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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE ZACATECAS FRANCISCO GARCA SALINAS

UNIDAD ACADMICA DE CIENCIAS QUMICAS PROGRAMA ACADMICO QUMICO FARMACUTICO-BILOGO

CROMATOGRAFA
Presenta: Ftima Arteaga Garca GRADO Y GRUPO: 3 C

Zacatecas, Zac., 8 de noviembre 2011

NDICE

Generalidades de la cromatografa. . . . . . . . . . . . 3

Cromatografa en papel. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5

Cromatografa en capa fina (CCF). . . . . . . . . . . . . 8

Cromatografa en columna. . . . . . . . . . . . . . . . . . 10

Cromatografa de intercambio inico. . . . . . . . . . 12

Resumen

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 17

Bibliografa. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18

Generalidades de la cromatografa Esta tcnica de separacin le corresponde al botnico ruso Mijal Tswett el haber establecido, entre 1903 y 1910, las ventajas de la cromatografa y la adopcin parcial de la terminologa, as como haber sentado las bases de los principales procedimientos experimentales relativos a esta. En 1903, Tswett logr la separacin de pigmentos de hojas verdes en una columna de sulfato de calcio, dndole a esta tcnica de separacin el nombre de Cromatografa, que proviene de dos races griegas: chroma = color y graphos = escritura, ya que observ zonas de color.1 Fase estacionaria: sta puede ser un adsorbente slido o un lquido de alto punto de ebullicin adherido a un soporte slido o a la pared de la columna.6 Fase mvil: en la cromatografa se usa el trmino eluyente para designar al disolvente lquido que se emplea como fase mvil. Si la fase mvil es gaseosa, se habla de gas acarreador.6 Dicho mtodo de separacin se basa en la diferencia de velocidad con la que se mueven los solutos a travs de un medio estacionario mediante un flujo de disolvente llamado eluente.1 En la actualidad se sabe que esta tcnica sirve para cualquier tipo de sustancias tanto coloridas como incoloras, las nicas sustancias que no pueden ser examinadas son las insolubles y aquellas que se descomponen con el solvente o con la fase estacionaria.1 Las tcnicas cromatograficas pueden clasificarse sobre la base de diferentes criterios.2 1. Atendiendo a la naturaleza de la fase mvil y la fase estacionaria. a. Cromatografa Lquida.

i. Cromatografa lquido-lquido ii.Cromatografa lquido-slido b. Cromatografa Gaseosa i. Cromatografa gas-lquido ii.Cromatografa gas-slido 2. Atendiendo al tipo de soporte sobre el que se dispone la fase estacionaria. a. Cromatografa en columna i. Convencional ii.Gases iii. Cromatografa lquida de alta eficiencia (CLAE o HPLC) b. Cromatografa en papel c. Cromatografa en capa fina 3. Atendiendo al tipo de interacciones entre el soluto y el lecho cromatogrfico. a. Cromatografa de reparto b. Cromatografa de adsorcin. c. Cromatografa de intercambio inico d. Cromatografa de filtracin sobre gel e. Cromatografa sobre fases qumicamente ligadas. Existen varias etapas en un anlisis cromatogrfico: 3 1. Adsorcin de las sustancias a separar, normalmente disueltas en disolventes no polares como ter de petrleo. 2. Desarrollo, en que los materiales adsorbidos se extienden por la accin de un flujo continuo de la disolucin o de un disolvente puro. 3. Recuperacin de los componentes separados, realizada normalmente por elucin del material adsorbido mediante un disolvente ms polar, o varios disolventes sucesivamente empleados, que van separando los materiales deseados. 4. Identificacin y medida de las sustancias individuales por distintos medios, como reacciones coloreadas, fluorescencia ultravioleta, espectrofotometra de adsorcin, etc.3

