Las Integrinas en Progresin del Cncer y Terapias

Integrinas
Qu son?: familia de protenas de adhesin celular ubicadas en la membrana plasmtica. Son
intermediarios en la sealizacin bidireccional por la membrana plasmtica.

Qu hacen?: regulan la adhesin celular y migracin en relacin a la matriz extracelular. Actan en

diversos procesos biolgicos como desarrollo embrionario, reparacin de tejidos, respuesta inflamatoria, angiognesis, y linfangiognesis.

De qu sirve su estudio?: Se han identificado integrinas con roles clave en el crecimiento tumoral. Se
estn investigando antagonistas de integrinas con potencial teraputico. Actualmente se estn investigando antagonistas de las integrinas 5b1, vb3, y vb5 en forma de anticuerpos. Tambin se investigan inhibidores peptdicos en el caso de las integrinas vb3 y vb5.

Las Integrinas estn formadas por subunidades y

ANLISIS DE SUS ESTRUCTURAS EN RELACIN A LA FUNCIN QUE OTORGAN A LA INTEGRINA
Las integrinas son glicoprotenas de membrana heterodimricas1 cuyas subunidades son denominadas y y se encuentran unidas de forma no covalente. La adhesin celular propia de las integrinas est dada por su dominio de unin a cationes divalentes2, que se asocian a estructuras peptdicas de poco tamao. Su unin permite iniciar procesos de migracin, invasin, proliferacin o respuesta celular. Ejemplos de protenas a las que se pueden unir son: - Protenas de la Matriz Extracelular - Miembros de la superfamilia de las inmunoglobulinas - Otras protenas Las subunidades y tienen diferente morfologa, lo que otorga funcionalidad distinta a cada una. Cabe mencionar que la subunidad es ms grande (140 kD) que la subunidad . Ambas subunidades poseen: DOMINIO EXTRACELULAR largo, que ser el lugar de unin a ligandos extracelulares DOMINIO TRANSMEMBRANA de estructura helicoidal, que naturalmente debe ser hidrofbico DOMINIO CITOPLASMTICO corto, que ser el lugar de unin a protenas intracelulares A su vez, en cada subunidad podemos distinguir: CABEZA, en el extremo N-terminal. Las subunidades interactan en esta regin, y el sitio de unin extracelular de la integrina coincide con el sitio de interaccin. COLA/TALLO, que tendr funcin de unin intracelular, dada exclusivamente por la subunidad

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Heterodmero se define como una protena con dos subunidades de estructura distinta. Un catin divalente puede unir molculas con dos valencias (Calcio o Magnesio). El hecho de poder unir cationes a la integrina nos permite denominarla metaloprotena.

El polimorfismo de estas subunidades (18 tipos de subunidades y 8 tipos de subunidades ) permite 24 combinaciones posibles. De su conformacin depender la afinidad por diferentes elementos proteicos de la matriz extracelular o bien protenas de la superficie extracitoplasmtica. Un ejemplo de esto es la combinacin entre la subunidad 5 con la 1, especfica para la protena de la MEC fibronectina

CABEZA: SITIO DE UNIN A LIGANDOS EXTRACELULARES

La cabeza de la subunidad aporta con un dominio de estructura hlice-enrollada (en ingls, dominio -propeller3), que es usualmente el lugar de unin a los ligandos extracelulares, usualmente 4 cationes divalentes. Esta subunidad se une a la otra por medio del -propeller. La unin con ligandos extracelulares, en algunos tipos de subunidad , est dado por el dominio I (Interactivo, de ah su nombre). La cabeza de la subunidad se asocia a la de la subunidad . Su dominio, el I-like (smil al dominio I), hace de sitio de unin a ligandos extracelulares cuando el dominio I no existe en la subunidad .

