MEMBRANA PLASMTICA

Ingrid Romer Hernn Sala Gabriela Gmez Silvia Mrquez

Introduccin
Las clulas estn separadas del medio que las rodea por una delgada lmina denominada membrana plasmtica, que define los lmites de las mismas. Hace 3700 millones de aos, la formacin espontnea de una estructura similar a la membrana plasmtica de las clulas actuales permiti aparicin de los primeros seres vivos. Sin esta barrera protectora, las clulas estaran expuestas a los rigores del mundo externo, no podran regular su medio interno y, en consecuencia, no serian viables. La membrana plasmtica no asla a la clula completamente sino que constituye una barrera altamente selectiva, que tiene la propiedad de regular el intercambio de materiales entre la clula y el medio que la rodea. La membrana es una estructura muy delgada: slo tiene un espesor de 6 a 10 nm (1nm=10-9m). Por lo tanto, se necesitaran mil membranas plasmticas apiladas, una sobre otra, para igualar el espesor de esta hoja de papel. Precisamente debido a su delgadez, cuando se examina una clula al microscopio ptico convencional, puede observarse sin dificultad el interior de la misma; en el mejor de los casos podr apreciarse el contorno de la membrana, pero nunca podr distinguirse su ultraestructura. Recin las primeras microfotografas al microscopio electrnico demostraron que la ultraestructura las membranas era siempre la misma. Esta estructura se denomin unidad de membrana y la misma no slo es vlida para la membrana plasmtica, sino para casi todas las membranas celulares.

Fig. 4.1 - Microfotografa electrnica de transmisin de una membrana plasmtica. Se pueden ver tres lneas paralelas, dos lneas densas alos electrones (2,5 - 3 nm) separada por una capa intermedia clara (3,5-4 nn). Este aspecto conocido como unidad de membrana no es reflejo de una estructura trilaminar a nivel molecular, sino es la expresin de como el osmio, usado como "colorante" se une a la membrana.

Funciones de la membrana plasmtica

Como ya se mencion, las membranas no son simples barreras sino que: Definen la extensin de la clula y establecen sus lmites. Constituyen barreras selectivamente permeables, dado que impiden el intercambio indiscriminado de sustancias entre el citoplasma y el medio extracelular. La membrana plasmtica, gracias a sus propiedades fisicoqumicas, est capacitada para transportar de un lado a otro de la misma determinados solutos, macromolculas y complejos macromoleculares. Sin embargo, hay molculas, que a pesar de ser toxicas para la clula, pueden ingresar sin dificultad a la misma a travs de la membrana. Un ejemplo seria el CO (monxido de carbono). Controlan las interacciones de la clula con el medio extracelular (tanto con la matriz extracelular como con otras clulas vecinas). Permite a las clulas reconocerse, adherirse entre s cuando sea necesario e intercambiar materiales e informacin.

 Intervienen en las respuestas a seales externas a la clula. La membrana posee receptores, que son molculas o conjuntos de molculas, capaces de reconocer y responder a seales provenientes del medio extracelular portando informacin especifica. Cuando dichas seales llegan hasta la membrana plasmtica, se desencadenan seales internas en la clula, tanto activadoras como inhibitorias de distintos procesos celulares. Como ejemplos de estas seales externas podemos citar a los factores de crecimiento que favorecen la divisin celular o diversas hormonas como por ejemplo la insulina, que aumenta la sntesis de glucgeno. Singer y Nicholson propusieron en 1972 un modelo estructural para las membranas al cual denominaron modelo del mosaico fluido. De acuerdo al mismo las membranas son disoluciones bidimensionales de lpidos y protenas. Segn este modelo, la estructura de la membrana sera una delgada lamina formada por dos capas superpuestas de lpidos (tambin llamadas hemimembranas), con la fluidez propia de los aceites, en la cual se encuentran insertadas protenas. Esto le confiere el aspecto de un mosaico.

Fig. 4.2 -Esquema del "Modelo del mosaico fluido" de las membranas Las membranas no son estructuras estticas ni rgidas. Estn formadas por un conjunto de molculas hidrofbicas e hidroflicas que se mantienen unidas por enlaces, en general, no covalentes. Una de las principales caractersticas de las membranas biolgicas es su alto grado de fluidez. Esto implica que sus lpidos y protenas pueden desplazarse libremente en todas las direcciones, pero siempre sobre el plano de la membrana. De all entonces la denominacin de mosaico fluido; a esta propiedad tambin se la conoce como difusin lateral. Como puede observarse en el esquema, las membranas tambin presentan glcidos unidos por enlaces covalentes a lpidos y protenas. Esto da lugar a los llamados glucolpidos y glucoprotenas, respectivamente.

