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0802_Pruebas

bioquímicas

Apartados de este ejercicio

A. Introducción

Los ensayos bioquímicos tradicionalmente utilizados( las llamadas pruebas bioquímicas convencionales), generalmente determinan la actividad de una vía metabólica de la bacteria (conjunto de reacciones químicas) a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer transforma o no.

Obviamente, en la identificación bacteriana hay que partir de un cultivo puro obtenido en el aislamiento, subcultivando de una colonia bien aislada. Es aconsejable realizar un comprobación efectuando una siembra en placa en la que crezcan únicamente colonias del mismo tipo.

B. Test de la catalasa

Se utiliza este test para identificar microorganismos que producen la enzima catalasa.

El peróxido de hidrógeno es una molécula altamente reactiva que provoca daños en los componentes celulares, puede producirse en los microorganismos por diferentes vías. Los organismos que producen la enzima catalasa son capaces de romper el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno gas.

Reacción:

2H 2 O 2

Catalasa

en agua y oxígeno gas. Reacción: 2H 2 O 2 Catalasa 2H 2 O + O

2H 2 O + O 2 (gas)

La ausencia de burbujas tras añadir el agua oxigenada se considera como resultado negativo.

El test de la catalasa se lleva a cabo de la siguiente forma:

Se siembra en una placa el microorganismo que queremos analizar. Se añade una gota de agua oxigenada (peróxido de hidrógeno) al 3% y se observa el resultado de la reacción.

TEST DE LA CATALASA: RESULTADOS (haga doble clic sobre

la imagen para observar el resultado)

La reacción es catalasa positiva cuando se producen burbujas de oxígeno de forma inmediata al añadir el agua oxigenada.

PRESENCIA DE CATALASA

AUSENCIA DE

CATALASA

CATALASA

C. Test de utilización de citrato

Se utiliza para determinar la capacidad de un microorganismo para usar citrato como única fuente de carbono. Esta reacción es llevada a cabo por la encima citrasa.

El citrato se produce típicamente en el ciclo de Krebs, pero algunos organismos son capaces de usarlo como única fuente de carbono si no hay carbohidratos fermentables presentes. cuando el citrato entra en la célula se hidroliza mediante la citrasa en ácido oxalacético y ácido acético. Este ácido oxalacético se hidrolizará a su vez en ácido pirúvico y CO 2 . Este último dará lugar a la formación de productos alcalinos.

Reacción:

Citrato

Citrasa

de productos alcalinos. Reacción: Citrato Citrasa Ácido oxalacético + Ácido acético Ácido oxalacético

Ácido oxalacético + Ácido acético

Ácido

oxalacético

Ácido oxalacético + Ácido acético Ácido oxalacético Ácido pirúvico + CO 2 El test del citrato

Ácido pirúvico + CO 2

El test del citrato se lleva a cabo utilizando el "agar citrato de Simmons":

El test del citrato se lleva a cabo de la siguiente forma:

 

Se siembra con asa en un tubo con "agar citrato de Simmons". Se incuban los tubos durante 24 horas y se hace la lectura del test.

Este agar contiene citrato sódico como única fuente de carbono y ión amonio como única fuente de nitrógeno. Además contiene azul de bromotimol como indicador de pH. El agar citrato de Simmons es inicialmente de color verde, si el microorganismo es capaz de crecer en este medio y utilizar el citrato se producirán productos alcalinos. El azul de bromotimol por encima de pH 7,6 produce un viraje del medio a azul.

TEST DEL CITRATO: RESULTADOS

 

La reacción es citrato positiva cuando se producen un cambio de color del medio a azul

La reacción es citrato positiva cuando se producen un cambio de color del medio a azul
La reacción es citrato positiva cuando se producen un cambio de color del medio a azul

La ausencia de cambio de color se considera como resultado negativo.

D. Test de la coagulasa

Se utiliza para detectar la capacidad de un microorganismo para coagular el plasma.

El test de la coagulasa en tubo utiliza como sustrato plasma tratado con anticoagulantes para evitar la coagulación espontanea. Los organismos coagulasa positivos activan los mecanismos de coagulación con la enzima coagulasa y esto produce una coagulación del plasma.

