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Carga negativa

La atraccin de los electrones hacia el oxgeno crea cargas locales parciales negativas y positivas

Carga positiva

El agua es esencial para las plantas (como para todos los seres vivos). Adems de ser el constituyente mayoritario (8090% del peso fresco en plantas herbceas y ms del 50% de las partes leosas), el agua es el disolvente de una gran cantidad de solutos y constituye el medio en el que tienen lugar todas las reacciones bioqumicas y en el que las estructuras celulares se mantienen. En su forma lquida, el agua es adems el vehculo para el transporte y distribucin de metabolitos por toda la planta. Otra funcin importante del agua es ejercer presin sobre la pared celular para mantener la turgencia celular. Con muy pocas excepciones (algunos tipos de semillas, por ejemplo), la deshidratacin de los tejidos por debajo de un nivel crtico conduce a la muerte de las plantas. Las molculas de agua se unen mediante enlaces por puentes de hidrgeno (ver figuras), establecidos entre el oxgeno electronegativo y el hidrgeno electropositivo. Estos enlaces son los responsables de las propiedades fisico-qumicas nicas de agua. As, hacen que el agua sea lquida a las temperaturas compatibles con la vida. Debido a su polaridad, el agua es adems un buen solvente para las molculas cargadas e iones. Por ltimo, las fuerzas entre las molculas de agua (la cohesin que surge de los enlaces por puentes de hidrgeno) hacen que el agua tenga una elevada tensin superficial y se adhiera fuertemente a las superficies. Tambin muestra una gran resistencia a la traccin por lo que es capaz de formar columnas continuas que resisten la ruptura cuando se someten a tensin (presin negativa), lo que es fundamental para su ascensin en las plantas.

Lehninger Principles of Biochemistry 4th Ed

Los puentes de hidrgeno en el hielo. Cuando el agua est en estado slido (hielo), las molculas de agua, unidas entre s por los puentes de hidrgeno, se asocian segn una geometra tetradrica formando cristales moleculares de manera semejante al diamante. Cuando se calienta el hielo por encima del punto de fusin, la red se desmorona y se desordena, ya que aunque algunas molculas siguen unidas por puentes de hidrgeno, otras no lo estn (en el hielo, cada molcula de agua forma cuatro puentes de hidrgeno, mientras que en el agua lquida, a temperatura ambiente y presin atmosfrica, cada molcula de agua forma puentes de hidrgeno con una media de 3.4 molculas de agua). Por ello se aproximan ms unas a otras, hacindose el conjunto ms compacto. En consecuencia, el agua lquida es ms densa que el hielo (alcanza un mximo de densidad a unos 4 C), por lo que este flota en la misma.

Taiz-Zeiger, 4th Ed

Las molculas de agua en una interfase aire-agua son atradas ms fuertemente hacia las molculas vecinas que a la fase gaseosa en contacto con la superficie de agua. Debido a esta atraccin desigual, la configuracin de menor energa (ms estable) es la que minimiza el rea superficial de la interfase agua-aire. Para incrementar el rea de la interfase se han de romper puentes de hidrgeno. La energa requerida para incrementar el rea superficial de una interfase gas-lquido es la tensin superficial, que tiene unidades de energa por rea (J m -2) o de fuerza por longitud (J m-2 = N m-1) Una burbuja de gas suspendida en un lquido asume la forma esfrica para minimizar su rea superficial. Dado que la tensin superficial acta a lo largo de la tangente de la interfase gas-lquido, la fuerza neta resultante es hacia adentro, comprimiendo la burbuja. La magnitud de la presin (fuerza/rea) ejercida por la interfase es igual a 2T/r, donde T es la tensin superficial del lquido (N/m) y r es el radio de la burbuja en metros (m).

A) La forma de una gota colocada sobre una superficie slida refleja la atraccin relativa del lquido hacia el slido y hacia si mismo. El ngulo de contacto describe esta interaccin. Las superficies mojables tienen ngulos de contacto menores de 90 (si la superficie es muy hidroflica el ngulo puede ser prximo a 0). Las superficies no mojables (hifrofbicas) tienen ngulos de contacto mayores de 90 (el agua forma gotas sobre estas superficies). B) La capilaridad se puede demostrar observando lo que les sucede a los lquidos que penetran, desde abajo, en un tubo capilar dispuesto verticalmente. Si las paredes del tubo son mojables (paredes de vidrio muy limpias), la fuerza neta es ascendente; la columna de agua subir hasta que esta fuerza se equilibre con el peso de la columna. La subida capilar (SC) viene definida por: SC = 14.9 x 10-6 m2/radio (para un tubo capilar de 25 m, la subida sera de 0.6 m) Si el lquido no moja las paredes (Hg sobre paredes de vidrio limpio), el menisco se curvar hacia abajo, y la fuerza resultante de la tensin superficial bajar el nivel del lquido en el tubo

Potencial hdrico El agua siempre se mueve pasivamente, a favor de gradiente de potencial hdrico (w), que es el potencial qumico del agua (w) expresado en unidades de presin. Matemticamente, el potencial qumico del agua se representa por la ecuacin: w = o + RT x lnNw (1) donde o es un trmino de referencia (potencial qumico del agua pura a la misma temperatura), R y T tienen el significado usual, y Nw es la fraccin molar de agua. Si usamos soluciones inicas, la fraccin molar se reemplaza por la actividad del agua, y para uso general, donde el agua puede no estar en una solucin simple, por la presin de vapor relativa (e/e0), donde e es la presin de vapor de la solucin y e0 la presin de vapor del solvente puro. Por lo tanto, (1) puede escribirse: w = o + RT x ln e/e0 (2) Cuando la presin de vapor del sistema en consideracin es la misma que la del agua pura, ln (e/e0) es cero, por lo que la diferencia de potencial qumico w - o tambin es cero (por tanto, el valor mximo del potencial hdrico es cero). Si la presin de vapor del sistema es menor que la del agua pura ln(e/e0) es un nmero negativo. En Fisiologa vegetal no se acostumbra a expresar el potencial qumico en unidades de energa (julios/mol) si no en unidades de presin. Para ello, basta con dividir los dos trminos de la ecuacin (2) por el volumen parcial molal de agua (Vw, esto es, el volumen de un mol de agua: 18 x 10-6 m3 mol-1), lo que nos da unidades de energa en julios/m3, que es equivalente a unidades de presin en newtons por metro cuadrado o megapascales en unidades SI: w = w - o / Vw = [RT / Vw] x [ln (e/e0)] = [RT / Vw] x [ln (HR/100)] (3) Donde HR humedad relativa = e/e0 (Ta) x 100, siendo Ta la temperatura del aire Las unidades del w son energa por volumen = fuerza por unidad de rea = presin. La presin se expresa normalmente en megapascales (MPa), donde 1 MPa = 106 pascales (P) = 106 newtons m-2 = 106 julios m-3 = 107 ergios cm-3 = 107 dinas cm-2 = 10 bares = 9.87 atmsferas. En cualquier sistema, el w decrece por accin de todos aquellos factores que disminuyen la presin de vapor relativa, incluyendo: 1) adicin de solutos (diluyen el agua y decrecen su actividad por hidratacin de las molculas de soluto), 2) adicin de slidos porosos que desplazan el agua y tienen fuerzas superficiales y microcapilares (fuerzas mtricas), y 3) aplicacin de presiones negativas o tensiones. Por otra parte, el w aumenta con aquellos factores que aumentan la presin de vapor relativa: 1) dilucin o eliminacin de solutos, 2) hidratacin de las matrices, y 3) aplicacin de presiones por encima de la atmosfrica. La temperatura afecta el potencial hdrico de acuerdo con el trmino T en la ecuacin 3.

Componentes del potencial hdrico Estos componentes se originan de los efectos de los solutos, presin, slidos (especialmente los porosos) y la gravedad sobre el potencial hdrico. Tales factores determinan, respectivamente, los potenciales osmtico o de solutos ( = s ), presin (P), matricial o mtrico (m) y gravitacional (g) : w = + P + m + g El potencial osmtico contribuye negativamente al potencial hdrico y puede ser estimado a partir de la ecuacin de vant Hoff: = -RTCs. A 20C y concentraciones de solutos (mol/litro) de 0.01, 0.1 y 1, los valores respectivos de potencial osmtico son -0.0244, -0.244 y -2.44 MPa (el agua de mar a esta temperatura tiene un potencial osmtico de -2.8 MPa). El potencial osmtico del jugo celular es aproximadamente -1 MPa. A veces, en lugar de hablar de potencial osmtico (que es negativo) se emplea el trmino presin osmtica (- = ). El potencial de presin es la presin hidrosttica de la solucin; las presiones positivas elevan el potencial hdrico, mientras que las negativas lo reducen. Dentro de la clula, la presin hidrosttica positiva es la denominada Presin de Turgencia. El valor del potencial de presin puede ser negativo, como sucede en el xilema de la planta en transpiracin, donde se desarrolla una presin negativa o tensin. El potencial de presin se mide como desviacin de la presin ambiental. Por definicin, el valor del P para el agua pura en un recipiente abierto es 0 MPa, aunque la presin absoluta sea de aproximadamente 0.1 MPa (1 atmsfera). El potencial matricial contribuye negativamente al potencial hdrico y surge del efecto de cuerpos porosos que retienen agua por capilaridad, adsorcin e hidratacin. En las clulas estas fuerzas se encuentran en las paredes y citoplasma. Aunque el efecto de este potencial no puede obviarse, se considera negligible en clulas vacuoladas. La gravedad hace que el agua sea arrastrada hacia abajo; g depende de la altura (h) , de la densidad del agua (w) y de la aceleracin debida a la gravedad (g): g = wgh; su valor es de 0.01 MPa por metro. Este trmino es, normalmente, omitido cuando se considera el transporte del agua al nivel celular, pero debe considerarse cuando se describe el movimiento vertical del agua en los rboles altos. La jeringa de la figura permite someter el agua a presiones positivas o negativas. Al deslizar el mbolo hacia dentro hacemos que el fluido desarrolle una presin positiva (si en interior hay una burbuja de aire se comprimir). Por el contrario, si deslizamos el mbolo hacia fuera hacemos que se desarrolle una presin negativa o tensin que provocara la expansin de la burbuja de aire.

El agua siempre fluye desde regiones de mayor potencial hdrico a regiones de menor potencial hdrico (Los valores del potencial hdrico y de sus componentes se expresan en megapascales = MPa). w = p + Membrana semipermeable Agua pura Disolucin 0.1 M Presin positiva Tensin Presin positiva

H2O w = 0

p = 0 = - 0.23 w = - 0.23

w = 0

p = 0.23 = -0.23 w = 0

w = 0

H2O p = 0.33 = -0.23 w = 0.10 p = -0.33 = 0 w = -0.33

H2O p = 0 = -0.23 w = -0.23

El movimiento del agua es siempre pasivo, es decir, a favor de gradiente de potencial hdrico (w). Por definicin, el w del agua pura (valor mximo) es 0 MPa. Los cambios en el potencial hdrico se producen, fundamentalmente, por cambios en el potencial de presin (p o presin hidrosttica) o por cambios en el potencial de solutos (s), tambin denominado potencial osmtico (). En las figuras se demuestra la influencia de estos potenciales sobre el w y, por tanto, sobre el movimiento del agua (indicado por las flechas rojas). En (A) la disolucin 0.1 M disminuye el w y el agua pura se desplaza hacia la derecha; en (B), la aplicacin de una presin positiva hace que en los dos compartimentos el w tenga el mismo valor, por lo que no hay flujo neto de agua; en (C), la presin positiva aplicada es mayor, por lo que el w en el compartimento derecho es mayor que en el izquierdo y el agua se desplaza hacia este; en (D), la tensin (succin) aplicada en el compartimento izquierdo disminuye mucho el w y el agua se desplaza hacia ese compartimento.

Las clulas de las plantas se comportan como osmmetros


Un osmmetro, aparato que mide presiones osmticas, tiene dos caractersticas : 1) membrana que restringe el paso libre de solutos; y 2) mecanismo para generar una presin. En nuestro ejemplo, el agua difundir a travs de la membrana semipermeable (de A a B), a favor de gradiente de potencial hdrico, hasta que la fuerza causante de llevar agua al compartimento B se iguale con la presin hidrosttica generada por la subida del agua en el tubo del compartimento B. La clula se comporta como un osmmetro ya que posee una membrana diferencialmente permeable y una pared rgida capaz de generar presiones. En la vacuola hay solutos disueltos, que generan el , por lo que el agua (w = 0) entrar en la clula. Esta entrada hace que el volumen vacuolar incremente y el citoplasma ejerza una presin (la presin de turgencia) sobre la pared. A su vez, la pared genera una presin opuesta e igual a la de turgencia (la presin de pared); esta presin es equivalente a la presin hidrosttica generada por el osmmetro y representa el p de la clula.

A = Agua B = disolucin de sacarosa Presin hidrosttica

A
Osmmetro

Membrana semipermeable

Presin de turgencia

Membrana plasmtica (diferencialmente permeable)

Vacuola

Presin de pared

Pared Clula vacuolada

Agua

Ejemplos del comportamiento de las clulas vegetales como osmmetros.


En la figura superior, la clula se coloca en agua pura (w externo = 0). Dado que el w celular es -1.1 MPa, el agua entra en la clula, se genera una presin hidrosttica, y la clula est turgente. En el estado de mxima turgencia, el w de la clula es cero y, por lo tanto, los potenciales de presin y osmtico se igualan. En la figura inferior, la clula se coloca en una disolucin hipertnica: el w externo (-2.5 MPa) es menor que el w de la clula (-2.0 MPa). Por lo tanto, el agua sale de la clula, lo que provoca la disminucin de la presin. Si la hipertona se mantiene, el agua sigue saliendo, causando el arrugamiento del citoplasma, fenmeno conocido como plasmolisis. La denominada plasmolisis incipiente o limitante, es el punto terico en el que se inicia la plasmolisis. En ese punto, el potencial de presin es cero y el potencial hdrico se iguala con el potencial osmtico.
Buchanan y col (2000) American Society of Plant Physiologists

Medida del potencial hdrico Equilibrio en medio lquido: Ausencia de cambios en el volumen tisular Equilibrio en medio lquido: Ausencia de cambios en la concentracin (Mtodo de Chardakov)

Medida del potencial hdrico


Psicrometra Se basa en el principio de que la presin de vapor de agua disminuye al disminuir el potencial hdrico. Los psicrmetros miden la presin de vapor de una disolucin o muestra vegetal en base al principio de que la evaporacin del agua enfra la superficie sobra la que se produce. Una de las variantes, conocida como psicrometra isopistica, se ilustra en la figura. La muestra se coloca en una cmara que contiene un sensor de temperatura (termopar) en contacto con una gota de una solucin estndar de concentracin conocida (s conocido y por tanto de w conocido). Si el tejido tiene un potencial hdrico menor que el de la gota, el agua se evapora y es absorbida por el tejido, causando una disminucn de la temperatura en la superficie de la gota. Si la solucin tiene un potencial hdrico menor que el tejido, el agua difundir del tejido a la gota causando su calentamiento. Si medimos el cambio de temperatura de las gotas de varias soluciones de w conocido se puede calcular el potencial hdrico de la disolucin en la que el movimiento neto de agua sea cero, lo que significa que la gota y el tejido tienen el mismo potencial hdrico. Los psicromtros no solo se emplean para medir potenciales hdricos de tejidos sino tambin s del jugo vacuolar, previamente extrado. De ese modo, se puede estimar la presin de turgencia que existe en el tejido antes de la extraccin del jugo (p = w s). La mayor dificultad de este mtodo es la sensibilidad de la medida a las fluctuaciones de temperatura; as, un cambio de temperatura de 0.01 C se corresponde con un cambio en el potencial hdrico de unos 0.1 MPa.

Medida del potencial hdrico

Cmara de Presin Este mtodo permite determinar el potencial hdrico de tallos y hojas. El rgano es escindido y, rpidamente, se coloca en la cmara de presin. Antes de la escisin la columna de agua est sometida a tensin; al seccionar el rgano, la columna se rompe y el agua se retrae, por lo que la superficie cortada aparece seca. Seguidamente, la cmara se presuriza con un gas comprimido hasta que el agua vuelve a rellenar el xilema y humedece la superficie cortada. Se asume que la presin requerida para que esto suceda es igual a la tensin a la que el agua estaba sometida antes de dar el corte. La cmara mide, por lo tanto, tensiones del xilema, aunque esto es exactamente cierto para medidas hechas en hojas o tallos que no transpiran (metidos en bolas de plstico, por ejemplo). En estas condiciones, el potencial hdrico de las clulas y del xilema estar en equilibrio y la presin de balance medida es de igual magnitud, aunque de signo opuesto, a la tensin del xilema.

