DESCRIPCIÓN BIOQUÍMICA DE LAS PROTEÍNAS: reacciones de color para aminoácidos, destinado a la identificación de sus propiedades moleculares.

Junior Álvarez Ortega1, Enrique Dávila Ochoa1, y Elkin Monterrosa Berrio1

RESUMEN Los aminoácidos forman la estructura primaria de las proteínas, y existen diferentes métodos o pruebas, que mediante serie de reacciones específicas, propias de cada reacción, permitan identificar aminoácidos con propiedades diferentes. Los aminoácidos se clasifican, esencialmente, según la estructura de su cadena lateral, es decir, la estructura de la cadena lateral va a determinar qué tipo de aminoácido es, y las propiedades químicas que posee. En las pruebas se utilizaron diferentes reactivos que intervinieron en cada una de las reacciones de diferentes pruebas de identificación. La prueba xantoproteica identifica aminoácidos con grupos bencénicos en su cadena lateral, como la tirosina o el triptófano, que generan tinción amarilla al reaccionar con el ácido nítrico o anaranjada al reaccionar con un álcali durante la neutralización, este último confirma la prueba. La prueba de Ehrlich identifica a los aminoácidos con grupos aromáticos que reaccionaron con el ácido Sulfanílico y nitrito de Sodio. La prueba de Hopkins- cole identifica proteínas que contenga
triptófano en su estructura, es decir, la prueba identifica el triptófano es por eso que solo se experimentó con el triptófano y no con otros aminoácidos. La prueba de azufre reducido busca identificar a sustancias con azufre en su estructura, que mediante diferentes pasos permite separar el azufre y formar una sal. La prueba de Sakaguchi identifica el grupo guanido o guanodino, el cual se encuentra en la arginina, por ende es una prueba para identificar arginina en una sustancia.

Palabras Claves: Reactivo, solución, soluto, aminoácidos, proteínas, hidróxido de sodio, ácido nítrico hidróxido de amonio, ácido clorhídrico, formaldehido, ácido sulfúrico.

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Estudiantes de medicina, III semestre, participantes del Experimento Bioquímica # 1

o específicos en los aminoácidos. T). isoleucina (Ile. A). tirosina (Tyr. G). •Con carga positiva. Esto significa que el grupo amino está unido al carbono contiguo al grupo carboxilo (carbono alfa) o. que tanto el carboxilo como el amino están unidos al mismo carbono. polares o hidrófilos: serina (Ser. metionina (Met. Y) y glicina (Gly. estos dos "residuos" de aminoácido forman un dipéptido. en los ribosomas. •Con carga negativa. Dos aminoácidos se combinan en una reacción de condensación entre el grupo amino de uno y el carboxilo del otro. liberándose una molécula de agua y formando un enlace amida que se denomina enlace peptídico. a este carbono alfa se unen un hidrógeno y una cadena (habitualmente denominada cadena lateral o radical R) de estructura variable. Todos los aminoácidos componentes de las proteínas son L-alfa-aminoácidos. está entre otras reacciones pueden llevarse a cabo para detección de grupos funcionales. Las propiedades de estos aminoácidos determinan muchas de sus propiedades y reacciones frente a otros compuestos y biomoleculas. fenilalanina (Phe. pero sólo 20 (actualmente se consideran 22. W). principalmente aquellos que afectan sus propiedades químicas y se ubican en sus cadenas laterales. Esta reacción tiene lugar de manera natural dentro de las células. las dos que se presentan a continuación son las más comunes. •Aromáticos: fenilalanina (Phe. I).  Según las propiedades de su cadena: •Neutros polares. o básicos: lisina (Lys. dicho de otro modo. tirosina (Tyr. Y) y triptófano (Trp. Existen cientos de radicales por lo que se conocen cientos de aminoácidos diferentes. M). tal es el caso de los aminoácidos aromáticos. . V). D) y ácido glutámico (Glu. apolares o hidrófobos: alanina (Ala. P). prolina (Pro. glutamina (Gln. los últimos fueron descubiertos en el año 2002) forman parte de las proteínas y tienen codones específicos en el código genético. K). treonina (Thr. además. L). asparagina (Asn. W) (ya incluidos en los grupos neutros polares y neutros no polares). sucesivamente. leucina (Leu. R) e histidina (His. S). C). Los aminoácidos más frecuentes y de mayor interés son aquellos que forman parte de las proteínas. cisteína (Cys. Existen muchas formas de clasificar los aminoácidos.INTRODUCCION Un aminoácido es una molécula orgánica con un grupo amino (-NH2) y un grupo carboxilo (COOH). N). Si se une un tercer aminoácido se forma un tripéptido y así. E). valina (Val. F) y triptófano (Trp. Q). F). H). •Neutros no polares. o ácidos: ácido aspártico (Asp. los cuales por ejemplo al reaccionar con ácido nítrico se crean nitroderivados que cambian el color del aminoácido permitiendo detectar la presencia de grupos aromáticos en los mismos. hasta formar un polipéptido. arginina (Arg. que determina la identidad y las propiedades de cada uno de los diferentes aminoácidos.