Procedimiento del test de la coagulasa:

El test de la coagulasa se lleva a cabo de la siguiente forma:

Se añade una suspensión densa de bacterias a un tubo con plasma tratado. Se incuban los tubos a 37ºC, se observa la coagulación entre las 4 y las 24 horas.

TEST DE LA COAGULASA: RESULTADOS

La reacción es positiva cuando se observa coagulación del plasma.

La reacción es positiva cuando se observa coagulación del plasma.

Si no se produce coagulasa la reacción es negativa y el plasma se queda líquido.

Si no se produce coagulasa la reacción es negativa y el plasma se queda líquido.

E. Test de la urea

Se utiliza para diferenciar organismos capaces de hidrolizar la urea. La enzima responsable de esta hidrólisis es la ureasa.

Este enzima hidroliza la urea (H 2 N-CO-NH 2) y origina amonio, lo que producirá un incremento del pH que puede detectarse con un

indicador (rojo fenol).

 

Ureasa

2NH

 

Urea

Urea 3 +

3 +

CO 2

El

test de la urea se lleva a cabo de la siguiente forma:

Las bacterias se inoculan en un medio con glucosa-peptona y urea al 2%. e incuban los tubos

a

37ºC, se observa el viraje de color del medio a las 24 horas.

Como indicador de pH se utiliza rojo fenol el cual por encima de pH 8,4 vira de amarillo a rosa.

TEST DE LA UREA: RESULTADOS

El color rosa del medio indica hidrólisis de la ureasa. El resultado es positivo

El color rosa del medio indica hidrólisis de la ureasa. El resultado es positivo

Cuando no se produce la hidrólisis de urea en el medio no se observa cambio de color. El resultado es negativo.

Cuando no se produce la hidrólisis de urea en el medio no se observa cambio de

F. Test de fermentación de carbohidratos

Las bacterias anaerobias o anaerobias facultativas a menudo fermentan carbohidratos a ácidos orgánicos y gas (H 2 o CO 2 ). Estos

productos de la fermentación pueden detectarse incluyendo en el medio un indicador de pH (que produce un cambio de color con la presencia de ácido) y una campana Durham (donde queda retenido el gas producido).

El test de fermentación de carbohidratos se lleva a cabo de la siguiente forma:

Se inocula la bacteria en un medio líquido conteniendo una pequeña cantidad de peptona, un indicador de pH (púrpura de bromocresol) y una fuente de carbono fermentable (por ejemplo glucosa) al 1-2 % y se coloca dentro de los tubos una campana Durham. La campana Durham es un pequeño tubito de vidrio que se coloca invertido dentro del tubo, de esta forma si se produce gas puede verse perfectamente porque queda retenido en el interior de la campana Durham.

El medio de cultivo es inicialmente de color morado.

Se incuban los tubos a 37ºC, se observa el viraje de color del medio y la producción de gas a las 24 horas.

TEST DE FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS: RESULTADOS

La reacción es positiva cuando los tubos se vuelven de color amarillo (lo que indica una disminución de pH por la producción de ácido) y se observa gas retenido en la campana Durham.

(lo que indica una disminución de pH por la producción de ácido) y se observa gas

La reacción es negativa cuando no se produce cambio de color del medio, ni se observa gas en la campana.

La reacción es negativa cuando no se produce cambio de color del medio, ni se observa

G. Test de producción de indol

Se usa para identificar bacterias capaces de producir indol a partir del triptófano (son bacterias que producen la enzima triptofanasa)

El aminoácido triptófano puede ser convertido por las bacterias que contienen la enzima triptofanasa, a indol, amonio y ácido pirúvico.

Triptófano

Triptofanasa

a indol, amonio y ácido pirúvico. Triptófano Triptofanasa indol + NH 3 + ácido pirúvico La

indol + NH 3 + ácido pirúvico

La presencia del indol se visualiza con reactivo de Kovacs, que provoca la formación de un anillo rojo en el tubo:

El test del indol se lleva a cabo de la siguiente forma:

La bacteria se inocula en un medio líquido que contiene triptófano (caldo de triptona). Este se incuba durante 24 horas. Transcurrido el tiempo de incubación, la presencia de indol se detecta añadiendo el reactivo de Kovacs (p- dimetilaminobenzaldehído).

