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UNIVERSIDAD DE SONORA DIVISIN DE CIENCIAS BIOLGICAS Y DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUMICO-BIOLGICAS

LABORATORIO DE INTEGRACIN CLNICO I LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD

PROFESORA: CHAPARRO PEA AIDA

PRCTICA No. 4 DETERMINACIN DEL COEFICIENTE DE VARIACIN EN LA MEDICIN DE VOLUMENES

Laboratorio de control calidad variacin

Determinacin del coeficiente de

OBJETIVO
El objetivo de llevar a cabo esta prctica es el de familiarizarnos con el clculo de las variables estadsticas asociadas a los errores analticos, en especfico el clculo del coeficiente de variacin; adems de observar que el empleo de diferentes instrumentos para realizar las mediciones puede influir notablemente en los resultados.

INTRODUCCIN
Constituye una premisa bsica del control de calidad el hecho de que los valores analticos registrados por el laboratorio deberan corresponder exactamente a los valores correctos o esperados. Se puede asumir que se tienen ciertas muestras de las que se conoce su verdadera concentracin (valor esperado); en el caso ptimo, cuando dichas muestras sean analizadas por el laboratorio, los valores registrados deberan corresponder exactamente a los valores esperados. Dichos valores deberan, pues, quedar comprendidos en una curva de pendiente de 1.00 al expresarlos en una grfica, sin embargo, todas las tcnicas analticas estn sujetas a una serie de imprecisiones analticas o errores. El error se denomina proporcional, por cuanto su magnitud aumenta en proporcin directa a la concentracin del agente analizado en la muestra. Adems de estar sujetos a los errores analticos, las pruebas de laboratorio tambin estn sujetas a la imprecisin o variabilidad aleatoria. El conocimiento de los tipos de error y de variabilidad analtica que afectan un sistema resulta til para la identificacin de sus causas. Por ejemplo, los lmites proporcionales de variabilidad son frecuentemente originados por la imprecisin en la obtencin volumtrica de la muestra. Una pipeta automtica constituye un dispositivo mecnico y, como tal, puede haber cierta cantidad de error en la operacin de sus partes integrantes, que pueden aumentar a medida de que el nmero de partes se incrementa. La variacin en la cantidad de la muestra, determinada mediante dicha pipeta, introduce una variacin en los resultados analticos que resulta proporcional a la concentracin del agente analizado, originando una variabilidad proporcional. De modo similar se observan con frecuencia lmites constantes de variabilidad en tcnicas analticas que se ven influidas por la turbidez de la muestra. La turbidez suele ser independiente de la concentracin del agente analizado, pero puede variar de una muestra a otra haciendo que los resultados se distribuyan entre lmites constantes. En consecuencia, el conocimiento de las diversas fuentes de error analtico y de variabilidad, as como el de los mecnicos que afectan la exactitud y precisin de la lnea operacional, puede ser muy til en la identificacin y correccin de los problemas analticos a medida que stos surgen. Las medidas de dispersin son aquellas que permiten retratar la distancia de los valores de cierta variable a un determinado valor central, o que permiten identificar la concentracin de los datos en un cierto sector del recorrido de la variable. El coeficiente de variacin (CV) es una de las medidas de dispersin que se calcula, se utiliza para comparar la dispersin de las variables que aparecen en unidades diferentes o que corresponden a poblaciones 2

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extremadamente desiguales, no depende de las unidades o del tamao de los datos; ste coeficiente slo sirve para comparar las dispersiones de variables correspondientes a escalas de razn. Para calcular el coeficiente de variacin primero se debe de calcular el promedio y la desviacin estndar de los datos, conociendo stos datos se aplica la siguiente frmula:

A menor coeficiente de variacin en una medicin, se considera que la distribucin de la variable es ms homognea. El coeficiente de variacin (CV) indica, hasta qu punto los valores medidos individuales se acercan el uno con respecto al otro, quiere decir la desviacin aleatoria. El coeficiente de variacin est definido como desviacin estndar en porcentaje, referida al valor medio.

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MATERIALES Y MTODOS
Material 30 tubos de ensaye 1 gradilla Pipetas serolgicas de 5 y 10 mL Micropipetas Pipetas de Sahli de 0.02 mL Procedimiento 1. Se lavaron 30 tubos de ensaye de 13 x 100 mm y se colocaron en una gradilla. 2. A cada tubo se le aadieron 3 mL de agua destilada: a 10 tubos se le aadi esta cantidad de agua con ayuda de una micropipeta (cuyo volumen mximo era de 5000 microlitros), a otros 10 tubos con una pipeta serolgica de 5 mL y a los 10 tubos restantes con una pipeta serolgica de 10 mL. 3. Posteriormente a cada tubo se le adicionaron 0.02 mL de colorante verde vegetal al 2%, tambin se utilizaron diferentes pipetas para este fin: en los tubos a los cuales se le aadi agua con la micropipeta tambin se les aadio el colorante con una micropipeta (cuyo volumen mximo era de 100 microlitros), en los tubos en donde se utiliz la pipeta serolgica de 5 ml se le aadio el colorante con otra pipeta serolgica (cuyo volumen mximo era de 100 microlitros), y por ltimo, en los que se utiliz la pipeta serolgica de 10 mL se les aadio el colorante con ayuda de una pipeta de sahli de 0.02mL. En la siguiente tabla se muestra la relacin de las pipetas que se utilizaron para medir el volumen de agua y del colorante.
Tubo s 1-10 11-20 21-30 Pipeta utilizada para el agua Micropipeta (Vmax = 5 mL) Pipeta serolgica (Vmax = 5 mL) Pipeta serolgica (Vmax = 10 mL) Pipeta utilizada para el colorante Micropipeta (Vmax = 100 microlitros) Pipeta serolgica (Vmax = 100 microlitros) Pipeta de Sahli (Vmax = 0.02 mL)