el uso de colorantes determinados por reactivos. con el uso de reacciones de identificación cromática. Se realizaron cinco tipos de prueba para determinar las propiedades químicas. un álcali. es decir. Para este experimento se agregaron 2ml de solución de aminoácidos (entre ellas Tirosina. 4 Se usó para su calentamiento un trípode. de cinco aminoácidos. y más específicamente de los aminoácidos. en cada Por lo cual esta reacción permite reconocer la presencia de Tirosina. Histidina y Triptófano3) en un tubo de ensayo y se procedió a agregar 1ml de Ácido nítrico (HNO3). Reactivos  Aminoácidos: o Histidina (al 2%) o Tirosina (al 2%) o Triptófano (al 2%) o Cisteína (al 2%) o Arginina (al 2%) Reactivos y soluciones o Ácido nítrico (HNO3) o Hidróxido de Amonio (NH4OH) o Ácido Sulfanílico 0. que resalte por medio de colores las propiedades de las proteínas. luego se calentó lentamente en baño de maría 4 .5% (C6H7NO3S) en Ácido Clorhídrico (HCl) (al 2%) o Agua (H2O) o Ácido Sulfúrico (H2SO4) o Hidróxido de Sodio (NaOH 6N) o Acetato de Plomo (CH3COOPb) o Hipoclorito de Sodio (NaClO) o α – Naftol o Nitrito de sodio (NaNO2)  2 Método y diseño del experimento El experimento tuvo como método la determinación de tipo cualitativa. poseen propiedades químicas aromáticas. empleando ácido nítrico concentrado que da origen a compuestos nitroderivados de color amarillo o anaranjado2. Fenilalanina y Triptófano 3 En tubos de ensayo separados. un mechero de bunsen. Estas fueron las siguientes: 1. se retiró del calor y se añadieron 8 gotas de Hidróxido de Amonio (NH4OH). y luego se neutraliza con un álcali. cada solución de aminoácidos en su respectivo recipiente. Y posteriormente la solución.MATERIALES Y METODOS Materiales y reactivos Instrumentos           Tubos de ensayo Gradilla Beakers Mechero Soporte Universal Aro Metálico Rejilla de asbesto Pinzas Hielo Llama una de sus pruebas. es decir. un beaker de 800ml y 600ml de agua . Prueba xantoproteica: es un método que se utiliza para determinar proteínas solubles en una solución. Esta prueba va a determinar cuál o cuáles de los aminoácidos (presentes en proteínas) utilizados. es decir. cuales poseen un grupo aromático en su estructura.