Al añadir unas gotas de reactivo de Kovacs (que es de color amarillo) este queda sobre la superficie del caldo de triptona (al ser menos denso el primero que el segundo) formando una especie de anillo. Si este anillo es de color rojo-morado la reacción es positiva. Si este anillo es del color amarillo que inicialmente tiene el reactivo de Kovacs, es decir amarillo, quiere decir que la reacción es negativa.

TEST DEL INDOL: RESULTADOS

La reacción es positiva cuando aparece en la superficie del medio líquido un anillo rojo-morado tras añadir el reactivo de Kovacs

es positiva cuando aparece en la superficie del medio líquido un anillo rojo-morado tras añadir el

Si el anillo es de color amarillo la reacción es negativa.

Si el anillo es de color amarillo la reacción es negativa.

H. Test de la oxidasa

Se usa para identificar bacterias que tienen la enzima citocromo oxidasa. La presencia de citocromo C oxidasa en la cadena de transporte de electrones puede detectarse utilizando un aceptor de electrones artificial (p- fenilendiamina).

El test de la oxidasa se lleva a cabo de la siguiente forma:

Se utiliza como reactivo p-fenilendiamina al 1% en agua. Con este reactivo se impregna un papel de filtro , posteriormente, con un asa que no sea de hierro (daría lugar a falsos positivos), se coge una colonia de un cultivo de 24 horas y se extiende sobre el papel de filtro. La lectura se hace inmediatamente.

TEST DE LA OXIDASA: RESULTADOS

La reacción es positiva cuando aparece un color azul en la zona de depósito de la bacteria.

La reacción es positiva cuando aparece un color azul en la zona de depósito de la

Si no se produce ningún cambio la reacción es negativa.

Si no se produce ningún cambio la reacción es negativa.

A. Introducción

El agar hierro de Kligler (KIA: Kligler Iron Agar) y el agar hierro triple azúcar (TSI: Triple Sugar Iron) son dos medios sólidos diferenciales que se preparan en tubo inclinado y que se utilizan principalmente para la diferenciación de enterobacterias.

En el mismo tubo se determinan simultneamente:

a) la fermentación y utilización de los hidratos de carbono,

b) la producción de ácido sulfhídrico (sulfuro de hidrógeno), y

c) la producción de gas.

KIA contiene 2 carbohidratos: 1,0% de lactosa y 0,1% de glucosa. El TSI es similar al KIA, la única diferencia es la adicción de un tercer carbohidrato, la sacarosa al 1,0 %. Ambos medios llevan un indicador del cambio de pH: el rojo fenol. Cuando el pH es neutro, como en el medio sin inocular, el indicador da un color rojo al medio de cultivo. Cuando el pH es ácido vira al amarillo y a pH alcalino toma un color rojo mas intenso (rojo cereza).

Como tienen una función bastante similar, en el resto del ejercicio nos referiremos nicamente al Kligler o KIA.

B. Fermentación y utilización de los hidratos de carbono:

glucosa y lactosa

La fermentación o utilización de los hidratos de carbono se produce tanto en condiciones anaerobias (fondo del tubo) como en condiciones aerobias (superficie inclinada). En la utilización de estos carbohidratos los microorganismos utilizan varias rutas metabólicas (Embden-Meyerhof-Parnas y ciclo de Krebs) que producen varios metabolitos intermedios (Ácido pirúvico, etc.) que son convertidos a productos finales como ácido láctico, aldehidos, alcoholes, dióxido de carbono e hidrógeno

En condiciones anaerobias, como en el fondo del tubo, los productos finales producidos son más estables como ácido láctico u otros ácidos orgánicos, aldehidos y alcoholes.

Aerobiosis

(superficie

inclinada)

Lactosa

ß-galactosidasa

Glucosa +

Galactosa

Glucosa o

galactosa

Ciclo de Krebs

C0 2 + H 2 O + energía

Glucosa

Embden-Meyerhof-

Parnas

ácidos orgánicos aldehidos alcoholes CO 2 + H 2 energía

Anaerobiosis

(fondo del

tubo)

Algunos microorganismos pueden fermentar ambos hidratos de carbono (glucosa y lactosa). Otros fermentan solo la glucosa (lactosa negativos) y otros no fermentan ni la glucosa ni la lactosa.