Estas membranas carecen de resistencia mecnica y en muchas clulas, como en el caso de hongos, bacterias y plantas estn reforzadas por paredes celulares. 1. COMPOSICIN DE LAS MEMBRANAS BIOLGICAS Todas las membranas biolgicas de los seres vivos, tanto la membrana plasmtica, como las de las organelas, estn formadas por: A. Lpidos B. Protenas C. Glcidos La proporcin de cada uno de estos componentes vara de acuerdo a la funcin que realiza cada tipo de membrana. Por ejemplo, las membranas mitocondriales tienen una proporcin muy elevada de protenas (ver Tabla 1). Tabla 1 Composicin de las membranas de diferentes clulas. (Los valores representados como % peso seco de la membrana) Glbulos Rojos Humanos Lpidos Fosfolpidos cido fosfatdico Fosfatidiletanolamina Fosfatidilcolina Fosfatidilserina Esfingomielina Cerebrsidos Colesterol Otros Lpidos Protenas Glcidos (o restos de glcidos en glicoprotenas) 30 a 40 20 a 25 < 1 5 7 5 6 <1 12 3 60 a 70 7 Staphiloccoccus aureus 20 20 <1 40 40 Mielina 60 a 70 25 a 30 0 5 10 5 5 10 15 15 20 a 30 Observada en cortes histolgicos

A. Lpidos
La variedad de lpidos presentes en las membranas es muy amplia; sin embargo, todos poseen una caracterstica en comn: son molculas anfipticas. Esto significa que sus molculas contienen una zona hidroflica o polar y una hidrofbica o no polar.

Los fosfolpidos son los lpidos ms abundantes en las membranas. Debido a su carcter anfiptico, los fosfolpidos, en un medio acuoso se organizan espontneamente conformando la denominada bicapa lipdica. Las cabezas polares estn orientadas hacia el medio acuoso (intra y extracelular) y las colas hidrofbicas hacia el medio lipdico, es decir, al interior de la bicapa, constituyendo la matriz de la membrana. A su vez, estas bicapas tienden a cerrarse espontneamente sobre s mismas formando vesculas, es decir, compartimientos cerrados en toda su extensin tridimensional, similares a una esfera.

Fig. 4.3 - Esquema de un fosfolpido.

Fig. 4.4 - Corte esquemtico de una

vescula de fosfolpidos.

La bicapa de fosfolpidos funciona principalmente como armazn estructural de la membrana y como barrera que impide el pasaje de sustancias hidrosolubles a travs de la misma; esto ltimo es debido al carcter fuertemente hidrofbico de la matriz de la membrana. Los fosfolpidos ms frecuentes de las membranas son la fosfatidiletanolamina, la fosfatidilcolina, la fosfatidilserina y la esfingomielina. Los fosfolpidos de las membranas son DIACILGLICERIDOS. La estabilidad de las bicapas lipdicas esta dada por: interacciones hidrofbicas entre las colas hidrocarbonadas. fuerzas de van der Waals entre las colas hidrofbicas. fuerzas electrostticas y puentes hidrogeno entre las cabezas polares de los lpidos, ya sea entre ellos mismos y con las molculas de agua de los medios extra e intracelular.

Como se notar todas estas son uniones dbiles (no covalentes) y le confieren simultneamente estabilidad y fluidez a la membrana. Las cadenas hidrocarbonadas de los cidos grasos que forman parte los fosfolpidos (tambin denominadas colas o grupos acilo), pueden presentarse: saturados (sin dobles enlaces) monoinsaturados (con un nico doble enlace) poliinsaturados (ms de un doble enlace)

En general, los lpidos de membrana contienen un grupo acilo insaturado y otro saturado en su estructura.

Fig. 4.5 -Fosfatidiletanolamina-(fosfolpido de membrana)

Fig. 4.6 - Esquema de un fosfolpido con una cola saturada y una no saturada.

La presencia de cidos grasos insaturados aumenta la fluidez de la membrana, debido al quiebre de las colas a la altura de los dobles enlaces. Esto impide, o al menos dificulta, que las colas hidrocarbonadas se compacten, restringiendo as las interacciones entre ellas. El hecho de que uno de los grupos acilo de los fosfolpidos est saturado y el otro no, garantiza una buena fluidez dentro del rango de temperaturas fisiolgicas. Por otro lado, cuando las cadenas hidrocarbonadas son cortas, tienen menor superficie para interactuar entre s; esto ltimo tambin favorece la fluidez de las membranas.

El colesterol es un esteroide que se encuentra en un alto porcentaje en la membrana plasmtica de las clulas animales. Su concentracin vara mucho de un tipo de membrana a otro; en animales hay membranas donde el colesterol constituye hasta el 50% del total de los lpidos. Contrariamente, la mayora de las clulas vegetales y bacterianas carecen de colesterol. El colesterol, al ser tambin una molcula anfiptica, presenta una orientacin similar a la de los fosfolpidos: el grupo hidroxilo (polar) se orienta hacia el exterior de la bicapa y el sector hidrofbico hacia el interior de la misma.