ACTIVACIN DE LA INTEGRINA

Y DINMICA DE LA COLA

Una integrina inactivada tiene las colas aproximadas y el dominio de unin extracelular unido a la membrana, estando de esta manera bloqueado. Cuando la integrina se activa, su estructura se despliega y elonga (la imagen de arriba muestra una integrina activada). Las partes citoplasmticas de las colas se apartan para poder interactuar independientemente con protenas intracelulares. Cola citoplasmtica de la cabeza Su rol no es del todo claro, pero se relaciona con regulacin de la transduccin de seales. Cola citoplasmtica de la cabeza Interacta con protenas del citoesqueleto:
-

TALINA (indirectamente con VINCULINA y TENSINA) lfa-ACTININA (indirectamente con ACTINA)

Interacta con quinasas

FAK (quinasa de adhesin focal)

Estos elementos son intermediarios de la unin con el citoesqueleto en las placas de adhesin focal. Cabe mencionar las regiones THIGH, CALF-1 y CALF-2, conformantes de la subunidad y los dominios EGF de la subunidad , que corresponden a la parte extracitoplasmtica de la cola (CALF-2 tiene una porcin citoplasmtica y otra extracelular).
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No confundir: -propeller es el nombre de la estructura, pero esta regin sigue siendo parte de la subunidad

Regulacin en la funcin de las integrinas

ES DADA POR LA REGULACIN EN LA EXPRESIN GNICA
La ltima afirmacin se puede comprobar porque podemos encontrar diferentes estados de expresin gnica segn el estado proliferativo de una clula4. En clulas endoteliales en estado de quiescencia (fase G0, sin proliferacin), no hay expresin significativa de las protenas precursoras de integrinas. En clulas endoteliales en angiognesis5, las integrinas 51, 41 y v3 estn expresadas (regulacin positiva de su traduccin) en respuesta a los factores de crecimiento angiognicos.

TAMBIN ES REGULADA POR UN PROCESO LLAMADO MODULACIN DE AFINIDAD

La modulacin de afinidad se basa en la posibilidad de inactivar estructuralmente a las integrinas, como vimos anteriormente. Por ejemplo, las integrinas 41 y 2 estn expresadas en los leucocitos, pero en estado inactivado Las plaquetas en circulacin tienen niveles altos de aIIb3 inactivadas Factores de regulacin de integrinas: Exposicin de plaquetas a TROMBINAS
Activa a la aIIb3 y permite su unin a talina (intracelular) y fibringeno (extracelular)

Exposicin de plaquetas a COLGENO en pared vascular Reconocimiento de mediadores de la RESPUESTA INFLAMATORIA por clulas T

Producen cadenas de transduccin que terminarn favoreciendo la activacin de las integrinas (reconocimiento efectivo de sus ligandos) y la consecuente unin a los tejidos blanco

Notar que los ejemplos de supresin/inactivacin de integrinas son de clulas sanguneas, puesto que no deben estar insertadas en la MEC sino circulantes por el plasma. 5 Las integrinas son importantes en este proceso pues su inhibicin farmacolgica detiene la angiognesis.

Las integrinas ayudan a regular la migracin celular

ESPECIFICIDAD POR LIGANDOS
La regulacin de la migracin est dada, bsicamente, por el control de la adhesin a la MEC, lminas basales y a otras clulas. Existen integrinas, en cuanto a sus ligandos, ms especficas que otras: Integrinas especficas
por ejemplo, a51, que solo reconoce fibronectinas

Integrinas que unen diferentes ligandos:

por ejemplo, av3 une vitronetina, fibringeno, colgeno denaturado o proteolizado y otras protenas de la matriz.

Integrinas que unen el tripptido Arg-Gly-Asp (motivo RGD):

por ejemplo, av3, a51, aIIb3

Integrinas que unen secuencias peptdicas cortas:

por ejemplo a41, que reconoce estructuras en fibronectina a la cual fue aplicado splicing alternativo.

La imagen nos muestra la adhesin de protenas a la MEC mediada por integrinas (derecha).

A la izquierda vemos como factores quimiotcticos (presentes en la sangre, favorecen la migracin a un foco de infeccin) se unen a integrinas especficas, permitiendo la migracin. Un ejemplo de factor quimiotctico es el EGF (endothelial growth factor).