La eficiencia de la separacin depende de factores como la naturaleza qumica de los componentes a separar, del disolvente y del absorbente; la geometra de la columna; la velocidad y el flujo de la disolucin y del disolvente utilizado en el desarrollo del cromatograma.3 Dos conceptos muy importantes para el anlisis de una sustancia son el R f (referencia frontal) y el Rx (relacin con una estndar x). El comportamiento migratorio de una sustancia se describe en funcin de la relacin de frente, es decir, el cociente de la distancia recorrida por el soluto y la distancia recorrida por el eluente.1 Rf = distancia recorrida por la sustancia
distancia recorrida por el eluente

Si se considera la distancia recorrida por un estndar x, los valores se denominan Rx. Este valor se emplea, sobre todo, cuando el frente del disolvente sale de la fase estacionaria: Rx = distancia recorrida por la sustancia
. distancia recorrida por la sustancia estndar x

La distancia de migracin del soluto se mida desde el punto de origen o aplicacin hasta algn punto de la marcha, tomndose dicho punto constante. Las condiciones experimentales influyen mucho en los valores de Rf por lo que no bastan para identificar una sustancia. Los valores de R x varan muy poco y son reproducibles con mayor facilidad.1 Cromatografa en papel Tipo de cromatografa de lquidos en la cual se puede realizar empleando como fase estacionaria papel filtro; la separacin se lleva a cabo sobre tiras de papel. Los tipos de papel ms comunes son Whatman (W), particularmente el nmero uno para grandes cantidades de muestra, y el nmero 3 MM; los dos estn formados por un conjunto de fibras de celulosa parcialmente orientadas, distinguindose zonas amorfas y cristalinas.1 Para usos especiales se emplean papeles modificados, por ejemplo, el papel acetilado, para la separacin de sustancias hidrfobas.1

Papel impregnado, para la separacin de sustancias hidrfobas o hidrfilas moderadas; el papel filtro se impregna con aceite de silicn, ltex de hule, etc.1 Papel cargado, que permite la separacin de sustancias inorgnicas, orgnicas, poco polares o inicas; se carga por dispersin en la fibra celulsica con resinas poliestirnicas intercambiadoras de iones.1 Por lo general, el eluente est constituido por dos fases, la orgnica y la acuosa. Cuando la cmara cromatogrfica est saturada de las dos fases o de la fase acuosa solamente, y el desarrollo del cromatograma se efecta en la fase orgnica, la cromatografa es en fase directa. Las fases se pueden invertir, y as se da lugar a la llamada cromatografa invertida. Los solutos polares se separan en fase directa invertida.1 Las muestras siempre se aplican en solucin. La eleccin del disolvente depender de las sustancias por separar.1 La aplicacin de las muestras sobre el papel se puede hacer en un punto o en forma de franja por medio de capilares o empleando un hilo de platino1. En la cromatografa cuantitativa, la aplicacin se hace con una micropipeta o tubo capilar calibrado.1 Tipos de desarrollo: Dependiendo del sentido en el que se desplace el eluente, el cromatograma bidimensional.4 En la cromatografa ascendente, el papel se introduce vertical en el lquido eluente, mojando el papel pero sin que llegue a la zona donde se deposit el problema. El eluente asciende por capilaridad y en contra de la gravedad.4 En la cromatografa descendente, con el papel tambin vertical, el eluente fluye de arriba abajo, desplazndose por capilaridad y gravedad. La parte superior del papel se introduce en un pequeo recipiente que contiene a la fase mvil.4 puede ser ascendente, descendente, circular y con un eluente polar y los hidrfobos se separan en fase

Para asegurar que la atmsfera del interior de la cmara est saturada de vapor del eluente, se coloca en el fondo una pequea cantidad de ste y se cierra hermticamente.1