Reactivos Solucin de colorante verde vegetal al 2% Agua destilada Aparato Espectrofotmetro

4. Cada tubo se agit adecuadamente para obtener una solucin de concentracin homognea en cada uno de los tubos. En este punto es importante que cada tubo se agite de manera adecuada, para buenos resultados y evitar accidentes es preferible agitar un tubo a la vez y no tratar de agitar dos o ms (aunque sean muchos tubos). 5. Por ltimo, se procedi a leer las absorbancias de cada una de las soluciones, stas fueron ledas en un espectrofotmetro a 405 nm. 6. Se anotaron los resultados y se realizaron los clculos correspondientes para obtener el coeficiente de variacin. 4

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RESULTADOS Y OBSERVACIONES
Como ya se mencion anteriormente, se utilizaron tres pipetas diferentes para realizar las mediciones, con el fin de poder observar la diferencia en el grado de error que existe entre ellas. En la tabla 1 se muestran los resultados que se obtuvieron utilizando una micropipeta para medir los 3 mL de agua y una micropipeta para medir los 0.02 mL del colorante verde vegetal.

Tabla 1. Muestra los resultados obtenidos en los primeros 10 tubos. En esta medicin se utilizaron micropipetas, tanto para la medicin del agua destilada como para el colorante vegetal.

CLCULOS ESTADSTICOS 1. Valor medio 2. Desviacin estndar

3. Coeficiente de variacin

4. Lmites de alerta 2 S

5. Lmites de control 3 S

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En los clculos anteriores se puede observar que el coeficiente de variacin es relativamente elevado, lo que significa que hay una alta dispersin de los datos lo cual se refleja en los lmites de control y de alerta. Con las lecturas de las absorbancias obtenidas y los lmites de control y de alerta calculados se puede construir una grfica de Levey-Jennings y observar como estn distribuidos nuestros datos.

Grfica 1.Grfico de Levey-Jennings correspondiente a las primeras 10 mediciones de las absorbancias (en donde se utilizaron micropipetas tanto para medir el agua como el colorante)

En la grfica anterior se puede observar que la distribucin de los datos no es muy buena, inclusive un valor sobrepasa el lmite de control (rea donde no se debera de encontrar ningn valor). Otro aspecto importante a considerar es que la mayora de los datos se encuentran por arriba de la media, en condiciones ptimas debe haber una distribucin mas equitativa entre los datos encontrados por debajo y por arriba del valor medio. En la grfica se puede observar que el primer punto se encuentra sobre la lnea del valor medio, aspecto que es bueno, sin embargo ste punto bueno se anula por los motivos expresados en el prrafo anterior. Lo ideal sera que todos los puntos estuvieran en la lnea media, pero esto es un aspecto talvez imposible para cualquier tipo de medicin, lo que se debe buscar es obtener la mayor cantidad de puntos lo mas cercanos posible al valor medio (sin tener ningn dato por encima o por debajo del lmite de control)

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En la tabla 2 se muestran los resultados obtenidos para la segunda serie de tubos. En este caso se utiliz una pipeta serolgica de 5 mL para medir el agua y una pipeta serolgica de 100 microlitros para medir los 0.02 mL del colorante verde vegetal.

Tabla 2. Muestra los resultados obtenidos en la segunda serie de 10 tubos. En esta medicin se utiliz una pipeta serolgica de 5 mL para la medicin del agua destilada y una pipeta serolgica de 100 microlitros para el colorante.

CLCULOS ESTADSTICOS 1. Valor medio 2. Desviacin estndar

3. Coeficiente de variacin

4. Lmites de alerta 2 S

5. Lmites de control 3 S

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En stos ltimos resultados, al igual que en los resultados de la primera serie de tubos (donde se utiliz micropipetas), el coeficiente de variacin es alto, es un poco mas alto que el obtenido en la primera serie de tubos. A continuacin se muestra la grfica de Levey Jennings de los resultados obtenidos en la segunda serie de tubos, donde se utilizaron pipetas serolgicas.