Medida del potencial de presin

Sonda de Presin (medida de p). Dado el tamao de las clulas, el desarrollo de mtodos para medidas directas del potencial de presin ha sido lento. Inicialmente, se utilizaron micromanmetros . En esta tcnica, un tubo de vidrio lleno de aire y sellado en un extremo se inserta en la clula. La presin celular comprime el gas atrapado. La presin de turgencia se calcula a partir del cambio en volumen del gas, teniendo en cuenta la ley de los gases ideales (presin volumen = constante). El mtodo solo puede utilizarse para clulas con volmenes relativamente grandes (alga verde Nitella ). Para clulas ms pequeas, se utiliza la sonda de presin, que se parece a una micro-jeringa. Un tubo micocapilar de punta muy fina se inserta en la clula. El microcapilar est lleno con aceite de silicona, un fluido relativamente incomprensible que se distingue sin problemas del jugo celular. Cuando la punta del microcapilar entra en la clula el jugo celular fluye hacia el tubo debido a la prdida inicial de presin. El investigador puede observar este movimiento bajo el microscopio y contrarrestarlo con ayuda de un mbolo generador de presin. De este modo, la frontera entre el aceite y el jugo celular puede llevarse hasta la punta del microcapilar. De ese modo se restaura el volumen inicial de la clula y la presin dentro de la clula queda balanceada con la del interior del capilar. Esta presin, que correspondera con la del jugo celular, se puede medir con un sensor de presin.

Medida del potencial osmtico (s)

Osmmetro crioscpico El osmmetro crioscpico mide el potencial osmtico de una solucin mediante medidas de su punto de congelacin. Las soluciones tienen propiedades coligativas que dependen del nmero de partculas disueltas y no de la naturaleza del soluto. As, los solutos reducen la presin de vapor de una solucin, suben el punto de ebullicin y bajan el punto de congelacin. Una de las propiedades coligativas es el descenso en el punto de congelacin a medida que incrementa la concentracin de soluto. Por ejemplo una solucin con 1 mol de solutos por Kg de agua tiene un punto de congelacin de 1.86C, comparado con los 0C del agua pura. En este osmmetro se utilizan muestras muy pequeas, de 1 nanolitro (109 L) que se colocan en un medio oleoso dispuesto en una platina de un microscopio con control de temperatura. Inicialmente, la temperatura se baja hasta -30 C, lo que causa la congelacin de las muestras. Despus la temperatura se va subiendo lentamente y se observa el proceso de fusin con el microscopio. Cuando el ltimo cristal funde se anota la temperatura (el punto de fusin es igual al punto de congelacin). Dado que conocemos el descenso crioscpico de la solucin 1 M, se puede calcular fcilmente la concentracin de soluto a partir del descenso en el punto de congelacin, y a partir de la concentracin se calcula el potencial osmtico como -RTcs .

Presiones (MPa)

Diagrama de Hfler p
Muestra los cambios en las relaciones entre los potenciales de presin (p), osmtico () e hdrico (w) frente al volumen celular. Cuando la clula esta colocada en agua pura, el volumen celular es mximo, alcanzndose la turgencia total. En ese punto, el potencial de presin se iguala con el potencial osmtico y, por lo tanto, el w celular (suma algebraica de p y ) es cero. A medida que disminuye el potencial hdrico externo, va saliendo agua de la clula y el volumen celular (y, por tanto el potencial de presin) disminuye paulatinamente. En el punto en el que se inicia la plasmolisis (plasmolisis incipiente), el p = 0 y, por tanto, w = . Si el potencial hdrico externo sigue disminuyendo, la clula se plasmoliza.

(+)
0

(-)

w celular

0.9

1.0

1.1

Volumen celular

Plasmolizada

Turgente Turgencia mxima

Plamolisis incipiente

Agua pura Disminucin progresiva del w externo

El diagrama de Hoffler muestra la relacin entre el potencial hdrico celular (w), sus componentes (p y = S) y el volumen celular relativo ( V/V). p decrece rpidamente con la prdida inicial del volumen celular del 5%. En comparacin, S cambia muy poco. A medida que el volumen celular cae por debajo de 0.9, la situacin se invierte: la mayora de los cambios en el potencial hdrico se deben a una cada en el S acompaado de un cambio relativamente pequeo en p. La pendiente de la curva que relaciona p con el volumen celular es una medida del mdulo de elasticidad , que indica la rigidez de la pared celular. El valor de no es constante ya que disminuye a medida que la clula pierde turgencia. Un valor alto del mdulo indica que para producir un determinado incremento en el volumen celular ha de aplicarse una presin elevada. Los valores de para las clulas vegetales se encuentran entre 1 y 50 MPa. La existencia de un mdulo de elasticidad elevado hace que las plantas, a diferencia de los animales, no requieran osmo-regular para mantener la integridad estructural de sus clulas (para impedir su lisis por entrada de agua, las clulas animales han de gastar energa para excluir solutos y mantener un potencial osmtico adecuado).
Taiz-Zeiger, 4th Ed

Buchanan y col (2000) American Society of Plant Physiologists

Ajuste osmtico

El w del suelo es -1.2 MPa. Notar que el w de las clulas de la planta de la derecha (sin ajuste osmtico) tiene el mismo valor, por lo que no pueden absorber agua y la planta se marchita. Sin embargo, el w de las clulas de la planta de la izquierda (que realizan el ajuste osmtico) es menor que el del suelo (1.5 MPa), por lo que absorben agua y se mantienen turgentes

En una clula vacuolada, el potencial hdrico depende fundamentalmente del potencial de presin y del potencial osmtico. El potencial osmtico depende de la presencia de solutos. Dado que las clulas acumulan solutos, pueden permanecer turgentes si se produce un dficit hdrico moderado (los solutos reducen el potencial hdrico y favorecen la absorcin de agua). Este proceso de osmo-regulacin se denomina ajuste osmtico. Las clulas con mayor capacidad de ajuste osmtico resisten mejor los dficit hdricos. Las clulas de la planta de la derecha no realizan el ajuste osmtico, por lo que el dficit hdrico causa su plasmolisis y la marchitez de la planta. En contraste, las clulas de la planta de la izquierda realizan el ajuste osmtico y permanecen turgentes.

El concepto de potencial hdrico ayuda a evaluar el estado hdrico de la planta


Adems de ser la fuerza conductora del agua, el potencial hdrico mide el estado hdrico de la planta. Debido a la transpiracin, las plantas nunca estn totalmente hidratadas y durante los periodos de sequa desarrollan dficit hdricos que inhiben su crecimiento y pueden causar su muerte. En la figura se muestran algunos de los cambios fisiolgicos que se producen en las plantas sometidas a dficit hdrico. El proceso ms afectado por el dficit hdrico es la expansin celular, aunque todos los procesos fisiolgicos son muy sensibles a la disminucin del potencial hdrico. La acumulacin de solutos (que disminuyen el potencial hdrico y favorecen la absorcin del agua) y la sntesis de cido abscsico (que cierra los estomas) permiten que las plantas puedan resistir sequas moderadas. Sin embargo, las plantas no pueden alterar la disponibilidad de agua en el suelo, por lo que la sequa impone limitaciones absolutas a los procesos fisiolgicos, aunque el valor de los potenciales hdricos en que ocurren tales limitaciones dependan de las especies

Las hojas de plantas bien regadas tienen potenciales hdricos entre -0.2 y -1 MPa, mientras que las de plantas de climas ridos pueden llegar a -10 MPa. Los valores del potencial osmtico tambin son muy variados (de -0.8 a -1.2 MPa en plantas bien regadas hasta valores muy negativos en condiciones de sequa extrema). Las plantas que crecen en ambientes salinos (halfitas) tienen potenciales osmticos muy negativos. Aunque el potencial osmtico celular sea muy negativo, el del apoplasto es, en general menos negativo, ya que en el apoplasto (xilema, por ejemplo) el potencial hdrico est dominado por el potencial de presin, que aqu es normalmente negativo. En contraste, el potencial de presin dentro de las clulas es positivo (0.1 a 1 MPa). Recordar que la planta se marchita cuando la turgencia celular cae hacia cero.

Transporte del agua: Difusin, Flujo de masas y Osmosis


La difusin se debe a la agitacin trmica de las propias molculas; si no acta otra fuerza, la difusin causa el movimiento neto de las molculas a favor de gradiente de concentracin. Matemticamente, la difusin sigue la ley de Fick (la velocidad de difusin es directamente proporcional al gradiente de concentracin, esto es, diferencia en la concentracin de la sustancia entre dos puntos separados por una determinada distancia. La denominada primera ley de Fick, expresa lo dicho como: Js = - Ds (Cs / x), Donde Js es la densidad de flujo (cantidad de sustancia que cruza una unidad de rea por unidad de tiempo, expresada, por ejemplo en mol m-2 s-1), Ds es el coeficiente de difusin, Cs es el gradiente de concentracin y x es la distancia recorrida. La difusin es un proceso rpido para distancias cortas pero muy lento para largas distancias: el tiempo requerido para que una sustancia difunda una distancia dada incrementa en proporcin al cuadrado de la distancia; el coeficiente de difusin de la glucosa en agua es 10-9 m2 s-1; por tanto el tiempo que tarda la glucosa en difundir a travs de la clula (dimetro 50 m) es de 2.5 s, pero el tiempo requerido para que la glucosa difunda 1m es de 32 aos. El flujo de masas es el movimiento concertado de un grupo de molculas en masa, en respuesta a un gradiente de presin (el movimiento del agua a travs de una manguera, por ejemplo). Si consideramos el movimiento del agua a travs de un tubo, la intensidad de flujo (Jv) depende del radio (r) del tubo, la viscosidad () del lquido y el gradiente de presin (p / x) que conduce el flujo. Matemticamente, se expresa por la denominada Ley de Poiseuille: Jv (m3 s-1) = [ r4 / 8 ] [p / x ] El flujo de masas es responsable del transporte a larga distancia (va xilema) del agua La osmosis hace referencia al paso del disolvente (agua en nuestro caso), pero no del soluto, entre dos disoluciones de distinta concentracin separadas por una membrana semipermeable (diferencialmente permeable en el caso de las clulas). La direccin y flujo de agua a travs de las membranas son determinados no slo por el gradiente de concentracin del agua (difusin) o por el gradiente de presin (flujo de masas) sino tambin por la suma de estas dos fuerzas conductoras. El flujo de agua (Jv, en m3 s-1) se expresa por la ecuacin: Jv = Lp w = Lp (P + ), donde Lp es la conductancia hidrulica (si no se especifican dimensiones del sistema) o conductividad hidrulica (si se especifica distancia y fuerza conductora) de la membrana. Los recprocos de estos trminos son resistencia y resistividad, respectivamente. Normalmente, la resistencia al agua se expresa en s cm-1 y la conductancia en cm s-1. es el coeficiente de reflexin e indica la extensin a la que una membrana es impermeable a un soluto dado; si su valor es 1, la membrana es impermeable, pero si es menor que uno, la membrana es permeable al soluto (en hojas de patata, los valores del coeficiente son 0.6-0.7 para sacarosa y 0.8-0.9 para el manitol).

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1 w w 3

w
2

Acuaporinas

El paso del agua a travs de las membranas biolgicas puede ocurrir a travs de la bicapa lipdica (1) y a travs de los poros formados por los canales de agua o ACUAPORINAS (2). Los datos actuales demuestran que el paso por los canales es la ruta principal (3). En ambas rutas, el movimiento siempre es a favor de gradiente de potencial hdrico. Las acuaporinas se encuentran tanto en la membrana plasmtica como en la membrana de las vacuolas (tonoplasto) y otros orgnulos celulares.

FEBS Letters 581 (2007) 22272236

Familia de acuaporinas de Arabidopsis. El rbol muestra las 35 acuaporinas y su agrupamiento en cuatro subfamilias. Tambin se muestra un esquema de la protenas intrnseca de la membrana plasmtica (PIP) de Arabidopsis PIP2,1, con sus seis dominios transmembrana (16), cinco bucles de conexin (AE), los extremos N- y C-terminal y las modificaciones postraduccin

Buchanan y col (2000) American Society of Plant Physiologists

DT H1-H6

NPA

Citoplasma
A) Estructura de una acuaporina mostrando los seis dominios transmembrana (DT) H1-H6, y dos regiones muy conservadas (NPA) formadas por los aminocidos Asn (asparagina)-Pro(prolina)Ala (alanina). Las acuaporinas se agrupan formando tetrmeros. No obstante, parece que en cada subunidad (cada acuaporina) se forma un poro para el paso del agua. La selectividad para el paso del agua es conferida por las regiones NPA. B) Estructura tridimensional de la acuaporina-1de eritrocitos humanos. Se muestra una vista extracelular de 8 subunidades que forman dos tetrmeros (uno de los monmeros aparece dorado).

Annu. Rev. Plant Biol. 2008. 59:595624

a) Estructura atmica de una acuaporina de plantas mostrando la tpica estructura tetramrica. Cada monmero tiene seis hlices transmembrana; se muestran las hlices N-terminal (rojo) y Cterminal (verde) del monmero situado en la parte superior izquierda.(b) Mecanismo de selectividad: los dos motivos muy conservados Asn-Pro-Ala (NPA) (representados por Asn101 y Asn222, verde) estn muy prximos para formar una de las principales restricciones del poro. Otra restriccin, denominada Ar/R (rojo) se forma en la cara extracitoplasmtica de la membrana por una ordenacin espacial de residuos aromticos (Ar) como Phe81 e His210, encarando un residuo de Arg (R), aqu Arg225. El transporte de protones es bloqueado por repulsin electrosttica en la restriccin Ar/R y la orientacin dipolar de la molcula de agua por los dos residuos Asn de los motivos NPA . Esto conduce a un aislamiento transitorio de la molcula de agua dentro de la fila de molculas de agua que llenan el poro (esferas naranja).

Structural mechanism of plant aquaporin gating (Nature 439: 688-694, 2006)

Las plantas contrarrestan las fluctuaciones en el aporte de agua regulando las acuaporinas de sus membranas plasmticas. El cierre de los canales es consecuencia de la desfosforilacin de dos residuos muy conservados de serina bajo condiciones de estrs hdrico (drought stres), o de la protonacin de un residuo muy conservado de histidina despus de una cada en el pH citoplasmtico debido a la hipoxia causada por un encharcamiento (flooding). En este trabajo se reporta la estructura por Rayos X de la acuaporina de espinacas SoPIP2;1 en su conformacin abierta y cerrada.

Annu. Rev. Plant Biol. 2008. 59:595624


Mecanismo molecular del gating de la protena intrnseca de la membrana plasmtica (PIP). La estructura de una PIP de Spinacia oleracea se resolvi tanto en su conformacin abierta (a) como cerrada (b). El residuo His193 (verde) est conservado en el bucle D de todas las PIPs. En la conformacin abierta (a), la His193 no est protonada y el bucle D se sita distal respecto al bucle citoplasmtico B. Rn contraste, la protonacin His193 (b) permite la interaccin con un residuo cido del extremo N, Asp28 (prpura). Esto lleva a un cambio conformacional del bucle D y a la oclusin del poro por desplazamiento de la cadena lateral hidrofbica de Leu197 (amarillo) en el orificio citoslico del poro. La unin de cationes divalentes [Cd2+ en la estructura atmica (esfera prpura) tambin implicara a Asp28 y un residuo cido adyacente (Glu31). El bucle D sera despus estabilizado en la conformacin cerrada del poro a travs de una red de puentes de H e interacciones hidrostticas que implican a Arg118. En este modelo, la fosforilacin del bucle B, en Ser115 (rosa), rompera esta red de interacciones y abrira el bucle D para permitir la conformacin abierta.