En la cromatografa circular, poco utilizada, la muestra se sita en el centro del papel y sobre ella misma se aplica el eluente que fluye de forma radial. La disposicin del papel es en horizontal y en este caso los distintos componentes se separan en anillos concntricos.4 En la cromatografa bidimensional, se utilizan consecutivamente dos eluentes distintos que fluyen en sentidos perpendiculares. Esta tcnica se utiliza cuando ninguno de los dos eluentes es capaz de efectuar una separacin total de componentes de la muestra, separacin que se logra con su uso conjunto. Para ello se pone la muestra en un ngulo de los eluentes, a continuacin se gira el papel 90 y se desarrolla con el otro eluente.4 Utilizando esta tcnica, se ha conseguido la resolucin de mezclas hasta veinte aminocidos, que han podido ser identificados y determinados.3 El desarrollo ascendente presenta una ventaja sobre el descendente, ya que la distancia recorrida por el disolvente es fija y todos los compuestos permanecen sobre el papel; se obtienen mejores resultados con disolventes muy voltiles.1

Una desventaja de esta tcnica es que los compuestos con Rf muy bajo se separan de manera incompleta, por lo que en estos casos es aconsejable emplear el desarrollo descendente.1

Ya una vez desarrollado el cromatograma, se marca el frente del eluente y se deja secar. Si los compuestos son incoloros se procede a revelarlos, ya sea por mtodos fsicos o qumicos. Los mtodos fsicos son:

a) Adsorcin ultravioleta b) Radioactividad. Los mtodos qumicos son aquellos que emplean sustancias qumicas llamadas agentes de revelado, que pueden ser gases, lquidos o slidos en solucin. Para aplicar estos reveladores se usan dos mtodos: 1. De baado. El papel se sumerge en un recipiente, el cual contiene la solucin reveladora. 2. De atomizacin. Consiste en esparcir uniformemente el revelador sobre la superficie del cromatograma por medio de un atomizador especial para cromatografa. La cromatografa preparativa sobre papel tiene por objeto separar el compuesto, mediante elucin total; aqul se cristaliza por concentracin de la solucin.1 La cromatografa cuantitativa sobre el papel, la aplicacin de la muestra problema se hace con una micropipeta o tubo capilar calibrado, y se realizan mediciones sobre el producto colorido, la intensidad de color es proporcional a la cantidad de componente, y se pude cuantear por elucin total, aplicando cualquier tcnica analtica, o bien colocando aplicaciones de la muestra a diferentes concentraciones y midiendo stas con un fotodensitmetro.1

Cromatografa en capa fina (CCF) El mtodo se ha convertido en uno de los medios ms tiles para la separacin, identificacin y ensayo de muchas sustancias, especialmente materiales bioqumicos, productos naturales, preparaciones farmacuticas y es una tcnica muy adecuada para los anlisis clnicos (en que la rapidez es un factor importante). Comparada con la cromatografa en papel, la cromatografa en capa fina proporciona separaciones ms rpidas y ms completas y necesita una cantidad de muestra en disolucin mucho ms pequea.3

Se utilizan dos tipos de placa: compacta y suelta.1 Para la fase estacionaria se emplea un adsorbente, generalmente gel de slice, almina, celulosa, caprolactama, etc.1 Para realizar una cromatografa en capa compacta, las dimensiones de la placa pueden ser de 5 x 20 cm o de 20 x 20 cm, en la cual se extiende el adsorbente juntamente con un soporte de almidn o de yeso, formando una capa de espesor uniforme (0.15 a 2.0 mm). Se deja secar dicha pasta durante 30 minutos. La capa formada se activa por calentamiento, normalmente en posicin vertical a 100-110C durante diversos periodos de tiempo; las placas se conservan en un desecador hasta el momento en que se vayan a utilizar.3 La cromatografa en capa suelta exige un manejo mucho ms cuidadoso. Las fases estacionarias son: celulosa microgranular, gel de slice y almina.1 La seleccin de la fase mvil depende de la fase estacionaria y de los solutos. Si un eluente puro no separa bien la muestra se emplean mezclas.1 En general, para separar sustancias polares se usa celulosa o gel de slice. Las sustancias no polares suelen separarse en gel de slice o en almina activada.1 Para el trabajo analtico se colocan unos cuantos microlitros de una solucin que contiene 10-100 microgramos de soluto cerca de un extremo de la placa preparada; para el trabajo preparativo pueden utilizarse hasta varios cientos de miligramos de soluto. Se han utilizado mtodos de desarrollo ascendente, descendente, horizontal, bidimensional y circular. Un desarrollo mltiple con un

