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Mtodos de aislamiento

Mtodos de aislamiento
Tcnicas de Aislamiento de hongos y
Aislamiento de hongos y bacterias

bacterias fitopatgenas.
Aislamiento de flora epiftica, de suelo,

rizosfera.
Unidad de Fitopatologa Dto. de Proteccin Vegetal Facultad de Agronoma. Dr. Pedro Mondino 24 de abril al 5 de mayo de 2012

Fundamentos, aislamientos directos e

indirectos.
Uso de medios selectivos. Uso de cebos.

Aislamiento a partir de tejido vegetal


A partir del tejido vegetal enfermo es posible

Mtodos de aislamiento
Sembrando trozos de tejido vegetal de la zona de

aislar a los patgenos. Se busca tomar trozos de la zona de avance para incrementar las chances de aislar al patgeno. Los trozos de tejido vegetal se someten a una desinfeccin superficial. En el caso de bacterias es posible macerar un trozo de tejido afectado y luego sembrar

avance del patgeno .


Ej: a partir de frutos afectados

Aislamiento a partir de trozos de tejido vegetal


Trozos de tejido afectado de la zona de avance son

Aislamiento a partir de tejido vegetal


Sembrando trozos de tejido vegetal de la zona de

sembrados en medio de cultivo (ej. Madera)

avance del patgeno .

Bistur

Zona de avance

Hipoclorito 1% Siembra en placa

Pinza Agua estril

Aislamiento de bacteria a partir del tejido infectado


Tocando con el ansa en la zona de avance

Aislamiento de bacterias por macerado del tejido vegetal


El tejido afectado es macerado en mortero y

de la infeccin es posible aislar la bacteria.

luego el macerado es estriado en placa.

Aislamiento directo a partir del signo.


Cuando la muestra vegetal presenta signo es

Aislamiento directo a partir del signo.


Cuando la muestra vegetal presenta signo es posible tomar una pequea porcin del mismo y sembrar en una placa con medio de cultivo.

posible tomar una pequea porcin del mismo y sembrar en una placa con medio de cultivo.

Aislamiento directo a partir del signo.


Cuando la muestra vegetal presenta signo es

Aislamiento directo a partir del signo.


Cuando la muestra vegetal presenta signo es posible

posible tomar una pequea porcin del mismo y sembrar en una placa con medio de cultivo.

tomar una pequea porcin del mismo y sembrar en una placa con medio de cultivo.

Aislamiento directo de zooglea

Aislamiento a partir del exudado bacteriano


Un trozo de tallo de una planta afectada vascularmente es

colocado en agua en recipiente con agua o saline esteril.

Ansa

Flujo bacteriano en agua estril

Estriado en placa

Induccin del signo


La aparicin de signo puede ser inducida mediante

Induccin del signo


La aparicin de signo puede ser inducida

cmara hmeda.

mediante cmara hmeda.

Uso de cebos
Trozos de manzana verde son utilizados para

Uso de cebos
Cebos utilizados para aislar Pythium: ptalos de clavel (Dianthus caryophyllus L.) Caamones (Cannabis sativa L.) hervidos. Trozos de zanahoria (Daucus carota L.) Papa (Solanunt tuberosum L.) + agar-agua. Trozos de tomate verde (Lycopersicon esculentum L) Acculas de pino (Pinus spp.).

capturar Phytophthora spp del suelo.

Colonizadores de patgenos
Se pueden encontrar antagonistas colonizando

Colonizadores de esclerotos

naturalmente a los patgenos de plantas.


Se pueden utilizar a los patgenos como cebo

para capturar a sus antagonistas.

Aislamiento a partir de la flora epiftica del fruto

Aislamiento de microorganismos del suelo


La muestra de suelo se suspende en agua estril. Se hacen diluciones 10-1 a 10-10 veces. De cada dilucin se siembran por extensin dos

placas con 100 L (0.1 ml) en medios de cultivo (dependiendo del tipo de microorganismos que queramos aislar) y luego se incuban.
Se aslan colonias separadas de distinta morfologa y

se purifican mediante repiques.

Aislamiento de microorganismos del suelo


Esquema de la metodologa utilizada para aislar a partir

Microorganismos rizofricos.
Microorganismos aislados de la rizosfera de

plantas de tomate.

de suelo.

Cultivos puros
para obtener un cultivo puro se debe inocular o

Mtodos de aislamiento
Para aislar clulas individuales, los

introducir, una sola clula o propgulo de un microorganismo en un medio slido o lquido, esterilizado previamente.

microorganismos han de ser diluidos, debido al gran numero en que normalmente estn presentes. La dilucin se realiza, normalmente, por uno de los siguientes sistemas:

siembra por estra en placa vertido en placa extensin en placa.

Mtodo de extensin en placa


Para que se pueda contar el nmero de

Mtodo de estriado en placa


Esquema prctico del aislamiento de bacterias

colonias en la placa debe estar entre 30 y 300.

Colonias aisladas

Mtodo de extensin en placa


A partir de una suspensin concentrada de

Mtodo de extensin en placa


0,1 ml de la solucin se siembra en superficie y

microorganismos se realizan diluciones seriadas.

se esparce mediante rastrillo de vidrio.

Aislamiento de bacterias
Aislamiento por estriado

Mtodo de extensin en placa


0,1 ml de la solucin se siembra en superficie

y se esparce mediante rastrillo de vidrio.

Mtodo de vertido en placa


0,1 ml de la solucin se siembra en superficie

Cultivos monospricos
Para asegurarnos la homogeneidad gentica de un

y se esparce mediante rastrillo de vidrio.

cultivo de hongos se recurre a la tcnica de cultivo a partir de una nica espora. Los cultivos monospricos se pueden realizar:

sembrando en superficie una suspensin de esporas y luego observando bajo lupa o microscopio repicar. Sembrando diluciones de forma que crezcan colonias aisladas.mm

Cultivos monospricos
Monospricos de Venturia inaequalis.

Metodologa

Metodologa
Monospricos a partir de colonias aisladas de una

Cultivo a partir de punta de hifa


Cuando no es posible disponer de esporas

siembra de una suspensin diluida.

se puede recurrir al cultivo de punta de hifa