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FLAVONOIDES

Alejandro Martnez M., Qumico M. Sc., Doctor en Ciencias, Facultad de Qumica Farmacutica, Universidad de Antioquia

Medelln, Septiembre 2005

Presentacin En la larga historia de la ciencia muchas personas, ideas y sueos han ido aportando su grano de arena en la bsqueda de la comprensin de la naturaleza y el mismo misterio enigmtico de la vida. Muchos de ellos han pasado de ser despreciados y despus alabados y ensalzados. Esto tambin ha ocurrido con el caso de las sustancias naturales. En la actualidad es bastante publicado en los medios de comunicacin, en particular por la prensa y la televisin, el hallazgo de nuevas sustancias naturales, que resaltan como panaceas para la cura de enfermedades como el cncer, o para el adelgazamiento, etc. Muchas son buenas pero muchas tambin entran ya hacen parte de la lista negra de las indeseables como los alcaloides txicos y que generan dependencia (cocana, herona, etc.). Casi podra hacerse un escalafn de las sustancias buenas (la clorofila, fundamental para la vida de las plantas e indirectamente para todos los dems seres vivos del planeta; la hemoglobina, una molcula con una bella estructura arquitectnica y que participa en un proceso simple pero fundamental para los mamferos: la respiracin; las penicilinas y su importante accin contra los microenemigos; la artemisinina de los chinos y su utilidad para el tratamiento de la malaria severa; los cidos nucleicos y su importante aporte para el desarrollo evolutivo de la vida, etc.). En el caso de las sustancias malas1, que son muy pocas, estn entre otras: los alcaloides que generan dependencia (cocana, herona, etc.), las sustancias que generan cianuro (como son los glicsidos cianognicos presentes en diferentes plantas). Sin embargo, esta discriminacin entre sustancias malas y sustancias buenas, se acaba cuando se considera es su utilidad. De acuerdo con esto, hyy tres clases de sustancias naturales: Unas con una utilidad reconocida y demostrada, otras con una utilidad potencial y otras poco tiles inclusive peligrosas. Dentro de estas tres categoras se podran hacer diferentes listados, dependiendo de la persona que las haga. Por ejemplo, para un botnico resultan ms tiles aquellas sustancias que le permiten desarrollar su trabajo de clasificacin, mientras para un qumico farmacutico resultan ms tiles otras sustancias (poco o nada interesantes
1 Es de anotar que no necesariamente son sustancias malas en el sentido estricto de la palabra, sino que el calificativo de malas se refiere al uso que se les ha dado.

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para el botnico) que le sirven para producir medicamentos, y para un agrnomo pueden ser ms interesantes las sustancias que tienen mayor valor nutritivo y agrcola. Con el propsito de convencer a estos y otros profesionales, y a usted amigo lector, a continuacin tratar de presentar un grupo de sustancias que a medida que vaya avanzando en la lectura, notar que no son tan desconocidas, sino que tal vez anteriormente no se las haban presentado, y al final espero convencerlo de que resultan no solo unas sustancias buenas, sino tiles, muy bellas y bastante romnticas, sino tambin que resulta saludable en nuestra alimentacin consumir ms repollo morado que blanco, menos remolacha, ms vino rojo, ms alimentos derivados de soya, etc. En buena parte de esta obra se utiliza un lenguaje especializado, esto con el fin de que adems de divulgar al pblico en general algunos aspectos de estas sustancias, esta pueda servir de apoyo a profesionales y estudiantes relacionados con el conocimiento y aprovechamiento de los productos naturales, en especial a profesionales qumicos, qumicos farmacuticos, bilogos y mdicos.

Expreso mis agradecimientos a La Universidad de Antioquia donde he aprendido y se me ha apoyado para elaborar este tipo de documentos, a los estudiantes de la asignatura de Farmacognosia y Fitoqumica, que con sus opiniones y valiosos aportes han contribuido para la elaboracin de este y otros documentos,

Alejandro Martnez M., Medelln, Septiembre de 2005

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1. Introduccin Las plantas mediante el proceso de la fotosntesis producen las sustancias necesarias para todos los ciclos vitales de la naturaleza. Mediante intrincados y cada vez ms conocidos mecanismos bioqumicos se constituyen en verdaderas factoras qumicas de carbohidratos, protenas, grasas, vitaminas y oligoelementos como el hierro y el magnesio; y adicionalmente mantienen la atmsfera rica en oxgeno y deficiente en dixido de carbono, permitindonos respirar. Son la base de la cadena alimenticia que soporta todas las dems formas de vida en nuestro planeta. En la actualidad, gracias a la visin ecologista que se ha dado a las nuevas generaciones de personas, existe una tendencia a mantener y conservar las especies de plantas mediante la conservacin de los bosques, las selvas, los parques naturales, los estuarios marinos, los humedales, etc. Para toda persona indistintamente de su profesin u oficio, no hay duda de que las plantas son importantes para la vida. Pero adems de producir sustancias como los carbohidratos, las protenas y las grasas, que los investigadores han denominado METABOLITOS PRIMARIOS, dado que se encuentran en prcticamente todas las formas de vida y cumplen funciones bsicas para la misma, existen otras que no se encuentran tan distribuidas y que se hallan restringidas solo a ciertas especies, gneros o familias como son los alcaloides, las saponinas esteroides, los aceites esenciales, los terpenoides, etc., a los cuales se les denomina METABOLITOS SECUNDARIOS. Dentro de este ltimo grupo estn los FLAVONOIDES, unas sustancias bautizadas as porque las primeras que se lograron aislar eran de color amarillo, pero que como ms adelante veremos las hay incoloras con otros colores diferentes del amarillo como son el rojo, el violeta y el azul.

A continuacin se presentar una breve resea histrica y una definicin qumica de los flavonoides, luego se hablar de su origen biolgico, algunos aspectos sobre su aislamiento y caracterizacin, y finalmente se destacar su utilidad real y potencial para ayudar a preservar nuestra salud.

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2. A manera de historia Los flavonoides son un gran grupo de sustancias vegetales que fueron descubiertas por el premio Nobel en Bioqumica Dr. Albert Szent-Gyorgi, quien les denomin como "vitamina P". El Dr. Szent-Gyorgi descubri que los flavonoides favorecen la funcin de la vitamina C, mejorando su absorcin y protegindola de la oxidacin. Los flavonoides comprenden varias clases de sustancias naturales, entre las cuales estn muchas de las que les confieren colores amarillo, naranja, rojo, violeta y azul, a muchas flores, hojas y frutos, especialmente. Cuando usted amigo lector est observando una rosa roja, adems de disfrutar la gracia artstica de su diseo, est disfrutando de su color, ese color es debido a los flavonoides; cuando observe una fresa jugosa, una uva roja morada, una flor amarilla, usted est observando ni ms ni menos a sustancias flavonoides. Esos colores que disfruta nuestro cerebro al percibirlos son en su gran mayora debidos a los flavonoides. Entonces, usted ahora puede comprender que esas aparentemente desconocidas sustancias han estado presentes en buena parte de su vida, y tambin en buena parte de la historia de la humanidad.

Desde el comienzo de la humanidad, en el mismo paraso terrenal de Adn y Eva, all ya estaban los flavonoides engalanando con sus colores ese idlico jardn celestial, y hasta en la jugosa manzana de color rojo con la que nuestra madre Eva sedujo a nuestro abuelo Adn, los flavonoides estaban participando de nuestro pecado original.

En todas partes de la historia de la humanidad los flavonoides han sido testigos y actores de muchas desgracias, momentos heroicos, alegras, etc. Al leer a los antiguos filsofos, poetas y escritores, se pone de manifiesto que en el enamoramiento de la mujer siempre han participado las flores de agradable aroma y de hermosos colores, esto quiere decir sin ms prembulos que no ha existido mujer alguna sobre la tierra que no haya sucumbido ante la presencia de los flavonoides de unas bonitas rosas rojas, un ramo de violetas o un pensamiento. No hay nada que ms agrade a una mujer que las flores, parece ser que ellas tienen una percepcin cerebral ms desarrollada que nosotros hacia este tipo de sustancias.

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Las casas y palacios ms bellos han sido no los que ostentan grandes desarrollos arquitectnicos, sino los que poseen los ms variados, coloridos y exticos jardines. En este sentido, los flavonoides han sido privilegiados al ocupar los sitios ms importantes para un rey, un noble un plebeyo. Si se mira bien una flor es tan bella en un palacio como en un comedor humilde.

Los flavonoides han sido testigos indirectos de momentos como el 20 de Julio de 1810, cuando en la entonces ciudad de Santaf de Bogot (Colombia), una ria entre un espaol y un criollo por un florero, sirvi de punto de partida para que se diese el grito de independencia. Aunque los flavonoides de las flores que iban a adornar este florero nunca lo llegaron a tocar, all estaban listos para cambiar la historia de un pas.

Los flavonoides siempre han estado de alguna manera en sitios privilegiados, y bien podran ufanarse de ello. Para las plantas adems del encantador adorno que dan a su ropaje, les sirven de cosmtico. Las plantas como todo lo bello son vanidosas. Estas sustancias adems de cambiar de colores y adornar las plantas durante toda su vida, son un maquillaje sutil para protegerse de los rayos solares dainos. S, las plantas usan flavonoides para eliminar ciertas radiaciones indeseables y filtrar otras que junto con las clorofilas trabajan en llave en el proceso de la fotosntesis.

Los flavonoides han estado en todas las mesas y comedores desde los primeros hombres y animales en el planeta. En mesas de reyes y plebeyos. Quin no se ha quedado mirando algn momento una mesa revestida y adornada con uvas rojas y verdes, con fresas, con moras, con manzanas, con bananos, con jugosas sandas. Pero ellos no solo estn en hermosas flores y agradables frutas, estn en alimentos de pobres y ricos como las verduras. Aunque no los vemos con sus festivos colores porque sus parientes ms famosas como son las clorofilas con su manto verde las opacan, pero si nuestra visin lograse filtrar y eliminar el color verde que apreciamos cuando miramos una planta verde, sin duda podramos reconocerlos. S amigo lector, esta es otra buena razn para preferir las comidas a base de vegetales, las espinacas adems de hierro contienen vitaminas y flavonoides. Los jugos de

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frutas como moras, fresas, uvas negras o rojas, cerezas, etc., todos contienen flavonoides, y los hemos consumido casi a diario, y ms adelante tratar de mostrar lo bueno que es consumir flavonoides para mantener nuestra salud, y hasta donde he ledo, para prevenir y tratar varias enfermedades, y espero convencerlo de que esas bebidas con colorantes y saborizantes artificiales no son tan saludables como las bebidas naturales con flavonoides. A continuacin se presentan algunos aspectos qumicos y biolgicos de los flavonoides, los cuales le sugiero al lector que si tiene inconvenientes en la comprensin del lenguaje cientfico pase al numeral 4, donde se hace nfasis en la utilidad potencial de los flavonoides para el mantenimiento de la salud y para la prevencin de algunas enfermedades (pgina 37, numeral 10).

3. Aspectos qumicos Para los qumicos los flavonoides tienen una estructura qumica muy definida como se muestra en la figura 1. Puede observarse que de manera general son molculas que tienen dos anillos bencnicos ( aromticos, para los qumicos orgnicos) unidos a travs de una cadena de tres tomos de carbono, puesto que cada anillo bencnico tiene 6 tomos de carbono, los autores los denominan simplemente como compuestos C6C3C6. La Figura 2 muestra la estructura qumica de uno de los flavonoides ms comunes: La quercetina.

Figura 1. Estructura bsica de los flavonoides

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OH OH HO O OH OH O
Figura 2. Estructura qumica de uno de los flavonoides ms comnmente hallados en la naturaleza, la quercetina. Ntese en color rojo la estructura bsica de los flavonoides.

La Figura 2 muestra una de las maneras ms utilizadas por los qumicos para representar las molculas de los flavonoides en dos dimensiones, sin embargo existen otras maneras de representarlas de manera ms real, esto es en tres dimensiones como se ilustra por ejemplo en la Figura 3.