mismo disolvente (con secados intermedios entre cada dos operaciones), o un desarrollo en etapas con disolventes diferentes, presenta ventajas en algunos casos particulares.3 El revelado de la placa se efecta por la tcnica de atomizacin, soportando agentes corrosivos.1 Los componentes separados pueden ser recuperados por elucin (desarrollo continuo) por el extremo de la placa. La identificacin y la determinacin de los componentes separados pueden verificarse de la misma forma que en la cromatografa en papel.3 Cromatografa en columna La cromatografa en columna es una de las tcnicas ms utilizadas en qumica analtica.1 Durante muchos aos se practic la cromatografa lquida en una forma que se conoce como clsica, que consiste en la columna de vidrio con una llave en la parte inferior (puede ser una bureta)1 en la cual se coloca un adsorbente, pueden utilizarse distintos tipos, como carbonato clcico, xido con la fase estacionaria adecuada.1 Para que el empacado sea uniforme, la columna se golpea con un tubo de goma o se vibra. La muestra se introduce disuelta en el eluente, el cual fluye a travs de la columna por efecto de la gravedad producindose una dbil presin por el volumen de la fase mvil que se agrega a la columna, lo que da lugar a la separacin de los componentes de la muestra en zonas que pueden ser incoloras o coloridas.1 A este tipo de desarrollo se le denomina anlisis por elucin. Actualmente, el desarrollo por elucin es el ms usual debido a que los componentes de la muestra pueden separarse cuantitativamente y un mismo empaque sirve para anlisis sucesivos. La retencin del eluente por la columna debe ser mucho menor que la de cualquier de los solutos. Por lo general, el eluente es una mezcla de disolventes o una serie de eluentes sucesivos.1 magnsico, xido de aluminio, almidn y gel de slice;3 se mantiene en posicin vertical y se empaca

Existen dos modificaciones a esta forma de anlisis; ellas son: temperatura y fase mvil programadas.1 Adems el anlisis por elucin, hay dos tcnicas de desarrollo de la columna: anlisis frontal y por desplazamiento.1 El anlisis frontal fue el primer mtodo empleado. En este procedimiento, la muestra en disolucin se va aadiendo de forma continua en la parte superior de la columna. Las primeras porciones del eluente estn formadas por disolvente puro, y despus de cierto tiempo aparece el componente (A) adsorbido en ltimo lugar; cuando aparece el siguiente componente (B), el eluente contiene una mezcla de ambas sustancias (A y B), y as sucesivamente, hasta que el final sale el componente ms adsorbido despus que la columna entera est saturada de l. En este momento la composicin del eluente corresponde a la que tena la disolucin original de la muestra.3 Actualmente no se usa, debido a que las separaciones son poco efectivas.1 Este mtodo es adecuado para la determinacin del nmero de componentes de una muestra; no es aplicable a la resolucin de mezclas complejas, debido a que solo puede recuperarse una cantidad limitada del ltimo componente adsorbido antes que el segundo componente comience a salir de la columna.3 En el anlisis por desplazamiento se introduce la muestra en la columna en un volumen muy pequeo de disolvente; as se forma una banda angosta en la parte superior del empaque. A continuacin se vierte una solucin que contiene un soluto, el cual es ms retenido por la fase estacionaria que cualquier componente de la muestra; este soluto se denomina agente desplazante. Al ir pasando por la columna desplaza los solutos de la muestra, los cuales emergen de aqulla sucesivamente en forma pura y en bandas. A finalizar el anlisis la columna queda saturada del agente desplazante, el cual no puede ser eliminado, por lo que el empaque no es recuperable. Una ventaja del mtodo es que los componentes de la muestra salen concentrados, a diferencia del anlisis por elucin, en el que se obtienen muy diluidos.1 Una vez separadas las sustancias, se pueden identificar por dos mtodos:1

