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Cintica de Enzimas

Cintica de Michaelis-Menten Determinao de kcat (constante cataltica) Atividade especfica Inibidores de enzimas: tipos e cinticas - Inibio competitiva - Inibio no-competitiva

Equao da cintica enzimtica

E + S

k1 k-1

ES

k2 k-2

E + P

Existe quatro diferentes passos para a reao enzimtica: Estes passos seguem o modelo de Michaelis-Menten, explicando a cintica de V vs S. 1. Enzima e substrato se unem para formar o complexo ES: 2. A reao reversa, k-2, improvvel 3.[ES] constante, estado de equilbrio: d[ES]/dt = 0 4. [E] <<<[S]

E + S

k1 k-1

ES

k2

E + P

taxa de produo: V0 = k2[ES] [ES] existe por pouco tempo e dificil de ser detectado. Como ns podemos

descrever a cintica enzimtica se no podemos medir diretamente [ES]? taxa de formao de ES = k1 [E] [S] taxa de clivagem ES = k-1 [ES] + k2 [ES] no estado de equilbrio, taxa de formao de ES = taxa de clivagem ou [ES]/dt = 0 k1[E][S] = (k-1 + k2)[ES] [E][S]/[ES] = (k-1 + k2)/k1 = KM KM a constante de Michaelis-Menten

E + S

k1 k-1

ES

k2

E + P

[ES] = [E][S]/KM se [E] << [S], [Slivre] ~ [Stotal] [Elivre] = [Etotal] - [ES] [ES] = ([Et][S] - [ES][S]) KM [ES] + [ES][S] = [Et][S] = [ES](1 + [S]/KM) KM KM Dividir por (1 + [S]/KM)

E + S

[ES] =

k1 k-1

ES
[Et][S]

k2

E + P

[Et][S]/KM = (KM/KM + [S][KM)

[S] + KM

Se lembre que V0 = k2[ES] so: V0 = k2[Et][S] [S] + KM At Vmax, todas as enzimas ligadas ao substrato, ou [Et] = [ES] So Vmax = k2[Et] Therefore:

V0 = Vmax[S] [S] +KM

Equao de Michaelis-Menten.

Termodinmica da catlise enzimtica

Ao de enzima

Atividade enzimtica
Unidade de atividade enzimtica :1.0 unidade de atividade enzimtica definida como a quantidade de enzima que causa a transformao de 1.0 mol of substrato min -1 em 25 oC em condies ideais. atividade: quantidade total de unidades de atividade enzimtica na amostra. atividade especifica : quantidade de unidades / mg-1 protein.

Regulao da atividade: Disponibilidade do substrato Regulao da atividade da enzima

Mudanas da atividade enzimtica e da atividade enzimtica durante a purificao da enzima:

Myocardial infarction Key Indicators Creatine Kinase Lactate Dehydrogenase-LDH H4 > H3M isozyme (flip) Supportive Indicators Aspartate transaminase-AST normal Alanine transaminase ALT

Creatina : Creatina quinase and infarto do miocrdio Fosfocreatina fornece uma reserva de alta energia para formao de ATP (em clulas musculares e nervosas) ATP + creatina deltaG0= +12,6 kJmol-1 Ensaios para determinao de atividade enzimtica fosfocreatina + ADP + H+

Saturao da enzima com substrato

A. Low [S] B. 50% [S] or Km C. High, saturating [S]

Curva de Michaelis-Menten

Vo (velocidade inicial) depende da concentrao da enzima

Curva de Lineweaver-Burke (linearizao da curva de Michaelis-Menten)

1/vo = (Km / vmax) 1/[S] +1 / vmax

-1/Km

Curva de progresso para uma reao simples catalisada por enzimas [So]

[E]T

Concentrao

Cintica de Michaelis-Menten para inibio competitiva Vo = Vmax [S]/ (Km + [S]); muda Km

= 1 + [I]/KI

Grfico de Lineweaver-Burke: Inibio no-competitiva Vo = Vmx [S]/ (Km + [S]); muda Km muda Vmax

Ensaio enzimtico da Invertase C12H22O11 + H2O Sacarose 1. DNS C6H12O6 + C6H12O6 Glicose Frutose 2. Reao de Fehling