Figura 3. Estructura qumica en tres dimensiones del flavonoide quercetina. Representacin en esferas: tomos de carbono de color gris, tomos de oxgeno en color rojo y tomos de hidrgeno en color blanco

Para su estudio sistemtico los ms de 4000 flavonoides naturales se han clasificado en varias clases de acuerdo con las variantes estructurales que presenta la cadena central C3 (Figura 4). De acuerdo con esto los flavonoides se clasifican en varios grupos: Chalconas,

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flavonas, flavonoles, flavanonas, flavanonoles, antocianidinas, catequinas, epicatequinas, auronas, isoflavonoides, pterocarpanos, rotenoides, etc.

O H O
FLAVANONAS

O H OH O
FLAVANONOLES

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O OH
(+)-CATEQUINAS

O OH
(-)-EPICATEQUINAS

O
ISOFLAVONAS

4 3

7 8 6 6a 7 10 8 11 9

O
11a

O
6a 12 12a

2 1

11

O
10

1 2

PTEROCARPANOS

ROTENOIDES

Figura 4. Estructuras bsicas de varias clases de flavonoides

La mayora de flavonoides poseen nombres triviales con la terminacin INA u OL. Estos nombres les han sido asignados por los investigadores que los han ido descubriendo uno a uno en la naturaleza. Por ejemplo la acacetina (Figura 5) se identific por primera vez en una planta del gnero Acacia y se clasifica como una flavona. La quercetina es un flavonol identificado inicialmente en una planta del gnero Quercus. La naringenina es una flavanona aislada inicialmente en la naranja. El eriodictiol es una flavanona y se aisl inicialmente en una planta del gnero Eriodictyon. Sin embargo, esta clase de nombres no es muy til cuando se requiere informacin sistemtica de estas sustancias, por lo cual los qumicos han convenido llamarlos con nombres que representen su estructura qumica. As por ejemplo la

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acacetina corresponde a la 5,7-dihidroxi-4'-metoxiflavona; la quercetina al 5,7,3',4'tetrahidroxiflavonol; la naringenina a la 5,7,4'-trihidroxiflavanona, etc.

Hasta ahora hemos visto aspectos relacionados con la estructura simple de los flavonoides, sin embargo dentro de las plantas los estudios han mostrado que estas sustancias se encuentran la mayora de las veces, ligados a molculas de carbohidratos. A este tipo de combinacin ncleo flavonoide bsico + una o varias unidades de carbohidratos, se les denomina GLICOSIDOS, y cuando no tienen ligadas molculas de carbohidratos se las denomina AGLICONAS FLAVONOIDES. Por ejemplo los que mencionamos

anteriormente (acacetina, eriodictiol, quercetina, naringenina, etc.) son agliconas flavonoides. Un ejemplo de glicsido es la vitexina que corresponde al 8-C--Dglucopiransido de apigenina. Como puede intuirse, la nomenclatura de los glicsidos es ms compleja que la de las agliconas.

En las figuras y tablas siguientes se presentan varios ejemplos de diferentes clases de flavonoides naturales y algunas de las fuentes vegetales ms conocidas.

a. Ejemplos de flavonas

R1 R2 R5 R4 R3

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NOMBRE TRIVIAL Crisina Baicalena Apigenina Acacetina Escutelarena Hispidulina Luteolina Crisoeriol Diosmetina

R1 OH OMe OH

R2 OH

R3 OH OH OH

R4 OH OH OH -

R5 OH OH OH OH OH OH OH OH OH

Fuente Populus Scutellaria Petroselinum Robinia Scutellaria Ambrosia Reseda Eriodictyon Diosma

OMe OH OH OH

OMe OH OH OH OH OH

OMe OH

b. Ejemplos de flavonoles:

R1 R6 R5 R4 R3 R2

O
OH

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NOMBRE TRIVIAL Galangina Fisetina Kaemferol Herbacetina Quercetina Ramnetina Quercetagetina Gossipetina Isorramnetina

R1 OH OH OH OH

R2 OH OH OH OH OH OH

R3

R4

R5 OH OH OH OH OH OMe

R6 OH OH -

Fuente Alpinia Rhus Delphinium Gossypium Quercus Rhamnus Tagetes Gossypium Cheiranthus

OH -

OH OH OH OH -

OH OH OH OH OH OH

OMe OH OH

OMe OH -

c. Ejemplos de antocianidinas:

R1 XR5 R2

O
R4 R3

R6

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NOMBRE TRIVIAL Apigenidina Luteolinidina Pelargonidina Cianidina Peonidina Delfinidina Petunidina Malvidina

R1 -

R2

R3

R4

R5 OH OH

R6 OH OH OHe

Fuente Rechsteineria Rechsteineria Pelargonium Centaurea Paeonia Delphinium Petunia Malva

OH OH -

OH OH OH -

OH OH OH OH

OH OH OH OH OH OMe OH OH OH OH OH OH OH OH OH OMe OH OH OH OH OMe OH OMe OH OH

d. Ejemplos de flavanonas:

R1 R2 R5 R4 R3

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NOMBRE TRIVIAL Pinocembrina Liquiritigenina Naringenina Sakuranetina Eriodictiol Hesperetina

R1 R2 OH

R3 R4 OH -

R5 OH OH OH

Fuente Pinus Glycyrrhiza Prunus

OH OH OH OH

OMe Prunus OH OH Eriodictyon Prunus

OH OH OH OH OMe OH

4. Distribucin y estado natural Los flavonoides se encuentran ampliamente distribuidos en las plantas verdes (especialmente las angiospermas), y slo algunos pocos se han detectado en hongos y algas. Se han encontrado en las diferentes partes de las plantas, especialmente en las partes areas; y se les encuentra en forma libre (tambin llamados agliconas flavonoides), como glicsidos (la mayora de las veces), como sulfatos y algunas veces como dmeros1 y polmeros2. Los glicsidos pueden ser de dos clases: con los carbohidratos ligados a travs de tomos de oxgeno (enlace hemiacetal) es decir como O-glicsidos; o con los carbohidratos ligados a travs de enlaces C-C, es decir como C-glicsidos. De todas estas formas naturales, los Oglicsidos son los ms comunes de hallar. Las antocianinas por su parte se encuentran como sales principalmente en flores, frutos y tejidos con coloraciones que van del rojo hasta el violeta y el azul3. Muy pocas veces se encuentran varias clases de flavonoides en un mismo tejido vegetal, sin embargo de las races de Lonchocarpus subglauscescens (leguminosas) se aislaron varias flavonas, flavonoles, isoflavonas, rotenoides, chalconas y flavanoles4.

5. Propiedades fsicas Las propiedades fsicas dependen de la clase de flavonoide considerado y su forma (libre, glicsido sulfato). Por ejemplo las flavonas, flavonoles y auronas, debido al sistema conjugado son compuestos slidos con colores que comprenden desde el amarillo muy tenue hasta el rojo. Las antocianidinas son de colores rojo intenso, morado, violeta y azul. Las

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flavanonas y flavanonoles debido al carbono quiral C-2 presentan el fenmeno de la rotacin ptica. Los glicsidos son en general slidos amorfos, mientras que las agliconas y los altamente metoxilados son cristalinos. La solubilidad depende de la forma en que se encuentren y el nmero y clase de sustituyentes presentes. Los glicsidos, las antocianidinas y los sulfatos son solubles en agua y alcohol. Las agliconas flavonoides altamente hidroxiladas son solubles en alcohol (etanol, metanol y n-butanol), mientras que las poco hidroxiladas lo son en solventes como ter etlico, acetato de etilo y acetona. Las agliconas flavonoides altamente metoxiladas son solubles en solventes menos polares como el ter de petrleo y el cloroformo. Los flavonoides con hidroxilos fenlicos son solubles en soluciones alcalinas, pero algunos altamente hidroxilados se descomponen por accin de las bases fuertes, un hecho que permite reconocerlos y diferenciarlos de otros, y que hace aos se utiliz para su elucidacin estructural. Los glicsidos flavonoides son slidos amorfos que se funden con descomposicin, mientras que las correspondientes agliconas son slidos cristalinos.

6. Biognesis Como se mencion anteriormente los flavonoides son metabolitos secundarios vegetales de origen biosinttico mixto: el anillo A proviene de la ruta de la malonilcoenzima A y el anillo B y la cadena C3 provienen de la ruta del cido shikmico. Un trictido se cicliza y se condensa con una molcula de cido p-cumrico. La enolizacin del ciclo proveniente de la ruta de la malonilCoA da origen al anillo aromtico A en las chalconas y flavanonas. Estas a su vez son los precursores de las dems clases de flavonoides. Es importante recalcar que este proceso de biosntesis sustenta el hecho de que en la mayora de flavonoides el anillo A sea meta-oxigenado, es decir como es caracterstico de los anillos aromticos originados por la va de la malonilCoA; y por otro lado, el anillo B proveniente de la ruta del cido shikmico, generalmente es orto-oxigenado. Para el caso de la biognesis de los isoflavonoides tales como las isoflavonas, pterocarpanos y rotenoides, los experimentos realizados por diversos investigadores sugieren que hay un proceso de migracin 2,3. Por ejemplo se ha demostrado que la (2S)-naringenina (una

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flavanona) es convertida por una isoflavonasintasa de la soya (Glycine max) en genistena (una isoflavona):

OH HO O 2 3 OH O Isoflavonasintasa OH O OH HO O

(2S)-Naringenina

Genistena

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AcetilCoA

Acido shikimico

OH OH

CH3 HO O O

OH O OH H O O

HO

OH O OH

OH HO OH HO O

OH

OH

OH

CHALCONA

(-)-FLAVANONA

7. Mtodos experimentales de anlisis

a. Extraccin y aislamiento Los flavonoides en general se extraen de muestras secas y molidas. La muestra se desengrasa inicialmente con ter de petrleo n-hexano, y el marco se extrae con etanol puro o del 70%. Este ltimo es recomendado para garantizar la extraccin de los ms polares. El extracto obtenido se evapora con calentamiento no superior a los 50C y se le hacen particiones sucesivas con ter etlico, acetato de etilo y n-butanol. Los flavonoides apolares quedan en la fase etrea, los medianamente polares en la fase acetato de etilo y los ms polares en el n-butanol. Cada una de estas tres fracciones se puede analizar por
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cromatografa en capa fina (CCF) y HPLC en fase reversa. Para el anlisis por CCF de las agliconas se pueden utilizar mezclas n-hexano/acetato de etilo y cloroformo/acetato de etilo en diferentes proporciones, por ejemplo la mezcla cloroformo/acetato de etilo 60:40 utilizada por Wagner y col. para el anlisis de drogas vegetales5. Para el anlisis de glicsidos flavonoides Wagner y col. utilizan una mezcla acetato de etilo/cido frmico/cido actico/agua 100:11:11:27. Para el anlisis por HPLC de los glicsidos pueden utilizarse columnas RP-18, detectando a 254 nm y eluyendo con mezclas cido actico al 2% acuoso/acetonitrilo en diferentes proporciones. El cido actico previene la formacin de picos asimtricos en el cromatograma. Para el anlisis cuantitativo HPLC de las agliconas tambin se usan columnas RP-18, deteccin a 254 nm y elucin con mezclas de acetonitrilo/agua con cido actico al 1%6,7. Para el caso de flavonas metoxiladas y glicsidos de flavanonas en plantas del gnero Citrus se puede consultar el trabajo de Mouly y col.8

Las antocianinas se pueden extraer de tejidos frescos (p. ej. ptalos) por maceracin con un solvente cido como por ejemplo la mezcla metanol-cido actico-agua (MAW) (11:1:5) la mezcla MFW, es decir metanol/cido frmico/agua por ejemplo 10:1:9. El extracto obtenido se concentra y se somete a cromatografa en papel unidimensional eluyendo con la mezcla t-BuOH:AcOH:H2O (3:1:1). En estas condiciones las antocianinas presentan Rf bajo y se pueden separar de otros tipos de flavonoides como los glicsidos de flavonoles los cuales presentan un Rf alto. Una vez eludo del papel el extracto con las antocianinas se puede purificar a travs de un cartucho RP-8 eluyendo con AcOH al 7% acuoso y con AcOH al 7% metanlico. Tambin se pueden analizar por cromatografa en capa fina con placas de celulosa y eluyendo con la mezcla HCl conc./cido frmico/agua 19.0/39.6/41.49. Las antocianinas se pueden separar a escala analtica por HPLC [(columna RP-18, 25 cm de long., 5 m); eluente: una mezcla 1:1 de A (H3PO4 al 1.5% acuoso) y B (H2O:MeCN:AcOH:H3PO4 107:50:40:3) a un flujo de 0.8 ml/min; detectando a 352 y 530 nm]. A nivel preparativo puede usarse una columna RP-18 de 25 cm de long., los mismos solventes citados arriba pero en una proporcin 43:57 respectivamente, a un flujo de 2

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ml/min y detectando a 440 nm. A las fracciones obtenidas luego de concentrarlas al vaco, se les puede eliminar el cido fosfrico pasndolas a travs de un cartucho RP-8 lavando con AcOH al 8% acuoso. Luego, las antocianinas se eluyen con AcOH al 8% metanlico, se concentran a sequedad y se liofilizan para obtener los compuestos puros para su caracterizacin qumica10. Existen mtodos para estabilizar las antocianinas en micelias11.