FUNCIN EN TRANSDUCCIN DE SEALES

Las integrinas se diferencian de los receptores de factores de crecimiento en el hecho de que no tienen actividad enzimtica intrnseca. La transduccin de seales viene dada, entonces, por su unin a quinasas y protenas adaptadoras en los complejos de adhesin focal. Un ejemplo de regulacin es la activacin de GTPasas Rho y Rac, las cuales desencadenarn una cadena seales, junto con permitir la adhesin de filamentos de actina al complejo de adhesin. Otra de las consecuencias de esto ltimo es la entrada al ciclo celular, que ocurre a causa de la estimulacin de factores de transcripcin de ciclinas. La inhibicin de la interaccin integrina-ligando, entonces: INHIBE LA MIGRACIN Por inhibicin de la adhesin a la MEC, por lo que la clula no podr unirse a la MEC de un nuevo tejido INHIBE LA PROLIFERACIN Porque la clula no podr salir de su estado de arresto, o bien, no podr avanzar en el ciclo celular. Los antagonistas de la a51 suprimen la migracin celular hacia la vitronectina, no su capacidad de unin. Esto explica que los antagonistas afectan la maquinaria de migracin y no a la integrina como receptor.

Adems los inhibidores activan a Proteina Kinasa A (PKA), afectando la formacin de fibras del citoesqueleto. A pesar de esto, algunos estudios han afirmado que algunos tipos de clulas tumorales pueden migrar ocupando movimiento ameboide, mecanismo que no requiere de las integrinas para funcionar (por lo tanto, existen tumores en los cuales la inhibicin de integrinas no afecta).

La unin de integrinas promueve la supervivencia celular.

RELACIN DE ADHESIN AL SUSTRATO Y APOPTOSIS
La unin al medio extracelular es de gran importancia para la sobrevida de las clulas, puesto que la prdida de contacto con el sustrato, o bien la adhesin a un sustrato no especfico (por ejemplo, unin a poli-L-Lisina en medios de cultivo) inducen la apoptosis. Este no es el caso en clulas tumorales. La razn por la cual algunas clulas tumorales no dependen de la adhesin es la acumulacin de mutaciones en factores de supervivencia: - Regulacin positiva de Bcl2 - Inhibicin de la accin de la p53 Adems, se ha visto en estudios que la prdida de ligandos especficos para las clulas contrae la muerte celular, a pesar de presentar la unin a otros factores. Como ejemplo de supervivencia tumoral dependiente de integrinas tenemos la expresin de av3 y a51 en clulas endoteliales, que al no estar ligadas activan a la PKA, que induce la muerte celular al activar las caspasas 3 y 8. Como conclusin a esto, podemos decir que determinadas integrinas determinan la supervivencia al estar ligadas y la apoptosis al no estar ligadas, mientras que otras tienen solamente funcin de anclaje.

Progresin del cncer en relacin a integrinas

El cncer tiene como caracterstica la proliferacin anmala de una poblacin celular a la vez del crecimiento del microambiente tumoral, consistente en todo lo que lo rodea: clulas endoteliales, endoteliales linfticas, fibroblastos y clulas del sistema inmune. Se considera a la angiognesis esencial para la supervivencia de un tumor, mientras que la linfangiognesis (crecimiento de vasculatura linftica) importante para la metstasis. El crecimiento, como ya vimos, y los procesos de generacin vascular estn mediados por integrinas especficas.

INVASIN TUMORAL
La metstasis funciona mediante: - Invasin directa a tejidos cercanos - Intravasacin a capilares sanguneos o linfticos A la vez, esta migracin espontnea puede suceder por cambios en la expresin de integrinas, proteasas o alteracin en cascadas de seal.