Fermentación únicamente de la glucosa

Estos microorganismos despus de 18-24 hora de incubación muestran un Kligler con reacción alcalina en la superficie inclinada y reacción ácida en el fondo del tubo (alcalino / ácido).

La superficie inclinada es alcalina, indicando una degradación aeróbica de la glucosa. Después de 18-24 horas de incubación, la baja concentración de glucosa (0.1 %) se agota y el microorganismo inicia la utilización de las peptonas (presentes en el medio) para sus necesidades nutritivas. El catabolismo de las peptonas libera amonio que produce un pH alcalino y el rojo fenol toma una coloración roja más intensa (rojo cereza) en la superficie inclinada del tubo.

Por el contrario, el fondo del tubo tiene un color amarillo (pH ácido) a causa de la degradación anaeróbica de la glucosa. La glucosa en el fondo del tubo es tambien degradada en las 18-24 horas de incubación. Los productos finales ácidos producidos en la fermentación anaeróbica producen un pH ácido y el indicador vira a amarillo. Este pH ácido (color amarillo) se mantiene en el fondo del tubo por la estabilidad de los productos finales y por la baja tensión de oxígeno.

Fermentación de lactosa y glucosa

Algunos microorganismos pueden fermentar ambos hidratos de carbono, produciendo un Kligler con reacción

ácida en la superficie del tubo y reacción también ácida en el fondo del tubo (ácido / ácido). La concentración de lactosa (1.0 %) es diez veces mayor que la concentración de la glucosa, por lo que no se agota al cabo de 18-24 horas y se mantiene el pH ácido tanto en le fondo del tubo como en la superficie inclinada.

Sin fermentación de glucosa ni lactosa

Ciertas bacterias, principalmente bacilos gram negativos no pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, no son capaces de fermentar ni la glucosa ni la lactosa. Dado que estas bacterias no pueden utilizar como nutrientes a estos carbohidratos, aprovechan las peptonas en el medio como nutrientes. Estos microorganismos pueden utilizar las peptonas tanto en condiciones aeróbicas como anaeróbicas. Una reacción alcalina en la superficie inclinada y no cambio en el fondo del tubo indica un microorganismo capaz de metabolizar las peptonas únicamente en condiciones aeróbicas, y por ello solamente se se produce un cambio de color (rojo cereza) en la superficie inclinada del tubo. Por el contrario, cuando el microorganismo es capaz de utilizar las peptonas tanto en condiciones aeróbicas como anaeróbicas se produce la alcalinidad tanto en la superficie inclinada como en el fondo del tubo. Cuando las peptonas son degradadas se produce un pH alcalino debido a la liberación de amonio y el color del medio cambia a un rojo más intenso (rojo cereza).

Peptonas

aerobiosis

anaerobiosis

amonio (NH 3 )

Por lo tanto, la reacción de Kligler permite identificar cuatro patrones metabólicos en las bacterias

1. alcalino / ácido : únicamente utilización de la glucosa

2. ácido /ácido : glucosa y lactosa utilizadas

3. alcalino / alcalino : ni glucosa ni lactosa atacadas; peptonas utilizadas aeróbica y anaeróbicamente

4. alcalino / no cambio : ni glucosa ni lactosa usadas; peptonas utilizadas únicamente en condiciones aerobias

Fermentación

Glucosa sólo

Glucosa y

Ni glucosa ni lactosa

Lactosa

Patrón de la reacción

     

Alcalino / No cambio

Superficie inclinada

Alcalino / Ácido

Ácido / Ácido

Alcalino /Alcalino

/

Fondo tubo

 
 

Color

       

Superficie inclinada

Rojo / Amarillo

Amarillo / Amarillo

Rojo / Rojo

Rojo / Rojo

/

Fondo tubo

 

Glucosa

 

Glucosa no fermentada Lactosa no fermentada Peptonas utilizadas en :

Glucosa no fermentada Lactosa no fermentada Peptonas utilizadas en :

fermentada

En superficie

inclinada:

Peptonas

Glucosa

fermentada

Lactosa fermentada

utilizadas

aerobiosis y

aerobiosis

anaerobiosis

únicamente

Posibles resultados

Sin inocular

Fermentación de glucosa sólo

Fermentación de Lactosa y Glucosa

Ni lactosa ni glucosa fermentada

No cambio/No cambio

Alcalino/Ácido

Ácido/Ácido

Alcalino/Alcalino

Alcalino/No cambio

   

Varias especies de:

   

Salmonella

Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa

Algunas especies que pueden dar ese resultado.