Adems de transportar agua, las acuaporinas realizan otras funciones:

Plant aquaporins: Novel functions and regulation properties FEBS Letters 581 (2007) 22272236 Aquaporins are water channel proteins of intracellular and plasma membranes that play a crucial role in plant water relations. The present review focuses on the most recent findings concerning the molecular and cellular properties of plant aquaporins. The mechanisms of transport selectivity and gating (i.e. pore opening and closing) have recently been described, based on aquaporin structures at atomic resolution. Novel dynamic aspects of aquaporin subcellular localisation have been uncovered. Also, some aquaporin isoforms can transport, besides water, physiologically important molecules such as CO2, H2O2, boron or silicon. Thus, aquaporins are involved in many great functions of plants, including nutrient acquisition, carbon fixation, cell signalling and stress responses.

Function of Nicotiana tabacum Aquaporins as Chloroplast Gas Pores Challenges the Concept of Membrane CO2 Permeability The Plant Cell (2008) 20: 648657 Photosynthesis is often limited by the rate of CO2 diffusion from the atmosphere to the chloroplast. The primary resistances for CO2 diffusion are thought to be at the stomata and at photosynthesizing cells via a combination resulting from resistances of aqueous solution as well as the plasma membrane and both outer and inner chloroplast membranes. In contrast with stomatal resistance, the resistance of biological membranes to gas transport is not widely recognized as a limiting factor for metabolic function. We show that the tobacco (Nicotiana tabacum) plasma membrane and inner chloroplast membranes contain the aquaporin Nt AQP1. RNA interferencemediated decreases in Nt AQP1 expression lowered the CO2 permeability of the inner chloroplast membrane. In vivo data show that the reduced amount of Nt AQP1 caused a 20% change in CO2 conductance within leaves. Our discovery of CO2 aquaporin function in the chloroplast membrane opens new opportunities for mechanistic examination of leaf internal CO2 conductance regulation. Also, the demonstrated CO2 transporting function in addition to water transport makes the term CO2 aquaporin or COOporin, as it was already suggested by Terashima et al. (J. Exp. Bot. 57: 343354, 2006) more appropriate than aquaporin.

Transporters of arsenite in rice and their role in arsenic accumulation in rice grain PNAS (2008) 105: 99319935
Arsenic poisoning affects millions of people worldwide. Human arsenic intake from rice consumption can be substantial because rice is particularly efficient in assimilating arsenic from paddy soils, although the mechanism has not been elucidated. Here we report that two different types of transporters mediate transport of arsenite, the predominant form of arsenic in paddy soil, from the external medium to the xylem. Transporters belonging to the NIP subfamily of aquaporins in rice are permeable to arsenite but not to arsenate. Mutation in OsNIP2;1 (Lsi1, a silicon influx transporter) significantly decreases arsenite uptake. Furthermore, in the rice mutants defective in the silicon efflux transporter Lsi2, arsenite transport to the xylem and accumulation in shoots and grain decreased greatly. Mutation in Lsi2 had a much greater impact on arsenic accumulation in shoots and grain in field-grown rice than Lsi1. Arsenite transport in rice roots therefore shares the same highly efficient pathway as silicon, which explains why rice is efficient in arsenic accumulation. Our results provide insight into the uptake mechanism of arsenite in rice and strategies for reducing arsenic accumulation in grain for enhanced food safety.

Annu Rev Plant Biol (2008) 59: 595-624

Las acuaporinas regulan el transporte en varios compartimentos celulares. Las isoformas de las subfamilias PIP1 y PIP2 siguen la ruta secretora hasta llegar a la membrana plasmtica. Estas PIPs tambin sufren ciclos repetidos de endocitosis y reciclaje a travs de los compartimentos endosomales antes de ser llevadas a la vacuola ltica va el cuerpo multivesicular. Las protenas intrnsecas del tonoplasto (TIP1s) se encuentran en la membrana de la vacuola ltica. AtTIP1;1 se localiza en estructuras esfricas llamadas bulbos en las clulas epidrmicas de cotiledones jvenes o de races tratadas con sal. TIP2s y TIP3s se asocian con vacuolas que acumulan protenas de almacenamiento de tejidos vegetativos y de semillas, respectivamente. Las protenas intrnsecas de membrana semejantes a nodulinas (NIPs) muestran un patrn de distribucin intracelular amplio. AtNIP2;1 se localiza en retculo endoplasmtico y membrana plasmtica; el transportador de influjo de Silicio de Oryza sativa (Lsi1, por low silicon, tambin llamado OsNIP2;1) y el canal de cido brico de Arabidopsis thaliana AtNIP5;1 se localizan en la membrana plasmtica, mientras que la nodulina-26 de Glycine max (GmNOD26) se expresa exclusivamente en la membrana peribacterioidea.

Continuo Suelo Planta Atmsfera (CSPA) Capa lmite Hoja

Tallo

Transpiracin cuticular Floema Corteza Xilema no funcional Xilema funcional

Transpiracin estomtica

Zona suberificada de la raz (menos permeable)

Agua
Raz
Xilema

La parte area de la planta est expuesta a una atmsfera seca que favorece la prdida de agua en estado de vapor (Transpiracin). La transpiracin es muy intensa en las hojas y se realiza tanto por los estomas (transpiracin estomtica) como por la cutcula (transpiracin cuticular). El agua perdida debe ser reemplazada ya que, de lo contrario, la planta muere. El reservorio de agua es el suelo. Las plantas la absorben por sus races, principalmente por la zona de los pelos radiculares. Una vez absorbida, el agua se distribuye por la planta a travs de una compleja red de caeras formada por el xilema. Se forma as un Continuo SueloPlanta Atmsfera (CSPA) a travs del cual el agua est continuamente circulando. En la figura tambin se representa el floema, que distribuye, los productos de la fotosntesis desde las hojas al resto de la planta.

Pelo radicular
Endodermis

Zona de crecimiento primario de la raz

La ecuacin del flujo de agua a travs del CSPA es similar a la del flujo de electricidad a travs de un sistema conductor, y se nombra en analoga con la ley de Ohm. Por ello, se usan conceptos derivados de la fsica de circuitos elctricos: Fuerza conductora (gradiente de potencial hdrico) y Resistencias o Conductancias conectadas en serie o en paralelo.

aire = -10 a -100 MPa


Poro Cutcula Interior hoja Aire

Hoja

mesofilo

Xilema

Agua en tejidos

suelo = -0. 1 MPa


Raz Suelo

Agua en suelo

Analoga de la la Ley de Ohm con CSPA. En la figura de la izquierda se muestra un modelo muy esquemtico del CSPA con: 1) resistencias (s cm-1) al paso del agua en suelo, raz, xilema, hoja (cutcula, interior de la hoja y poro estomtico) y capa limite de aire no turbulento y 2) capacitancias (reservorios de agua en suelo y tejidos); el flujo de agua es conducido por el gradiente de potencial hdrico entre el suelo y el aire. En la figura de la derecha el modelo se ha construido en base a las conductancias (K), recprocos de las Resistencias (por tanto en cm s-1) de raz, tallo y hojas en serie y en paralelo; se muestran dos modelos de analoga con la ley de Ohm: el ms simple, con conductancias en serie, y el ms complejo, con conductancias en serie y en paralelo; notar que slo se considera el gradiente de potencial hdrico entre el suelo y las superficies evaporantes; por ello solo se indica la conductancia total del agua lquida (Kliquid). Journal of Experimental Botany (1997) 48: 1753-1765.

Agua del suelo


El potencial hdrico (w) del suelo depende de cuatro componentes de importancia variable:

w = m + + g + p,
m representa el potencial matricial producido por capilaridad y adsorcin; representa el potencial osmtico producido por la presencia de solutos y g las fuerzas gravitatorias que operan sobre el agua. p representa la presin externa y puede eliminarse ya que la presin en la zona radicular es prxima a la atmosfrica. A no ser que se trate de suelos salinos, las fuerzas que afectan principalmente al movimiento del agua en el suelo son las mtricas y las gravitacionales. Una vez que el suelo est saturado con agua, una fraccin de la misma es arrastrada por accin de la gravedad (agua gravitacional). Capacidad de campo: Contenido hdrico del suelo (expresado en % de materia seca) una vez que el agua gravitacional ha percolado. Esta situacin se da varios das despus de que el suelo haya sido regado por irrigacin o precipitacin. La capacidad de campo depende de la textura del suelo (por ejemplo, un suelo arenoso retiene menos agua que un suelo arcilloso. Porcentaje de marchitez permanente (PWP = permanent wilting percentage): Contenido hdrico del suelo (expresado en % de materia seca) en el que las plantas permanecen marchitas , a no ser que sean regadas. El potencial hdrico de los suelos en PWP oscila entre -1.5 y -2 MPa, con la mayora de los valores cercanos a -1.5 MPa, que se considera como el potencial hdrico de los suelos en PWP. Agua fcilmente disponible: Se refiere al agua en el rango entre la capacidad de campo y el PWP El suelo es una mezcla de partculas (arena, limo, arcilla y materia orgnica), agua, solutos disueltos y aire. El agua es adsorbida por estas partculas. A medida que la planta absorbe agua, la solucin edfica se retrae entre los intersticios de las partculas edficas. En la interferencia agua-aire esta recesin hace que la superficie de la solucin desarrolle meniscos cncavos (sealados por flechas) que imponen en la solucin una presin negativa debida a la tensin superficial. Cuanto ms agua es absorbida por la planta ms meniscos se forman y mayor es la tensin. La presin negativa que se desarrolla se puede estimar por la frmula: -2T/r, donde T es la tensin superficial del agua (7.28 x 10 -8 MPa m) y r es el radio de la curvatura en la interfase agua-aire

Zonas de absorcin del agua por las races. A) Diagrama de la absorcin del agua por la raz, en el que se constata como la suberificacin supone un gran impedimento al paso del agua. En B y C se esquematizan races en las que toda la superficie es permeable (B) o las zonas viejas son impermeables debido a la deposicin de suberina (C). Si toda la superficie radicular es permeable, la mayor parte del agua entra por la zona ms prxima a la base, quedando hidrulicamente aislada la zona distal ya que en esa zona no se genera mucha tensin xilemtica. Cuando las regiones ms viejas son menos permeables, la tensin xilemtica se extiende ms y permite la absorcin del agua desde las regiones ms distales de la raz

Mecanismos de absorcin del agua por las races


La absorcin del agua siempre sucede a favor de gradiente de potencial hdrico entre el suelo y raz. Sin embargo, dicho gradiente se produce de forma diferente dependiendo de la intensidad de la transpiracin, lo que lleva a la existencia de dos mecanismos de absorcin: osmtica y pasiva. La absorcin osmtica se produce cuando la transpiracin es muy baja (las races se comportan como osmmetros y el agua del xilema est sometida a una presin superior a la atmosfrica, la denominada presin radicular), mientras que la absorcin pasiva tiene lugar cuando la transpiracin es elevada y el agua en el xilema est sometida a una presin negativa o tensin (las races son meras superficies de paso del agua; en realidad, la absorcin puede producirse en ausencia de races).
iones H2O

Absorcin = xilema

suelo - xilema Resistencias

( + P) suelo =

( + P) xilema

Resistencias

suelo
Suelo Raz

Xilema

La fuerza conductora que hace posible la absorcin y trnsito del agua desde el suelo al xilema radicular es el gradiente de potencial hdrico entre el suelo y la savia xilemtica. El mantenimiento del gradiente puede conseguirse disminuyendo el o el P de la savia xilemtica. Ambas situaciones se dan en la planta, pero nunca de forma simultnea: Si hay poca transpiracin, las races se comportan como osmmetros: los iones se acumulan en el xilema, disminuye el y se produce la absorcin osmtica de agua que causa una presin positiva en el xilema denominada presin radicular, que se hace visible como gutacin (ver diapositiva siguiente) o como exudacin desde el tallo de una planta desmochada. Este mecanismo requiere races sanas y bien aireadas de plantas con tasas bajas de transpiracin. Si la planta est transpirando, la evaporacin del agua en las clulas foliares disminuye su potencial hdrico, causando que el agua pase desde el xilema a las clulas, lo que provoca una disminucin del P en el xilema que es transmitida hasta las races a travs de la columna cohesiva de agua, causando la absorcin pasiva del agua. Debido a la demanda de agua por las hojas, los iones ascienden rpidamente y no se acumulan en el xilema radicular. En este mecanismo, las races son meras superficies de paso; de hecho, la absorcin pasiva tambin se produce en races daadas o en ausencia de races. Esta diferencia se puede demostrar colocando el tallo de una planta en una solucin de un colorante (fuchina cida) y haciendo un corte en el mismo. Si la planta est transpirando, el colorante penetrar por el corte y teir el xilema, tanto por enzima como por debajo del corte; en contraste, si la planta transpira poco, el colorante no entrara y la savia saldr a travs del corte. En suelos hmedos la absorcin durante la noche y el amanecer se produce por el mecanismo osmtico, pero a medida que corre el da, la transpiracin incrementa y la absorcin del agua se produce mediante el mecanismo pasivo; ambos procesos son, por lo tanto, mutuamente excluyentes. Si la transpiracin es baja (absorcin osmtica) el oscila entre -0.1 y -0.2 MPa y domina la absorcin del agua, mientras que el P es positivo (0.1-0.15 MPa). Si la transpiracin es elevada (absorcin pasiva), el es negligible mientras que P es negativo y domina la absorcin del agua

Gutacin = Prdida de agua en forma lquida


La gutacin se produce, normalmente, a travs de poros especializados denominados hidatodos, asociados con los terminales xilemticos en los mrgenes de las hojas
Poro Epidermis Mesofilo Epitema Xilema

Taiz-Zeiger, 4th Ed

Diagrama de un hidatodo mostrando un poro en las proximidades del epitema y terminaciones del xilema. El epitema es una masa de clulas parenquimticas de paredes delgadas con amplios espacios intercelulares a travs de los cuales se mueve el agua. Los hidatodos se parecen a estomas poco diferenciados con clulas guarda no funcionales. Se encuentran en los pices y mrgenes de las hojas (adaptado de Kramer, 1983, Water relations of plants)

El fenmeno de la gutacin slo aparece bajo condiciones ambientales que disminuyen significativamente la transpiracin. En tales condiciones, los solutos pueden acumularse en el xilema radicular, provocando una absorcin osmtica del agua, que genera una presin positiva, denominada Presin Radicular. En plantas herbceas esta presin es suficiente para hacer que el agua pueda salir de las hojas y formar gotitas en sus bordes. Este fenmeno no se produce cuando las condiciones ambientales favorecen la transpiracin (situacin habitual). Si la transpiracin es intensa, los solutos no se acumulan en el xilema radicular ya que la demanda de agua es muy grande y ascienden, disueltos en la misma, hacia las partes areas. Adems, la transpiracin intensa hace que el agua en el xilema est sometida a una presin negativa (tensin). Por lo tanto, Presin Radicular y Transpiracin son dos fenmenos excluyentes.

La absorcin del agua est controlada por la intensidad de la transpiracin, siempre que el agua est disponible para las races. Cuando se comparan las curvas de absorcin y transpiracin se observa, especialmente hacia el medio da, un retraso de la absorcin con respecto a la transpiracin. Para obtener los resultados mostrados en la figura, las plantas se fijaron a la base de recipientes auto-irrigados por un sistema, que permiti medir la prdida y la absorcin de agua. En Opuntia, especie CAM (Metabolismo Acido de las Crasulaceas), que cierra sus estomas durante la mayor parte del da, la mxima transpiracin ocurre al final de la tarde. La transpiracin del girasol, desciende hacia el medio da, posiblemente por dficit temporal de agua y cierre parcial de estomas (Kramer-Boyer 1995).

Valores relativos del potencial hdrico y sus componentes (en MPa) en cortex radicular y fluido xilemtico de plantas con tasas de transpiracin baja o elevada. Las plantas se crecieron en suelos prximos a su capacidad de campo (Kramer 1983) Transpiracin baja (absorcin osmtica) Suelo Cortex -0.5 0.4 -0.1 Xilema -0.2 0.05 -0.15 Transpiracin alta (absorcin pasiva) Cortex -0.5 0.1 -0.4 Xilema -0.05 -0.5 -0.55

m P w

-0.01 -0.02 -0.03

MICORRIZAS
V.A.M
Arbsculo viejo Punto de entrada Pelo radicular Arbsculo joven Hifa extracelular Red de Hartig

Ectomicorrizas
Las micorrizas son asociaciones simbinticas entre las races de las plantas y hongos del suelo. Aunque las hifas de los hongos siempre pasan al interior del cortex radicular, pueden permanecer en los espacios intercelulares (ectomicorrizas) o penetrar en el interior de las clulas del cortex, donde forman estructuras Vesiculares (V) o Arbusculares (A) [ Micorrizas VAM o endomicorrizas]. Las micorrizas mejoran significativamente la adaptacin de las plantas a su entorno ya que favorecen la absorcin del agua y nutrientes.