Fig. 4.7 - Esquema de la ubicacin del colesterol en la membrana plasmtica Las funciones del colesterol se pueden resumir de la siguiente mane Inmoviliza los primeros carbonos de las cadenas hidrocarbonadas. Esto hace a la membrana menos deformable y menos fluida, es decir, la estabiliza. Sin colesterol, la membrana necesitara de una pared celular que le otorgue contencin mecnica. Previene el compactamiento de las cadenas hidrocarbonadas a bajas temperaturas, ya que evita que las colas se junten, aumenten las interacciones dbiles entre las mismas y se cristalicen (adopten una estructura muy compacta).

La cardiolipina es un derivado de los fosfolpidos que se encuentra en la membrana interna de la mitocondria. El dolicol es un lpido que se halla en el REG e interviene en la glicosilacin de las protenas.

B. Protenas (Fig.4.8) Mientras que los lpidos ejercen principalmente una funcin estructural, las protenas no slo desempean un rol estructural sino que adems son las responsables de las funciones especficas de las membranas biolgicas. Estas segn su funcin pueden agruparse en: enzimticas, de transporte, receptoras y de reconocimiento. Diferentes membranas tienen distinta proporcin y composicin de protenas, de acuerdo a sus funciones. En otras palabras, son justamente las protenas las que le otorgan distintas funciones a las membranas. Estas en su mayora son protenas globulares (estructura terciaria o cuaternaria). Segn su ubicacin en la membrana se clasifican en: -Protenas intrnsecas, integrales o transmembrana: Pueden atravesar total o parcialmente la bicapa, asomando a una o ambas superficies de la misma. nicamente pueden ser extradas de la membrana por medio de detergentes que rompen la bicapa. Tienen un sector hidrofbico, que es el que esta insertado en la membrana y una o dos regiones hidroflicas, expuestas a los medios intra y extracelulares (ambos acuosos). De lo anterior se deduce que estas protenas son molculas anfipticas. La porcin que atraviesa la membrana suele presentar una estructura de alfa hlice con una elevada proporcin de aminocidos hidrofbicos que interaccionan con las colas hidrocarbonadas de la matriz de la membrana. El sector proteico (tambin llamado dominio) expuesto a los medios acuosos suele tener estructura globular e interacciona con las cabezas polares de los fosfolpidos y con otras molculas a travs de uniones inicas y puente de hidrgeno. Dentro de las protenas integrales encontramos: Protenas monopaso: La protena atraviesa una sola vez la membrana. Protenas multipaso: La cadena polipeptdica atraviesa dos o ms veces la bicapa lipdica. Por lo tanto, esta posee varias regiones hidrofbicas insertadas en la matriz de la membrana alternadas con sectores hidroflicos que se exponen hacia los medios acuosos.

Fig. 4.8 -Asociacin de protenas de membrana con la bicapa lipdica: Transmembrana, atraviesan la membrana como -helice o como lminas plegadas cerradas. Perifricas unidas a protenas transmembrana por interacciones no covalentes dbiles y Perifricas unidas a lpidos mediante uniones covalentes. Algunas protenas multipaso atraviesan muchas veces la membrana y forman un cilindro hueco con un interior hidroflico por el que pueden pasar molculas pequeas solubles en agua. Este es el principio de las protenas canal que se analizaran mas adelante. Las protenas integrales pueden difundir lateralmente y rotar sobre su propio eje, pero no pueden realizar movimientos a travs del plano de la membrana, o ms sencillamente movimiento flip-flop (ver ms adelante). Las protenas integrales suelen desplazarse acompaadas de los lpidos que las rodean ya que estos le ayudan a mantener su conformacin. Sin embargo, algunas protenas integrales estn ancladas a componentes del citoesqueleto y no pueden trasladarse. De esta manera intervienen en la morfologa de la clula, por ejemplo alargada (o ahusada), cbica, cilndrica, etc. -Protenas extrnsecas o perifricas: Se encuentran sobre la cara externa o tambin interna de la membrana y pueden estar ligadas tanto a las protenas integrales como a los fosfolpidos por uniones dbiles. Se pueden extraer fcilmente con tratamientos no drsticos. Cuando estas se ubican del lado citoplasmtico de la membrana suelen interactuar con el citoesqueleto. C. Hidratos de carbono Las membranas celulares contienen entre un 2-10% de glcidos. Estos se asocian covalentemente a los lpidos (glicolpidos) y a las protenas (glicoprotenas). Los glicolpidos (o glucolipidos) presentes en las membranas son los ganglisidos y cerebrsidos. Los ganglisidos se forman por la unin de un oligosacrido con la ceramida. La