Shigella

Escherichia coli Enterobacter aerogenes Citrobacter spp. Enterobacter cloacae Klebsiella oxytoca Enterobacter

Varias especies de:

Varias especies de:

Proteus

Serratia

 

Yersinia

Acinetobacter

Acinetobacter

Alcaligenes

Alcaligenes

C. Producción de gas

En los tubos de Kligler no sólo se observa la fermentación de la lactosa y la glucosa, sino también la producción de gas (CO 2 y O 2 ) como producto final del metabolismo de los carbohidratos. Las bacterias productoras de gas se denominan aerogénicas y se evidencian por la aparición de burbujas, grietas en el medio, desplazamiento del fondo del tubo, etc

Algunas imágenes con evidencia de la producción de gas

Fondo del tubo desplazando el medio hacia arriba

Grietas o roturas del medio

Burbujas en el medio

Una simple burbuja de gas

D. Producción de sulfhídrico Otra caracter � stica que se determina en el medio de

D. Producción de sulfhídrico

Otra caracterstica que se determina en el medio de Kligler es la producción de ácido sulfhídrico (sulfuro de hierro). El sulfuro de hierro generado reacciona con el hierro que contiene el medio (en forma de sales de hierro) formado sulfuro de hierro, insoluble y de color negro. El sulfuro de hierro se puede presentar como un precipitado negro en el fondo del tubo, como un ennegrecimiento de todo el fondo del tubo enmascarando la acidez, o como un anillo cerca de la superficie.

Algunas imágenes con evidencia de producción de sulfhídrico

Algunas imágenes con evidencia de producción de sulfhídrico

Algunas imágenes con evidencia de producción de sulfhídrico

Precipitado negro en el fondo del tubo

Ennegrecimiento de todo el fondo enmascarando acidez

Anillo negro en parte superior del fondo

Alcalino / ácido, SH 2 +

Alcalino / ácido, SH 2 +

Alcalino / ácido, SH 2 +

E. Técnica de siembra

Toma de muestra de colonia aislada

Con el asa flameada y dejada enfriar, se toma la muestra de una colonia aislada

Siembra por picadura en el fondo del tubo

Sembrar la muestra de la colonia primero en el fondo del tubo, introduciendo el asa, por picadura, en el centro del tubo y hasta el fondo del mismo

Siembra por estría en la superficie inclinada

Realizar además, una estría recta, al salir sobre la superficie inclinada del medio

Incubación a 37 ºC

Incubar los tubos a 37 ºC durante 18-24 horas

F. Lectura de los resultados

En la lectura de los resultados tenga en cuenta que debe observar las tres caracteristicas:

1. Fermentación de carbohidratos

2. Producción de gas

3. Produccin de sulfhídrico

y que todas las combinaciones son posibles. Existen varias formas de anotar en el laboratorio los resultados del Kligler, una normal y otras abreviadas

Anotación normal

Anotaciones abreviadas

Significado

Ácido / ácido

A / A

Utilización de lactosa y glucosa

Ácido / ácido, gas

A / A, gas - A / A, G

Utilización de lactosa y glucosa, producción de gas

Ácido / ácido, H 2 S

A / A, H 2 S

Utilización de lactosa y glucosa, producción de sulfhídrico

Alcalino / ácido

Alc / A - K / A

Utilización de glucosa

Alcalino / ácido, gas

Alc / A, gas - K / A, G

Utilización de glucosa, producción de gas

Alcalino / ácido, gas, H 2 S

Alc / A, gas, H 2 S - K / A, G, H 2 S

Utilización de glucosa, producción de gas, producción de sulfhídrico

Alcalino / ácido, H 2 S

Alc / A, H 2 S - K / A, H 2 S

Utilización de glucosa, producción de sulfhídrico

Alcalino / alcalino

Alc / Alc - K / K

Ni lactosa ni glucosa fermentada; utilización de peptonas

Alcalino / no cambio

Alc / no cambio - K / NC

Ni lactosa ni glucosa fermentada; utilización de peptonas en aerobiosis

No ca

 