Clamidospora Vescula Hifa intramatricial

Manto fngico

Ruta del agua por la raz

Taiz-Zeiger, 4th Ed

El agua absorbida por las clulas epidrmicas atraviesa radialmente la raz y llega al xilema. El paso del agua por el cortex puede seguir tres rutas: La apoplstica, la simplstica (el agua pasa de clula a clula por los plasmodesmos) y la transmembrana (el agua pasa de clula a clula atravesando las membranas plasmticas). En la endodermis, la ruta apoplstica es impedida por la banda de Caspari. Para atravesar la endodermis, el agua entra en la ruta simplstica (ver tambin figura siguiente)

Rutas apoplstica y simplstica para el trnsito radicular del agua. La ruta aploplstica se interrumpe a nivel de la endodermis debido a la banda de Caspari. Por ello, el agua atraviesa la endodermis siguiendo la ruta simplstica.

ENDODERMIS Y EXODERMIS
Capas especializadas de la raz que, por definicin, poseen bandas de Caspari en sus paredes; adems, pueden desarrollar lamelas de suberina y paredes terciarias muy engrosadas.
Para ms informacin: J Plant Growth Regul (2003) 21: 335-351; Can J Bot (2003) 81: 405-421; PNAS (2010) 107: 52145219

ENDODERMIS La endodermis es la capa ms interna del cortex radicular y est caracterizada por la formacin de bandas de Caspari en las paredes anticlinales (perpendiculares a la superficie de la raz) de sus clulas. Bandas de Caspari. La banda de Caspari es una modificacin de la pared anticlinal primaria de las clulas endodrmicas debida a la incrustacin en la misma de suberina y lignina (la proporcin de ambos polmeros varia mucho entre especies); las bandas de Caspari estn completamente diferenciadas a muy poca distancia del pice radicular (10 mm) y ocupan entre 1/3-1/2 de las paredes anticlinales. Lamelas de Suberina. Se depositan como paredes secundarias una vez que las bandas de Caspari estn totalmente desarrolladas. Estn constituidas por suberina y lignina . Al contrario que las bandas de Caspari, las lamelas de suberina no se desarrollan en todas las races ni en todas las clulas de la endodermis. Las clulas que no tienen lamelas de suberina encaran el protoxilema y se denominan clulas de paso. Paredes terciarias. Estn presentes en la mayora de las monocotiledneas. Aparecen principalmente como engrosamientos de las paredes tangenciales internas. El componente mayoritario de estas paredes es la celulosa, normalmente impregnada de lignina; la suberina, si aparece, lo hace en proporciones mnimas.

Corte transversal de una raz de dicotilednea con exodermis y endodermis, ambas con bandas de Caspari en las paredes anticlinales (mancha rojas) y lamelas de suberina (lneas amarillas) depositadas sobre las superficies internas de las paredes primarias (gris). Trends in Plant Science (2010) doi:10.1016/j.tplants.2010.06.004

EXODERMIS La exodermis es un tipo especial de hipodermis que desarrolla bandas de Caspari en sus paredes anticlinales. Tambin desarrollan lamelas de suberina y pared terciaria. Las exodermis se desarrolla ms alejada del pice radicular que la endodermis y aparece en muchas, aunque no todas, las angiospermas estudiadas (en un estudio con 200 plantas, se vio en el 90%); las gimnospermas pueden tener hipodermis, pero no est claro que sea una exodermis. Los contenidos en suberina y lignina de las paredes exotrmicas son menores que los de las paredes de la endodermis. Las exodermis pueden ser dimrficas (con clulas largas y cortas alternantes) o uniformes (slo clulas elongadas). En algunas familias de monocotiledneas aparecen exodermis uniformes multiseriadas. En las exodermis uniformes, las bandas de Caspari rellenan casi todas las paredes anticlinales, aunque hay clulas sin banda de Caspari. En esta exodermis tambin aparecen las lamelas de suberina y, eventualmente, desarrollan paredes terciarias, muy lignificadas, sobre el lado interno de las lamelas. En las exodermis dimrficas, las bandas de Caspari se desarrollan igual que en las exodermis uniformes, pero las clulas cortas, denominadas de paso, no desarrollan lamelas de suberina. FUNCIONES DE ENDODERMIS Y EXODERMIS Debido a su composicin qumica, la endodermis y exodermis son, principalmente, barreras apoplasticas. As, las bandas de Caspari de la endodermis impiden tanto el paso de sustancias hacia la estela por la ruta apoplstica, como el reflujo de los iones que al llegar al cilindro central por la ruta simplstica son liberados al apoplasto. En las races con una exodermis madura, la barrera al influjo apoplstico de iones tiuene lugar cerca de la superficie radicular, pero la prevencin del reflujo de iones desde el cilindro central sigue siendo una funcin de la endodermis. Las lamelas de suberina protegen contra la invasin de patgenos y, posiblemente, contra la desecacin de la raz en condiciones de estrs hdrico. De hecho, bajo situaciones de estrs, la endodermis y exodermis se desarrollan ms prximas al pice radicular; adems, el estrs, acelera el desarrollo de la endodermis y exodermis. Las paredes terciarias pueden actuar como soporte mecnico de la raz, aunque esta funcin debe ser corroborada

Races de cebolla cuya endodermis ha desarrollado lamelas de suberina (flechas) excepto en las clulas de paso (asteriscos) . PH, floema; XY, xilema. Autofluorescencia observada con iluminacin UV.J Plant Growth Regul
(2003) 21: 335-351

Paredes terciarias (flechas) en la endodermis de races de maz Notar el mayor engrosamiento en la cara interna. Tejido tratado con floroglucinol-HCL para observar la lignina. CC, cortex central; EN, endodermis. J Plant Growth Regul (2003) 21: 335-351

Exodermis de races de cebolla. Las clulas ms elongadas tienen bandas de Caspari (cabezas de flecha) y lamelas de suberina (flechas); las clulas pequeas (asteriscos) no tienen lamelas de suberina. Tincin con berberina-azul de anilina y observacin con microscopio de fluorescencia. EP, epidermis; EX, exodermis; CC, cortex central J Plant Growth Regul (2003) 21: 335-351

Annu Rev Plant Biol (2008) 59: 595-624

Transporte de agua y solutos, mediado por acuaporinas, en races. Se muestra una seccin transversal de una raz primaria con representacin de los patrones especficos de expresin de las acuaporinas y rutas de transporte. Izquierda: expresin de acuaporinas y transporte de agua en races de maz; Derecha: absorcin de cido silcico en races de arroz por el canal Oryza sativa Lsi1 (OsNIP2;1) en combinacin con el transportador de eflujo de silicio Lsi2. El agua puede seguir la ruta simplastica (i) o apoplstica (ii).

Root pressure and a solute reflection coefficient close to unity exclude a purely apoplastic pathway of radial water transport in barley (Hordeum vulgare) New Phytologist (2010) 187: 159170
Aquaporins can contribute to the control of root water uptake, provided that at least one membrane is crossed between the root medium and the xylem and that water does not move only along the apoplast. In the present study we have critically assessed the possibility of such a purely apoplastic pathway. A range of methods were used to analyse root water flow (root pressure probe, root exudation, vacuum perfusion and cell pressure probe) and associated driving forces (gradients in hydrostatic pressure and osmolality). These methods were complemented by theoretical approaches in which we predicted, for a particular main pathway of water movement, values for root pressure and osmolality and compared these with measured values. The mere existence of root pressure excludes the possibility of a purely apoplastic pathway of radial water uptake. A membrane(s) must be crossed. Equilibrium measurements of gradients in hydrostatic and osmotic pressure between the root medium and the xylem point to a root reflection coefficient for solutes close to 1.0. The generally accepted composite model of water transport across roots should be revised. Barley (Hordeum vulgare) roots behave as perfect osmometers. Root reflection coefficients significantly smaller than unity may be experimental artefacts. En este trabajo, se descarta la posibilidad de que una ruta exclusivamente apoplstica contribuya al transporte radial de agua en las races de cebada. Los resultados obtenidos enfatizan que las membranas (y acuaporinas) son puntos importantes de control para el transporte radial del agua en las races. Los resultados obtenidos cuestionan la idea (al menos para una especie anual como la cebada), generalmente aceptada, de que el transporte radial del agua en las races requiere de un paso apoplstico, conducido por gradientes de presin, para hacer frente a la demanda de agua en las partes areas causada por la transpiracin. .

Placas perforadas

El xilema es un tejido complejo formado por varios tipos de clulas: 1) Elementos traqueales (clulas conductoras); 2) clulas del parnquima xilemtico; y 3) elementos de sostn (fibras y esclereidas).
Elementos de los vasos
Placa perforada compuesta Placa perforada simple

Los elementos traqueales son las clulas ms especializadas. Durante su diferenciacin, desarrollan paredes secundarias lignificadas y mueren. Por lo tanto forman conductos huecos perfectamente adaptados para el transporte del agua. Existen dos traqueales: tipos de elementos

Punteaduras

Traqueidas

Elementos de los vasos

1)Traqueidas: clulas no perforadas conectadas por pares de punteaduras. 2) Miembros (elementos) de los vasos: clulas perforadas, conectadas por agujeros presentes en sus paredes comunes (las placas perforadas). Estas clulas forman largos conductos denominados vasos.

Par de punteaduras areoladas

Tipos de elementos traqueales: Traqueidas y elementos (miembros) de los vasos


Punteaduras Placa perforada

Perforaciones

Traqueidas Vaso

Pares de punteaduras Elementos de los vasos

Las traqueidas son clulas no perforadas que se comunican entre si por pares de punteaduras. Presentes en en traquefitos inferiores, gimnospermas y angiospermas

Los elementos (miembros) de los vasos son clulas perforadas, conectadas entre si por agujeros presentes en sus paredes comunes (placas perforadas). De ese modo, forman largos conductos denominados vasos. Son exclusivos de angiospermas

Los reforzamientos de pared secundaria y lignina hacen que los elementos traqueales del xilema resisten las presiones negativas causadas por la transpiracin

Microscopa electrnica de barrido de secciones longitudinales de xilema en Arabidopsis. Se muestran patrones de deposicin de pared secundaria: espiral y anular en protoxilema (cabezas de flecha); reticulado y punteado en el metaxilema (flechas). Current Biology (2010) 20: R450-R452

Xilema

Aire: -10 a -100 MPa Espacios intercelulares hojas: -7 MPa Paredes mesofilo: -1 MPa

Mesofilo Estoma

Ascensin del agua: Teora de la cohesin-tensin El agua, mayoritariamente confinada en los elementos traqueales, forma columnas continuas desde las superficies evaporantes de las hojas hasta las zonas de absorcin en las races. La continuidad de las columnas viene asegurada por la cohesin entre las molculas de agua y su adhesin a las paredes del xilema. Estas fuerzas impiden la ruptura de las columnas sometidas a presin negativa (tensin) La evaporacin del agua genera una succin (tensin) que tira del agua hacindola ascender por el xilema. El agua fluye por flujo de masas a favor de gradiente de potencial hdrico (ver los valores de w indicados en la figura)

Transpiracin
Molculas de agua Clulas xilema Adhesin Pared

Xilema del tronco: -0.8 Mpa


Cohesin por puentes Cohesin y de H

Xilema de la raz: -0.6 MPa

adhesin en xilema

Pelo radicular

Suelo: -0.2 MPa

Gradiente w

H2O

Absorcin de agua del suelo

Suelo

Desarrollo de tensiones en las hojas


A medida que el agua se evapora en las paredes de las clulas del mesofilo, el agua en forma lquida se retrae paulatinamente en los intersticios de las paredes. Dado que la celulosa es hidroflica, la fuerza que resulta de la tensin superficial produce una presin negativa en la fase lquida. A medida que el radio de la curvatura decrece, la presin tambin lo hace de acuerdo con la frmula: P = - 2T/r, donde T es la tensin superficial del agua (7.28 x 10-8 MPa m) y r es el radio de la interfase aireagua

Taiz-Zeiger, 4th Ed

Tericamente, el gradiente de presin requerido para la ascensin del agua es de 0.02 MPa por metro de altura (este valor deriva de la aplicacin de la ecuacin de Poiseuille considerando un tubo ideal de 40 m de radio y una velocidad de flujo de 4 mm/s). Por lo tanto, una tensin de -2.4 MPa sera suficiente para subir el agua en un rbol de 100 m de altura. Este valor terico est dentro del rango de valores tpicos de tensin encontrados en las plantas (-0.5 a -10 MPa). Las fuerza de cohesin entre las molculas de agua son ms que suficientes para resistir estas tensiones (la resistencia a la traccin del agua pura a 20C es de 30 MPa).

La Teora de la Cohesin-Tensin predice que la transpiracin genera una succin que reduce la presin a la que el agua est sometida en el xilema. Esta presin negativa (tensin), puede medirse con la Cmara de Presin. Para realizar las medidas, se corta un tallo de una planta y, rpidamente, se coloca en una cmara hermticamente cerrada a la que se pueden aplicar presiones. Dado que el agua esta sometida a tensin, el corte hace que el agua se retraiga en los conductos xilemticos del tallo. Al aplicar la presin, los conductos xilemticos del tallo vuelven a llenarse de agua. Se asume que la presin requerida para hacer que los conductos se llenen de nuevo (momento en el que se observa que el corte se humedece) es equivalente a la tensin existente en el tallo en el momento en que se realiz el corte.

La foto muestra el Gigante Estratosfrico(Sequoia sempervirens) el rbol ms alto conocido (112.7m),localizado en Humboldt County, California. Los investigadores ascendieron a la copa de rboles con alturas entre 95 y 112.34 m (ver crculo amarillo) y midieron la tensin del xilema,en tallos cortados a distintas alturas, con la cmara de presin. Como se aprecia en la figura de la derecha la presin del agua en el xilema se correlacion con la altura, tanto al amanecer (smbolos vacos) como al medio da (smbolos llenos) cuando la transpiracin es mayor. Los cuadrados, tringulos y esferas representan tres rboles distintos (Plant Physiology online, Taiz-Zeiger, 4th edition,
http://4e.plantphys.net/article.php?ch=4&id=100)

The transpiration of water at negative pressures in a synthetic tree Nature (2008) 455: 208-212
Plant scientists believe that transpirationthe motion of water from the soil, through a vascular plant, and into the airoccurs by a passive, wicking mechanism. This mechanism is described by the cohesiontension theory: loss of water by evaporation reduces the pressure of the liquid water within the leaf relative to atmospheric pressure; this reduced pressure pulls liquid water out of the soil and up the xylem to maintain hydration. Strikingly, the absolute pressure of the water within the xylem is often negative, such that the liquid is under tension and is thermodynamically metastable with respect to the vapour phase. Qualitatively, this mechanism is the same as that which drives fluid through the synthetic wicks that are key elements in technologies for heat transfer, fuel cells and portable chemical systems. Quantitatively, the differences in pressure generated in plants to drive flow can be more than a hundredfold larger than those generated in synthetic wicks. Here we present the design and operation of a microfluidic system formed in a synthetic hydrogel. This synthetic tree captures the main attributes of transpiration in plants: transduction of subsaturation in the vapour phase of water into negative pressures in the liquid phase, stabilization and flow of liquid water at large negative pressures (21.0 MPa or lower), continuous heat transfer with the evaporation of liquid water at negative pressure, and continuous extraction of liquid water from subsaturated sources. This development opens the opportunity for technological uses of water under tension and for new experimental studies of the liquid state of water.

REPERCUSIONES DEL ARBOL SINTETICO En este trabajo, se construy un rbol sinttico (de 5 cm de largo) formado por dos lminas de un hidrogel, que mimetizan las hojas y las races, conectadas por canales (xilema) de 10 micras de dimetro. Las races se expusieron a una fuente de agua y las hojas a una corriente de aire, lo que provoc la evaporacin del agua. As consiguieron hacer fluir el agua desde las races a las hojas. La presin desarrollada en el tronco (-21 MPa) fue hasta 15 veces ms negativa que la de cualquier sistema de bombeo conocido. El rbol sinttico demuestra la verosimilitud de la teora de la cohesin tensin y puede ser utilizado para estudiar otros aspectos ligados a la ascensin del agua, como la recuperacin de los embolismos. Adems, la tecnologa utilizada podra ser de utilidad para la construccin de bombas pasivas o de aparatos de refrigeracin. Tambin, las enormes tensiones desarrolladas se podran emplear para sacar agua pura (filtrada a travs del hidrogel) de suelos bastante secos. Este proceso, que los autores denominan smosis inversa inversa podra ser la base de minas solares de agua en ambientes ridos o contaminados.