La siguiente tabla muestra diferentes evidencias de la relevancia de integrinas en la metstasis: Integrina av3 Integrina 6 Integrina 31 Integrina v6 Melanoma con metstasis a pulmn y hueso Metstasis de cncer de mama a nodos linfticos Su expresin tiene relacin a cncer de cuello y de mamas. En el ltimo, 6B4 trae mayor prevalencia de metstasis Se relaciona a metstasis pulmonar, por su afinidad a la Laminina-5, presente en la vasculatura pulmonar. El cambio de expresin de V5 a V6 promueve la transicin epitelio-mesnquima, pronstico de carcinoma agresivo de colon

ANGIOGNESIS TUMORAL
La angiognesis es esencial para los tejidos en crecimiento. Con esto nos podemos referir a tejidos en desarrollo embriolgico como a tumores cancerosos. Este proceso ocurre a partir de vasos ya existentes o bien clulas con capacidad progenitora de la mdula sea, adems inducidos por factores de crecimiento, como es el VEGF (vascular endotelial growth factor). La protena fibronectina, de la MEC, es importante en la angiognesis, lo que nos dice que el crecimiento vascular depende de la fijacin celular. Esta protena se ve ms expresada durante recuperacin de tejidos, aterosclerosis e hipertensin. Evidencias de la importancia de la fijacin celular para el proceso de angiognesis: Subunidades especficas Subunidad v Su eliminacin trae muerte in tero o bien muerte temprana por malformaciones de la vasculatura cerebral Su eliminacin no se ha asociado a defectos cardiovasculares Su eliminacin en ratas se asoci a la disminucin de angiognesis.

Subunidades 3 o 5 Cabeza corta de la Subunidad 4 Fibronectina Ratones sin fibronectina nacen con defectos relacionados a malformaciones vasculares. Sus inhibidores en forma de anticuerpo bloquean la angiognesis. Integrina 51 Su eliminacin en el desarrollo induce defectos en la formacin vascular y la incapacidad de crear estructuras con forma de vaso ex vivo. Su funcin es la asociacin del msculo liso a la tnica endotelial Integrina 41 Su prdida se relaciona a malformaciones articas, del corazn y otras estructuras vasculares Integrinas 11 Su inhibicin reduce la angiognesis mediada por VEGF y 21 Podemos concluir que la v3 y la 51 son integrinas cuya expresin tiene gran relacin con la angiognesis. La expresin de estas integrinas est regulada por el factor de transcripcin Hox D3, quien adems de promover la regulacin de las integrinas, regula a la uPA (urokinase-type plasminogen activator), otra molcula importante en el mecanismo angiognico. Adems, como ya habamos mencionado, estas dos integrinas, al no estar ligadas a la MEC, activan a la PKA, que activa al sistema de caspasas, que causa apoptosis.

LINFANGIOGNESIS
Su nacimiento viene de los vasos del sistema venoso, y en este caso su formacin es de clulas endoteliales sin pericitos o msculo liso. Esta estructura permite un paso fcil de clulas tumorales y del sistema linftico . Es por esto que los linfonodos son los primeros en recibir metstasis tumorales. Gracias a la posibilidad de identificar vasos linfticos, dado por el reciente descubrimiento del factor de transcripcin Prox-1 y su homlogo, el LYVE-1 (lymphatic vessel hyaluronan receptor-1), se han podido estudiar los mecanismos linfangiognicos. Los factores de crecimiento VEGF-C y VEGF-D (expresados por clulas o macrfagos tumorales) promueven la formacin de receptores de factores de crecimiento (VEGFR-3, por ejemplo) en clulas endoteliales del vaso, promoviendo as la linfangioegnesis y la migracin tumoral. Se sabe poco de la funcin de las integrinas en este proceso, pero la 91 est expresada en clulas endoteliales linfticas, por lo que su supresin ha llevado a muerte temprana debido a quilotrax, lo que indica una inminente relacin con la linfangiognesis en desarrollo embrionario. A la vez, se ha asociado un factor de crecimiento linftico (VEGF-A) con la expresin de 1 y 2 en proceso de reepitelizacin de heridas.