1.-Se eluye durante un tiempo apropiado, se saca el soporte de la columna y se hacen cortes de las zonas. Si stas son incoloras, se acerca un papel filtro, el cual se revela para localizar la posicin de los compuestos separados. 2.- Se realiza una elucin total por separacin continua obtenindose los compuestos en fracciones. En la prctica se usan colectores automticos, que son de dos tipos:1 a) Un colector de volmenes fijos donde el tubo colector es brazo de balanza. b) Un contador de gotas que activa una celda fotoelctrica, de tal manera que al llegar a un nmero determinado se cambia al tubo siguiente. Se puede realizar un anlisis continuo conduciendo el eluente a travs de un aparato que mide alguna propiedad de los compuestos que se separan; por ejemplo, un espectrofotmetro, un espectrgrafo de masas, o un refractmetro.1 Si la fase estacionaria es gel de slice o almina se empelan eluentes en orden creciente de polaridad para evitar desorcin de la muestra. En el caso del carbn activado se invierte el orden de los eluentes.1 Las dimensiones de la columna varan de acuerdo con la cantidad de muestra. En una columna sencilla no se obtiene una separacin completa, por lo que es necesario pasar las fracciones por otra columna con diferentes fases estacionaria y mvil. Debido a las prdidas de muestra que esto representa, se emplea la cromatografa con reciclado, que consiste en pasar varias veces la muestra por la columna. La separacin se puede detectar mediante algn aparato adecuado adaptado a la columna, como un espectrofotmetro, un conductmetro, etc. Adems, contiene vlvulas selectoras que permiten la separacin o eliminacin de cualquier componente en algn momento del ciclo.1 Cromatografa de intercambio inico Tcnica de separacin analtica que utiliza una fase estacionaria (la columna de separacin a base de resinas de intercambio inico) y una solucin

como eluente. Est indicada para anlisis cualitativos y cuantitativos de sustancias inicas solubles. Tambin se conoce como cromatografa inica.5 La cromatografa de intercambio inico consiste en intercambiar iones de la fase estacionaria, la cual debe ser un polmero con iones lbiles (cationes o aniones) de estructura porosa, insoluble pero capaz de aumentar su volumen al ser humedecido por la fase mvil.1 La solucin de la muestra se hace pasar por la fase estacionaria, la cual toma iones de la muestra, y una cantidad equivalente de los iones del intercambiador pasa a la solucin.1 Segn el anlisis que se vaya a realizar, se escoge la fase estacionaria apropiada, que debe contar con las siguientes caractersticas: 1 a) Estructura y poro uniformes. b) Resistencia qumica, mecnica y trmica. c) Gran capacidad. La capacidad se define como el nmero de grupos funcionales disponibles para el intercambio inico, y se expresa como miliequivalentes por gramo de polmero seco. d) Alta selectividad. La selectividad es la preferencia que presenta la fase estacionaria por un ion determinado. e) Entrecruzamiento. Los polmeros con poco entrecruzamiento aumentan de volumen excesivamente al estar en contacto con la fase mvil, y al secarse se contraen. Por otra parte, no es conveniente un entrecruzamiento muy elevado, ya que se forman polmeros con macroporos.1 Durante muchos aos se emplearon polmeros inorgnicos naturales, como aluminosilicatos, fosfato de zirconio y otros, pero presentan baja capacidad, son relativamente inestables y solubles, tanto en soluciones bsicas como en soluciones cidas.1 Entre los aluminosilicatos se encuentra la zeolita (Ca, Na) (Si4Al2O12) 6H2O; actualmente se prepara en forma sinttica para evitar el tamao del poro irregular y la estructura heterognea que presenta el producto natural; se conoce comerciablemente como malla molecular.1