estructura de los cerebrsidos es similar, slo que el hidrato de carbono no es un oligosacrido sino una galactosa o una glucosa. (ver captulo de lpidos) Los hidratos de carbono de los glucolpidos y las glucoprotenas, en su mayora oligosacridos, suelen ubicarse en la cara no citoslica de la membrana plasmtica formando una estructura llamada glicoclix (Fig. 4.9 y 4.10), cuyas funciones se pueden resumir de la siguiente manera: Proteger a la superficie de la clula de agresiones mecnicas o fsicas. Como ejemplo podemos citar a las clulas situadas en la luz del intestino delgado que presentan un glicoclix muy pronunciado. Poseer muchas cargas negativas, que atraen cationes y agua del medido extracelular.

Intervenir en el reconocimiento y adhesin celular. Actan como una huella dactilar caracterstica de cada clula, que permite distinguir lo propio de lo ajeno. Actuar como receptores de molculas que provienen del medio extracelular y que traen determinada informacin para la clula, por ejemplo, receptores de hormonas y neurotransmisores.

Fig. 4.9 - Microfotografa electrnica de un glicocalix de epitelio intestinal (izquierda).

Fig.4.10 Esquema del glicocalix de una clula eucariota

Las diferencias entre los grupos sanguneos se hallan determinadas por ciertos oligosacridos muy cortos, presentes en las membranas plasmticas de los glbulos rojos o eritrocitos. Estos oligosacridos slo difieren en sus monmeros terminales y estn ligados a una protena transmembranosa o a una ceramida de la membrana plasmtica. Por ejemplo, los eritrocitos pertenecientes al grupo sanguneo A, presentan como monosacrido terminal una Nacetilgalactosamina y los del grupo B una galactosa. Cuando ambos monosacridos terminales estn ausentes estamos en presencia del grupo 0 (Fig.4.11).

Fig. 4.11 - Grupos sanguneos 2. FLUIDEZ DE LA MEMBRANA Como ya se mencion, las membranas son estructuras dinmicas donde los componentes pueden desplazarse en todas las direcciones sobre el plano de la bicapa. De ah que el modelo reciba el nombre de mosaico fluido.

Fig. 4.12 - Movimientos de los fosfolpidos en una bicapa lipldica 2.1. MOVILIDAD DE LOS COMPONENTES DE LAS MEMBRANAS

Existen tres tipos de movimientos posibles en las membranas: rotacin (sobre su propio eje) traslacin (o difusin lateral) sobre el plano de la membrana. flip-flop

El movimiento de flip-flop es el intercambio de fosfolpidos de una monocapa (o hemimembrana) a la otra; esta sumamente restringido, debido a la dificultad que posee la cabeza polar para atravesar el medio hidrofbico de la matriz de la membrana. De all que no sea un movimiento que ocurra de manera espontnea sino que est mediado por enzimas denominadas flipasas. Tanto los movimientos de difusin lateral como el de rotacin se llevan a cabo sobre la misma hemimembrana de la bicapa lipdica. 2.2. FACTORES QUE AUMENTAN LA FLUIDEZ DE LAS MEMBRANAS -cidos grasos insaturados -Baja concentracin de colesterol -Altas temperaturas -Colas hidrocarbonadas cortas (dificultan el empaquetamiento) Factores que favorecen la viscosidad Alto grado de saturacin y mayor longitud de las colas hidrocarbonadas. Menor temperatura del medio Factores que favorecen la fluidez Alto de grado de insaturacin y menor longitud de las colas hidrocarbonadas. Mayor temperatura del medio

Fig. 4.13 - Esquema de los fosfolpidos de membrana en estado viscoso y fludo. 2.3. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA FLUIDEZ El ascenso de la temperatura aumenta la energa cintica entre las molculas y, por lo tanto, el movimiento de las colas hidrocarbonadas. Esto lleva a una disminucin de las interacciones atractivas entre las mismos y a un aumento de los movimientos de rotacin y de difusin lateral. Por el contrario, una disminucin de la temperatura vuelve ms rgida a la membrana ya empaqueta las colas hidrofbicas de los fosfolpidos e impide sus movimientos. Si la temperatura desciende significativamente, la membrana puede llegar a cristalizarse, con la prdida consiguiente de muchas funciones vitales de la membrana. Los organismos que habitan regiones donde hay grandes amplitudes trmicas estacionales varan la composicin de los fosfolpidos de sus membranas en forma peridica, asegurando as una fluidez ms o menos constante durante todo el ao. Por otra parte, organismos que habitan ambientes extremos poseen composiciones fosfolipdicas muy particulares en sus membranas, por ejemplo, los que viven a temperaturas inferiores a los 0C tienen membranas muy ricas en lpidos poliinsaturados. 2.4.. DETERMINACIN DE LA FLUIDEZ DE LA BICAPA LIPDICA La fluidez de la membrana se pudo determinar experimentalmente tratando clulas con anticuerpos fluorescentes que eran reconocidos y se unan a las protenas (receptores) presentes en la membrana plasmtica. Gracias a esta tcnica, se pudo observar, a travs del microscopio, el desplazamiento de los receptores sobre la superficie de la membrana y su agrupamiento en un polo de la clula, donde posteriormente ingresaban por endocitosis (internalizacin a la clula, ver ms adelante). 3. ASIMETRIA DE MEMBRANA En ambas caras de la bicapa (tambin denominadas hemimembranas o monocapas) no se encuentran los mismos tipos de fosfolpidos. Si bien estos en su mayora se sintetizan en la cara citosolica del retculo endoplasmtico liso, luego, por medio de movimientos del tipo flipflop (nicamente permitidos en el REL, gracias a la presencia de flipasas), se van ubicando del lado de la bicapa que les corresponda. Por ej., la fosfatidilcolina y la esfingomielina predominan en la cara no citosolica de la membrana (Fig. 4.7).