Inhibidores de Integrinas
Y SU TESTEO COMO POSIBLES AGENTES ANTI-CANCERGENOS
La alta exposicin de los receptores endoteliales a la sangre entrega una posibilidad importante para la aplicacin de agentes anti-cancergenos para la inhibicin de la angiognesis. Es por esto que inhibidores peptdicos y de forma de anticuerpos se encuentran en perodo de prueba.

INHIBIDORES EN FORMA DE ANTICUERPOS

Inhibidores en forma de anticuerpo de v3, v5 y 51 son posibles inhibidores de angiognesis tumoral. Vitaxina Inhibidor v3 Voloxicimab Inhibidor 51 Centocor
Anti-51/ v3 Inhibidores v
Reconocen RGD En pruebas Fase II En pruebas Fase II Pronto a Fase I Experimentacin animal Experimentacin animal

Inhibe metstasis de melanoma y cncer de prstata Inhibe metstasis de melanoma y cncer renal. Inhibe angiognesis en animales. Inhibe metstasis de cncer de mama Inhibe mieloma mltiple y ostelisis asociada.

La 41 es importante en la promocin de resistencia a la quimioterapia en leucemia linfoctica y mieloma mltiple. Esto se explica por la supervivencia adquirida de clulas hematopoyticas en la mdula sea, entregada por su habilidad de unirse a fibronectina. Recordemos que la fijacin es estimuladora del ciclo celular.

Inhibidores 41

INHIBIDORES EN FORMA DE PPTIDOS

Se basa en la insercin de ligandos alternos para saturar los dominios de unin de las integrinas. Cilengitida
Pptido cclico, antagonista v3/ 51 En pruebas Fase II En pruebas Fase II Pronto a Fase I

Inhibe glioblastoma, no se han encontrado dosis lmite. Inhibe carcinoma de clulas escamosas, habiendo generado remisin de tumor reincidente de 15 cm. Inhibe angiognesis en animales.

Otros inhibidores v3/ 51 Pptidos con RGD cclico

Unin a subunidad v

INHIBIDORES DE MOLCULA PEQUEA

No se han desarrollado inhibidores de molcula pequea para cncer, pero s para asma, especficamente de la integrina 41. Se han descrito inhibidores de la integrina 43 como posible frmaco para metstasis sea de cncer de mama.

INHIBIDORES EN FORMA DE NANOPARTCULAS

Las nanopartculas son vehculos en forma de lpido, carbono o silicona, de menos de 100 nm de dimetro. Se han estudiado nanopartculas basadas en lpidos para atacar al sistema de angiognesis mediado por la v3. Estas nanopartculas miden 40 nm y llevan un gen Raf mutante6 plasmdico, cuya expresin causa la apoptosis celular. La eficacia de estas nanopartculas est dada por la unin selectiva que presentan, puesto que las nanopartculas liberan su contenido clulas que expresan el v3

Cuadro: enfoque diagnstico basado en Integrinas

La disponibilidad de integrinas endoteliales permite la unin de factores accesorios a la imagenologa. Enfoques diagnsticos basados en PET (Tomografa de Emisin de Positrones), RM y ultrasonido estn en proceso de evaluacin. Un ejemplo de esta aplicacin es el uso de dipptidos con secuencias RGD ocupadas para unirse a integrinas v3, mostrando clulas tumorales en cncer de pulmn en ratones. Tambin se ha ocupado para diagnosticar angiognesis tumoral en cerebro con glioblastoma ortotpico. Otra tcnica til para el estudio diagnstico es la inmunohistoqumica, donde se ha mostrado eficacia en el diagnstico ocupando la integrina v3. Tambin se est estudiando la integrina 41 como indicador de cncer de mama. La imagen muestra un estudio de pptidos RGD marcados con Cobre, donde se puede observar la integrina v3 expresada en cncer de pulmn focalizado en el lobo superior del hgado con metstasis local a diafragma, hgado y el pulmn contralateral.

FIN DEL PAPER.

Recordar que la Raf normal se relaciona con los mecanismos de activacin de proliferacin celular, por lo cual una versin mutada podra evitar una proliferacin anmala como la del cncer y favorecer la apoptosis.