0804_Batería de pruebas API20E

La batería de pruebas API20E es un sistema de identificación rápida para bacterias de la familia Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram (-). Básicamente consta de 21 tests bioquímicos estandarizados y miniaturizados y una base de datos. Este sistema presenta las ventajas de ser rápido, eficaz y de permitir realizar numerosas pruebas a la vez. Cada tira de API 20E contiene 20 microtubos o pocillos con distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una prueba bioquímica distinta.

Los microtubos se inoculan con una suspensión de microorganismos, en agua o solución salina, que rehidrata los medios. Las tiras o galerías se incuban a 37°C y por efecto del metabolismo bacteriano se producen cambios de color espontáneos o bien por la adicción de reactivos.

La lectura de las reacciones se hace mediante comparación con una tabla de lectura donde se indica si los microorganismos deben considerarse positivos o negativos para cada reacción según el color aparecido.

se indica si los microorganismos deben considerarse positivos o negativos para cada reacción según el color
se indica si los microorganismos deben considerarse positivos o negativos para cada reacción según el color

A. Batería de pruebas incluidas y tablas de lectura con coloraciones positivas y negativas

Pueba

Reacción / Enzimas

Negativo

Positivo

ONPG

beta-galactosidasa

sin color

amarillo

ADH

arginina deshidrolasa

amarillo

rojo o naranja

   

LDC

lisina descarboxilasa

amarillo

rojo o naranja

   

ODC

ornitina descarboxilasa

amarillo

rojo o naranja

CIT

utilización del citrato

verde

azul oscuro o turquesa

H2S

producción de H 2 S

sin precipitado negro

precipitado negro

URE

ureasa

amarillo

rojo o naranja

   

TDA

triptófano desaminasa

amarillo

marrón-rojo

   

IND

producción de indol

amarillo

color rosa o anillo rosa- rojo

VP

producción de acetoína (Voges-Proskauer)

sin color

rosa-rojo

GEL

gelatinasa

sin difusión

difusión de pigmento

GLU

fermentación/oxidación de glucosa

azul o verde

amarillo

MAN

fermentación/oxidación de manitol

azul o verde

amarillo

INO

fermentación/oxidación de inositol

azul o verde

amarillo

SOR

fermentación/oxidación de sorbitol

azul o verde

amarillo

RHA

fermentación/oxidación de ramnosa

azul o verde

amarillo

SAC

fermentación/oxidación de sacarosa

azul o verde

amarillo

MEL

fermentación/oxidación de melobiosa

azul o verde

amarillo

AMY

fermentación/oxidación de amigdalina

azul o verde

amarillo

ARA

fermentación/oxidación de arabinosa

azul o verde

amarillo

OX

citocromo oxidasa

   
amarillo OX citocromo oxidasa     B. Etapas del procedimiento Preparación de la suspensión

B. Etapas del procedimiento

Preparación de la suspensión bacteriana

Tomar una colonia bien aislada de cada microorganismo y resuspenderla homogéneamente en 5 mL de solución salina (1% de NaCl) o 5 mL de agua estéril.

de cada microorganismo y resuspenderla homogéneamente en 5 mL de solución salina (1% de NaCl) o

Siembra de la galería API

Cada pocillo tiene un tubo y una cúpula (parte aerobia).

 

Llenar con la suspensión de bacterias los tubos, no la cúpula, de todos los pocillos.

Llenar con la suspensión de bacterias los tubos, no la cúpula, de todos los pocillos.

Llenar la cúpula de los pocillos CIT , VP, GEL con la suspensión de bacterias.

Llenar la cúpula de los pocillos CIT , VP, GEL con la suspensión de bacterias.

Tapar con parafina líquida

Llenar con parafina las cúpulas de los pocillos ADH, LDC, ODC, URE, H 2 S para obtener anaerobiosis.