Para la extraccin y aislamiento de flavonoides sulfatados puede consultarse el artculo de Chulia et al.12

Para la resolucin de mezclas enantiomricas de flavanonas se utiliza actualmente la HPLC con fases estacionarias quirales13.

8. Mtodos de identificacin a. Ensayos de coloracin Los flavonoides se pueden reconocer experimentalmente mediante diferentes ensayos de coloracin. A continuacin se describen un ensayo general de reconocimiento como es el ensayo de Shinoda, y otros ensayos ms especficos para varias clases de flavonoides.

Ensayo de Shinoda

Los flavonoides con el ncleo benzopirona (p. ej. flavonas, flavonoles, flavanonas, etc.) producen coloraciones rojizas cuando a sus disoluciones acuosas o alcohlicas se les adiciona magnesio seguido de HCl concentrado. Aunque no se conoce el mecanismo de esta prueba, es muy utilizada para reconocer esta clase de compuestos.

Ensayo con Zn/HCl

Al remplazar el Mg por el Zn en el procedimiento del ensayo de Shinoda, solamente los dihidroflavonoles (o flavononoles) producen coloraciones rojo-violeta. Las flavanonas y flavanoles no producen color o producen coloraciones rosadas dbiles.

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Ensayo de Pacheco

El slido flavonoide se calienta sobre una llama con unos pocos cristales de AcONa y 0.1 ml de anhdrido actico. Luego con 0.1 ml de HCl conc. Los dihidroflavonoles producen un color rojo caracterstico. Las flavonas, chalconas, auronas, flavonoles y flavanonas dan una respuesta negativa.

Ensayo del estroncio-amoniaco

Este ensayo se utiliza para distinguir entre flavonas y flavonoles-3-O-sustitudos 5,6dihidroxilados y 5-hidroxil-6-metoxilados14.

Reconocimiento de antocianinas

Las antocianinas se comportan como indicadores cido-base debido al proceso:

OH OH HO O
+

OH O OHHO O OGli OGli Base de la cianina (pH=8.5, violeta) OHH+ OGli HO O

OGli OGli catin de cianina (pH =3, rojo)

H+

OGli

Anin de la cianina (pH=11, azul)

A pH cido presentan coloraciones rojas, violetas y moradas; mientras que a pH alcalino presentan coloraciones verdes y azules15. Con esta prueba se pueden diferenciar entre las antocianinas y las betacianinas (pigmentos nitrogenados de colores rojos y violeta de plantas del orden Centrosperma, como p. ej. los pigmentos de la remolacha Beta vulgaris, Fam. quenopodiceas y tambin presentes en otras plantas como la Phytolacca americana, Fam. Fitolacceas16)

b. Espectroscopa ultravioleta-visible Los espectros UV de los flavonoides en metanol presentan bandas caractersticas debidas a los sistemas conjugados de los anillos aromticos.

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Las flavonas y flavonoles muestran dos bandas definidas: La banda I, de mayor longitud de onda en el rango 300-390 nm asociada con la funcionalidad cinamolo, y la banda II, entre 250-280 nm debida al anillo aromtico A (funcionalidad benzolo), aunque a veces se observan otras bandas de absorcin. La posicin de la banda I depende del tipo de flavonoide: las flavonas la muestran en 310-350 nm, los flavonoles 3-O-sustituidos en 330360 nm, y los flavonoles en 350-385 nm. La presencia de hidroxilos fenlicos en diferentes posiciones de la molcula puede establecerse estudiando el comportamiento del espectro UV metanlico al aadirle los denominados reactivos de desplazamiento: metxido de sodio (NaOMe), acetato de sodio (NaOAc), cloruro de aluminio (AlCl3) con y sin HCl, y cido brico (H3BO3).

El NaOMe es una base fuerte que ioniza los hidroxilos fenlicos presentes en la molcula y particularmente permite reconocer la existencia de grupos hidroxilo en 3 y 4'. Las flavonas 4'-hidroxiladas y los flavonoles 3-O-sustituidos presentan desplazamiento batocrmico de 45-65 nm para la banda I al aadir NaOMe, y la intensidad de la banda no decrece. Los flavonoles ( 3-hidroxiflavonas) sin hidroxilo en 4', tambin presentan el mismo desplazamiento batocrmico de 45-65 nm, pero la intensidad de la banda se ve disminuida. En los flavonoles 3,4'-dihidroxilados, orto-dihidroxilados y diorto-trihidroxilados, el espectro se descompone en pocos minutos luego de aadir el NaOMe. La aparicin de una banda alrededor de 330 nm (banda III) es caracterstica de flavonas 7-hidroxiladas17.

El NaOAc es una base ms dbil que el NaOMe, y ioniza solo los hidroxilos fenlicos ms cidos: 3, 4' y 7. La ionizacin del hidroxilo en 7 afecta la banda II y por lo tanto el NaOAc es un reactivo til para determinar la presencia de dicho hidroxilo. Si al aadir el NaOAc se observa un desplazamiento batocrmico de 5-20 nm en la banda II se trata de una flavona o flavonol 7-hidroxilado. Las flavanonas 5-hidroxiladas presentan un desplazamiento batocrmico de 35 nm. Los flavononoles (sin 5-OH) presentan un desplazamiento batocrmico de 60 nm. Sin embargo, Heinz y col. han reportado que se debe tener precaucin en la obtencin del espectro con NaOAc18.

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El H3BO3 en medio alcalino forma quelatos con hidroxilos fenlicos en posicin relativa orto:
Cl OH OH HO O AlCl3 HO O HCl O Al O HO O OH OH

OH

Al

O Cl

Al

O Cl

Cl

Cl

OH HO HO O O R H3BO3 (exc.) OH-

OH O
-

O B O

O R O

La formacin del quelato produce desplazamiento batocrmico en la banda I. Si el desplazamiento es de 12-36 nm se trata de un flavonoide (flavona, flavonol, aurona o chalcona) orto-dihidroxilado en el anillo B, pero si el desplazamiento batocrmico es menor es un flavonoide orto-dihidroxilado en el anillo A. Las isoflavonas, flavanonas y flavononoles orto-dihidroxiladas en el anillo A muestran desplazamiento batocrmico de 1015 nm pero en la banda II.

El AlCl3 anhidro tambin forma quelatos con flavonoides orto-dihidroxilados, 3hidroxilados y 5-hidroxilados19. En el caso de los orto-dihidroxilados el quelato es inestable a pH cido, mientras que los quelatos formados con 3- y/o 5-hidroxilados son estables: Por lo anterior, si al determinar el espectro con AlCl3 y HCl se mantiene un desplazamiento batocrmico de 35-55 nm en la banda I (comparando con el espectro metanlico) se trata de una flavona o un flavonol 5-hidroxilado. Si el desplazamiento es de 17-20 nm se puede tratar de una flavona o un flavonol 5-hidroxilado y 6-oxigenado. Si el desplazamiento es de 50-60 nm se trata de una flavona o un flavonol 3-hidroxilado (con o sin 5-OH).

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En el caso de flavonoides (flavonas y flavonoles) orto-dihidroxilados en el anillo B (sin 3OH ni 5-OH) al aadir el cloruro de aluminio se obtiene un desplazamiento batocrmico de la banda I de 30-40 nm, el cual se pierde al aadir el HCl. Los orto-dihidroxilados en A (sin 3-OH ni 5-OH) muestran un desplazamiento de la misma banda de 20-25 nm, el cual se pierde tambin al aadir el HCl. Otros flavonoides como las flavanonas, isoflavonas y flavanonoles presentan

desplazamientos batocrmicos pero en la banda II. Las auronas, chalconas y antocianidinas tambin presentan desplazamientos batocrmicos en la banda I20,21. Los datos espectrales UV de varios flavonoides se dan en el trabajo de Jay y col. 22

c. Espectrometra de Resonancia Magnetica Nuclear El espectro de RMN-1H de los flavonoides permite reconocer caractersticas estructurales importantes. Un resumen de los para los tipos de protones ms comnmente hallados se presenta en la tabla 7.

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Tabla 7. Desplazamientos qumicos de varias clases de protones presentes en los flavonoides


(ppm)

Tipos de protones Tetrametilsilano Trimetilsililo Metilo de la ramnosa (doblete ancho) Metilos del grupo isopentenilo Metilos de acetatos alifticos (de azcares) Metilos de acetatos aromticos H-3 de flavanonas (multiplete) Protones de azcares Metileno del grupo isopentenilo Metoxilos aromticos Protones 2 y 3 de isoflavanonas Protn 1 de azcares, protn 2 de flavanonoles y flavanonas (doble

0.0 0.0-0.5 1.0-1.2 1.7 1.9-2.0 2.2-2.4 2.7-3.1 3.0-4.8 3.5 3.7-4.1 4.1-4.6 4.2-6.0 doblete) 5.4 5.9-6.0 6.0-6.8 6.8-8.0 7.5-8.0 8.9 12.0-14.0

Protn 2 de flavanonoles y flavanonas (dd) Metilndioxi Protones 3, 6 y 8 de flavonas Protones aromticos del anillo B Protn 2 de isoflavonas Protn 4 de antocianinas Protn del hidroxilo 5

Las antocianinas23 se pueden reconocer en sus espectros RMN-1H por la seal en 8.9 (s, H-4)24 y las seales caractersticas de otros protones aromticos como en los glicsidos de la delfinidina25:

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26

7.0d, 2 Hz H HO H 6.9d, 2Hz OR 1

7.7s H O+

OH OH OH H OR2 7.7s R1, R 2: Carbohidratos

H 8.9s

Las flavanonas se reconocen por las seales dd en 5.4 (H-2, J=13 y 2-3 Hz), 3.1 (H-3 trans, J=13 y 2-3 Hz) y 2.8 (H-3 cis, J=17 y 2-3 Hz) 26. Las isoflavanonas se pueden reconocer por RMN-1H por las seales: 4.1 (H-2a, dd, J=5 y 8 Hz), 4.5 (H-2b, dd, J=5 y 12 Hz) y 4.6 (H-3, dd, J=8 y 12 Hz)27.

Los protones de los grupos hidroxilos generalmente no se observan en los espectros cuando estos se determinan en solventes prticos, sin embargo existen mtodos para observarlos no solo en los flavonoides sino en cualquier producto natural28. Vese a manera ejemplo el espectro de la flavanona:

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27

En el espectro de RMN-13C se pueden reconocer varios tipos de carbonos, en la Tabla 8 se presentan los rangos de desplazamiento qumico para varios de ellos.