Informacin relevante para la presentacin

Otras afecciones relacionadas con integrinas
ARTRITIS REUMATOIDE
Relacionada con la sobreexpresin de integrinas y CAM.

Nuevos avances Textos de referencia

a) The Tail of Integrins, Talin, and Kindlins, Markos Moser, Kyle R. Legate, Roy Zent and Reinhard Fassler estudio de regulacin intracelular de integrinas mediada por estas protenas b) PKC Regulation of an alpha-5 integrin-ZO-1 complex Controls Lamellae Formation in Migrating cancer cells, Saara Tuomi, Anja Mai, Johna Nevo, Jukka O. Laine, Vesa Villkki cmo regulan las PKC la funcin de las integrinas c) Loss of E-cadherin Promotes Ovarian Cancer Metastasis via a5-Integrin, which is a therapeutic target, Kenjiro Awada, Anirban Mitra, A. Reza Radjabi, Vinay Bhaskar cmo influye la prdida de E-caderina d) Integrin signalling adaptors: not only figurants in the cancer story , Sara Cabodi, Mara del PIlar Camacho-Leal, Paola Di Stefano e) Integrin-TGFb crosstalk in fibrosis, cancer and wound healing, Coert Margadant, Arnoud Sonnenberg f) Integrin-linked kinase has a critical role in ErbB2 mammary tumor progression: implications for human breast cancer, S M Pontier, L Huck, D E White, J Rayment g) Integrin-regulated FAK-Src signaling in normal and cancer cells Mitra SK, Schlaepfer DD FAK (Focal Adhesion Kinasas), una tirosina quinasa no receptora. Como esta molcula une a protenas adaptoras, de forma de activarse y producir crecimiento/metstasis. h) The initial steps of myofibril assembly: integrins pave the way John C. Sparrow & Frieder Schck La miofibrillogenesis dependiente de adhesion clula matriz y las integrinas como punto de inicio de este proceso. i) Integrins modulate relapse to cocaine seeking LO TENGO BAJADO EN EL PC importancia de las integrinas en la recada en la bsqueda de cocana :/ MUY INTERESANTE j) Integrins regulate mirotubule nucleating activiy of centrosome through Mitogen-activated Protein Kinase / Extracellular Signal-regulated Kinase Kinase /Extracellular Signal-regulated Kinase (MEKERK) Signaling como una integrina mutada elimina la sealizacin MEK/ERK y reduce la nucleacin de microtbulos

k) Integrins in immunity LO TENGO BAJADO EN EL PC La habilidad de penetrar otras clulas por parte de los linfoides depende de la integrina l) Endocytic transport of integrins during cell migration and invasin control de la migracin de integrinas y el uso de sealosomas el tranposrte especfico endoctico-exoctico m) Cellular adaptation to mechanical stress: role of integrins, Rho, cytoskeletal tension and mechanosensitive ion channels LO TENGO BAJADO EN EL PC n) Regulation of integrin endocytic recycling and chemotactic cell migration by sintaxin 6 and VAMP3 Interaction o) Anti adhesion molecule therapy for Inflammatory bowel disease LO TENGO BAJADO EN EL PC p) Roles for MicroRNAs in the regulation of cell adhesin molecules Lo tengo bajado en el PC} q) Adhesio molecues in Leukocyte Emigration LO TENGO BAJADO EN EL PC r) Bets1-Integrins are required for hippocampal AMPA Receptor-Dependent syanptic transmission, synaptic plasticity and working memory LO TENGO BAJADO s) Alpha4 integrins and vascular cell adhesion molecule-1 play a role in sympathetic innervation of the heart LO TENGO BAJADO EN EL PC t) Beta1 Integrins in muscle, but not in motor neurons, are required for skeletal muscle innervation LO TENGO BAJADO u) Integrin requiremenet for Hippocampal synaptic plasticity and spatial memory LO TENGO BAJADO EN EL PC muy interesante