La asimetra estructural de las membranas suele manifestarse a travs de una asimetra funcional. Esto significa que las funciones presentes en la cara citosolica no son las mismas que aparecen en la cara no citoslica. Por ejemplo, en el caso de la membrana plasmtica, las molculas que intervienen en el reconocimiento celular se ubican casi exclusivamente en la cara expuesta hacia el medio extracelular, pues no tendra mucho sentido que dichas molculas estuviesen expuestas hacia el citoplasma.
4. FUSIN DE MEMBRANAS

Las membranas tienen una elevada capacidad para fusionarse entre s. Por ejemplo, cuando una vescula se aproxima a la membrana plasmtica, a una cisterna o, inclusive, a otra vescula, al entrar en contacto ambas superficies, las dos membranas se fusionan, constituyendo a partir de ese momento una sola membrana. Este fenmeno explica el transito de sustancias desde un compartimiento celular a otro, y desde las endomembranas a la membrana plasmtica. (ver ms adelante endo y exocitosis). Este es el principio en el que se basa la administracin de frmacos vehiculizadas dentro de liposomas, que son vesculas fosfolipdicas artificiales que contienen alguna droga de inters teraputico. Cuando el liposoma se aproxima a la clula blanco (o target), la membrana del liposoma se fusiona con la membrana plasmtica liberando su contenido directamente en el citoplasma de la clula. Este fenmeno permite que el contenido del liposoma slo sea captado por ciertos tipos celulares y no por otros. Tcnicas basadas en esta propiedad de las membranas se utilizan, por ejemplo, para combatir clulas tumorales.

Fig. 4.14 -Fusin de dos membranas

5. PERMEABILIDAD DE LAS MEMBRANAS CELULARES Como ya se ha mencionado la membrana plasmtica es una barrera con permeabilidad selectiva que regula el intercambio de sustancias entre el citoplasma y el medio extracelular. Sus propiedades aseguran que las sustancias esenciales, como la glucosa, los aminocidos y los lpidos entren a la clula fcilmente, que los intermediarios metablicos permanezcan en la clula y que los productos de desecho, como la urea, abandonen la misma. Todo esto permite a la clula mantener el medio interno relativamente constante. La membrana, debido a sus caractersticas hidrofbicas, es impermeable a la mayor parte de las molculas hidrosolubles, como la glucosa, los aminocidos y los iones en general. En cambio, las molculas hidrofbicas, siempre y cuando su tamao no sea demasiado grande, pueden atravesarla fcilmente. Podemos observar en la figura 4.15, que nicamente atravesarn la membrana las molculas no polares y pequeas como el O2, CO2, N2 e incluso el CO (txico), compuestos liposolubles como los cidos grasos y esteroides y, adems, a pesar de ser molculas polares, el glicerol, la urea y el agua. El resto de las molculas se transfiere de un lado a otro de la membrana gracias a protenas integrales que actan como transportadores; sin estos transportadores dichas molculas no pueden difundir a travs de las membranas.

Fig. 4.15 - Permeabilidad de la membrana a los diferentes solutos 6. MECANISMOS DE TRANSPORTE TRANSMEMBRANA

Fig. 4.16 - Distintos mecanismos y estructuras utilizados por los solutos para atravesar las membranas de una clula. Antes de continuar con los mecanismos de transporte es preciso hacer una breve aclaracin acerca del fenmeno de difusin. Si colocamos un soluto en un solvente, las molculas de soluto, debido a la energa cintica de las molculas presentes en la solucin, difundirn desde la zona donde se encuentran en mayor concentracin hacia la zona donde se hallan en menor concentracin. Al cabo de un tiempo toda la solucin presentar la misma concentracin de soluto. Por ejemplo, si agregamos una gota de tinta a un vaso con agua, la tinta difundir a travs del lquido y al cabo de un tiempo todo el vaso presentara una tincin pareja.