Las columnas de agua sometidas a presiones negativas son muy inestables y pueden romperse
La tensin en las columnas de agua se incrementa a medida que decrece la humedad del suelo o aumenta la intensidad de la transpiracin. Este incremento de tensin hace que el aire disuelto en el agua se escape y forme burbujas de gas (embolismos) que causan la ruptura (cavitacin) de las columnas y la interrupcin del transporte de agua Los vasos y las traqueidas forman rutas paralelas e interconectadas para el transporte del agua. La cavitacin bloquea el transporte del agua por la formacin de conductos llenos de aire (embolismos). Dado que los conductos xilemticos estn interconectados por pares de punteaduras, el agua puede evitar los vasos bloqueados movindose a travs de los elementos traqueales adyacentes. Las membranas de las punteaduras evitan que el embolismo se extienda entre conductos xilemticos. As, en la figura de la derecha, el gas queda contenido dentro de una sola traqueida, mientras que en la figura de la izquierda el gas ha llenado completamente todo el vaso (formado en este caso por tres elementos de los vasos separados por placas perforadas escaleriformes). Normalmente, los vasos son ms largos (varios metros) y estn formados por muchos elementos de los vasos

Taiz-Zeiger, 4th Ed

Cavitacin en traqueidas y vasos


De acuerdo con la ley de Poiseuille, el flujo de agua en los elementos traqueales es proporcional al cuarto poder del radio de dichos elementos; por lo tanto, los vasos transportan el agua ms eficazmente que las traqueidas, por lo que cabra esperar que slo existieran vasos; sin embargo, los rboles ms altos (conferas) slo tienen traqueidas. La primera explicacin a esta aparente contradiccin podra ser que las conferas son ms primitivas. Sin embargo, esto no es correcto, ya que bajo ciertas circunstancias, son ms ventajosos los elementos traqueales de menor radio, ya que en ellos se incrementa la adhesin del agua a las paredes, lo que refuerza la integridad de la columna de agua (ver figura)
Agua poco mvil Agua muy mvil

Dimetro rea transversal Conductancia relativa

10m 314m2 1

20m 1256m2 16

40m 5026m2 256

En los tres elementos traqueales la integridad de la columna de agua depende tanto de las fuerzas de cohesin entre las molculas de agua como de las de adhesin entre el agua y las paredes. La capa de agua ms prxima a la pared est sostenida por la pared, por lo que es ms resistente a la traccin que el agua lquida ordinaria. Si el elemento traqueal es estrecho, este efecto de borde refuerza toda la columna de agua; en los elementos ms anchos, las molculas situadas en el centro estn demasiado alejadas de las paredes y no tienen este refuerzo; obviamente, fluyen con mayor facilidad, pero tambin pueden cavitar al ser sometidas a una tensin menor. Por lo tanto, bajo condiciones que favorecen la cavitacin es ms ventajoso poseer elementos traqueales ms estrechos para que la pared refuerce ms la columna de agua (adhesin). En otras palabras, en tales condiciones es ms ventajoso poseer traqueidas que vasos

Consecuencias de la cavitacin
Aunque la propia estructura del xilema minimiza los efectos de las embolias, su ocurrencia es continua, especialmente bajo dficit hdrico severo que provoca presiones muy negativas. De hecho, la vulnerabilidad al embolismo puede ser un factor determinante de la distribucin de las plantas. Las embolias tambin se producen por los ciclos de congelacin/descongelacin de la savia en el invierno y por agentes patgenos; tal es el caso de la grafiosis, enfermedad producida por los hongos Ophiostoma ulmi y O. novo-ulmi, que ha devastado la mayor parte de los olmos de Europa y Norte Amrica. En la pennsula Ibrica esta enfermedad se detect, por vez primera, en la dcada de los aos 30 del pasado siglo, aunque la mayor devastacin sucedi en los aos 70 con la entrada de la especie O. novo-ulmi. La enfermedad es transmitida por un coleptero (el barrenillo del olmo). Si las disponibilidades hdricas del suelo son adecuadas, la cavitacin no supone un grave problema para la supervivencia de las plantas, ya que existe un exceso de sistema conductor en relacin con el agua que se transporta. Adems, la planta puede rellenar los conductos que han sufrido cavitacin. Se asume que este proceso tiene lugar durante la noche, cuando la ausencia de transpiracin permite el desarrollo de la presin radicular. Sin embargo, este mecanismo no es de aplicacin general ya que, en la mayora de los rboles, no se detecta presin radicular. Tambin hay evidencias de que el rellenado puede realizarse durante el da, cuando el agua est an sometida a tensin. Por el momento, no se conoce el mecanismo aunque, como es obvio, cualquier explicacin que viole principios fsicos bsicos debe ser a priori excluida. Tngase en cuenta que la eliminacin del embolismo requiere la redisolucin de los gases en el agua y, para que sta suceda, el embolismo debe estar sometido a una presin superior a la atmosfrica; el rbol sinttico puede ayudar a resolver este problema.

El gigante estratosfrico, ejemplar de Sequoia sempervirens con 112.7 m, equivalente a un edificio de 30 pisos (composicin realizada con 700 fotografas; Nature 428: 807808 (2004)

Respuestas fisiolgicas a la altura del rbol. Cada curva est normalizada, por lo que el valor cero indica la altura mxima sostenible del rbol basada en la eficacia fotosinttica, el punto de embolismo en el xilema (agua), aporte de CO2 a la hoja y la densidad foliar. La elipse muestra el rango predicho de alturas mximas. El aporte de agua es el factor limitante fundamental para la altura ya que es esencial para los restantes factores fisiolgicos. Nature (2004) 428, 851 854.

Comentario en el Pas, al artculo de Nature (2004) 428, 851854.

LIMITATIONS WITHIN THE LIMITS TO TREE HEIGHT: American J Botany 96: 542544. 2009. Koch et al. ( Nature 428: 851 854, 2004) measured various parameters that were thought to limit the height of Sequoia sempervirens from northern California and concluded that the maximum height for this species is 122 130 m because within this range: (1) Irreversible embolism formation was proposed to occur when the xylem pressure was less than 1.9 MPa. (2) The leaf mass to area ratio exponentially approached 833 g m 2 . (3) The discrimination against 13 CO exponentially approached 20. (4) Light-saturated photosynthesis 2 per unit leaf mass decreased to zero, indicating no net gain in leaf biomass. These conclusions are questioned here by reassessing the assumed limits to the biophysical parameters and by reexamining the proposed linear and exponential relationships between these parameters and tree height. It is concluded that: (1) Embolism repair mechanisms could have occurred at 2.7 MPa. (2) The leaf mass to area ratio could be a result of, rather than a determinant of, the large differential between cellular turgor and the xylem pressure. (3) The discrimination against 13 CO2 may show two populations of foliage with apparent linear relationships with height rather than one exponential relationship. (4) The light-saturated photosynthesis per unit leaf mass as a measure of biomass investment in leaf expansion excludes investment in branch and trunk wood. As a result, tree height may be limited by a long-term balance between dieback and continued growth. A RESPONSE TO: LIMITATIONS WITHIN THE LIMITS TO TREE HEIGHT: American J Botany 96: 545 547, 2009. Here we respond to the communication in American Journal of Botany (96: 542 544 in this issue) by Netting, who proposes several ways in which our paper The Limits to Tree Height ( Nature 428: 851 854) may have erred in estimating the biophysicallimits to height growth in Sequoia sempervirens . We fi rst explain that because embolism repair requires long time periods and is generally incomplete, xylem vulnerability characteristics offer a sound basis for estimating performance limits in woody plants. We reaffirm our earlier use of vertical gradients of foliar carbon isotope composition with new data for S. sempervirens . We support these arguments with reference to studies in other tree species. We take exception with Netting s view that the turgor pressure cell expansion relationship for Zea mays is applicable to S. sempervirens . Finally, we second Netting s call for more work on carbon allocation vis a vis height growth limits.

Maximum height in a conifer is associated with conflicting requirements for xylem design
PNAS (2008) 105: 1206912074 Despite renewed interest in the nature of limitations on maximum tree height, the mechanisms governing ultimate and species-specific height limits are not yet understood, but they likely involve water transport dynamics. Tall trees experience increased risk of xylem embolism from air-seeding because tension in their water column increases with height because of path-length resistance and gravity. We used morphological measurements to estimate the hydraulic properties of the bordered pits between tracheids in Douglas-fir (Pseudotsuga menziesii) trees along a height gradient of 85 m. With increasing height, the xylem structural modifications that satisfied hydraulic requirements for avoidance of runaway embolism imposed increasing constraints on water transport efficiency. In the branches and trunks, the pit aperture diameter of tracheids decreases steadily with height, whereas torus diameter remains relatively constant. The resulting increase in the ratio of torus to pit aperture diameter allows the pits to withstand higher tensions before air-seeding but at the cost of reduced pit aperture conductance. Extrapolations of vertical trends for trunks and branches show that water transport across pits will approach zero at a heights of 109m and 138 m, respectively, which is consistent with historic height records of 100127 m for this species. Likewise, the twig water potential corresponding to the threshold for runaway embolism would be attained at a height of  107 m. Our results suggest that the maximum height of Douglas-fir trees may be limited in part by the conflicting requirements for water transport and water column safety.

Transpiracin: Evaporacin del agua en las superficies areas de las plantas


La transpiracin es la evaporacin del agua desde las partes areas de las plantas, especialmente las hojas. En otras partes de la planta, las prdidas ms importantes de vapor de agua se producen en las lenticelas (transpiracin lenticular).

Capa lmite Cutcula Epidermis superior Mesofilo Transpiracin cuticular

Epidermis inferior Cutcula


Clula guarda

Considerando las hojas, el agua que sale por los terminales del xilema (flechas azules en la figura) es utilizada por las clulas de las hojas, pero la mayor parte se evapora desde las paredes de las clulas del mesofilo a los espacios intercelulares, desde donde difunde a la atmsfera cuando los estomas estn abiertos (transpiracin estomtica). Una pequea cantidad se evapora en las paredes externas de las clulas epidrmicas y sale a travs de la cutcula (transpiracin cuticular). En ambos casos, el vapor de agua debe cruzar la capa lmite de aire no turbulento en contacto con la hoja. El CO2 difunde en direccin opuesta. La transpiracin domina las relaciones hdricas y su magnitud es espectacular: Una planta de maz pierde 200 litros durante su vida (475 Tm/ha), un rbol medio 5000 kg por mes de verano, un bosque 500 kg/m2/ao lo que implica entre el 50 y el 85% de la precipitacin en la zona.

Capa lmite

H 2O Estomas CO2
Transpiracin estomtica

Xilema

Annu Rev Plant Biol (2008) 59: 595-624

Transporte de agua y solutos, mediado por acuaporinas, en hojas. Se muestra una seccin transversal de una hoja de Brassica napus con representacin de los patrones especficos de expresin de las acuaporinas PIP1s y TIP1s.

Fuerzas conductoras y resistencias de la transpiracin


La intensidad de transpiracin (T, en g m-2 s-1) depende del aporte de agua a las zonas evaporantes, del aporte de energa para vaporizar el agua, del tamao de las fuerzas conductoras y de las resistencias (r en s m-1) o conductancias. La fuerza conductora es, en ltima instancia el gradiente de potencial hdrico, aunque de forma estricta, para el vapor de agua es la diferencia en la concentracin (C) de vapor o la presin de vapor (e) entre la hoja y la atmsfera:

T = Choja- Caire/rhoja + raire ~ ehoja- eaire/rhoja + raire (1)

Mtodos de medida de la transpiracin


Gravimtricos (fitomtricos): se aplican a plantas individuales (midiendo la prdida de peso de plantas crecidas en macetas) o a plantaciones; en este segundo caso, se emplean los lismetros (recipientes rellenos de suelo apoyados en dispositivos de pesada, con el conjunto enterrado en el suelo) Partes de la plantas (pesada rpida): se emplean tallos u hojas y se miden cambios de peso en funcin del tiempo; a veces, se mide la absorcin del agua de las ramas cortadas mediante potmetros. Medidas de la prdida de vapor de agua: el material (hojas, plantas individuales, plantaciones, se colocan en contenedores de plstico y se mide el cambio en la humedad de la corriente de aire que pasa por el contenedor Medida del flujo de savia (existe una relacin entre la velocidad de flujo y la intensidad de transpiracin)

Factores que afectan a la transpiracin:


La intensidad de transpiracin la determina la interaccin entre factores ambientales (radiacin, dficit de presin de vapor del aire, temperatura, velocidad del viento y suministro de agua) y de la propia planta (rea foliar, estructura y exposicin de las hojas, resistencias foliares y capacidad de absorcin del sistema radicular). Existe una interaccin compleja entre todos estos factores, que se puede resumir en trminos de sus efectos sobre los distintos componentes de la ecuacin 1.

Eficiencia en el uso del agua (WUE, del ingls water use efficiency):
WUE-fotosntesis moles CO2 absorbido / moles agua transpirada WUE-productividad: Kg por ha de materia seca / Kg por ha de agua consumida en evapotranspiracin (transpiracin mas evaporacin desde el suelo)

Transpiracin (mm/ao) de la vegetacin terrestre

Aunque el rea total de los poros estomticos slo representa el 5% de la superficie foliar, la intensidad de transpiracin puede suponer el 70% de una estructura similar sin cutcula. Los estomas ejercen, por tanto, un control fundamental sobre los ciclos de carbono y agua en la Tierra. La precipitacin anual sobre el suelo del planeta es de unos 110.000 km3, o 110 x 1015 kg y la evaporacin y transpiracin total de 70 x 1015 kg. La contribucin de la transpiracin estomtica al ciclo global del agua puede determinarse usando un modelo dinmico de vegetacin. Las intensidades mayores de transpiracin se producen en las reas forestales uniformes entre los trpicos, con 32 x 1015 kg ao de vapor de agua, que es el doble del contenido en vapor de agua de la atmsfera (15 x 1015 kg ao). La fotosntesis bruta terrestre fija anualmente unos 120 x 1015 g C (440 x 1015g CO2) a partir de los 730 x 1015 g C de la atmsfera. La distribucin global de este flujo es paralela a la distribucin de la transpiracin, indicando el control acoplado ejercido por los estomas sobre la difusin del CO2 y vapor de agua. Nature (2003) 424: 901-908

Transpiracin estomtica

Transpiracin cuticular Capa lmite Cutcula Epidermis

ra
Betula verrucosa Quercus robur

Resistencias (s cm-1)

ra
0.80 0.69 0.69 0.73

rs
0.92 6.7 4.7 10.6

rc
83 380 85 37

Estoma Espacio intercelular Mesofilo

rp rs ri rc

Acer platanoides Lamium galeobdolon

Haz vascular Agua lquida Vapor de agua

rm

En la figura de la derecha se resume la ruta del agua en la hoja, desde el haz vascular hasta la atmsfera. El agua, se evapora desde las paredes de las clulas del mesofilo y pared interna de las clulas epidrmicas a los espacios intercelulares, desde los que difunde a la atmsfera a travs de los estomas (transpiracin estomtica). El agua tambin se evapora desde las paredes externas de las clulas epidrmicas, difundiendo a la atmsfera a travs de la cutcula (transpiracin cuticular). La intensidad del proceso es directamente proporcional a la fuerza conductora (gradiente de concentracin de vapor de agua entre la hoja y la atmsfera) e inversamente proporcional a las resistencias (r) que ofrece la ruta de salida del agua. Este concepto es anlogo al flujo e electrones en un circuito elctrico (ver figura de la izquierda) y, por tanto, sigue la Ley de Ohm. Las resistencias del circuito son: la del mesofilo (rm), la de los espacios intercelulares (ri) la del poro estomtico (rp), ambas constituyen la resistencia estomtica (rs) y la debida a la capa lmite de aire no turbulento presente en la superficie de la hoja (ra) (del ingls air boundary layer). El circuito presenta resistencias en serie y en paralelo (la estomtica y cuticular), hecho que hay que tener en cuenta para el calculo de la resistencia total de la hoja .