Tabla 8. Desplazamientos qumicos de varios tipos de carbonos de flavonoides


(ppm)

Tipos de carbonos C-6 de ramnosa C-4 de flavan-3-oles29 C-3 de flavanonas30,31 Metoxilos32 C-OH de carbohidratos C-3 de flavanonoles C-2 de flavanonas33 C-2 de flavanonoles C-3 de flavonas, C-1 de carbohidratos, C-10 de flavonas 5-hidroxiladas aromticos con H aromticos sulfatados C-3 de flavonoles, C-5 de flavonas 5-hidroxiladas, C-3 y C-4 de antocianinas34

18 30 42-46 56-61 60-80 70-75 80 85 100-115 115-128 130-140 145

150-165

C aromticos hidroxilados y metoxilados, C-1a de flavonas, C-2 de antocianinas, C-2 de flavonas, C-4' oxigenado, C-9 de flavonas

175-178 182 190-196 197-200

carbonilo C-4 sin OH en C-5 en flavonas, C-4 de flavonoles carbonilo C-4 con OH en C-5 de flavonas35 carbonilo C-4 de flavanonas36 carbonilo C-4 de flavanonoles

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28

Es posible tambin diferenciar entre un C-glicsido flavonoide y un O-glicsido flavonoide. En los O-glicsidos, el C-1 resuena alrededor de 100 ppm para los carbohidratos ms comunes, mientras que en los C-glicsidos resuena alrededor de 75 ppm. Por otro lado, en los C-glicsidos el carbono de la aglicona ligado al carbohidrato resuena alrededor de 10 ppm a campo ms bajo de su valor normal (sin sustituyente)37. Recientemente, se ha publicado el estudio de 70 espectros de RMN-13C de flavonas polioxigenadas, y los autores aplican el anlisis de estos espectros a la asignacin de las seales de los carbonos del anillo A38. Para otras colecciones de espectros consultar los artculos de Markham y col.39 A manera de ejemplo se presenta a continuacin el espectro RMN-13C de la flavanona:

d. Espectrometra de masas Las agliconas flavonoides presentan fragmentos caractersticos en su espectro de masas de impacto electrnico IE40. Por ejemplo, las flavonas y flavonoles presentan generalmente los fragmentos M+., [M-H]+, y [M-CO]+. uno o varios de los fragmentos A1+., [A1+H]+, B1+. y B2 + los que se originan por rompimientos Retro-Diels-Alder:

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29

R4 ' R7 O R3 R5 O O

R4 '

B2 +

R7

O + R5 A1+ O R3 B1 +

R4 '

Las flavonas e isoflavonas generalmente muestran los fragmentos A1+., [A1+H]+, B1+. y B2+. Los flavonoles muestran [A1+H]+ y B2 +; adems el fragmento [M-CHO]+. Las 3metoxiflavonas muestran A1+., [A1+H]+ y B1 +.. Adems se observa el fragmento [M-COMe]+. Las flavanonas muestran A1+., [A1+H]+, [B1+2H]+. y los fragmentos [M-anillo B] + y B3+.:

R7 R4' R7 O R5

OH

[M-B] + R5 O M+. B3 +. R4'

Los flavanonoles muestran A1+. y los fragmentos siguientes:

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R4' R7 O

R4'

R4' R4'
+

OH R5 O

CH2 B6 +

OH B4 +.

O B5 +.

M +.

Las chalconas tienden a producir fragmentos originados por ruptura a cada lado del carbonilo:

R4' R7 R4' R7 R7 R5 O R5 R4' A2 + [A2-28] + O R5 R5 [M-28] +. R7

R4' B7 +.

[B7-28] +.

Las 2'-hidroxichalconas pueden isomerizarse a flavanonas y generar los fragmentos caractersticos de estas.

En general las agliconas flavonoides con uno o varios grupos metoxilo presentan el fragmento [M-Me]+ , el cual es especialmente intenso en flavonoides 6- y 8-metoxilados. En los flavonoides 2'-hidroxilados tambin se aprecia a veces el fragmento [M-OH]+, mientras que los 2'-metoxilados presentan el fragmento [M-OMe]+.
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El fragmento [M-agua]+ es comn en flavonoles, flavan-3,4-dioles y C-glicsidos. El fragmento [M-55]+ o [M-56]+. indica la presencia de un sustituyente isopentenilo. Son ejemplos de este tipo de fragmentaciones en el caso de tricina, jaceosidina y eupafolina, aisladas de Artemisia vulgaris.41 Es importante anotar que algunos autores como Goudard y col. reportaron que es posible diferenciar 5-hidroxi-, 6,7-dimetoxi-, 7,8-dimetoxi-, 5,6,7-trimetoxio 5,7,8-

trimetoxiflavonas con base en las intensidades relativas de los iones M y M-1542. La tabla 9 resume los fragmentos caractersticos de agliconas de flavonas y flavonoles y su interpretacin respecto al nmero de sustituyentes hidroxilos y metoxilos en los anillos A y B:
Tabla 9. Valores m/z de fragmentos obtenidos a partir de rupturas de las molculas de flavonas y flavonoles m/z Nmero de sustituyentes en el ANILLO A43 Nmero de sustituyentes en el ANILLO B44

OH H 105 120 121 135 136 150 151 152 153 165 166 167 168 169 180 0 0 1 0 0 2 2 1 1 3 3 0 4 4 3 3 3 2 2 2 2 1 1 2

OMe 0 0 0 1 1 0 0 1 1 0 0 2

OH 0 1 0 2 1 3 0 2 4 -

H 5 4 4 3 3 2 3 2 1 -

OMe 0 0 1 0 1 0 2 1 0 -

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32

181 182 183 184 185 195 196 197 198 199 210 211 212 213 226 227 240 241 255

0 2 2 4 4 1 1 3 3 0 0 2 2 1 1 0 0 -

2 1 1 0 0 1 1 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 -

2 1 1 0 0 2 2 1 1 3 3 2 2 3 3 4 4 -

1 3 5 0 2 4 1 3 2 1 0

2 1 0 2 1 0 1 0 0 0 0

2 1 0 3 2 1 3 2 3 4 5

Para los glicsidos y flavonoides sulfatados, aunque anteriormente se obtenan los espectros de masas a partir de sus derivados permetilados45,46,47 y trimetilsililteres48,49, ms recientemente se utiliza la Espectrometra de masas FAB50. Por ejemplo el espectro de masas FAB permite reconocer los flavonoides sulfatados ya que presentan adems del in pseudomolecular (M+H en modo positivo, M-H en modo negativo), prdidas sucesivas de 80, 160, 240, etc. unidades de masa debidas a la prdida de 1, 2, 3 ms grupos sulfato. Por ejemplo, el espectro FAB del siguiente compuesto, muestra los fragmentos m/z 505 (M-H), 425 (M-HSO3) y 345 (M-2HSO3)51:
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33

O OM e M eO O O OM e O

S O 3H OH

S O 3H

3,3'-disulfato de gossipetina-7,8-dimetilter

Para el caso de los glicsidos flavonoides el espectro de masas FAB permite determinar el nmero de unidades y la clase de carbohidratos ligados, por ejemplo52:

OMe HO O
Li+

OH

Glu Glu
m/z 675 m/z 513

O
m/z 345

Actualmente se utilizan tcnicas como la Espectrometra de masas de Ionizacin Electrospray (sigla en ingls: ESI-MS), con la cual se pueden analizar flavonoides presentes en bajas concentraciones en diferentes muestras53.

A manera de ilustracin se presentan a continuacin los espectros de masas IE de la quercetina y la flavanona:

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e. Difractometra de Rayos-X La asignacin de la estereoqumica y la determinacin de la estructura espacial de algunos flavonoides se ha realizado mediante los estudios de los espectros de Difraccin de RayosX. Un ejemplo es el 12a-hidroxidalpanol, un rotenoide aislado de las partes areas de Amorpha fruticosa (leguminosas) y que es citotxico a seis lneas celulares de cncer humano 54.

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HO H O O H O OH OMe OMe

f. Espectroscopia infrarrojo Aunque el espectro infrarrojo de los flavonoides no se usa mucho actualmente, a manera de ilustracin se presentan a continuacin los espectros infrarrojo de la quercetina y la flavanona:

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g. Hidrlisis55 Los O-glicsidos flavonoides se pueden hidrolizar en presencia de cidos para liberar los carbohidratos ligados y la correspondiente aglicona flavonoide. En general se utiliza HCl 2N: metanol 1:1 reflujando durante 1 hora. Los O-glucurnidos flavonoides requieren condiciones ms fuertes para su hidrlisis y sta se realiza con HCl 2N reflujando a 100C durante 2 horas. Los C-glicsidos no se hidrolizan en estas condiciones pero pueden sufrir el reordenamiento de Wessely-Moser, como en el caso de la vitexina:

Glu HO O

OH HO H+ Glu O

OH

OH

OH

Vitexina

Isovitexina

En condiciones alcalinas fuertes (p. ej. reflujo con NaOH 2N, 100C, 1 hora) el ncleo flavonoide se rompe liberando sustancias de menor peso molecular:

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OH HO O NaOH 2M OH O 100C, 60 min N2 OH HO OH + OH R (R=CH2OH o COOH)

El anlisis cromatogrfico y espectral de estos productos de degradacin ha sido utilizado para confirmar la asignacin de la estructura del flavonoide.

9. Interconversin de los flavonoides Existen varios procedimientos experimentales para interconvertir un flavonoide en otro, generalmente con el fin de facilitar su identificacin. Por ejemplo, las flavanonas pueden convertirse en flavonas con diclorodicianobenzoquinona/dioxano o con Se2O/Ac2O. Los dihidroflavonoles a flavonoles con AcOK/AcOH/I 2. Las isoflavanonas a isoflavonas con Se2O/Ac2O o SeO 2/alcohol amlico. Las proantocianidinas (o leucoantocianidinas) a antocianidinas por ebullicin en n-butanol con 5% de HCl concentrado durante 1-2 horas.

10. Utilidad de los flavonoides Como se mencion anteriormente, sin saberlo le humanidad ha consumido casi a diario esta clase de sustancias, pero como muchas otras que son conocidas para los cientficos permanecen desconocidas para el ciudadano comn. Como el objetivo de este texto es llegar no slo al auditorio acadmico-cientfico, sino tambin a ese ciudadano comn, a continuacin tratar de usar un lenguaje de comprensin general, y para mostrar la utilidad de los flavonoides hablar de sus beneficios para la salud, muy especialmente lo relacionado en las investigaciones ms recientemente publicadas.

b. Los flavonoides y el hgado Recientemente ha crecido mucho el inters y el uso de varias drogas naturales como hepatoprotectores, esto es como protectores del hgado. Una de las ms mencionadas y comercializadas es el gingko. La droga la constituyen las hojas de Gingko biloba

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(Gingkoaceae) un arbusto ornamental de origen asitico. Estas contienen flavonoides, biflavonoides, proantocianidinas y otros. El extracto de gingko acta al nivel circulatorio. Inhibe la agregacin plaquetaria56, aunque contiene una concentracin baja de 4'-Ometilpiridoxina, una sustancia neurotxica57.

c. Los flavonoides y la arteriosclerosis La arteriosclerosis es el endurecimiento progresivo de las venas y arterias por acumulacin de sustancias grasas, por lo tanto afecta la presin arterial y puede llevar a la muerte. Uno de los medios ms utilizados para su tratamiento es el manejo de dietas rigurosas y deficientes en grasas y carbohidratos. Sin embargo, existen investigaciones recientes que demuestran que las personas que consumen habitualmente bebidas como los vinos tintos y el t verde, se ven beneficiados por el hecho de que son menos propensos a ataques cardacos y prevenir la arteriosclerosis.

A continuacin se resumen algunas de las acciones benficas de los flavonoidespara nuestro organismo y nuestra salud:

Los flavonoides son importantes para la salud de los vasos sanguneos. Regulan la permeabilidad del capilar, por eso detienen el flujo de protenas y clulas de sangre, pero permiten el flujo de oxgeno, dixido del carbono y otros nutrientes. Muchos flavonoides incrementan la fortaleza de los vasos capilares, previnindolos de cerrarse fcilmente. Esto es en parte debido a que ciertos flavonoides tienen una accin similar a la de la vitamina C. Esto puede ayudar a proteger los vasos sanguneos contra las infecciones y las enfermedades.

Los flavonoides tambin puede relajar el msculo liso del sistema cardiovascular, disminuyendo as la presin de la sangre. Esto tambin mejora la circulacin en el propio corazn. Los flavonoides son antioxidantes y tambin pueden prevenir la oxidacin del colesterol LDL, previniendo el aumento de placa arterioesclertica. Tambin pueden detener

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el agrupamiento de las plateletas de sangre, reduciendo la coagulacin de la sangre y el dao de los vasos sanguneos.