Grfica 2.Grfico de Levey-Jennings correspondiente a las mediciones de la segunda serie de tubos (para la medicin de volmenes se utilizaron pipetas serolgicas)

En esta grfica se puede observar que hay un punto que sobrepasa el lmite de alerta, al igual que en la grfica 1. Esto nos dice que las mediciones no se realizaron de una manera adecuada, ya que en condiciones ptimas no se debera de encontrar ningn punto que sobrepase el lmite de alerta. Un aspecto que se puede observar en esta grfica, es que hay varios puntos que se encuentran muy cerca del valor promedio, y adems, la distribucin de stos puntos por encima y por debajo del promedio es equitativa, aspecto que no se puede observar en la grfica 1.

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Por ltimo, se leyeron las absorbancias de las soluciones en la tercer serie de tubos. Para preparar esta serie de tubos se utiliz una pipeta serolgica de 10 ml para medir el volumen de agua destilada y una pipeta de Sahli de 0.02 mL para el colorante vegetal. En sta ocasin slo se realizaron 4 mediciones, ya que el colorante se termin y no alcanz para preparar ms tubos. Se obtuvieron los siguientes resultados:

Tabla 3. Resultados obtenidos en la tercer serie de tubos. Para medir los volmenes se utiliz una pipeta de 10 mL (para el agua) y una pipeta de sahli (para el colorante).

CLCULOS ESTADSTICOS 1. Valor medio 2. Desviacin estndar

3. Coeficiente de variacin

4. Lmites de alerta 2 S

5. Lmites de control 3S

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E n

los clculos anteriores se puede observar que el coeficiente de variacin es Grfica 3.Se muestran los resultados en la tercera serie de tubos, slo se se realizaron muy alto, ms alto que el de las obtenidos dos primeras series de tubos. Esto puede 4 mediciones. En este caso se utiliz una pipeta serolgica para medir el agua y una pipeta de sahli deber que nosotros como alumnos no estamos tan familiarizados con las para ela colorante. pipetas Sahli, y nuestro error al medir volmenes en esta clase de pipetas es mayor al que tenemos al medir en pipetas serolgicas o micropipetas. En la grfica de Levey Jennings se puede observar que la distribucin de los datos es buena y ningn dato sobrepasa el lmite de control, pero esto se puede deber a que slo se realizaron 4 mediciones y no las 10 que se deban haber realizado (como en los primeros dos casos, en los cuales si se tuvieron valores fuera del lmite de control). Con respecto a la distribucin de los puntos por arriba y por debajo de la media, se puede observar que hay distribucin buena, hay dos puntos por encima de la media y dos puntos por debajo, como debe ser (una relacin equitativa o simtrica).

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CONCLUSIONES
Con los resultados obtenidos en sta prctica, se pude concluir que todava cometemos ciertos errores al pipetear volumenes. Esto se puede concluir ya que los valores del coeficiente de variacin calculado para los tres casos no fueron muy buenos (pudieron haber sido mejores), y adems, en dos de las tres grficas de Levey Jennings se observan puntos que sobrepasan los lmites de control, aspecto que en condiciones normales no debera de suceder. Comparando los tres coeficientes de variacin calculados, se observa que el mayor valor se obtuvo en la tercer serie de tubos, donde utilizamos pipetas de sahli para medir el volumen del colorante; mientras que el menor coeficiente de variacin se obtuvo en la primer serie de tubos, donde utilizamos micropipetas; quedando el coeficiente de variacin de las mediciones donde se utilizaron pipetas serolgicas en el medio. Esto nos indica que al pipetear con micropipetas tenemos menor grado de error o de dispersin de datos que cuando lo hacemos con pipetas de Sahli, lo cual es lgico, ya que no estamos muy familiarizados con las pipetas de Sahli (las hemos utilizado muy pocas veces), mientras que las micropipetas ya las hemos utilizado varias veces y adems, stas ltimas son mecnicas y el grado de error que se puede obtener es menor que con una pipeta normal, claro, si se utilizan adecuadamente. Una observacin importante es que el coeficiente de variacin que se obtuvo en las mediciones en las que se utilizaron pipetas serolgicas esta muy cerca del valor que se obtuvo para las mediciones en las que se utilizaron nada mas micropipetas, lo cual nos indica que se puede pipetear de una manera similar tanto con micropipetas como con pipetas serolgicas, y si se adquiere la experiencia necesaria, tambin con pipetas de Sahli. En general, se puede concluir que todava cometemos errores en las mediciones de volmenes, pero esos errores deben de ser eliminados lo mas pronto posible, debemos de aprender a pipetear bien con cualquier tipo de pipetas; de eso puede depender que trabajemos en un laboratorio de buena o de mala calidad, lo cual se reflejar en los resultados que le entreguemos al paciente, y muy probablemente en el diagnstico que proporcione el mdico.

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BIBLIOGRAFIA
John Bernard Henry /Diagnstico y tratamiento clnicos por el laboratorio. Tomo I / Editorial Salvat/ Octava Edicin, Espaa 1988/ Pginas: 93-96 http://www.brand.de/es/informaciones-tecnicas/gestion-decalidad/precision/ http://www.liccom.edu.uy/bedelia/cursos/metodos/material/estadistica /med_disp.html http://www.bioestadistica.uma.es/libro/node23.htm l

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