. 3. La arginina libre de la prueba positiva. el triptófano. Prueba de Hopkins-Cole: La reacción de Hopkins cole se usa principalmente para identificar en una sustancia o una proteína la presencia de un aminoácido específico. histidina o triptófano. 5. colocar en un baño de hielo durante 5 minutos y por ultimo añadir ocho gotas de hipoclorito de sodio. La prueba consiste en tratar la muestra con alfa-naftol e hipoclorito de sodio.5ml de NaOH6 N y 1 ml de α – naftol. luego colocar en baño de hielo por un tiempo de 3 minutos y luego adicionar 1ml de NaNO2 0. De ahí que se dé una indicación de la presencia de arginina libre de proteínas que contengan arginina.5% en HCl 2%. con lo cual se desarrollara un color rojo intenso. El desarrollo del color se altera o se previene por completo por la presencia de amino. Prueba de Azufre reducido: Para este experimento agregaron 2ml de solución de aminoácido (Cisteína) y agregar 2 ml de NaOH 6N y 1 ml CH3COOPb. Para este experimento agregaron 2ml de solución de aminoácido (Arginina) y agregar 0. colocar en un baño de hielo durante 5 minutos y por ultimo añadir ocho gotas de hipoclorito de sodio. Para este experimento agregaron 2ml de solución de aminoácido (Histidina o Tirosina) y agregar 1ml de ácido Sulfanílico 0.) que reacciona con un buen número de compuestos orgánicos tales como indoles. Para este experimento agregaron 2ml de solución de aminoácido (Histidina o Tirosina) y agregar 1ml de nitrito de sodio y luego se le agregan ocho gotas de ácido sulfanilico 4. Prueba de Ehrlich: de composición (pdimetilaminobenzaldehído al 10% en HCl concentrado.5% y 2 ml de NH4OH.2. aminas aromáticas y compuestos ureicos para dar complejos coloreados. Prueba de Sakaguchi: Es una reacción de los compuestos que contengan grupo guanido o guanodino.

ni en el momento de la aplicación. y creó una reacción exotérmica. la solución continuó con ese mismo estado. 2 Sustancia: Tirosina 2% La tirosina es un aminoácido liquido con partículas sólidas que forma cristales y que generalmente presenta un color blanquecino5. ni tiempo después mostro cambio apreciable en su color. al momento de mezclar los componentes las solución libera calor. y tras el añadido de hidróxido de amonio reaccionó creando una nube espesa sobre la solución y en su color no hubo ningún cambio. Cabe resaltar que apreciando detenidamente la solución se observaron dos fases una densa de líquido claro y otra sobrenadante de líquido turbio y aceitoso ambas de color transparente. se generó un color ocre dorado. Luego con la adición de calor la solución cambio de color a un naranja claro.RESULTADOS 1 PRUEBA XANTOPROTEICA Sustancia: Histidina 2% La histidina es un aminoácido transparente al cual se le agregó ácido nítrico. también llamados hidrófobos. con la diferencia de que al momento de mezclarse las sustancias. se clasifica entre los aminoácidos apolares. no hubo cambio de calor ni mucho menos después de agregarles las 8 gotas de hidróxido de amonio Color inicial: Transparente Color final: Transparente Observación: No hubo cambio le adicionó el ácido nítrico. Color inicial: Blanco o semitransparente Color final: Naranja claro Observación: Hubo cambio de color Fig. se Aunque también puede ser incoloro Aunque normalmente se clasifica como aminoácido hidrofóbico a causa de su anillo aromático. y tras el calentamiento el color de la sustancia cambio a un verde limón y 5 6 Fig. Al cabo de la aplicación de calor. Y al igual que el anterior proceso. se clasifica como un aminoácido no esencial en los mamíferos ya que su síntesis se produce a partir de la hidroxilación de otro aminoácido: la fenilalanina. 1 Sustancia: Triptófano 2% El triptófano es un aminoácido de color blancuzco con grumos blancos. 6 En la reacción con el ácido nítrico la solución cambió a un color amarrillo parecido al aceite de oliva. por lo tanto es una reacción exotérmica. . Se considera un aminoácido polar y protonable.