Efectos Anti-inflamatorios

Los farmaclogos son personas profesionales en los medicamentos y quienes estudian todos los procesos que ocurren en nuestro organismo cuando ingerimos o se nos inyecta un medicamento, para ellos las sustancias que son fundamentales en los medicamentos las clasifican de acuerdo a su accin, por ejemplo hay medicamentos antimicrobianos, anticancergenos, antinicticos, antigripales, etc. Una de estas clases son las sustancias antiinflamatorias, que como su nombre lo indica sirven para desinflamar. A los flavonoides se les ha asociado con la accin antiinflamatoria, y es de las ms estudiadas. Existen varios ejemplos que demuestran con evidencia experimental entre ellos estn por ejemplo: Algunos dmeros flavonoides (biflavonoides) como el diinsininol58, isoflavanquinonas59, etc. En Colombia varias plantas medicinales han sido aprobadas por el Ministerio de Salud como antiinflamatorias, entre ellas estn:

Flores de Arnica: Las flores de Arnica montana (Asteraceae) contienen quercetrina-3-Oglucsido, luteolina-7-O-glucsido y kaemferol-3-O-glucsido entre otros. Esta droga es de venta libre en Colombia y se usa como antiinflamatorio de uso externo 60,61.

Flores de Calndula: Las flores de Calendula officinalis (Asteraceae) contienen glicsidos de iso-ramnetina y quercetina. En nuestro pas es una droga de venta libre usada como antiinflamatoria y regeneradora del epitelio 62, y fue aprobada por el Minsterio de Salud para su uso medicinal como antiinflamatorio y cicatrizante63. El extracto alcohlico mostr efecto positivo en el tratamiento de lceras varicosas y lesiones en la piel64.

Existen en Colombia otras plantas que aunque no estn aprobadas por el Ministerio de Salud, s se han usado como antiinflamatorios, como el caso el caso del Chuchugas. Esta corresponde a la corteza de Maytenus aelevis (Celastraceae), que contiene proantocianidinas con actividad antiinflamatoria (artritis)65.
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Las propiedades anti-inflamatorias de los flavonoides se deben a su accin antioxidante y a su habilidad de actuar contra los histaminas y otros mediadores de inflamacin, como las prostaglandinas y los leucotrienos. Otros efectos66 Sistema cardiovascular

Los flavonoides son importantes para mantener sanos los conductos sanguneos. Regulan la permeabilidad capilar. Muchos de ellos incrementan la resistencia de los capilares evitando que se plieguen o aplanen. Esto es debido en parte a que ciertos flavonoides mejoran la accin de la vitamina-C. Estos efectos ayudan a proteger contra infecciones y enfermedades de los vasos sanguneos. Los flavonoides tambin ejercen una accin relajante del msculo liso del sistema cardiovascular, lo que lleva a la disminucin de la presin sangunea. Esta accin mejora tambin la circulacin del mismo corazn. Por su efecto autoxidante y pueden evitar la oxidacin del colesterol LDL, lo que a su vez previene la formacin de la denominada placa arterioesclertica. Tambin pueden evitar la acumulacin excesiva de las plateletas, evitando as el dao de los vasos sanguneos y la coagulacin de la sangre.

Accin antiinflamatoria

Como se anot anteriormente, a los flavonoides se les ha asociado principalmente con su accin farmacolgica. Esta es debida a sus efectos antioxidantes y a su capacidad de actuar contra las histaminas y otros mediadores de los procesos inflamatorios como son las prostaglandinas y los leucotrienos.

Aunque los flavonoides tienen muchas propiedades comunes a muchos de ellos, algunos de ellos tienen propiedades especficas. Algunos tienen actividad estrognica mientras otros inhiben el crecimiento de tumores. Absorcin Los flavonoides se absorben fcilmente desde el instestino, y los metabolitos y excesos se excretan en la orina.

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Fuentes dietarias ms comunes Los flavonoides se encuentran en la pulpa comestible de frutos como los ctricos, cerezas, uvas, albaricoques, grosellas negras, etc. La pimienta verde, el brocoli, las cebollas y los tomates son buenas fuentes vegetales, como tambin el trigo sarraceno. El t verde y el vino tinto tambin contienen varios flavonoides. Muchas plantas aromticas tambin contienen flavonoides, y en ellas estos contribuyen a sus efectos teraputicos. Entre estas se incluyen el gingko, espino, cardo, etc. Deficiencia

No existen hasta ahora estudios experimentales que demuestren que en las personas puedan existir deficiencias en cuanto a la ingestin de los flavonoides y se cree que la mayora de la gente consume en su dieta alimenticia la cantidad requerida. Es posible tambin que mucha gente, especialmente las personas que consumen menos alimentos de origen vegetal no consuman lo suficiente para mantener una salud ptima. Por lo anterior, no existen recomendaciones dietarias respecto al consumo de los flavonoides, sin embargo en el comercio se consiguen algunos suplementos de diferentes tipos y dosis. Los extractos de corteza de pino y de semillas de uvas son fuentes de proantocianidinas. La proporcin de estos flavonoides, como otros nutrientes, vara de una especie vegetal a otra. Ambas fuentes pueden utilizarse de manera alterna, pero el extracto de semillas de uvas contiene un mayor porcentaje de proantocianidinas (92-95%), mientras que los extractos de corteza de pino contienen 80 a 85% de tales compuestos. Adems las semillas de uvas contienen flavonoides que se encuentran tambin presentes en el t verde, el cual como se muestra adelante tambin es benfico para la salud.

Efectos txicos

No se han reportado hasta ahora efectos txicos cuando se consumen relativamente grandes cantidades de flavonoides.

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Usos terapeticos de los suplementos

Mejoramiento de la accin de la vitamina C Los flavonoides como los presentes en los ctricos, a menudo se administran junto con la vitamina C, por ejemplo para el tratamiento de resfriados, hemorragias, lceras, etc. Tambin tienen accin antiviral.

Desrdenes cardiovasculares Debido a sus propiedades antioxidantes, los flavonoides protegen contra enfermedades del corazn, lo que explica la denominada paradoja francesa. Esta se refiere al hecho de que como los franceses consumen dietas ms ricas en grasas saturadas, y tienen mayores niveles de colesterol y presin arterial ms alta que por ejemplo los norteamericanos, tienen 2.5 veces menos incidencias de enfermedades coronarias. El vino tinto es una buena fuente de flavonoides y muchas personas han sugerido que el amplio consumo de vino tinto por parte de los franceses, los protege de enfermedad coronaria. Existen varios estudios que demuestran que el consumo diario de uno dos vasos de vino tinto, protegen contra el infarto cardaco y parece probable que precisamente el vino tinto es ms efectivo que el vino blanco, lo que de alguna manera descarta que la accin benfica sea debida al alcohol.

Una investigacin que involucr a 805 hombres de 65 a 84 aos de edad en 1985, y con un seguimiento clnico durante 5 aos, demostr que de ellos, los que ms consumieron t, cebolla y manzanas, presentaron menos incidencia de riesgo de ataques cardacos, que los que consumieron menores cantidades de tales vegetales. El consumo de dietas ricas en flavonoides al parecer tambin protege contra el riesgo de paro cardaco. Algunos estudios demuestras que el consumo de dietas ricas en flavonoides, especialmente quercetina, y ms de 3 tazas de t negro al da, presentaron hasta un 75% de menor riesgo, comparados con aquellos que ingirieron menores cantidades. El t negro Los flavonoides son tiles el el tratamiento de la hipertensin arterial debido a su efecto fortificante y tonificante en los vasos capilares. Tambin en desrdenes circulatorios de la
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retina y el ojo. Son particularmente tiles en el tratamiento de problemas de las venas y capilares tales como las venas varicosas, insuficiencia venosa (disminucin de la capacidad de retorno de la sangres desde las piernas hasta el corazn), y problemas en los ojos tales como la retinopata originada por la diabetes. T verde

El t verde contiene varias sustancias polifenlicas que tienen efectos benficos, incluyendo la proteccin contra enfermedades del corazn. Adems se ha demostrado que disminuye los niveles de colesterol, por ejemplo en una investigacin realizada en Japn, donde se consume habitualmente. Cncer

Los flavonoides tambin ayudan a proteger contra el cncer. Muchas investigaciones han demostrado que varios flavonoides pueden inhibir la proliferacin de clulas cancerosas. En una investigacin en el estado de Iowa, EE.UU., se encontr que de 35000 mujeres postmenopasicas, aquellas que bebieron habitualmente ms de dos tazas de t al da, el 32% present menos probabilidad de desarrollar cncer de boca, esfago, estmago, colon y recto, y el 60% menor probabilidad de desarrollar cncer del tracto urinario. La cebolla es tambin rica en el contenido de flavonoides y hay estudios que demuestran que hombres y mujeres que consumen habitualmente la cebolla presentaron menor riesgo de cncer estomacal. T verde

Diferentes preparaciones y extractos de t verde han mostrado inhibicin de la formacin y el crecimiento de tumores en animales de laboratorio. La evidencia de este efecto protector ha sido obtenida para el caso de cnceres del tracto digestivo y de seno. Sin embargo se encontr que cuando se consume algn tipo de bebida alcohlica se disminuye el efecto protector.

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Alergias y autoinmunidad

Adems de sus efectos antioxidantes, la capacidad de los flavonoides para afectar enzimas involucradas en la produccin de sustancias antiinflamatorias significa que son tiles para el tratamiento de asma, alergias, artritis, etc.

Quercetina

La quercetina ha mostrado efectos antiinflamatorios. La inflamacin es mediada parcialmente por la liberacin de histamina. La quercetina puede estabilizar las membranas de las clulas que liberan la histamina, reduciendo su liberacin. Tambin afectan la sntesis de leucotrienos. La quercetina tambin inhibe la enzima que convierte glucosa en sorbitol, un compuesto que est relacionado con las complicaciones diabticas, incluyendo las cataratas. Varios compuestos qumicamente relacionados con la quercetina han mostrado que inhiben la formacin de cataratas en animales diabticos. La quercetina tambin mejora la secrecin de insulina y protege las clulas pancreticas del dao por radicales libres. Tambin existen estudios que demuestran su accin benfica en el tratamiento de tumores en prstata67 Soya La soya contiene un tipo de flavonoides denominados como isoflavonas. Estas a su vez se las refiere como fitoestrgenos, debido a que tienen propiedades estrognicas y antiestrognicas. Cuando los niveles circulantes de estrgenos son altos, como en el caso de las mujeres premenopasicas, estos compuestos pueden ligar receptores estrognicos y bloquear la accin de la hormona. En cambio, cuando los niveles de estrgenos son bajos, como en el caso de las mujeres post-menopasicas los fitoestrgenos actan estrognicamente. Los compuestos fitoestrognicos de la soya incluyen la genistena y la daidzena68. Las evidencias obtenidas a partir de experimentos de biologa celular y molecular, experimentos con animales, y ensayos clnicos con humanos, sugieren que los fitoestrgenos pueden ayudar a prevenir enfermedades cardiovasculares, cncer, osteoporosis y sntomas de la menopausia. Los estudios epidemiolgicos sugieren que las tasas de estas enfermedades son ms bajas entre poblaciones que consumen dietas ricas en vegetales, particularmente en culturas como la China y la Japonesa, las cuales consumen

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habitualmente productos a partir de soya. Adems la soya contiene los fitoesteroles, los cuales han demostrado que disminuyen el colesterol sanguneo, posiblemente por un mecanismo competitivo con el colesterol dietario. Los productos de la soya tambin pueden reducir la oxidacin del colesterol LDL e inhibir el acumulamiento excesivo de las plateletas, dos procesos que disminuyen el proceso arterioesclertico. Adems mejoran el funcionamiento de las arterias. El consumo de soya tambin disminuye el riesgo de cncer, particularmente los dependientes de hormonas como el de seno y el de prstata. Tambin se ha encontrado relacin entre el alto consumo de productos a base de soya y la menor incidencia de sntomas menopasicos y osteoporosis, por ejemplo en mujeres japonesas. En el caso del cncer de prstata, existe controversia sobre su efecto benfico, pues existen autores que asocian los isoflavonoides con la promocin de tumores.