Control de la transpiracin por la capa lmite de aire no turbulento


La resistencia de la capa limite depende de su grosor que, bsicamente, es proporcional al tamao de la hoja y disminuye con la velocidad del viento. En general, las hojas ms pequeas tienen una menor resistencia a la difusin por la capa lmite que las grandes. En la figura se expone la dependencia de la intensidad de transpiracin sobre la apertura estomtica en condiciones de brisa mnima (still air) o aire en movimiento (moving air). La capa lmite es mas gruesa y ofrece ms resistencia cuando la brisa es mnima. Debido a ello, el grado de apertura estomtica tiene menos control sobre la transpiracin en estas condiciones que cuando el aire esta en movimiento.

Tabla 1. Relaciones entre la concentracin de vapor de agua Cwv, Presin de vapor de agua (Pwv), Humedad relativa (RH) y Potencial hdrico (w), a 20C. (Taiz-Zeiger, 4th Ed.). RH (humedad relativa) varia entre 0 y 1; multiplicado por 100 es el porcentaje de HR

Necesidad fsica de la transpiracin


La fuerza conductora de la transpiracin es el gradiente de concentracin de vapor de agua entre la hoja y la atmsfera. Las Tablas 1 y 2 nos muestran que los espacios intercelulares de las hojas tienen valores de humedades relativas prximos a 1 cuando los potenciales hdricos estn en el rango fisiolgico (0 a 7.04 MPa). Sin embargo, en el exterior, una atmsfera con una humedad relativa de 0.5 (50 %) tiene un potencial hdrico muy bajo (-93.6 MPa). Notar adems (ver Tabla 2) que la concentracin de vapor de agua disminuye en cada paso de la ruta de difusin del vapor de agua, desde los espacios intercelulares de las hojas hasta la atmsfera externa. Por lo tanto, el gradiente de concentracin de vapor de agua entre la hoja y la atmsfera siempre favorece la transpiracin. En resumen: teniendo en cuenta que los valores normales del Potencial hdrico foliar oscilan entre -0.05 y -5 (o ms) MPa y que la humedad relativa de la atmsfera, incluso con lluvia intensa, nunca supera el 95% (que supone un potencial hdrico de -6.5 MPa), se comprende la necesidad fsica de la transpiracin

Tabla 2. Valores representativos de humedad relativa, concentracin absoluta de vapor de agua y potencial hdrico en cuatro puntos de la ruta de prdida de agua en la hoja (Taiz-Zeiger, 4th Ed.)

a) Datos calculados a partir de la ecuacin Donde RH es la concentracin de vapor de agua expresada como una fraccin de la concentracin de vapor de agua a saturacin:

Absorcin y disipacin de la energa luminosa en las hojas (*)


La carga de calor de las hojas debida a la absorcin de la energa solar es elevada. Por ello, esta carga calrica debe ser disipada para evitar daos en la hoja. Los tres procesos bsicos de disipacin de la carga de calor son: a) emisin de radiaciones de longitud de onda larga (re-irradiacin); b) prdida de calor sensible por conveccin (transferencia de calor por movimiento en masa del aire, normalmente de forma vertical) o advencin (transferencia horizontal); y c) prdida de calor latente (el calor latente se refiere a la ganancia o prdida de calor por un cambio de estado) que enfra la hoja al evaporarse el agua (Transpiracin). (*) Estrictamente, la carga de calor de las hojas procede de radiacin solar directa, radiacin reflejada o re-irradiada desde el suelo y vegetacin vecina, y flujo advectivo de calor sensible desde el ambiente.

Taiz-Zeiger, 2006

Los procesos fundamentales en la regulacin de la temperatura foliar son las prdidas de calor sensible y latente. La relacin entre ambas, se denomina cociente (ndice) de Bowen: Prdida de calor sensible/prdida de calor por evaporacin. Si las plantas no tienen problemas de agua, la transpiracin es elevada y el ndice es bajo. Por el contrario, si las prdidas evaporativas son bajas, el ndice es elevado. Las plantas con ndices de Bowen muy elevados conservan el agua y resisten elevadas temperaturas en sus hojas, pero la gran diferencia entre la temperatura de la hoja y el aire incrementa la prdida de calor sensible. Normalmente, ndices de Bowen elevados se acompaan con un crecimiento reducido ya que los estomas estn parcialmente cerrados. Los valores tpicos del ndice de Bowen son: 0.2 (bosques tropicales), 0-4-0.8 (bosques templados), 2 a 6 (regiones semiridas) y 10 (desiertos).
La carga energtica de la hoja se puede representar por la ecuacin: (S + G) (rS + R) + H E + A = 0, donde los trminos en rojo representan la radiacin neta (realmente disponible) de la hoja y consiste en la radiacin solar total (S), ms la radiacin de longitud de onda larga desde el entorno (G) menos la radiacin reflejada desde las hojas (rS) y la re-irradiada (R). H es el intercambio de calor sensible desde el entorno por conveccin y advencin, E es la prdida de calor latente por transpiracin o ganado por condensacin, y A es la energa utilizada en la fotosntesis (su valor es pequeo, 2-3% del total). Las relaciones energticas de las hojas son muy complejas. Si las temperaturas de la hoja y aire son iguales, la carga de calor es disipada por r-e-irradiacin y transpiracin. Si la transpiracin es mnima por el cierre de los estomas las hojas se calientan ms que el aire y la carga de calor es disipada por re-irradiacin y transferencia de calor sensible, aunque normalmente operan los tres mecanismos de disipacin de calor. Por la noche, las hojas estn, normalmente, ms fras que el aire por la emisin de radiacin hacia el cielo fro, favoreciendo hacia ellas un flujo de calor sensible y latente con la deposicin de roco.

Decoding Leaf Hydraulics with a Spatially Explicit Model: Principles of Venation Architecture and Implications for Its Evolution The American Naturalist (2010) 175: 447460 Leaf venation architecture is tremendously diverse across plant species. Understanding the hydraulic functions of given venation traits can clarify the organization of the vascular system and its adaptation to environment. Using a spatially explicit model (the program K_leaf), we subjected realistic simulated leaves to modifications and calculated the impacts on xylem and leaf hydraulic conductance (Kx and Kleaf, respectively), important traits in determining photosynthesis and growth. We tested the sensitivity of leaves to altered vein order conductivities (1) in the absence or (2) presence of hierarchical vein architecture, (3) to major vein tapering, and (4) to modification of vein densities (length/leaf area). The Kx and Kleaf increased with individual vein order conductivities and densities; for hierarchical venation systems, the greatest impact was from increases in vein conductivity for lower vein orders and increases in density for higher vein orders. Individual vein order conductivities were colimiting of Kx and Kleaf, as were their densities, but the effects of vein conductivities and densities were orthogonal. Both vein hierarchy and vein tapering increased Kx relative to xylem construction cost. These results highlight the important consequences of venation traits for the economics, ecology, and evolution of plant transport capacity Comentario a este trabajo (ver diapositiva siguiente)

The hidden cost of transpiration Nature (2010) 464, 495-496:

The hydraulic arms race in plants. a, The decline in atmospheric CO2 concentration over the past 200 million years; the shaded envelope represents uncertainties due to the weathering rates of basalt rocks. b, Maximum photosynthesis rates are estimated to have fallen over the past 50 million years (red line), mainly due to declining CO2. That decline led to increases in maximum stomatal conductance, requiring more investment in carboncostly leaf vascular tissue, indicated by increased maximum vein density. This investment in hydraulic capacity, relative to photosynthesis rate, has increased with the rise of the angiosperms (arrow). But the analyses of this paper show that design features such as hierarchical vein organization, conduit taper and relatively higher density of the highest-order (smallest) veins made the investment highly cost-efficient

Estomas

Nature (2003) 424: 901-908

Los estomas son poros de las epidermis de las partes areas de las plantas rodeados de dos clulas epidrmicas especializadas denominadas clulas guarda (oclusivas o estomticas). Las clulas guarda no presentan comunicaciones plasmodsmicas con sus vecinas. Las clulas adyacentes a las guarda tambin pueden ser diferentes del resto de clulas epidrmicas; si lo son, se denominan subsidiarias. El conjunto formado por el poro, clulas guarda y subsidiarias (o epidrmicas sin caractersticas distintivas adyacentes a las guarda) se denomina complejo o aparato estomtico. Los estomas aparecieron hace unos 400 millones de aos y, desde entonces, han cambiado de tamao y forma. Actualmente,los dos tipos principales de estomas son el tipo gramnea (izquierda), con clulas oclusivas en forma de pesas de halterofilia, y el tipo elptico (derecha), con el poro de forma elptica y clulas oclusivas en forma arrionada. Se cree que los primeros son una forma evolutiva ms avanzada ya que durante su desarrollo, las clulas guarda pasan por una forma transitoria arrionada. Adems, maximizan sus cambios con menor coste energtico (pequeos cambios en turgencia conducen a un mayor incremento en apertura, mejorando la eficacia).

A) Estoma Tipo gramnea. Ntese la forma de las dos clulas guarda (alargada con extremos bulbosos, semejante a pesas de halterofilia), el poro en forma de ranura y la gruesa pared celular de la parte central de las clulas guarda.
Taiz-Zeiger, 2006

B) Visin frontal de la epidermis mostrando varios estomas de tipo elptico. Tambin se observan clulas subsidiarias (adyacentes a las de guarda) y clulas epidrmicas tpicas (recordad que las clulas guarda son un tipo especializado de clulas epidrmicas)

C) Fotografa al microscopio electrnico de barrido de estomas de tipo elptico. Notar la forma arrionada de las clulas guarda, el mayor grosor de sus paredes ventrales (delimitan el poro) y la forma elptica del poro estomtico

Taiz-Zeiger, 2006

Micelacin (orientacin) en radial de las microfibrillas de celulosa en las paredes de las clulas guarda de los estomas elpticos (A) y tipo gramnea (B)

Fotografa al microscopio electrnico del par de clula guarda de los estomas elpticos de Nicotiana tabacum. El poro encara a la atmsfera y la parte basal a la cmara subestomtica. Notar el patrn desigual de grosor de las paredes celulares que determina la deformacin asimtrica de las clulas guarda cuando su volumen incrementa durante la apertura del poro

La disposicin radial de las microfibrillas de celulosa de las paredes de las clulas guarda (y el patrn desigual de grosor de sus paredes) hace que adquieran forma de arcos cuando incrementa su turgencia, lo que provoca la apertura del poro. El cierre, se produce al disminuir la turgencia. Notar que la base fsica del movimiento estomtico reside en los cambios en las relaciones de turgencia entre las clulas guarda y las subsidiarias: El incremento en la turgencia de las clulas guarda respecto a las subsidiarias conduce a la apertura del poro, mientras que lo opuesto conduce a su cierre.

Stomagen positively regulates stomatal density in Arabidopsis Nature (2010) 463:241-244


Los patrones de distribucin y la densidad de estomas en la epidermis foliar tienen tanto componentes genticos como ambientales. Dos factores de sealizacin intercelular (EPF1 y EPF2, por EPIDERMAL PATTERNING FACTOR) funcionan como reguladores negativos del desarrollo estomtico en Arabidopsis, va su interaccin con el receptor TMM (por TOO MANY MOUTHS). Tambin se asume que en el desarrollo de los estomas participan seales positivas, aunque por el momento se desconoce su identidad. En este trabajo se describe uno de estos factores positivos, un pptido de secrecin nuevo, denominado estomagen, muy conservado entre las plantas vasculares. El estomagen es un pptido de 45 aminocidos, rico en cisteina, generado a partir de una protena precursora de 102 aminocidos denominada ESTOMAGEN. Tanto estudios in planta como semi-invitro, utilizando estomagen recombinante o procedente se sntesis qumica muestran que el estomagen tiene actividad, dosis-dependiente, inductora de estomas. Un anlisis gentico muestra que TMM es episttico de ESTOMAGEN (At4g12970), sugirindose que el desarrollo de los estomas est regulado por uniones competitivas de reguladores positivos y negativos al mismo receptor. El gen ESTOMAGEN se expresa en el mesofilo de las hojas inmaduras y no en las epidermis donde se desarrollan los estomas. Este estudio da evidencias de la existencia de un regulador positivo, procedente del mesofilo, de la densidad estomtica. Se demuestra as, que los tejidos fotosintticos optimizan su funcin regulando la densidad estomtica. Imgenes de contraste de interferencia diferencial (DIC) de las epidermis abaxiales de hojas maduras de Arabidopsis silvestre (Wild type) y de arabidopsis transgnicas con el gen STOMAGEN silenciado (STOMAGENRNAi10) o sobreexpresado (STOMAGENOX10).Los estomas setieron con safranina-O. Barra 50 m.

Factores implicados en el movimiento estomtico


abrindose si disminuye o cerrndose si aumenta; esta respuesta, que es muy rpida y no requiere reacciones fotosintticas, ayuda a mantener Ci de 230 (plantas C3) y 100 (plantas C4) mol de CO2 por mol de aire.

1- Dixido de carbono. Los estomas responde a la concentracin intercelular (Ci) de CO2, tanto en luz como en oscuridad,

2-Luz. Todas las plantas, excepto las CAM, abren sus estomas durante el da. Este efecto promotor de la luz es
mayoritariamente indirecto, va cambios en la concentracin de CO2, que explican tanto la apertura en luz (disminucin de Ci por fijacin fotosinttica del CO2) como en oscuridad (disminucin de Ci por carboxilacin del fosfoenol piruvato en las plantas CAM). Sin embargo, la luz azul ejerce un efecto directo sobre la apertura (ver figuras)

La grfica de apertura estomtica en hojas de Vicia faba (B) es paralela a los niveles de radiacin fotosintticamente activa (400-700 nm), indicando que la respuesta a la luz fue la respuesta dominante regulando la apertura de los estomas

Los estomas de tiras epidrmicas de Commelina comunis se trataron luz roja saturante (flecha roja). En otro experimento paralelo, los estomas pre-tratados con luz roja se iluminaron con luz azul (flecha azul). Este segundo tratamiento increment de forma significativa la apertura de los estomas

2.1-Fotorreceptores de la luz azul: Fototropinas (phot1 y phot2): Son cromoprotenas de la membrana plasmtica. La apoprotena es una proten-quinasa y el cromforo el FMN. Es el fotorreceptor fundamental en la respuesta de los estomas a la luz azul Zeaxantina: Es un carotenoide (xantofila). Los estomas de tiras epidrmicas del mutante de Arabidopsis npq1 (nonphotochemical quenching1), que carece de zeaxantina, no responde a la luz azul; no obstante hay dudas ya que los resultados no se repiten en hojas o protoplastos del mutante. Otros fotorreceptores: parecen implicados, como moduladores de la respuesta mediatizada por fototropinas los Criptocromos y fitocromos. 3-Humedad. Los estomas se cierran rpidamente en respuesta a una disminucin en la humedad ambiental 4-Temperatura. Efecto normalmente indirecto va cambios en la concentracin de CO2, aunque no se puede descartar el directo. 5-Estado hdrico de la hoja. Si el potencial hdrico foliar disminuye por debajo de un valor umbral (dependiente de las especies) los etomas se cierran y as permanecen a no ser que haya rehidratacin. Hay debate sobre que parte de la planta (hojas o races) son el sensor inicial de estrs hdrico. 6-Hormonas: Entre las hormonas, el cido abscsico (ABA) es la ms importante, promoviendo el cierre de los estomas. No obstante, otras hormonas como auxinas, citoquininas, etileno, brasinoesteroides, jasmonatos y cido saliclico tambin contribuyen al control del movimiento estomtico (ver diapositiva siguiente).