Fig. 4.17 - Difusin de una sustancia disuelta en un solvente. Para lograr esto no se requiere aporte externo de energa, sino que es suficiente con la energa cintica propia de las molculas. Si tenemos en cuenta que la temperatura de un medio es, de alguna manera, un ndice de la energa cintica de las molculas presentes en el mismo, es fcil deducir que a mayor temperatura, ms importante ser el fenmeno de difusin. Podemos definir entonces a la difusin como el movimiento de molculas desde una zona de mayor concentracin hacia una de menor concentracin. A la diferencia de concentracin que existe entre una zona y otra se la denomina gradiente.

a)

DIFUSION SIMPLE

Cuando la difusin se realiza entre compartimientos separados por una membrana permeable a ese soluto, se denomina difusin simple y, como ya se dijo, no requiere de otra energa adicional que no sea el movimiento de las molculas, desplazndose stas a favor de su gradiente de concentracin. En otras palabras, la difusin simple no requiere gasto de ATP, ya que es un fenmeno espontneo. Las molculas que se movilizan por difusin simple a travs de la membrana son las no polares y pequeas, las liposolubles y las polares pequeas, pero sin carga elctrica neta, como el H2O. En el caso particular del H2O, la difusin simple se denomina smosis. El pasaje de agua a travs de la membrana u smosis se lleva a cabo siempre en forma espontnea y muy rpidamente. El H2O difundir desde el compartimiento de menor concentracin de solutos o medio hipotnico, al de mayor concentracin de solutos o medio hipertnico, de modo tal de igualar las concentraciones en ambos compartimientos. Al cabo de un tiempo, el resultado sern dos medios isotnicos, o sea, la concentracin a ambos lados de la membrana ser la misma.

Fig. 4.18 -Efecto del proceso osmtico sobre una clula viva. Si colocamos una clula, por ejemplo un glbulo rojo, en una solucin hipertnica (agua salada, por ejemplo) el H2O tender a salir por smosis hacia el medio extracelular, encogiendo o crenando al glbulo rojo. En cambio, si el medio extracelular es hipotnico (agua destilada, por ejemplo) el H2O penetrar en la clula, hinchndola y, finalmente, ocasionando su ruptura o lisis. Cabe hacer aqu una breve aclaracin: un medio no es por s mismo ni hipertnico ni hipotnico; siempre que se use esta terminologa lo que se esta haciendo es comparar un medio con respecto a otro. Por ejemplo, A puede ser hipertnico con respecto a B y, al mismo tiempo, A tambin puede ser hipotnico con respecto a C. Es decir, A tiene una concentracin de solutos intermedia. Por otra parte, se dice que dos medios son isotnicos cuando su concentracin de solutos es la misma. Ms adelante veremos (en Acuaporinas) que adems de la smosis existen otros tipos de transporte de H2O a travs de las membranas biolgicas.

Fig. 4.19 - Osmosis. Efecto de los cambios de concentracin de soluto en (a) clulas animales y (b) clulas vegetales b) DIFUSIN FACILITADA Aquellas molculas que no pueden atravesar fcilmente las membranas por difusin simple debido a su polaridad y/o a su tamao (por ej. glucosa, aminocidos, iones, etc.), podrn hacerlo si estn presentes sus respectivos transportadores. Dichos transportadores son protenas integrales de membrana y se los puede agrupar del siguiente modo: Protenas canal o canales inicos Protenas carrier o permeasas

La difusin facilitada ocurre siempre a favor del gradiente, por lo tanto no requiere gasto de energa adicional. Sin embargo, puede tratarse de un gradiente de concentracin (las molculas se dirigen del compartimiento de mayor concentracin hacia el de menor concentracin) o de un gradiente de potencial elctrico (el soluto con carga elctrica, independientemente de su signo, se desplazar de una zona donde la carga sea mayor hacia otra donde la carga sea menor). Estas protenas transportadoras presentes en las membranas presentan caractersticas muy similares a las enzimas:

Saturabilidad (se saturan al alcanzar la mxima velocidad de transporte) Especificidad (reconocen a sus ligandos a travs de un sitio especfico) Pueden ser inhibidas por determinadas sustancias.