Otros estudios

Los flavonoides se han aislado de muchas drogas vegetales debido a que son productos naturales muy comunes. Su presencia en una droga vegetal no necesariamente explica sus propiedades farmacolgicas. Se les ha atribuido una cantidad de propiedades farmacolgicas, incluyendo actividades inhibidoras de enzimas (hidrolasas, ciclooxigenasas69, fosfatasa alcalina, cAMP fosfodiesterasas, ATP-asas, liasas, hidroxilasas, transferasas, oxidoreductasas y kinasas)70, antiinflamatoria71, anticancergena, antibacterial y antiviral. La crisina se encuentra en el lamo (Populus sp.) y en la cereza salvaje (Prunus sp.), la apigenina en el perejil, el kaemferol en el sen, y la liquiritigenina en el regaliz. La rutina presente en la cscara de los ctricos fue alguna vez considerada como la vitamina P, pero actualmente no se le reconoce como tal. El uso de la rutina para el tratamiento de la fragilidad capilar es motivo de controversia, pero sin embargo es utilizada para el tratamiento de la hipertensin y en geriatra. Las flores de saco (Sambucus niger), usadas para el tratamiento de resfriados, influenza y reumatismo, contienen varios glicsidos flavonoides. Una cantidad de isoflavonas (derivados de la 3-fenil--cromona) posee actividad estrognica72 y producen esterilidad en las ovejas que consumen trbol. La silibina y la silimarina son flavolignanos constituyentes del cardosanto (Silybum marianum) el cual se

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utiliza ampliamente en Alemania para la proteccin del hgado73. La quercetina y la rutina tienen efectos anticancergenos potenciales. Tambin existen algunas evidencias que los consumidores de vinos rojos y vinotinto presentan baja mortalidad por enfermedad coronaria74, y que ello se debe a los compuestos fenlicos presentes, entre los cuales estn los flavonoides catequina, epicatequina y quercetina 75. Las procianidinas presentes en las uvas tienen uso potencial en isquemias cardacas76. Esto a llevado a que en Francia se elabore un producto denominado la "Paradoja francesa", al cual se le atribuyen propiedades benficas para el tratamiento y prevencin de enfermedades cardiovasculares77. La soya contiene isoflavonoides antiestrognicos78 y antimutagnicos79. Artemisia vulgaris contiene flavonoides estrognicos80. El Maytenus aquifolium, denominada "espinheira-santa" en Brasil, donde es utilizada para dolencias estomacales, tiene accin contra lceras en ensayos con ratones81. Tambin se han reportado flavonoides que inhiben la agregacin plaquetaria, con accin vasodilatadora (naringenina, eriodictyol y luteolina)82, con accin antiarrtmica83, chalconas con accin antimictica, antibacteriana, citotxica y antimittica84,85, la 3-

ramnosilquercetina presenta actividad antidiarrica86, y antialrgica8788, flavonoles con actividad antiespasmoltica89, isoflavonas y flavanonas antimicticas, isoflavanos y flavanonas antimicrobianos90 y flavanos con actividad leishmanicida91. Varios glicsidos del kaemferol, la quercetina y la miricetina inhiben la infeccin por el virus VIH-192. Flavonoides como la quercetina, flavona, catequina y crisina parecen desempear un papel importante contra la accin de la morfina93. Las antocianinas por sus caractersticas se han sugerido como colorantes de alimentos94. Adems se ha informado el uso potencial de ciertos flavonoides en cosmticos95. Otras clases de flavonoides como los denominados rotenoides tienen uso como insecticidas96.

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11. Relacin Estructura-Actividad Biolgica (REA) Existen diferentes reportes en los que se presentan estudios de diferentes clases de flavonoides respecto a su estructura qumica y su actividad biolgica. Por ejemplo en el caso de su accin antialrgica, Matsuda y col.2, encontraron que son requisitos los siguientes: (1) El enlace doble 2-3 de las flavonas y flavonoles es esencial para la actividad antialrgica. (2) Los 3- y 7-O-glicsidos tienen menor actividad. (3) Entre ms grupos hidroxilos existan en las posiciones 3, 4, 5, 6 y 7, la actividad es ms fuerte. (4) Los flavonoles tipo pirogalol (3,4,5 trihidroxilados), presentan menor actividad que los tipo pirogalol (4-hidroxilados) o catecol (3,4-dihidroxilados). (5) Las actividades de las flavonas son ms fuertes que las de los flavonoles. (6) En los flavonoles 3-O-metilados se sdisminuye la actividad. (7) Varias flavonas y flavonoles con grupos metoxilos en 4 y en 7, no siguen las reglas 3, 4 y 5. Otro trabajo, de Zhang y col., estudi la REA entre varios flavonoides y el cncer de seno. Estos autores encontraron que el enlace doble entre C-2 y C-3, el anillo B ligado al C-2, el grupo hidroxilo en C-5, la no hidroxilacin en C-3 y la presencia de sustituyentes apolares en C-6, C-7, C-8 C-4, son carctersticas estructurales importantes para la interaccin entre los flavonoides y la BCRP (breast cancer resistance protein)3. En cuanto a la accin antioxidante de los flavonoides, se ha propuesto que el enlace doble C-2 C-3, el carbonilo C-4, y los hidroxilos en C-3 y C-5, son esenciales para la accin antioxidante de los flavonoides4. Existen otros estudios sobre REA de los flavonoides, como el de Alves y col., quienes evaluaron la REA entre varios flavonides naturales y sintticos, con actividad contra el virus del sida5.

2 Matsuda, H., et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry 10 (2002) 3123 3128 3 Zhang, S., et al., Biochemical Pharmacology 70 (2005) 627639. 4 Lien, E. J., et al., Free Radic. Biol. Med. 26 (1999) 285-294. 5 Alves, C. N., et al., J. Mol. Struct. (Theochem), 541 (2001) 81-88.

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Tambin se ha estudiado la REA entre flavonoides tipo antocianina como inhibidores de la xantina-oxidasa, la cual desempea un papel importante en el metabolismo del cido rico, y los problemas fisiolgicos asociados a este como la gota. Estos trabajos han permitido proponer por ejemplo que la presencia de hidroxilo en C-5 y/o en C-7, y el anillo B sin sustituyentes son requisitos para que tengan accin inhibidora de la enzima6.

12. Funcin Biolgica Aunque todava no se conoce exactamente el papel que desempean los flavonoides en los vegetales, se tienen algunas evidencias experimentales que sugieren que cumplen una o varias de las siguientes funciones:

a) Su capacidad de absorber ciertas radiaciones ultravioleta, los convierte en filtros solares para proteger los tejidos vegetales de radiaciones dainas, y adems se ha sugerido que participan en el proceso de la fotosntesis.

b) Sus variados colores y su presencia en tejidos como los de las flores, sugieren que participan en procesos como la reproduccin favoreciendo la atraccin de insectos polinizadores.

c) Las diferentes actividades biolgicas halladas para algunos de los flavonoides (antimicrobiana, antimictica, etc.) y las evidencias experimentales de que algunos aumentan la resistencia de ciertas plantas contra diferentes infecciones y enfermedades vegetales (es decir que actan como fitoalexinas97), sugieren que estas sustancias tambin son un mecanismo qumico de defensa vegetal.

d) La capacidad inhibidora de ciertas hormonas vegetales presentada por algunos flavonoides sugiere que actan como reguladores del crecimiento vegetal.

6 Amic, D., et al., J. Chem. Inf. Comput. Sci. 38 (1998) 815-818.

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13. Metabolismo La mayora de flavonoides son degradados en condiciones alcalinas fuertes rompindose el anillo C. Por esta razn resultan no txicos para el hombre y los mamferos pues son degradados en las condiciones alcalinas a nivel del intestino. Por ejemplo la quercetina es degradada segn el siguiente esquema:

OH OH HO O

OH OH HO + OH OH OH O

OH OH O pH alcalino

OH

-CO 2 OH OMe OH HO OH

OH

OH

OH

14. Algunas drogas vegetales que contienen flavonoides98

Flores de Acacia

Las flores de Robinia pseudoacacia (Fabaceae) contienen robinina. Flores de Manzanilla Romana

Las flores de Anthemis nobilis (Asteraceae) contienen apigenina-7-O-glucsido y luteolina7-O-glucsido. Flores de Cactus

Las flores de Cereus grandiflorus (Cactaceae) contienen glicsidos de iso-ramnetina y rutina. Para el anlisis HPLC de la rutina se puede consultar el artculo de Dimov y col.99

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Flores de Calndula

Las flores de Calendula officinalis (Asteraceae) contienen glicsidos de iso-ramnetina y quercetina. En nuestro pas es una droga de venta libre usada como antiinflamatoria y regeneradora del epitelio100. El extracto alcohlico mostr efecto positivo en el tratamiento de lceras varicosas y lesiones en la piel101.

Espino

La droga la constituyen las hojas, flores y frutos de Crataegus sp. (Rosaceae). Contiene glicsidos de quercetina y apigenina102.

Tuslago

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Las flores de Tussilago farfara (Asteraceae) contienen glicsidos de quercetina. Manzanilla Chiquita

Las flores de Matricaria chamomilla (Asteraceae) contienen quercimeritrina, glicsidos de apigenina, luteolina y patuletina. Esta es una planta medicinal aprobada en Colombia y se usa como carminativa y digestiva103,104.

Primavera

Las flores de Primula sp. (Primulaceae) contienen glicsidos de quercetina, gossipetina y kaemferol. En Colombia tiene uso ornamental.

Endrino

Las flores de Prunus spinosa (Rosaceae) contienen glicsidos de quercetina y kaemferol.

Saco

Las flores de Sambucus niger (Caprifoliaceae) contienen glicsidos de quercetina, rutina, hipersido, etc. Esta planta est aprobada en Colombia y se utiliza como expectorante. La especie relacionada Sambucus canadensis ha mostrado uso potencial contra el virus de la influenza105.

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Reina de los prados

Las flores de Filipendula ulmaria (Rosaceae) contienen espiracsido, hipersido y avicularina.

Pi de gato

Las flores de Helichrysum arenarium (Asteraceae) contienen glicsidos de naringenina, kaemferol, apigenina y luteolina.

Tilo

Las flores de Tilia sp. (Tiliaceae) contienen glicsidos de quercetina, kaemferol y miricetina. La especie medicinal est aceptada en Colombia corresponde a Tilia sylvestris y sus hojas se utilizan como sedante menor. Para el anlisis HPLC de los glicsidos flavonoides del tilo se puede consultar el trabajo de Pietta y col.106

Abedul

Las hojas de Betula sp. (Betulaceae) contienen glicsidos de quercetina y miricetina.

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Nogal

Las hojas de Juglans regia (Juglandaceae) contienen hipersido y otros glicsidos flavonoides. En Colombia es de venta libre la Juglans cinerea (nogal blanco), cuyas hojas se usan como antidiarrico.

Bodas de Plata

Corresponde a la Potentilla anserina (Rosaceae) que contiene glicsidos de quercetina y miricetina.

Cola de caballo

Las partes areas de Equisetum arvense (Equisetaceae) contienen glicsidos de luteolina, isoquercitrina y equisetrina107.

Herniaria

La Herniaria sp. (Caryophyllaceae) contiene rutina y narcisina.

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Infusin madre

La Leonorus cardiaca (Lamiaceae) contiene rutina.

Ruda

La Ruta graveolens (Rutaceae) contiene rutina.

Retama

Sarothamnus scoparius (Fabaceae) contiene escoparina y vitexina.

Vernica

Veronica officinalis (Scrophulariaceae) contiene luteolina-7-O-glucsido y rutina.

Bastoncillo dorado

Solidago virgaurea (Asteraceae) contiene glicsidos de quercetina y kaemferol.

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Pensamiento

Corresponde a Viola tricolor (Violaceae). Contiene glicsidos de quercetina. Es una planta medicinal aceptada en Colombia. Sus hojas y flores se usan como antitusivo.

Sofora

Las yemas de Sophora japonica (Fabaceae) contienen rutina (ca. 20%).

Naranja amarga

El pericarpio del fruto de Citrus aurantium (Rutaceae) contiene eriocitrina, rutina, naringenina, naringina, etc. En Colombia el fruto se usa como laxante.