hasta el color ferroso (gris) que era el color final. de igual manera ocurrió con la tirosina exceptuando el hecho de que el color inicial de esta última es semitransparente con grumos blancuzcos Fig. Conservando su degradante cromático más oscuro en el fondo Color inicial: Transparente con grumos blancos Color final: Canela oscuro Observación: El fondo del tubo de ensayo aun después del calentamiento permaneció con una coloración oscura al igual que el sobrenadante Fig. la solución cambio de color nuevamente a un miel claro. Sustancia: Histidina y Tirosina 2% En el proceso que se llevó a cabo la reacción de la histidina y la tirosina genero cambios de color. cambio el color de toda la solución a un color canela oscuro. Color inicial: Blanco Color final: Miel claro Observación: Hubieron diversos cambios de color (De amarillo a verde y de este último. a color miel) 3 PRUEBA DE HOPKINS-COLE Sustancia: Triptófano 2% Al agregarle a la solución.luego de que se terminara el último pasó de la prueba. 3 2 PRUEBA DE EHRLICH La prueba de Ehrlich se encarga de identificar la presencia de anillos aromáticos fenólicos o nitrogenados en la cadena lateral de los aminoácidos se puede identificar mediante la reacción con ácido Sulfanílico y nitrito de Sodio. que tenía un degradado que se aclaraba hacia el final del tubo de ensayo y luego con el posterior baño de maría. desde el inicial que es el que posee la histidina que es transparente. 4 . el agua destilada más las gotas de formaldehido se creó un granulo sobrenadante blanco sobre una solución rojiza. el cual era agregar el NH4OH.

a una mezcla heterogénea entre una sustancia blanca y transparente) Sustancia: Arginina 2% A la arginina que es de color transparente se le añadió. En la reacción se crearon dos fases una de color naranja rojizo que se encontró en el sobrenadante y una solución más densa de color transparente . hidróxido de sodio que es una sustancia también transparente. al agregarle el Hidróxido de sodio ese color pasa a ser transparente. Color inicial: Blanco Color final: Transparente en la porción más densa de la solución y sustancia espumosa Observación: Hubieron diversos cambios de color (De blanco a transparente y de este último. luego al agregarle el acetato de plomo se genera una solución espesa sobrenadante parecida a la espuma. luego a esta mezcla se le enfría por cinco minutos y se le agrega el alfanaftol que es una solución rosa más ocho gotas de hipoclorito de sodio.4 PRUEBA DE AZUFRE REDUCIDO 5 PRUEBA DE SAKAGUCHI Sustancia n: Cisteína 2% La cisteína es un aminoácido de color blanco hueso.

Sustancia: Tirosina 2% Al igual que el triptófano la tirosina es un aminoácido aromático cuya fórmula es la siguiente: En la prueba xantoproteica el cambio de color en ciertos aminoácidos es debido a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo. no posee en su estructura un grupo benceno. cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico concentrado. lo que no le brinda a este la propiedad aromática.ANALISIS DE RESULTADO 1 PRUEBA XANTOPROTEICA nitrocompuestos de color amarillo. que luego de añadirse un álcali (Base) se torna aun color más anaranjado. el color es debido a la presencia del grupo triptófano. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali vira a un color anaranjado oscuro. Por eso al agregarle el ácido nítrico reacciona formando un color más anaranjado que el formado antes en el triptófano. En la reacción del grupo fenilo del aminoácido demarca por acción del ácido nítrico coloreando la solución de un amarillo parecido al color miel Sustancia: Triptófano 2% El triptófano es un aminoácido cuya fórmula es la siguiente: Aquí se observa que la tirosina posee un grupo fenólico este le da la propiedad de aromático. que consiste en un benceno unido a un pirrol . aunque el El indol es un compuesto orgánico heterocíclico. Gracias a la nitración del anillo bencénico presente en este tipo de aminoácidos se obtienen 7 3 PRUEBA DE HOPKINS-COLE Sustancia: Triptófano 2% En la prueba de Hopkins-Cole. este grupo lo hace un aminoácido aromático por lo tanto la reacción debe dar positiva para esta sustancia. especialmente en presencia de tirosina. 2 PRUEBA DE EHRLICH Cuando se formación de sales de Diazonio fuertemente coloreadas permitiendo así detectar la presencia de Tirosina e Histidina libres o formando péptido y proteínas En el experimento se observó que la solución se coloreó de gris debido a la presencia de grupos fenólicos que reacción con el reactivo y forman el color gris La estructura de este aminoácido contiene un grupo indol7. Sustancia: Histidina 2% En la histidina no hay cambio de color puesto que este aminoácido. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos bencénicos.