El principal uso de la zeolita es en la determinacin de iones de amonio en la orina.1 El fosfato de zirconio (-Zr (H2PO4)2-O-)n es un polmero lineal capaz de intercambiar cationes por los iones hidrgeno de su estructura.1 Los polmeros inorgnicos presentan dos ventajas de su estructura. a) Gran resistencia a las radiaciones y temperaturas extremas. b) Alta selectividad hacia iones inorgnicos simples. Actualmente se han desarrollado diversos tipos de polmeros orgnicos con caractersticas ms adecuadas, como geles, celulosa y resinas de intercambio de iones.1 1.- Geles de intercambio inico. Son redes de dextrano en forma de partculas esfricas uniformes tridimensionales. El grupo cambiador apropiado se introduce en la estructura del polmero. Son especialmente tiles en la separacin de electrlitos. 2.- Celulosa de intercambio inico. Son similares a los geles por ser derivados de polisacridos. Poseen los mismos grupos cambiadores, pero la celulosa presenta la irregularidad del producto natural. Este tipo de cambiadores fibrosos se eligen para separaciones en las que la velocidad de flujo es el parmetro principal. Cuando la resolucin es lo importante, se usa celulosa microcristalina. 3.- Resinas de intercambio inico. Resinas de cambio catinico: contienen grupos polares firmemente unidos en la estructura de la resina, mientras que el catin es difusible o intercambiable. La mayor parte de las resinas de intercambio catinico contienen aniones de los cidos sulfnicos o carboxlicos. Si la resina est en su forma cida (H +), el in hidrgeno se intercambia con otros cationes de las disoluciones en contacto con la resina. Las resinas sulfnicas son cidos ms fuertes que las resinas carboxlicas. Por ello, las primeras intercambian su ion hidrgeno con ms facilidad que las segundas. Tambin se deduce de esto que la reconversin a su forma hidrgeno ser ms difcil en las resinas sulfnicas. Los iones sodio son un poco ms

difciles de sustituir por los iones calcio y magnesio si estn en una resina sulfnica que si estn en una carboxlica.3 Las reacciones de intercambio pueden ilustrarse con las reacciones siguientes, en que Res- representa toda la resina, excepto el grupo cido.3 Res-SO3- H+ + Na+ Res-SO3- Na+ + H+ Res-COO- H+ + Na+ Res-COO- + Na+ + H+ 2Res-COO- Na+ + Ca++ (Res-COO-)2 Ca ++ + 2Na+ La afinidad de cambio o el potencial de cambio de cationes por las resinas es, en general, la misma que su adsorbabilidad en las series liotrpicas en los sistemas coloidales, que tambin es paralela al orden en que aumenta el grado de hidratacin con el aumento de la carga inica y el descenso del radio cristalogrfico. La afinidad de cambio del ion hidrgeno vara con la fuerza del cido formado por el ion hidrgeno y el grupo funcional de la resina; cuanto ms fuerte es el cido, ms baja es la afinidad de cambio del ion hidrgeno. En medios no acuosos, a elevada concentracin y a alta temperatura, las diferencias en la afinidad de cambio al variar la carga inica y el nmero atmico se hace ms pequea e incluso puede invertirse el orden.3 Resinas de cambio aninico: Los grupos funcionales en estas resinas son aminas sustituidas o compuestos de amonio cuaternario, que son bases orgnicas. Las reacciones de intercambio pueden representarse por analoga con el comportamiento de las aminas primarias, que, en disolucin acuosa, reaccionan para formar compuestos hidroxilados:3 Res-NH2 H2O Res-NH3+ + OHLos iones hidroxilo pueden luego ser cambiados por otros aniones: Res-NH3+ HO- + Cl- Res-NH3+ + Cl- + OHAdems del hidroxilo, pueden intercambiarse otros aniones: 2Res-NH3+ Cl- + SO4 -- (Res-NH3+ )2 SO4-- + 2ClSi el material sometido a intercambio con una resina en forma hidroxilo es un cido, el ion hidroxilo que es desplazado por el anin, se neutraliza con el ion hidrgeno del cido: cuanto ms fuerte sea el cido, ms completa ser la