Llenar con parafina las cúpulas de los pocillos ADH, LDC, ODC, URE, H 2 S para

Poner la galería en su propia cámara húmeda de incubación

Poner la tira en su propia cámara húmeda de incubación. Previamente poner agua en los alvéolos de la cámara para proporcionar una atmósfera húmeda durante la incubación.

Previamente poner agua en los alvéolos de la cámara para proporcionar una atmósfera húmeda durante la

Incubación en estufa

Incubar a 37 °C durante 18-24 h.

Incubar a 37 °C durante 18-24 h.

Anotar los resultados inmediatos

La lectura de los resultados se lleva a cabo por comparación de los colores de
La lectura de los resultados se lleva a
cabo por comparación de los colores de
cada pocillo con los de las tablas de
lectura.
Ver tabla de lectura (colores en
imagen) en otra pantalla
Ver tabla de lectura (colores en texto)
en otra pantalla
Y anotando el resultado como positivo o
negativo
Revelado de pruebas que requieren reactivos (Ver vídeo revelado y lectura API20E)

Revelado de pruebas que requieren reactivos (Ver vídeo revelado y lectura API20E)

Para la lectura se tienen en cuenta los siguientes criterios:

Para la lectura se tienen en cuenta los siguientes criterios:

 Si la glucosa da negativo y los tests positivos son 2 o menos de

Si la glucosa da negativo y los tests positivos son 2 o menos de 2, no hay que añadir reactivos. Cuando ésto ocurre se hacen otros tipos de API como el API 20NE, API OF, el API M o el API 10S para ver determinados metabolismos especiales.

Si la glucosa es positiva y/o 3 o más tests son positivos se revelan los test que requieren reactivos:

 Si la glucosa es positiva y/o 3 o más tests son positivos se revelan los

TDA

Añadir una gota de FeCl3 10 %. Positivo = color marrón oscuro.

VP

Añadir una gota del reactivo 1 (KOH al 40%) y una gota del reactivo 2 (C2 H5 OH). Positivo = color rosa fuerte o rojo en 5-10 minutos.

IND

Añadir una gota de reactivo de Kovacs (1) o de Dimetilamino-cinamaldehido (2). Dependiendo del reactivo utilizado pueden darse las posibilidades siguientes:

(1)Positivo = aparece un anillo rosa- rojo

(2)Positivo =color de rosa a morado en todo el pocillo

Oxidasa

Añadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recién preparado. Positivo = color azul que aparece inmediatamente

Añadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recién preparado. Positivo = color azul que aparece inmediatamente
Añadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recién preparado. Positivo = color azul que aparece inmediatamente
Añadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recién preparado. Positivo = color azul que aparece inmediatamente
Añadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recién preparado. Positivo = color azul que aparece inmediatamente
Añadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recién preparado. Positivo = color azul que aparece inmediatamente
Añadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recién preparado. Positivo = color azul que aparece inmediatamente
Añadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recién preparado. Positivo = color azul que aparece inmediatamente
Añadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recién preparado. Positivo = color azul que aparece inmediatamente
Añadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recién preparado. Positivo = color azul que aparece inmediatamente
Añadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recién preparado. Positivo = color azul que aparece inmediatamente

Anotar el resto de resultados

 

La lectura de los resultados se lleva a cabo por comparación de los colores de cada pocillo con los de las tablas de lectura.

de los resultados se lleva a cabo por comparación de los colores de cada pocillo con

Y

anotando el resultado como positivo o

negativo

Perfil numérico e identificación

 

Del conjunto de reacciones y resultados se obtiene un perfil numérico de 7 cifras. Los pocillos están separados en grupos de tres: en total tenemos 7 grupos de tres tubos o tripletes (el test número 21 corresponde al test de la oxidasa). A cada pocillo se le da el valor 0, 1, 2 o 4.

tubos o tripletes (el test número 21 corresponde al test de la oxidasa). A cada pocillo

o

Si la reacción es negativa se pone 0.

o

Si la reacción es positiva se pone: 1 si

es el primer pocillo de un triplete, 2 si es el segundo, 4 si es el tercero.

o

Se suman los valores de cada triplete

y

se obtiene un código de 7 cifras.

o

Con este código se busca en la tabla

de identificación la especie de que se

 

trata.