el azufre se combina con el plomo para producir un precipitado de color negro que corresponde a sulfuro de plomo. la prueba de Hopkins cole. 4 PRUEBA DE AZUFRE REDUCIDO 5 PRUEBA DE SAKAGUCHI Sustancia: Cisteína 2% Sustancia: Arginina 2% La prueba es positiva para la arginina porque esta presenta a el grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la arginina esta cadena reacciona con el alfa .triptófano puro no da la prueba excepto en presencia de trazas de iones férricos o cúpricos.naftol y pierde el grupo imino por oxidación. o inclusive en el aminoácido libre existe el cambio de color que es siempre característicos por su gradiente rojo . como lo fue el acetato de plomo. es decir en presencia de . La reacción se lleva a cabo en un medio alcalino. De todo esto podemos decir que esta reacción es solo para aquellas sustancias o aminoácidos que contengan azufre en su estructura. dará positiva. La arginina oxidada reaccionó con otra molécula de alfa-naftol cuando se le adiciona un compuesto alcalino formando un complejo coloreado rojo. Para la cisteína este tipo de prueba es positiva debido a que estos aminoácidos poseen azufre en su estructura. Al añadir una sal soluble en agua.oscuro NaOH. En cualquier proteína que contenga aminoácidos de triptófano. el cual permite la separación del azufre de la estructura del aminoácido.

la prueba de Ehrlich o la prueba de Hopkins-cole. Obtenido de http://kathy-bioquimicaguialaboratorios09. La prueba de Ehrlich identifica a la histidina y a la tirosina.UUJ71hzNmwg . La arginina está compuesta por el grupo guanidinio. el cual es identificado en la prueba.CONCLUSIÓN Los aminoácidos se pueden clasificar según la estructura de su cadena lateral. La prueba de Hopkins-cole identifica sustancias que presenten en su estructura el aminoácido triptófano. Análisis de orina: atlas color. como la prueba xantoproteica. El triptófano y la tirosina dan positiva esta prueba (tienen grupos aromáticos en su estructura). Mexico: Editorial medica Panamerica. Existen pruebas que permiten identificar a los aminoácidos. Generalmente la prueba se utiliza para identificar proteínas en distintas sustancias.  En la prueba xantoproteica se busca identificar los aminoácidos que en su estructura presentan grupos aromáticos. Graff. Experimentos de Química Orgánica. G.      Estas pruebas se utilizaron con una variedad de reactivos e instrumentos. lo cual permite clasificarlos. que en medio alcalino. mientras que la histidina da negativa a la prueba. lo que les confieres propiedades que los caracterizan. Cada prueba identifica ciertas propiedades de los aminoácidos. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS Franco. (2011). que al reaccionar con el ácido nítrico forman compuestos nitroderivados y así dar positiva la prueba. Lol Kathy. Laboratorio Kathy.es/experiencia-3pruebas-cualitativas-para-aminoacidosy-proteinas#. esto debido a la diferente naturaleza de diferentes aminoácidos. A. permite separar el azufre y así identificarlo mediante la reacción con una sal. (2006). ya que la arginina está presente en la estructura de la mayoría de las proteínas. La prueba de azufre reducido identifica a loa aminoácidos que en su estructura llevan azufre. L. ya que estos aminoácidos presentan en su estructura un grupo fenol. (2007).bligoo.

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