electrn exterior de la molcula. Se ha observado que el espectro de absorcin es una funcin de la estructura completa de una sustancia; por ello, es una propiedad altamente especfica de la estructura molecular del material absorbente. Cuando un analito no presenta de manera directa una absorcin relevante del espectro visible, se hace necesario utilizar una reaccin previa a la determinacin que permita obtener un producto absorbente de la radiacin. A este tratamiento se le denomina como Desarrollo del color, Para la determinacin cuantitativa del fsforo, generalmente se aprovecha el color azul desarrollado por la reduccin de cido ascrbico del complejo fsforo molbdico, formado por la adicin de molibdato a una alcuota de la solucin que contiene el fsforo. La intensidad del color depende de la concentracin del fsforo. Por su parte para el desarrollo del color algunos investigadores han evaluado diferentes reactivos simples, sin embargo se encontr que el antimonio acelera el desarrollo del color y, adems lo estabiliza durante 24 horas (Watanabe y Olsen, 1962 Murphy y Riley, 1962).

3. MATERIALES Y REACTIVOS Espectrofotmetro de absorcin molecular, con sus celdas. 10 Tubos de ensayos 1 Gradilla. 2 Beaker 100ml 1 Beaker 400ml 1 Matraz 250ml 1 Pipeta 10ml. Tartrato de antimonio y potasio Acido Sulfrico Molibdato de amonio Acido ascorbico Fosfato cido de potasio.

4. PROCEDIMIENTO a) Preparacin de soluciones - Solucin estndar de fsforo de 100 ppm Secar una cantidad de fosfato cido de potasio a 105 C, suficiente para preparar un litro de solucin a 1000 ppm de fsforo. Luego pesar la cantidad requerida, segn clculos previos basados en la informacin de la etiqueta del reactivo y diluir a un litro con agua destilada. Posteriormente, preparar la solucin a 100 ppm mediante dilucin con agua destilada en matraz de 100ml. - Soluciones curva de trabajo Preparar a partir de la solucin estndar de 100ppm de fsforo, las siguientes concentraciones: 1, 2, 4, 10, 12 y 15 ppm. -Soluciones para el desarrollo del color Solucion A Disolver 6 g de molibdato de amonio en 20 ml de H2O, 0.1455 g de tartrato de antimonio y potasio y agitar hasta que se disuelva. Agregar lentamente con agitacin suave 70 ml de cido sulfrico concentrado. Enfriar la solucin y llevar a 100 ml con agua. Mantener en frasco oscuro. Solucion B Disolver 6.6 g de cido ascrbico en 25 ml de agua, completar volumen con agua en matraz de 50 ml. Solucin desarrolladora Agregar 25 ml de solucin A a 500ml de agua destilada contenida en matraz de 1000ml; luego transferir 10ml de solucin B al mismo y completar el volumen hasta el aforo del matraz con agua destilada. (Esta solucin debe presentar una tonalidad amarilla cristalina). Se debe tener mucho cuidado con el lavado de los materiales, evitando el uso de detergentes fosforados, que pueden producir contaminacin. (Esta solucin se debe preparar el da que se va a trabajar). b) Construccin de curva espectral. Desarrollo del color: Tomar una alcuota de 1ml de agua destilada (blanco), de las soluciones de la curva de trabajo y de la dilucin de las cenizas de la muestra problema y transferir cada una a un tubo de ensayo. Luego, agregar a cada tubo, siguiendo desde la menor concentracin hasta la mayor, 9 ml de la solucin desarrolladora de color. Agitar y dejar en reposo por 20 minutos. Ajuste de las condiciones de trabajo: Encender el equipo y dejarlo calentar durante 10 minutos aproximadamente. Con el portacelda vaco, girar el botn de ajuste al 0 % T hasta que la

escala seale ese valor. Coloque en el portacelda del equipo una celda con el blanco de reactivos y gire el botn hasta que la escala marque 100% T. Captura de datos: En otra celda, colocar aproximadamente 6ml de la solucin patrn de 4ppm de fsforo y leer el % T (o Absorbancia) en el colormetro desde 500 hasta 950 nm de longitud de onda. (Sugerencia: hacer un recorrido inicial a intervalos grandes de 50nm y luego hacer un recorrido ms exhaustivo en los rangos de mayor absorcin). Se debe realizar el ajuste del 0% y 100% de transmitancia cada vez que cambie la longitud de onda. c) Construccin de curva de trabajo. Seleccionar la longitud de onda ptima determinada en b) y realizar la lectura de transmitancia o absorbancia de todos los patrones y las muestras en el mismo orden en el que se les adicion la solucin desarrolladora. (Para optimizar el tiempo, realizar dos diluciones previas de la muestra problema con factores de dilucin de 10 y 50 y leer cada una)

PREGUNTAS 1. Elaborar el espectro de absorcin (se grfica absorbancia contra longitud de onda). 2. Cul es la longitud de onda ptima para construir la curva de trabajo? 3. Obtenga la ecuacin que relaciona la absorbancia con la concentracin de fsforo por mnimos cuadrados. 4. Cul es el intervalo de concentracin aplicable? 5. Calcular la concentracin de fsforo en la muestra con su desviacin estndar.

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