Cscara de limn

Adems del aceite esencial el cual ha sido utilizado en la elaboracin de diferentes fragancias y saborizantes, el pericarpio del fruto de Citrus limon (Rutaceae) contiene hesperidsido el cual se utiliza en el tratamiento de hemorroides. Otros flavonoides con actividad antioxidante tambin ha sido aislados108

Cscara de cidra

El pericarpio del fruto de Citrus medica (Rutaceae) contiene eriocitrina, rutina, etc.

Yerbasanta

Corresponde a Eriodictyon glutinosum (Hydrophyllaceae). Contiene homoeridictiol, eriodictiol, etc.

Ortosifonis

Las hojas de Orthosiphon spicatus (Lamiaceae) contienen sinensetina, escutelarena y eupatorina. El extracto acuoso de Orthosiphon stamineus, Lamiaceae, usado tradicionalmente en Malasia para el tratamiento de diabetes, mostr actividad hipoglicmica en ratas109.

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Cardo de Mara

Los frutos de Sylibum marianum (Asteraceae) contienen flavolignanos, silibina, silicristina, silidianina, silimarina, etc. La silimarina es hepatoprotector y se utiliza en el tratamiento de trastornos digestivos funcionales110, ase dice tambin que protege el hgado de personas que consumen drogas sicotrpicas111. Adems la silimarina inhibe la hipercolesterolemia en ratas112. Otros estudios reportan que los flavolignanos potencian la accin de sustancias antimicrobianas113. Para el anlisis por CG-EM de sus componentes fenlicos se puede consultar el trabajo de Galetti y col.114

Trigo sarraceno

Las flores de Fagopyrum sculentum (Polygonaceae) son de venta libre en Colombia y se usan contra la fragilidad capilar.

Eucalipto

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Gingko

Los extractos de Gingko biloba, han mostrado efectos benficos en el tratamiento de insuficiencia cerebrovascular y problemas de la circulacin perifrica. La actividad farmacolgica se ha atribuido a trilactonas terpnicas y glicsidos flavonoles. Sin embargo, algunos alquilfenoles (cidos gingklicos, cardanoles y cardoles) se han identificado como constituyentes peligrosos en los extractos de Gingko. Estos compuestos adems de que tienen propiedades alergnicas, poseen tambin actividades mutagnica y cancergena, por lo tanto no pueden estar presentes en concentraciones mayores de 5 ppm, segn las farmacopeas americana y europea7.

Lespedeza

Corresponde a la Lespedeza capitata (Leguminosae). El extracto alcohlico se usa como estimulante de la eliminacin renal. Pycnogenol

El pycnogenol es un extracto de la corteza del pino marino francs Pinus maritima Lamk. (Pinceas), que contiene bioflavonoides, catequina, cidos fenlicos y procianidinas (tambin denominadas leucoantocianidinas). Entre sus efectos estn la inhibicin de la agregacin plaquetaria y la inhibicin de formacin de trombos. Es comparativamente ms activo contra

7 Fuzzati, N., Pace, R., Villa, F., Fitoterapia 74 247-256 (2003).

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los radicales libres, que el t verde y el gingko. Existen estudios sobre su accin benfica en pacientes con insuficiencia venosa crnica, con manifestaciones como las venas vrices115.

Fuentes de antocianinas

Las antocianinas debido a sus propiedades como verdaderos pigmentos vegetales y a que son fcilmente degradados en el intestino, se utilizan principalmente como colorantes de medicamentos y alimentos. Se extraen de plantas comestibles como las uvas negras (Vitis vinifera, Ampelidaceae)116, la mora, la fresa, el repollo morado, el pericarpio del rbano rojo117, el grosellero negro (Ribes nigrum, Saxifragaceae), etc. Las antocianinas de los frutos y hojas del arndano, Vaccinium myrtillus L., Ericaceae, presentan propiedades vasoprotectoras y contra desrdenes oftalmolgicos, y se vende el extracto con el nombre comercial de Myrtocyan118. Las flores de albahaca Ocimum basilicum, contienen varias antocianinas119.

15. Algunas plantas colombianas que contienen flavonoides Dentro de la muy poco estudiada flora colombiana existen numerosas plantas que tienen uso medicinal popular y que contienen flavonoides, especialmente de plantas de las familias ericceas, euforbiceas y compuestas (p. ej. el gnero Eupatorium es uno de los ms

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estudiados a nivel mundial por su uso medicinal120). A continuacin se mencionan algunas de ellas121.

Arnica

Corresponde al Senecio formosus de la familia Compositae. Se usa contra el reumatismo, como sudorfica, para la depuracin de la sangre y antisifiltica, pero contiene alcaloides lo cual la hace txica.

Cerraja

Corresponde a Sonchus oleraceus de la familia Compositae. Se usa su infusin en enfermedades del hgado, como diurtica, depuradora de la sangre, en trastornos biliares, como laxante y antiespasmdica.

Botn de oro

Corresponde a Spilanthes oppositifolia de la familia Compositae. Su decoccin se usa contra enfermedades del hgado, manchas en la piel y como dentfrico. Las flores como analgsico. Garca-Barriga anota que se usa contra la diabetes122.

Flor de muerto

Corresponde a Tagetes erecta de la familia Compositae. Su decoccin se usa como antihelmntico y emenagogo. La infusin de las flores y hojas se utiliza para el lavado de orzuelos y ojos infectados.

Chaparro

Corresponde a la Curatella americana de la familia Dilleniaceae. Las hojas contienen la avicularina y son usadas como sustituto del papel de lija. Se usa contra la artritis, la diabetes y para disolver los clculos biliares123.

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ame

El color violeta de los tubrculos de la Dioscorea trifida de la familia Dioscoreaceae, son debidos a antocianinas del tipo malvidina.

Angucho

Corresponde a la Befaria aestuans de la familia Ericaceae. La infusin de sus flores se usa como expectorante.

Uva caimarona

Corresponde a Cavendishia bracteata de la familia Ericaceae. Sus frutos son comestibles. La decoccin de las hojas se usa como astringente y contra el reumatismo.

Uva de pramo

Corresponde a la Gaylussacia buxifolia de la familia Ericaceae. Los frutos son de color morado debido a antocianinas.

Maz de perro

Corresponde a Pernettya prostrata de la familia Ericaceae. Sus hojas contienen flavonoides. Sus frutos son txicos.

Algayubo

Corresponde al Croton glabellus de la familia Euphorbiaceae. Las hojas contienen los flavonoides ayanina y quercitrina. Se usa como digestiva e hipotensora.

Contra-rayo

Las hojas de Euphorbia lathyris de la familia Euphorbiaceae contienen flavonoides. Ceiba

Corresponde a Hura crepitans de la familia Euphorbiaceae. Las semillas son venenosas. Las hojas contienen kaemferol.

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Frailecillo

Corresponde a la Jathropa curcas de la familia Euphorbiaceae. Las hojas contienen flavonoides. Las semillas se usan como purgantes pero son txicas.

Chuchugas

La corteza de Maytenus aelevis (Celastraceae) contiene proantocianidinas con actividad antiinflamatoria (artritis)124. 15. Problemas 1. J. NAT. PROD. 58(4) 475-482 (1995) Del extracto metanlico de la planta entera Polanisia dodecandra, se aisl por mtodos cromatogrficos una sustancia con actividad antimittica potente y con las siguientes caractersticas: Prismas amarillos P.F. 176-7C UV (MeOH): 257, 278, 345 nm UV (MeOH+NaOMe): 280, 396 nm EMIE: 404.1110 (74%), 389 (100), 371 (8), 359 (10), 331 (12), 303 (8), 275 (9), 211 (14), 202 (8), 183 (13), 164 (10), 151 (17), 123 (5). RMN-1H (CDCl3, 300 MHz): 3.88 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 3.96 (s, 3H), 4.00 (s, 3H), 4.11 (s, 3H), 7.00 (d, 1H, J=7.0 Hz), 7.77 (d, 1H, J=2.2 Hz), 7.78 (dd, 1H, J=2.2 y 7.0 Hz), 12.40 9s, 1H). RMN-13C (CDCl3, 75 MHz): 56.1, 60.1, 61.2, 61.7, 62.1, 107.5, 110.5, 114.6, 121.6, 123.7, 132.9, 136.2, 138.9, 144.9, 145.6, 149.0, 149.1, 152.9, 155.8, 179.4 ppm. Determine la estructura ms probable para esta sustancia. 2. PHYTOCHEMISTRY 42(4) 1203-1205 (1996). De la fraccin soluble en n-butanol del extracto metanlico de las partes areas de Lysionotus pauciflorus (Gesneriaceae) se aisl la nevadensina una sustancia que ha sido reportada como poseedora de actividad antiinflamatoria e hipotensora. Sus caractersticas son las siguientes: P.F. 198-199C UV(metanol): 283, 330 nm UV (AlCl3): 210, 352 nm UV (AlCl3/HCl): 308, 351 nm UV (NaOAc): 283, 273 nm UV (H3BO3/NaOAc): 283, 321 nm EMIE: m/z 344, 329, 277, 197, 169, 133

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RMN-1H (CDCl3, 360 MHz): 3.90 (s, 3H), 4.02 (s, 3H), 4.04 (s, 3H), 6.59 (s, 1H), 7.03 (2H, d, J=8.9 Hz), 7.89 (2H, d, J=8.9 Hz), 11.82 (s, 1H). RMN-13C (CDCl3, 90 MHz): 55.6, 60.2, 61.2, 103.0, 103.1, 114.7, 123.0, 128.0, 128.2, 131.6, 145.4, 148.4, 150.9, 162.4, 163.1, 182.3 ppm. Determine la estructura ms probable y el nombre IUPAC de esta sustancia. 3. Una sustancia vegetal presenta las siguientes caractersticas espectrales: Espectro de masas de impacto electrnico: m/z = 300 (100%), 299 (12), 272 (4), 257 (10), 155 (3), 121 (13), 93 (4). Espectro de RMN-1H (60 MHz, CCl4): 3.83 (3H, s); 6.18 (d, 1H, J=2 Hz); 6.47 (d, 1H, J=2 Hz); 6.85 (d, 2H, J=8 Hz), 8.00 (d, 2H, J=8 Hz). Espectros UV MeOH: 366, 266 nm NaOMe: 418 nm (descompone) AlCl3: 423, 270 nm AlCl3/HCl: 426, 267 nm NaOAc: 369, 265 nm H3BO3/NaOAc: 366, 265 nm Determine la estructura ms probable para esta sustancia, asigne las seales de RMN y el correspondiente nombre IUPAC. 4. Una sustancia vegetal presenta las siguientes caractersticas espectrales: Espectro de masas de impacto electrnico: m/z = 316 (100%), 301 (24), 288 (19), 285 (27), 273 (28), 271 (28), 166 (5), 137 (15), 109 (11). Espectro de RMN-1H (60 MHz, DMSO-d6): 3.90 (3H, s); 6.33 (d, 1H, J=2 Hz); 6.65 (d, 1H, J=2 Hz), 6.85 (d, 1H, J=8 Hz); 7.62 (dd, 1H, J=8 y 2 Hz); 7.58 (d, 1H, J=2 Hz); 12.45 (s, 1H).