Cuando las protenas transportadoras se saturan de solutos a transportar, alcanzan su mxima velocidad de transporte y por lo tanto las molculas a ser transportadas debern esperar a que se desocupen los sitios de unin. b1) Canales inicos: Los canales inicos son poros o tneles formados por una o varias protenas transmembrana. En general, son de tipo multipaso, con un interior hidrofilico. Existen canales inicos en todas las clulas, tanto en la membrana plasmtica como en las membranas de los organoides. Son altamente selectivos, porque cada canal slo puede transportar un tipo de ion (K+, Na+, etc.). Los iones se mueven a travs del canal a una velocidad muy elevada (108 iones por segundo). El transporte de un ion es impulsado por el gradiente electroqumico. O sea que un ion puede difundir de un lado a otro de la membrana, gracias a la diferencia de concentracin como a la diferencia de carga elctrica a ambos lados de la membrana. La mayora de los canales no permanecen abiertos permanentemente, sino que se abren en respuesta a estmulos. Estos estmulos pueden ser tanto la presencia de una sustancia inductora como una modificacin de la carga elctrica de la membrana (modificacin del potencial elctrico). Los canales que se abren o cierran en presencia de sustancias inductoras (ligandos) son llamados dependientes de ligando y los otros, dependientes de voltaje.

Fig. 4.20 - Diferentes tipos de canales. b2) Carriers o permeasas: Al igual que los canales inicos, las permeasas estn formadas por protenas transmembrana multipaso. Suelen transportar una gran variedad de iones como el HCO3- y otras molculas polares sin carga como la glucosa. Este tipo de protenas fijan una nica molcula de sustrato (o unas pocas) a la vez, y a continuacin sufren un cambio conformacional reversible que les permite transportar el soluto de un lado al otro de la membrana (translocacin). Aqu vale hacer otra aclaracin: para entender la difusin facilitada no hay que pensar si una sustancia entra o sale de la clula, lo importante es considerar que se est movilizando algo a favor del gradiente (qumico o elctrico) gracias a la accin de protenas transportadoras. Por esta razn es que no se requiere de energa adicional, no se requiere gasto de ATP, ya que es el propio gradiente el que impulsa el pasaje a travs de los transportadores. Este tipo de transporte es siempre sin gasto de energa y a favor del gradiente electroqumico. La velocidad de transporte es muy inferior al de los canales inicos.

Fig. 4.21 -Transporte facilitado por medio de una permeasa. Existen tres tipos de permeasas: -MONOTRANSPORTADORA O UNIPORTE: Transfieren UN solo tipo de soluto de un lado al otro de la membrana. (ej.: transporte de glucosa en la mayora de las clulas animales, desde el medio extracelular, la sangre, donde la concentracin es mayor, hacia el interior de las mismas donde es menor) -COTRANSPORTADORA O SIMPORTE: Transfieren DOS tipos de solutos, ambos en el mismo sentido. -CONTRATRANSPORTADORA O ANTIPORTE: Transfiere DOS tipos distintos de solutos en sentidos contrarios. Es decir, uno ingresa al citoplasma si, y solo si, simultneamente el otro sale.

Fig. 4.22 - Tres tipos de transporte mediados por protenas transportadoras

Los uniportes transportan las molculas a favor de su gradiente de concentracin. Como ejemplo podemos citar la glucosa y distintos aminocidos. En cambio, los otros dos tipos de transporte acoplan el movimiento de un tipo de ion o molcula a favor de su gradiente de concentracin con el de otro tipo de molcula o ion en contra de su gradiente de concentracin. O sea lo que hacen es acoplar un transporte energticamente favorable con otro que no lo es. Un ejemplo de COTRANSPORTE sera el transporte de Na+ y glucosa en la membrana plasmtica de las clulas intestinales (ver ms adelante) y uno de CONTRATRANSPORTE, el transporte de Cl- y HCO3- en la membrana de los glbulos rojos. Tanto el cotransporte como el contratransporte, son tambin llamados transportes acoplados, ya que no se pueden llevar a cabo si no estn presentes ambos tipos de solutos. Casos particulares de transporte pasivo: Ionforos y Aquaporinas IONOFOROS

Fig. 4.23 - Mecanismo de pasaje de iones a travs de ionforos transportadores mviles Estas sustancias tienen la propiedad de poder incorporarse a las membranas y aumentar la permeabilidad a ciertos iones. En general son fabricados por bacterias como mecanismos defensivos. Existen dos tipos distintos: -Transportadores mviles: Se unen reversiblemente a un ion que se encuentra en el medio con mayor concentracin, giran en la bicapa y lo liberan en el otro lado de la membrana. Ejemplo: Valinomicina (Fig.4.23). - Formadores de canales: Son protenas con estructura helicoidal, en cuyo interior de la hlice hay una regin hidroflica que permite el paso de iones monovalentes (con una sola carga elctrica). Ejemplo: Gramidicina (Fig. 4.24).