Interaccin de las hormonas en la funcin estomtica


EIN3 (insensible a etileno3). Componente de la ruta de sealizacin del etileno OST1 (estomas abiertos 1): proten quinasa ETR1 (resistente a etileno1): Receptor del etileno COI1 (insensible a coronatina 1): receptor de JA JA-Ile: conjugado del JA con isoleucina (forma activa del JA) ROS: esoecie reactiva de oxgeno NO: xido ntrico

El Acido Abscsico (ABA), Jasmonatos (JAs), Brasinoesteroides (BRs) y Acido Saliclico (SA) son reguladores positivos del cierre estomtico, mientras que las auxinas y citoquininas son reguladores positivos de la apertura estomtica. El etileno juega un papel dual en la apertura estomtica y su accin es dependiente de las especies. La interaccin de auxinas, citoquininas o etileno con ABA inhibe el cierre estomtico dependiente de ABA. Las interacciones de ABA y SA regulan positivamente el cierre estomtico e impiden la invasin de patgenos bacterianos. Ms informacin en :Hormone interactions in stomatal function: Plant Mol Biol (2009) 69:451462

Luz azul

Membrana plasmtiva

Pared Citosol

Acida y positiva

APERTURA de los ESTOMAS La apertura de los estomas se inicia con la salida de protones (activacin de la bomba de protones de la membrana plasmtica de las CG). La luz azul, absorbida por las fototropinas, es uno de los activadores de la bomba de protones. Este proceso crea un gradiente de potencial electroqumico de H+ (Pared positiva y cida; citoplasma negativo y bsico) que activa: 1) los canales de entrada de K+ 2) la entrada de Cl- o NO3- (no indicado en la figura) mediante simport H+/ Cl- o NO33) la enzima fosfoenol piruvato carboxilasa (PEPC), que cataliza la carboxilacin del PEP (un intermediario de la glucolisis). El producto de esta reaccin (OAA) es rpidamente convertido en Malato. El malato, junto con los iones potasio, cloro y nitrato, se acumula en las vacuolas, provocando la reduccin del Potencial osmtico (y, en consecuencia, del Potencial hdrico), lo que conduce a la entrada de agua, al incremento en la turgencia y a la apertura del poro estomtico.

Fototropina Bomba H H+ H+ ClSimport H/Cl K+ Canal K K+


ATP

Bsico y negativo
Glcidos

H+
ADP + P

PEP PEPC CO2

ClATP

OAA-

H+ ADP + P

Malato-

acumulacin de Cl, K y Malato

Disminucin

Vacuola

H2O Clula guarda (CG)

Procesos implicados en la apertura de los estomas en respuesta a la luz azul. Se hace hincapi en la activacin de la bomba de protones por la luz azul, va las fototropinas, y en la represin por ABA de este efecto. Algunos autores sugieren que las fototropinas forman un complejo con la H+-ATPasa a travs de las protenas 14-3-3 lo que mantendra activa la bomba de protones. Annu. Rev. Plant Biol. 2007. 58:21947

Blue light inhibits guard cell plasma membrane anion channels in a phototropin-dependent manner The Plant Journal (2007) 50: 2939
Guard cells respond to light through two independent signalling pathways. The first pathway is initiated by photosynthetically active radiation and has been associated with changes in the intercellular CO2 concentration, leading to inhibition of plasma membrane anion channels. The second response is blue-light-specific and so far has been restricted to the activation of plasma membrane H+-ATPases. In a search for interactions of both signalling pathways, guard cells of Vicia faba and Arabidopsis thaliana were studied in intact plants. Vicia faba guard cells recorded in CO2-free air responded to blue light with a transient outward plasma membrane current that had an average peak value of 17 pA. In line with previous reports, changes in the currentvoltage relation of the plasma membrane indicate that this outward current is based on the activation of H+-ATPases. However, when V. faba guard cells were blue-light-stimulated in air with 700 l/l CO2, the outward current increased to 56 pA. The increase in current was linked to inhibition of S-type anion channels. Blue light also inhibited plasma membrane anion channels in A. thaliana guard cells, but not in the phot1 phot2 double mutant. These results show that blue light inhibits plasma membrane anion channels through a pathway involving phototropins, in addition to the stimulation of guard cell plasma membrane H+-ATPases.

K-252a, inhibidor de proten quinasas de Ser/Thr; NADH-MDH, NADH-malato deshidrogenasa; phot1, fototropina 1; phot2, fototropina 2; PLC, fosfolipasa C; RPT2, ROOT PHOTOTROPISM 2; VfPIP, protena que interactua con la fototropina de Vicia faba; PP1, proten fosfatasa de tipo 1

Apertura estomtica

Cooperacin de la luz azul y del metabolismo de las clulas guarda en la apertura de los estomas. La luz azul es percibida por las fototropinas 1 y 2 (phot1 y phot2), iniciando una ruta de sealizacin que activa la bomba de protones de la membrana plasmtica, induciendo la absorcin de K+. La luz azul tambin estimula la degradacin del almidn. La luz roja es absorbida por los cloroplastos de las clulas guarda y del mesofilo. Los cloroplastos de las clulas guarda aportan ATP y NADH al citosol, mientras que los cloroplastos del mesofilo fijan CO2, lo que reduce la concentracin intercelular de este gas, activndose mecanismos que llevan a la hiperpolarizacin de la membrana. Estas reacciones no son especficas de la luz roja. La luz azul tambin es absorbida por los cloroplastos y tiene el mismo efecto que la luz roja, aunque el papel de la luz azul no se indica en la figura. Annu. Rev. Plant Biol. 2007. 58:21947

Provisin de ATP y NADH desde los cloroplastos de las clulas guarda para el bombeo de protones inducido por la luz azul. Las flechas gruesas indican actividades enzimticas elevadas y demostradas en las clulas guarda. La luz azul provoca la activacin de la bomba de protones de la membrana plasmtica va la sealizacin a travs de las fototropinas. La bomba consume ATP y causa la entrada de potasio, que provoca la sntesis de malato, para compensar el exceso de cargas positivas, a expensas de NADH, resultando en la regeneracin de ATP y NADH. El 3-PGA resultante puede ser transportado desde el citosol a los cloroplastos, donde es fosforilado y reducido para producir DHAP/GAP. DHAP/GAP podra pasar desde los cloroplastos al citosol y las reacciones de fosforilacin/reduccin seran facilitadas bajo luz roja fuerte.
1,3-BPGA, 1,3-Bisphosphoglycerate; DHAP, Dihydroxyacetone phosphate; FBP, Fructose1,6bisphosphate; G-1-P, glucose 1-phosphate; GAP, Glyceraldehyde 3-phosphate; GAPD, Glyceraldehyde-3phosphate dehydrogenase; MDH, Malate dehydrogenase; OAA, Oxaloacetate; PEP, phosphoenolpyruvate; PEPC, phosphoenolpyruvate carboxylase; PGAK, Phosphoglycerate kinase; 3-PGA, 3-phosphoglycerate; Rubisco, Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase; TPI, Triose-phosphate isomerase.

Cierre de los estomas = Inhibicin Apoplasto

Bomba H Canal de entrada de K

La inhibicin de la bomba de H+ anula el gradiente de potencial electroqumico de protones y, por tanto, inhibe los canales de entrada de K y el simport Cl/H (o NO3/H; no mostrado). En esta situacin: Canales de salida Se activan los canales de salida de aniones (Cl, Nitrato y Malato) y Potasio (tanto los del tonoplasto como los de la membrana plasmtica) que provocan un aumento del Potencial Hdrico y la salida del agua (la turgencia disminuye y los estomas se cierran)

K+ Malato-

Clcitoplasma

Simport Cl/H

K+ MalatoCl-

aumenta Agua
Vacuola
Membrana plasmtica

ABA-ESTOMAS

ABA

Los estomas realizan dos funciones fundamentales: maximizan la absorcin de CO2 y minimizan la prdida de agua debida a la transpiracin. En respuesta a un dficit hdrico, las plantas sintetizan ABA, que activa las reacciones que llevan al cierre del poro estomtico o impiden su apertura (ver diapositiva siguiente). Las clulas estomticas (guarda u oclusivas) son un sistema ideal para el estudio de la sealizacin de esta hormona.

ABA induce el cierre del poro estomtico o impide su apertura

Cierre de Estomas (izquierda): El incremento en Ca 2+ citoplasmtico mediado por ABA activa dos canales aninicos (tipo S, por slow-activating sustained, y Tipo R, por rapid transient), lo que despolariza la membrana y se produce la desactivacin de los canales de influjo de K y la activacin de los de eflujo de K. Adems, la alcalinizacin del citosol inducida por ABA, activa directamente los canales de eflujo de K. La salida de solutos de la clula es precedida de su salida de la vacuola. Los canales del tonoplasto responsables de esta salida son activados tambin por el Ca 2+ . Inhibicin de la apertura (derecha): La apertura es conducida por la bomba de protones, principal responsable de la activacin de los canales de influjo de K. El incremento en Ca 2+ mediado por ABA reprime la bomba y los canales de influjo de K, impidiendo as la apertura del estoma. The Arabidopsis Book 2008, ASPB

Resumen de la regulacin de los canales inico en las clulas guarda. Los eventos de sealizacin durante el cierre se muestran a la izquierda, mientras que los eventos principales de la inhibicin de la apertura estomtica inducida por ABA se muestran a la derecha. Abreviaturas: ABA, cido abscsico; Ica, inward Ca 2+ current; S-type, slow-type; SLAC1, SLOW ANION CHANNEL ASSOCIATED 1; R-type, rapid-type; SV, slow vacuolar; VK, vacuolar K+ selective; TPK1, TWO PORE K+ CHANNEL 1; AHA1, ARABIDOPSIS H+ ATPASE 1; OST2, OPEN STOMATA 2. Annu. Rev. Plant Biol. 2010. 61:13.113.31

El Ca2+ es un segundo mensajero de la accin del ABA en los estomas


El empleo de nuevas tcnicas de determinacin de calcio, como las protenas camalen que, expresadas en plantas transgnicas, cambian su coloracin dependiendo de la concentracin de calcio ( ver Figura A) ha permitido conocer que el ABA (y otras seales ) inducen oscilaciones en la concentracin citoplasmtica de Ca2+ Para que se produzca el cierre de los estomas, las oscilaciones en la concentracin de Ca2+ en el citoplasma de las clulas guarda deben tener una frecuencia determinada. Este hecho se constata en la parte superior de la Figura B, que muestra la frecuencia de oscilacin de Ca2+ en los estomas de plantas silvestres (WT) de Arabidopsis. En el mutante det3 (parte central de la figura B) no se detectan oscilaciones de Ca2+, aunque su concentracin incrementa despus del tratamiento con ABA, pero no se produce el cierre de los estomas. Finalmente, la existencia de oscilaciones en la concentracin de Ca2+ no lleva, necesariamente, al cierre de los estomas. Como se muestra en la parte inferior de la Figura B, las oscilaciones en la seal de Ca2+ en el mutante gca2 muestran una frecuencia muy alta, pero no conducen al cierre de los estomas.

Constitutive activation of a plasma membrane H+-ATPase prevents abscisic acidmediated stomatal closure
The EMBO Journal (2007) 26, 32163226 Light activates proton (H+)-ATPases in guard cells, to drive hyperpolarization of the plasma membrane to initiate stomatal opening, allowing diffusion of ambient CO2 to photosynthetic tissues. Light to darkness transition, high CO2 levels and the stress hormone abscisic acid (ABA) promote stomatal closing. The overall H+-ATPase activity is diminished by ABA treatments, but the significance of this phenomenon in relationship to stomatal closure is still debated. We report two dominant mutations in the OPEN STOMATA2 (OST2) locus of Arabidopsis that completely abolish stomatal response to ABA, but importantly, to a much lesser extent the responses to CO2 and darkness. The OST2 gene encodes the major plasma membrane H+-ATPase AHA1, and both mutations cause constitutive activity of this pump, leading to necrotic lesions. H+-ATPases have been traditionally assumed to be general endpoints of all signaling pathways affecting membrane polarization and transport. Our results provide evidence that AHA1 is a distinct component of an ABA-directed signaling pathway, and that dynamic downregulation of this pump during drought is an essential step in membrane depolarization to initiate stomatal closure.

El gen OST2 (ESTOMAS ABIERTOS 2) codifica la ATPasa de protones ms importante de la membrana plasmtica de arabidopsis (AH1). En este trabajo se demuestra que las mutaciones dominantes que provocan una actividad constitutiva de la bomba anulan la respuesta de los estomas al ABA.

Ruta de sealizacin del ABA En dos publicaciones recientes: 1) Regulators of PP2C Phosphatase Activity Function as Abscisic Acid Sensors: Science (2009) 234: 1064-1068; y 2) Abscisic Acid Inhibits Type 2C Protein Phosphatases via the PYR/PYL/RCAR Family of START Proteins: Science (2009) 234: 1068-1071, se demuestra que las protenas PYR/ PYL/RCAR forman una familia de receptores del
ABA, proponiendo que la unin del ABA a estas protenas inhibe la accin de las fosfatasas PP2Cs, reguladores negativos de la ruta de sealizacin, permitiendo as la actuacin de proten-quinasas que, en ltima instancia, activan las respuestas mediadas por ABA. La redundancia en esta familia de co-receptores ha sido un obstculo para identificar factores necesarios en las respuestas al ABA.

Sin ABA
PYR/PYL/RCAR

ABA
ABA

Fosfatasas PP2C

PYR/PYL/RCAR

Fosfatasas PP2C

Proten quinasas

Proten quinasas

Efectores

Efectores

En ausencia de ABA (izquierda) las fosfatasas PP2C inhiben la autofosforilacin de Proten quinasas, lo que impide la activacin de la ruta de sealizacin. La unin del ABA al receptor PIR/PYL/RCAR (derecha) hace que el complejo ABA-Receptor se una a las fosfatasas PP2c, causando su inhibicin. Esto elimina la inhibicin sobre las quinasas, las cuales se auto-activan y pueden as iniciar una cascada de fosforilaciones que permite la acumulacin de efectores fosforilados y la transcripcin de genes de respuesta al ABA o la regulacin de otros efectos mediados por el ABA

Respuestas

Modelo de actuacin de los receptores PYR/ PYL/RCAR en el cierre estomtico


(A protein kinase-phosphatase pair interacts with an ion channel to regulate ABA signaling in plant guard cells PNAS (2009) 106: 21419-21424

El canal SLAC1 (por SLOW ANION CHANNEL 1) es requerido para el cierre estomtico inducido por CO2 o por ABA. En este trabajo se demuestra que tanto la quinasa OST1 (por open stomata 1) como las fosfatasas PP2C interactan directamente con SLAC1, regulando la actividad del canal. Adems, PP2C interacta directamente con OST1 y decrece su actividad quinasa. Teniendo en cuenta que las fosfatasas PP2C son reguladores negativos de la ruta de sealizacin del ABA y que se sitan por encima de las quinasas en dicha ruta, los autores proponen la siguiente ruta para explicar el cierre de los estomas mediado por ABA: Cuando los niveles de ABA son bajos, las fosfatasas PP2C interactan con la quinasa OST1 e inhiben su actividad quinasa, lo que hace que los canales aninicos SLAC1 estn cerrados. Cuando los niveles de ABA incrementan, la hormona se une a su receptor e inhibe la actividad quinasa. Alternativamente, el receptor del ABA puede interactuar con las fosfatasas PP2C y disociarse del complejo OST1-PP2C. Todos estos eventos conducen a la activacin, primero de la quinasa OST1 y despus de los canales SLAC1, lo que libera aniones y despolariza la membrana. Esta despolarizacin tambin activa el canal que media el eflujo de cationes desde las clulas guarda, conduciendo a una mayor cada de la turgencia y al cierre de los estomas.

Genes & Dev. (2010) 24: 1695-1708

Ruta de sealizacin del ABA: modelo PYR/RCARPP2CSnRK2. En ausencia de ABA, las fosfatasas PP2Cs inhiben la actividad proten quinasa (SnRK2). El ABA se une gracias a dmeros intracelulares PYR/PYL, que se disocian para formar los complejos Receptor ABAPP2C. La formacin del complejo inhibe la actividad de la fosfatasa PP2C, permitiendo la activacin de SnRK2s. Se han identificado varias dianas de SnRK2, tanto en la membrana plasmtica como en el ncleo, lo que lleva al control de canales inicos, segundos mensajeros y expresin gnica. Las conexiones en rojo indican interaccin inhibidora. SLAC1, canal aninico de eflujo; KAT1, canal de influjo de potasio; RbohF, RESPIRATORY BURST OXIDASE HOMOLOG F (enzima NADPH oxidasa, generadora de ROS; Factores de transcripcin: ABI5 (ABA insensitive); AREB, ABA-RESPONSIVE ELEMENT-BINDING FACTOR..