eliminacin del ion OH- de la resina y su cambio por aniones. La forma hidroxilo de la resina se regenera por tratamiento con hidrxido sdico.3 La afinidad de cambio de los aniones depende en parte de la carga inica, aunque hay anomalas aparentes entre algunos aniones oxigenados. En el grupo de los haluros, la afinidad de cambio aumenta con el nmero atmico. La posicin del ion hidroxilo en la serie de intercambio depende de la fuerza bsica del grupo funcional de la resina aninica; el ion hidroxilo tiene una elevada afinidad de cambio para las resinas dbilmente bsicas y una baja afinidad por las resinas fuertemente bsicas.3 Regeneracin de resinas.5 Las resinas fuertemente cidas se pueden regenerar a la forma H + ; esto permite retener incluso cationes alcalinos. Las resinas regeneradas a la forma Na+ no retienen a los cationes alcalinos. Las resinas fuertemente bsicas se pueden regenerar a la forma OH-; as se pueden retener incluso aniones de halgenos. Se conocen los siguientes tipos de regeneracin:5 Resina fuertemente cida a la forma H+. A un litro de resina se le pasan 3 litros de HCI al 6% Resina fuertemente cida a la forma Na+. Un litro de resina se trata con 2.5 litros de NaCI al 10% Resina dbilmente cida a la forma H+. Un litro de resina se trata con 2.5 litros de HCI al 3%. Resina fuertemente bsica a la forma OH-. Un litro de resina se trata con 2.5 litros de NaOH al 4%. Resina fuertemente bsica a la forma Cl-. Se trata 1 litro de resina con 2.5 litros de NaCI al 6%. Resina dbilmente bsica a base libre. A un litro de resina se le pasan 2.0 litros de NaOH al 4%. Se coloca esta sustancia que es conocida por el investigador en la columna de cromatografa y se hace pasar la muestra; las diferentes sustancias presentes en la mezcla quedarn sealadas o no dependiendo de su comportamiento inico.7

Una vez determinadas las sustancias se pueden desprender utilizando el tampn adecuado que se hace pasar por la columna, y que, al cambiar las condiciones de pH o fuerza inica, liberar a la sustancia en cuestin.7 Este tipo de cromatografa es utilizada en el laboratorio para la identificacin de protenas, pptidos, aminocidos... (Sustancias que presentan un comportamiento inico conocido.7 Aplicaciones del cambio inico: 1.-Cambio de constituyentes inicos. 2.- Fraccionamiento de electrlitos. 3.- Eliminacin de los iones que interfieren en un anlisis. 4.- Concentracin de constituyentes traza. 5.- Tratamiento de aguas. 6.- Aplicaciones variadas.

Resumen Todos los mtodos cromatograficos tienen como ltimo fin la separacin de una mezlca en sus constituyentes individuales estas separaciones se logran mediante la distribucin de los constituyentes de una mezcla entre dos fases de las cuales una es fija y se llama fase estacionaria y la otra que se desplaza y se llama fase mvil a continucin se hace referencia de estas caractersticas de acuerdo a las clases de cromatografa: Adsorcin Fase estacionaria Slida Reparto Lquida Intercambio inico Slida Filtracin molecular Slida

Fase Mvil

Lquida o Lquida gaseosa (LG) gaseosa Interaccin molecular entre el soluto y el solvente

o Lquida gaseosa

o Lquida

La velocidad de la migracin varia

Solubilidad diferencial del soluto entre las fases

Intercambio de iones entre la solucin y la fase estacionaria Ionizacin

Grado de inclusin en los poros de la fase estacionaria Tamao molecular

Propiedad Polaridad diferenciadora

Solubilidad

La separacin en realidad nada tiene que ver con el color de los compuestos, ya que se pueden separar mezclas no coloridas. La distancia que una sustancia recorre es particularmente importante y esta en funcin de la distancia que recorri el disolvente durante el mismo experimento, proporciona una constante llamada referencia frontal (Rf ) = distancia recorrida por el analito entre la distancia recorrida por el solvente. Son varios los mtodos utilizados en la cromatografa: cromatografa en papel, cromatografa de capa fina, cromatografa en columna, cromatografa de gases, cromatografa de intercambio ionico.

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