Espectros UV MeOH: 372, 255 nm NaOMe: 418, 294 nm AlCl3: 455, 275 nm AlCl3/HCl: 425, 268 nm
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H3BO3/NaOAc: 386, 259 nm Determine la estructura ms probable para esta sustancia, asigne las seales de RMN y el correspondiente nombre IUPAC. 5. Xang, F. et al.; PHYTOCHEMISTRY 42 (3) 867-869 (1996). Del extracto de la corteza de Colebrookea oppositifolia (Labiatae), usada en China para el tratamiento de fracturas, heridas y artritis reumatoide, se aislaron dos compuestos con las siguientes caractersticas: Compuesto A: Polvo amarillo, [ ]D25 = -27 (DMSO, c 0.48). IR (KBr): 3270, 1650, 1600, 1580, 1485, 1441, 1350, 1290, 1196, 1112, 1065, 1045, 840, 800, 765, 680 cm-1. EM-FAB: m/z 447 [M+H]. EMIE: m/z 284 (100), 266 (41), 238 (44), 181 (15), 153 (35), 139 (32), 102 (48). RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 12.89 (s, 1H), 8.10 (2H, dd, J=7.6 y 1.6 Hz), 7.60 (3H, m), 6.98 (1H, s), 7.03 (1H, s), 5.05 (1H, d, J=7.6 Hz), 3.90 (s, 3H). RMN-13C (100 MHz, DMSO-d6): 56.56, 60.91, 69.95, 74.13, 76.54, 77.21, 91.77, 102.05, 104.93, 105.16, 126.35 (dos carbonos), 128.31, 129.05 (dos carbonos), 130.62, 132.01, 151.60, 152.75, 158.99, 163.39, 182.31 ppm. Compuesto B: Polvo amarillo, [ ]D25 = -48 (DMSO, c 0.36). IR (KBr): 3430-3240, 1650, 1610, 1560, 1500, 1442, 1350, 1280, 1240, 1162, 1075, 1040, 850, 830, 751, 740 cm-1. EM-FAB: m/z 432 [M]. EMIE: m/z 432, 280, 270, 242, 152, 124, 118. RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 12.88 (s, 1H), 7.87 (1H, d, J=8.1 Hz), 7.53 (1H, dd, J=8.4 y 7.4 Hz), 7.33 (1H, d, J=8.4 Hz), 7.20 (1H, dd, J=7.5 y 7.8 Hz), 7.00 (1H, s), 6.45 (1H, s), 6.20 (1H, s), 5.10 (1H, d, J=8 Hz). RMN-13C (100 MHz, DMSO-d6): 60.63, 69.62, 73.28, 76.73, 77.12, 93.69, 98.76, 100.26, 103.77, 110.19, 115.53, 120.32, 121.91, 129.00, 132.73, 155.35, 157.64, 160.76, 161.36, 164.30, 181.79 ppm. 6. Wesson, K. J.; Haman, M. T.; J. NAT. PROD. 59 (6) 629-631 (1996). 7. Van den Berg, J. J., et al.; PHYTOCHEMISTRY 42 (1) 129-133 (1996). 8. Palme, E. et al.; PHYTOCHEMISTRY 42 (3) 903-905 (1996). 9. Zheng, W. F. et al.; PLANTA MED. 62 (2) 160-162 (1996). 10. (Salvigenina y cirsimaritina) Youssef, D. et al.; PLANTA MED. 61 (6) 570-573 (1995). 11. Jong, T. T.; Hwang, C. C.; PLANTA MED. 61 (6) 584-585 (1995).

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12. PHYTOCHEMISTRY 42 (4) 1011 (1996) 13. (Flavonoides prenilados) Li, W-K. y col.; PHYTOCHEMISTRY 43 (2) 527-530 (1996). 14. (Crisoeriol, Jaceosidina, Diosmetina, Eupatorina), Schinella, G. R., y col., J. PHARM. PHARMACOL. 50, 1069-74 (1998). 15. Shilin, Y. Y col., PHYTOCHEMISTRY 28(5) 1509-1511 (1989) En 1989 Shilin y col. de la Universidad de Londres publicaron un estudio de las partes areas de Artemisia annua, una planta medicinal china que presenta actividad contra el parsito de la malaria debido a la artemisinina125, una sesquiterpenlactona que contiene. En dicho estudio reportaron la identificacin de 17 flavonoides, entre ellos 5,2,4-trihidroxi6,7-dimetoxiflavona (compuesto 16). Son consistentes los datos espectrales all publicados con esta estructura ? Porqu ?

16. Vaishnav, M. M. y col., FITOTERAPIA (1) 78 (1996). 17. Vaishnav, M. M. y col., FITOTERAPIA (1) 80 (1996). 18. Qais, N. y col., FITOTERAPIA (5) 476 (1996). 19. Tripathi, M. y col., FITOTERAPIA (5) 477 (1996). 20. Grayer, R. J. y col., PHYTOCHEMISTRY 47 (5) 779 (1998). (Glucosilflavona) 21. Imperato, F., PHYTOCHEMISTRY 47 (5) 911 (1998) (Glicsido de Kaemferol). 22. Carnat, A. P. y col., J. NAT. PROD. 61 (2) 272 (1998) (C-Glicosilflavona) 23. Chan, S. C. y col., PLANTA MED. 64 (2) 143, 153 (1998). 24. Sinz, A., y col., PHYTOCHEMISTRY 47 (7) 1393-1396 (1998). (O-glicosil-3metoxiflavonas) 25. Kassem, M. E., y col., FITOTERAPIA LXVII (5) 432-433 (1996). 26. Adelakun, E. A., y col., FITOTERAPIA LXVII (5) 478 (1996). 27. Vaishnav, M. M., y col., FITOTERAPIA LXVII (1) 78-80 (1996). 28. Ahmad, V. U., y col., FITOTERAPIA 71, 84-85 (2000) (5,7,4-Trihidroxiflavona; 5,3,4-trihidroxi-7-metoxiflavona y 5,3-dihidroxi-6,7,4-trimetoxiflavona). 29. Yadava, R. N., y col., FITOTERAPIA 71, 88-90 (2000) (5,6-dihidroxi-7-metoxiflavona 6-O--D-xilopiransido) 30. Kumar Kruthiventi, A., y col., FITOTERAPIA 71, 94-96 (2000). 31. La morina es un flavonoide de frmula molecular C15H10O7 y que presenta los espectros UV mostrados a continuacin. Determine la estructura ms probable para esta sustancia.

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32. Da Silva, B. P., et al., PHYTOCHEMISTRY 53, 87-92 (2000). Costus spicatus Swartz (Costceas), es commmente llamada "cana do brejo" en Brasil. La raz de esta planta es utilizada para eliminar clculos renales, hemorragias, etc. De las partes areas se prepara una infusin para tratar resfriados, disentera y diarrea. Un extracto metanlico de las hojas secas se fraccion por cromatografa con mezclas de cloroformometanol. Aislndose los compuestos 1 (125 mg), 2 (70 mg) y 3 (45 mg). Estos compuestos presentan las siguientes caractersticas:

Compuesto 1: Polvo amorfo amarillo desde metanol, P.F. 180-190C desc., []20D -78 (DMSO, c 0.001). UV mx (MeOH, nm, log E): 254 (3.3), 286 (1.0), 373 (3.5). AlCl3: 268, 298, 386. AlCl3/HCl: 270, 300, 376. NaOMe: 271, 328, 414. NaOMe/H3BO3: 252, 282, 370. IR (KBr): 3400, 1651, 1600, 1560, 1506, 1289, 1205, 1166, 1129, 1050, 1030, 980 cm -1. LSIMS Negativo m/z: 623 [M-H-] (30%), 315 (100), etc.

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RMN-1H (200 MHz, DMSO-d6): 0.68 (d, 1H, J=6.2 Hz), 3.83 (s, 3H), 5.06 (1H, bs), 5.80 (1H, d, J=7.2 Hz), 6.22 (1H, d, J=1.8 Hz), 6.48 (1H, d, J=1.8 Hz), 6.86 (1H, d, J=8.54 Hz), 7.54 (1H, dd, J=8.4 y 1.82 Hz), 7.98 (1H, d, J=1.8 Hz), 12.52 (1H, s), etc. RMN-13C (50 MHz, DMSO-d6): 17.00, 55.74, 60.60, 68.29, 69.73, 70.20, 70.62, 71.90, 76.56, 77.13, 77.34, 93.71, 98.77 (2 carbonos), 100.75, 104.05, 113.56, 115.59, 121.08, 121.89, 132.60, 146.88, 149.38, 156.32, 156.34, 161.24, 164.19, 177.30 ppm. El compuesto 1 (40 mg) se refluj con HCl 2M (5 ml) durante 2 horas. La aglicona se extrajo con acetato de etilo, y se recristaliz en metanol obtenindose la tamarixetina (18 mg). La fase acuosa se ajust a pH 6 con NaHCO3, se liofiliz. Despus de la liofilizacin los azcares se disolvieron en piridina y se analizaron por Cromatografa en Capa Fina (CCF). Despus de rociar las placas, la rhamnosa se observ como una mancha de color verde de Rf 0.75, y la glucosa como una mancha azul de Rf 0.70.

Compuesto 2 Polvo amorfo amarillo desde metanol, P.F. 170-180C desc., []20D -85 (DMSO, c 0.001). UV mx (MeOH, nm, log E): 252h, 266 (3.0), 353 (3.5). AlCl3: 254, 270, 418. AlCl3/HCl: 256, 270, 355. NaOMe: 280, 323, 411. NaOMe/H3BO3: 254, 268, 355. IR (KBr): 3438, 1650, 1600, 1558, 1504, 1287, 1203, 1163, 1127, 1048, 1029, 975 cm -1. LSIMS Negativo m/z: 607 [M-H-] (27%), 299 (100), etc. RMN-1H (200 MHz, DMSO-d6): 0.76 (d, 1H, J=6.2 Hz), 3.87 (s, 3H), 5.08 (1H, bs), 5.68 (1H, d, J=7.2 Hz), 6.22 (1H, d, J=1.8 Hz), 6.46 (1H, d, J=1.8 Hz), 6.92 (2H, d, J=8.4 Hz), 8.06 (2H, d, J=8.4 Hz), 12.53 (1H, s), etc. RMN-13C (50 MHz, DMSO-d6): 17.25, 55.95, 60.58, 68.28, 69.71, 70.18, 70.62, 71.88, 76.54, 77.13, 77.32, 93.70, 98.37, 98.72, 100.60, 104.03, 115.13 (2 carbonos), 120.93, 130.77 (2 carbonos), 132.74, 156.06, 156.08, 159.91, 161.23, 164.20, 177.29 ppm.

El compuesto 2 (40 mg) se refluj con HCl 2M (5 ml) durante 2 horas. La aglicona se extrajo con acetato de etilo, y se recristaliz en metanol obtenindose el kaempferido (18 mg). La fase acuosa se ajust a pH 6 con NaHCO3, se liofiliz. Despus de la liofilizacin

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los azcares se disolvieron en piridina y se analizaron por Cromatografa en Capa Fina (CCF). Despus de rociar las placas, la rhamnosa se observ como una mancha de color verde de Rf 0.75, y la glucosa como una mancha azul de Rf 0.70.

Compuesto 3 El compuesto 3 se someti a hidrlisis cida como se describi para los dos compuestos anteriores y se obtuvo quercetina, glucosa y ramnosa.

Determine la estructura de estos compuestos y describa la biognesis de las agliconas.

33. (Espectros proporcionados por Marn L., Juan C., "Fitoqumica y Evaluacin Biolgica de Polygonum punctatum", Tesis de Maestra, Instituto de Qumica, Universidad de Antioquia, Medelln, 2001) Del extracto en acetato de etilo de Polygonium punctatum, y mediante procedimientos cromatogrficos se aislaron 4 sustancias, una de ellas con las siguientes caractersticas espectrales:

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Espectro HMBC

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EMIE: 330 (100%), 315 (4), 301 (8), 287 (11), etc. Determine la estructura ms probable para esta sustancia Marn L., Juan C., "Fitoqumica y Evaluacin Biolgica de Polygonum punctatum", Tesis de Maestra, Instituto de Qumica, Universidad de Antioquia, Medelln, 2001) Agradecimientos A Juan C. Marn L., por los datos y espectros del ltimo ejercicio planteado. Por los otros espectros a: SDBSWeb : http://www.aist.go.jp/RIODB/SDBS/ (National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, Sep. 28 2005) Las imgenes de plantas en blanco y negro fueron escaneadas en su mayora del libro: Hernando Garca-Barriga, Flora Medicinal de Colombia, Tomo II, 1978, Instituto de Ciencias Naturales, Universidad Nacional, Bogot.

RMN-1H (DMSO-d6): 3.84 (s, 6H), 6.33 (d, 1H, J=1.7 Hz), 6.75 (d, J=1.4 Hz), 6.94 (d, 1H, J=8.5), 7.74 (dd, 1H, J=8.5 Hz), 7.76 (d, 1H, J=1.7 Hz), 9.52 (bs, 1H), 9.75 (bs, 1H), 12.44 (s, 1H). UV (MeOH): 371, 254, 205 nm

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Alejandro Martnez M.