Membrana plasmtica

Retculo endoplasmtico

Bomba H

Ruta de sealizacin del ABA en el cierre de los estomas

Canal de Ca

Ca
Ca 3 K 2
1

[Ca2+]i
Canales A
Poro

ABA

activacin Inhibicin

K
Canal entrada K Vacuola

K A
Canal salida K

Bomba H del tonoplasto

Canal salida Aniones (Cl, Malato)

El ABA, sintetizado en respuesta a un dficit hdrico, se une a Receptores (R) presentes en las clulas guarda e inicia una cadena de reacciones (1,2,3) que llevan a un incremento en la concentracin de Ca2+ en el citoplasma (se activan canales en membrana plasmtica, Retculo y Vacuola). El incremento en Calcio causa: 1) la inhibicin de la bomba de protones; 2) la inhibicin de los canales de entrada de K; 3) la activacin de canales de salida de potasio y de aniones (A). Todo ello, aumenta el potencial osmtico de las clulas guarda, lo que lleva al aumento del potencial hdrico y a la salida del agua (disminuye la turgencia y se cierran los estomas).

1. El ABA se une a Receptores y se inicia la ruta de transduccin; para simplificar slo se muestran receptores de Membrana Plasmtica (MP); 2) Formacin de especies reactivas de oxgeno (ROS) que activan canales de Ca en membrana plasmtica (MP); la formacin de cido fosfatdico (PA) mediada por fosfolipasa D (PLD) contribuye a la formacin de ROS; 3) El influjo de Ca inicia los cambios transitorios en el Ca intracelular y promueve la salida de Ca desde la vacuola; 4) El ABA estimula la produccin de NO, que incrementa los niveles de ADP-ribosa cclica (cADPR); 5) El ABA incrementa los niveles de IP3 va esfingosina-1-P (S1P), protenas G y fosfolipasas C y D (PLC y PLD); 6) Los incrementos en cADPR e IP3 activan canales de Ca en tonoplasto, liberndose ms Ca desde la vacuola; 7) La subida en Ca intracelular bloquea los canales de entrada de K (K-in); 8) La subida en Ca activa canales de salida de aniones (Cl y Malato) que despolarizan la MP; 9) La bomba de H de la MP es inhibida por el incremento en el pH citoplasmtico provocado por el ABA, lo que despolariza an ms la MP; 10) la despolarizacin de la MP activa canales de salida de K (K-out); 11) Los iones que abandonan las clulas guarda salen primero al citosol desde las vacuolas

Taiz-Zeiger, 2006

Annu. Rev. Plant Biol. 2010. 61:13.113.31

El cierre estomtico inducido por ABA opera a travs de rutas de sealizacin Ca 2+dependientes (parte media y derecha de la figura) y Ca 2+-independientes (izquierda). Abreviaturas: ABA, abscisic acid; PP2C, type 2C protein phosphatase; OST1, OPEN STOMATA 1; RbohD/F, RESPIRATORY BURST OXIDASE HOMOLOGUE D/F; Ica, inward Ca2+ current; AtMRP5, MULTIDRUG RESISTANCE PROTEIN 5; CPK, CALCIUMDEPENDENT PROTEIN KINASE; GCA2, GROWTH CONTROLLED BY ABSCISIC ACID 2; S-type, slow-type; SLAC1, SLOW ANION CHANNEL ASSOCIATED 1; R-type, rapid-type

Cierre estomtico inducido por CO2


El incremento continuado en la concentracin de CO2 en la atmsfera puede causar una reduccin en la apertura de los estomas a escala global. Sin embargo, aun existen muchas lagunas en el mecanismo de cierre estomtico inducido por este gas. Se sabe, no obstante, que como en el caso del ABA, el cierre tambin parece mediado por un incremento en la concentracin de Ca2+ . Adems se ha sugerido que el CO2 promueve la apertura de canales aninicos que median el eflujo de aniones osmoreguladores (cloro y malato, por ejemplo). De especial relevancia a este respecto, son dos trabajos publicados en 2008 en la revista Nature, en los que se demuestra que la protena SLAC1 (Slow anion chanel-associated 1) de Arabidopsis puede estar implicada en el cierre estomtico inducido por el CO2. La protena se localiza en la membrana plasmtica de las clulas guarda y el mutante slac1 tiene ms malato en sus estomas que la planta silvestre y es insensible al CO2. La protena guarda relacin con un transportador de malato de bacterias y hongos. Tambin se se ha publicado otro trabajo en el que se demuestra que un transportador ABC funciona como importador de malato, por lo que puede ser un modulador de la respuesta de los estomas al CO2. Finalmente, otro trabajo reciente sugiere que una MAPK (proten quinasa activada por mitgenos) tambin puede estar implicada en el cierre estomatico inducido por este gas.

CO2 regulator SLAC1 and its homologues are essential for anion homeostasis in plant cells NATURE 452: 483-486 (2008)
The continuing rise in atmospheric [CO2] is predicted to have diverse and dramatic effects on the productivity of agriculture, plant ecosystems and gas exchange. Stomatal pores in the epidermis provide gates for the exchange of CO2 and water between plants and the atmosphere, processes vital to plant life. Increased [CO2] has been shown to enhance anion channel activity proposed to mediate efflux of osmoregulatory anions (Cl and malate2) from guard cells during stomatal closure. However, the genes encoding anion efflux channels in plant plasma membranes remain unknown. Here we report the isolation of an Arabidopsis gene, SLAC1 (SLOW ANION CHANNEL-ASSOCIATED 1, At1g12480), which mediates CO2 sensitivity in regulation of plant gas exchange. The SLAC1 protein is a distant homologue of bacterial and fungal C4-dicarboxylate transporters, and is localized specifically to the plasma membrane of guard cells. It belongs to a protein family that in Arabidopsis consists of four structurally related members that are common in their plasma membrane localization, but show distinct tissue-specific expression patterns. The loss-of-function mutation in SLAC1 was accompanied by an over-accumulation of the osmoregulatory anions in guard cell protoplasts. Guardcell-specific expression of SLAC1 or its family members resulted in restoration of the wild-type stomatal responses, including CO2 sensitivity, and also in the dissipation of the over-accumulated anions. These results suggest that SLAC1- family proteins have an evolutionarily conserved function that is required for the maintenance of organic/inorganic anion homeostasis on the cellular level.

SLAC1 is required for plant guard cell S-type anion channel function in stomatal signalling NATURE (2008) 452: 487-491
Stomatal pores, formed by two surrounding guard cells in the epidermis of plant leaves, allow influx of atmospheric carbon dioxide in exchange for transpirational water loss. Stomata also restrict the entry of ozonean important air pollutant that has an increasingly negative impact on crop yields, and thus global carbon fixation and climate change. The aperture of stomatal pores is regulated by the transport of osmotically active ions and metabolites across guard cell membranes. Despite the vital role of guard cells in controlling plant water loss, ozone sensitivity and CO2 supply, the genes encoding some of the main regulators of stomatal movements remain unknown. It has been proposed that guard cell anion channels function as important regulators of stomatal closure and are essential in mediating stomatal responses to physiological and stress stimuli. However, the genes encoding membrane proteins that mediate guard cell anion efflux have not yet been identified. Here we report the mapping and characterization of an ozone-sensitive Arabidopsis thaliana mutant, slac1. We show that SLAC1 (SLOW ANION CHANNEL-ASSOCIATED 1) is preferentially expressed in guard cells and encodes a distant homologue of fungal and bacterial dicarboxylate/malic acid transport proteins. The plasma membrane protein SLAC1 is essential for stomatal closure in response to CO2, abscisic acid, ozone, light/dark transitions, humidity change, calcium ions, hydrogen peroxide and nitric oxide. Mutations in SLAC1 impair slow (S-type) anion channel currents that are activated by cytosolic Ca2+ and abscisic acid, but do not affect rapid (R-type) anion channel currents or Ca2+ channel function. A low homology of SLAC1 to bacterial and fungal organic acid transport proteins, and the permeability of S-type anion channels to malate suggest a vital role for SLAC1 in the function of S-type anion channels.

The ABC transporter AtABCB14 is a malate importer and modulates stomatal response to CO2 Nature Cell Biology (2008) 10: 1217-1223 Carbon dioxide uptake and water vapour release in plants occur through stomata, which are formed by guard cells. These cells respond to light intensity, CO2 and water availability, and plant hormones. The predicted increase in the atmospheric concentration of CO2 is expected to have a profound effect on our ecosystem. However, many aspects of CO2dependent stomatal movements are still not understood. Here we show that the ABC transporter AtABCB14 modulates stomatal closure on transition to elevated CO2. Stomatal closure induced by high CO2 levels was accelerated in plants lacking AtABCB14. Apoplastic malate has been suggested to be one of the factors mediating the stomatal response to CO2 and indeed, exogenously applied malate induced a similar AtABCB14-dependent response as high CO2 levels. In isolated epidermal strips that contained only guard cells, malate-dependent stomatal closure was faster in plants lacking the AtABCB14 and slower in AtABCB14-overexpressing plants, than in wildtype plants, indicating that AtABCB14 catalyses the transport of malate from the apoplast into guard cells. Indeed, when AtABCB14 was heterologously expressed in Escherichia coli and HeLa cells, increases in malate transport activity were observed. We therefore suggest that AtABCB14 modulates stomatal movement by transporting malate from the apoplast into guard cells, thereby increasing their osmotic pressure.

Silencing of NtMPK4 impairs CO2-induced stomatal closure, activation of anion channels and cytosolic Ca2+ signals in Nicotiana tabacum guard cells The Plant Journal (2008) 55: 698708
Light-induced stomatal opening in C3 and C4 plants is mediated by two signalling pathways. One pathway is specific for blue light and involves phototropins, while the second pathway depends on photosyntheticaly active radiation (PAR). Here, the role of NtMPK4 in light-induced stomatal opening was studied, as silencing of this MAP kinase stimulates stomatal opening. Stomata of NtMPK4-silenced plants do not close in elevated atmospheric CO2, and show a reduced response to PAR. However, stomatal closure can still be induced by abscisic acid. Measurements using multi-barrelled intracellular micro-electrodes showed that CO2 activates plasma membrane anion channels in wild-type Nicotiana tabacum guard cells, but not in NtMPK4silenced cells. Anion channels were also activated in wild-type guard cells after switching off PAR. In approximately half of these cells, activation of anion channels was accompanied by an increase in the cytosolic free Ca2+ concentration. The activity of anion channels was higher in cells showing a parallel increase in cytosolic Ca2+ than in those with steady Ca2+ levels. Both the darkness-induced anion channel activation and Ca2+ signals were repressed in NtMPK4-silenced guard cells. These data show that CO2 and darkness can activate anion channels in a Ca2+-independent manner, but the anion channel activity is enhanced by parallel increases in the cytosolic Ca2+ concentration. NtMPK4 plays an essential role in CO2and darkness-induced activation of guardcell anion channels, through Ca2+-independent as well as Ca2+dependent signalling pathways.

Annu. Rev. Plant Biol. 2010. 61:13.113.31

Modelo simplificado de la ruta de sealizacin que conduce al cierre de estomas inducido por concentraciones elevadas de CO2. Por el momento se desconoce donde se sita el sensor inicial del CO2, aunque tanto las clulas guarda como las del mesofilo pueden estar implicadas En este modelo, la protein quinasa HT1 y el transportador de malato ABCB14 funcionan como reguladores negativos (color rojo), mientras que las anhidrasas carbnicas CA1 y CA2, la protein quinasa GCA2, y el canal aninico SLAC1 funcionan como mediadores positivos (color verde) del cierre estomtico inducido por concentraciones elevadas de CO2. Notar la convergencia con la sealizacin del ABA. Abreviaturas: HT1, HIGH LEAF TEMPERATURE 1; GCA2, GROWTH CONTROLLED BY ABSCISIC ACID 2; CA, CARBONIC ANHYDRASE; SLAC1, SLOW ANION CHANNEL ASSOCIATED 1.

Intact plant MRI for the study of cell water relations, membrane permeability, cellto-cell and long-distance water transport
Journal of Experimental Botany (2007) 58: 743756, 2007 Water content and hydraulic conductivity, including transport within cells, over membranes, cell-to-cell, and long-distance xylem and phloem transport, are strongly affected by plant water stress. By being able to measure these transport processes non-invasely in the intact plant situation in relation to the plant (cell) water balance, it will be possible explicitly or implicitly to examine many aspects of plant function, plant performance, and stress responses. Nuclear magnetic resonance imaging (MRI) techniques are now available that allow studying plant hydraulics on different length scales within intact plants. The information within MRI images can be manipulated in such a way that cell compartment size, water membrane permeability, water cell-to-cell transport, and xylem and phloem flow hydraulics are obtained in addition to anatomical information. These techniques are non-destructive and non-invasive and can be used to study the dynamics of plant water relations and water transport, for example, as a function of environmental (stress) conditions. An overview of NMR and MRI methods to measure such information is presented and hardware solutions for minimal invasive intact plant MRI are discussed.

Quantitative NMR flow images of xylem water moving upwards through the hypocotyl of Ricinus communis (a)(d), and phloem water moving downwards to the roots (e)(h). Shown are the volume of stationary water per pixel (a, e), the flow conducting area per pixel (b, f), the average linear velocity per pixel (c, g), and the average volume flow per pixel (d, h). The xylem flow images were calculated from a single flow imaging measurement; the phloem flow images were constructed from seven consecutive individual flow imaging measurements. The differences in the amounts of water per pixel shown in (a) and (e) are due to differences in image matrix size (1283128 versus 64364), slice thickness (3 mm versus 6 mm) and scaling

In Situ Investigation of Leaf Water Status by Portable Unilateral Nuclear Magnetic Resonance Plant Physiology (2009) 149: 16381647 A portable unilateral nuclear magnetic resonance (NMR) instrument was used to detect in field conditions the water status of leaves of herbaceous crops (Zea mays, Phaseolus vulgaris), mesophyllous trees (Populus nigra), and natural Mediterranean vegetation characterized by waterspending shrubs (Cistus incanus) and water-saving sclerophyllous trees (Quercus ilex). A good relationship was observed between NMR signal, leaf relative water content, and leaf transpiration in herbaceous leaves undergoing fast dehydration or slowly developing a drought stress. A relationship was also observed between NMR signal and water potential of Populus leaves during the development of a water stress and when leaves recovered from the stress. In the natural vegetation, the relationship between NMR signal and water status was found in Cistus, the species characterized by high transpiration rates, when measured during a drought stress period and after a rainfall. In the case of the sclerophyllous Quercus, the NMR signal, the relative water content, and the transpiration rate did not change at different leaf water status, possibly because a large amount of water is compartmentalized in cellular structures and macromolecules. The good association between NMR signal and relative water content was lost in leaves exposed for 24 h to dehydration or to an osmotic stress caused by polyethylene glycol feeding. At this time, the transverse relaxation time became longer than in leaves maintained under optimal water conditions, and two indicators of membrane damage, the ion leakage and the emission of products of membrane lipoxygenation [(Z)-3-hexenal, (Z)-3-hexenol, and (E)-2hexenol], increased. These results taken all together give information on the physiological state of a leaf under a developing stress and show the usefulness of the NMR instrumentation for screening vegetation health and fitness in natural and cultivated conditions. It is concluded that the portable unilateral NMR instrument may be usefully employed in field conditions to monitor nondestructively the water status of plants and to assist agricultural practices, such as irrigation scheduling, to minimize stomatal closure and the consequent limitation to plant production.

Funciones integradas de las acuaporinas de las plantas. Se muestran los factores endgenos y ambientales que actan sobre cada una de las funciones indicadas de las acuaporinas. GA3, cido giberlico. Annu Rev Plant Biol (2008) 59: 595-624

Absorcin foliar de agua


Existen diferencias de opinin sobre la importancia de la absorcin del agua por hojas y tallos. Algunos autores sugieren que este mecanismo slo es importante en los musgos, ya que la falta de xilema limita la conduccin desde el suelo, lo que tambin puede ser cierto para plantas epifitas. La importancia del roco y niebla es controvertida; mientras que algunos autores sugieren que puede ser esencial para la supervivencia de herbceas y leosas en regiones ridas, otros cuestionan estas ideas. El incremento de la polucin atmosfrica ha hecho que surjan nuevos problemas ya que diversas sustancias txicas pueden concentrarse en la niebla y nubes, por lo que las hojas de plantas que crecen a latitudes elevadas pueden sufrir daos