Fig. 4.24 - Esquema de la estructura del canal de gramicidina ACUAPORINAS Son canales especiales con estructura helicoidal que permiten el paso selectivo de H20. No son canales inicos. En ciertas clases de clulas, por ejemplo en algunas clulas renales, se requiere un mayor transporte de H20 que el logrado exclusivamente con la difusin simple (osmosis). La estructura de las acuaporinas es semejante a la de los ionoforos formadores de canales. c) TRANSPORTE ACTIVO Las clulas no pueden depender nicamente del transporte pasivo dado que deben importar, por un lado, molculas que estn en menor concentracin en medio extracelular que en el citoplasma y, por otro, necesitan mantener constante la composicin inica intracelular. Ambas funciones se llevan a cabo por medio del transporte activo. Es un transporte que se realiza en contra del gradiente, ya sea este de concentracin o elctrico y, en consecuencia, se requerir gasto de energa en forma de ATP. El transporte activo se realiza por medio bombas y tambin presenta formas de monotransporte, cotransporte y contratransporte. Posee las mismas caractersticas de especificidad y saturabilidad que la difusin facilitada, aunque difiere de sta por realizarse contra el gradiente electroqumico. El transporte activo esta desfavorecido termodinmicamente (es endergnico) y se da solamente cuando est acoplado (directa o indirectamente) a un proceso exergnico como, por ej., la conversin de ATP a ADP + Pi. Debido a esto, las bombas se suelen denominar ATPasas de transporte. Existen muchos tipos de ATPasas distintas. Aqu vamos a hablar de las ms importantes, que son la Bomba de Na+-K+ (bomba sodio potasio)y la de K+/H+.

Fig. 4.25 - Esquema de la ATPasa.

Las sustancias que se movilizan por transporte activo son en muchos casos las mismas que lo hacen a travs de difusin facilitada, la diferencia fundamental es que en el primer caso lo hacen en contra del gradiente mientras que en el segundo lo hacen a favor.

Bomba Na+/K+
Est presente en todas las membranas plasmticas de las clulas animales. Tambin se la conoce como Na+-K+ ATPasa. Es un complejo proteico formado por cuatro subunidades, todas ellas protenas integrales de la membrana plasmtica. Su funcin es expulsar Na+ al espacio extracelular e introducir K+ al citosol. Ambos son movilizados en contra de su gradiente electroqumico, estableciendo as diferencias de concentracin y carga entre el espacio extra e intracelular para ambos iones. Debido a que se esta transportando simultneamente dos solutos distintos en sentidos opuestos, estamos en presencia de un sistema de contratransporte. Es importante recordar que, si bien el Na+ sale y el K+ ingresa a la clula, ambos lo hacen en contra de su gradiente y, en consecuencia, hace falta hidrolizar ATP para movilizarlos. La Bomba Na+-K+ tiene simultneamente funciones de protena transportadora y de ATPasa (hidroliza ATP para obtener energa). Por lo menos un tercio de la energa que consume una clula animal se destina para impulsar esta bomba. En las clulas nerviosas, donde la actividad elctrica es sumamente importante, este valor asciende al 60%. Cada ATPasa puede hidrolizar hasta 100 molculas de ATP Mecanismo de accin de la Bomba Na+/K

1) Tres iones de Na+ se unen al dominio citoplasmtico de la ATPasa, debido a la gran afinidad que existe entre ambos. 2) Luego se hidroliza el ATP y se fosforila la protena. Esto lleva a un cambio conformacional en la misma. 3) Esto permite la translocacin de los iones Na+ hacia el espacio extracelular. 4) A continuacin, dos iones K+ del medio extracelular, donde su concentracin es menor, se unen a un sitio receptor de K+ accesible ahora desde el exterior de la clula. La unin del K+ con la protena induce la liberacin del fosfato. 5) La desfosforilacin de la bomba, restituye la conformacin original. 6) Esto permite la translocacin de los iones K+ hacia el citoplasma. Se puede comenzar nuevamente el proceso. Por cada molcula de ATP que se hidroliza se posibilita el transporte de 3 iones Na+ hacia espacio extracelular y de 2 iones K+ al citoplasma. Las transferencias de iones se hallan acopladas, y por lo tanto no pueden realizarse una independientemente de la otra.

Fig. 4.26 Mecanismo de accin de la ATPasa Na+/K+

Las funciones de la bomba de Na+/K+ son: a) Mantener diferencias en las concentraciones de Na+ y K+ intra y extracelulares. b) Generar un potencial elctrico de membrana, que es una diferencia de voltaje, o sea de carga, entre ambos lados de la membrana. Al bombear tres iones en una direccin y slo dos en otra, se genera un potencial elctrico negativo del lado interno de la membrana con respecto al externo. El lado citoslico es normalmente ms negativo que el espacio extracelular.

c)

Intervenir en la regulacin del volumen celular.

d) Generar diferencias de concentracin de Na+ o K+ para que otros transportadores pasivos utilicen indirectamente la energa potencial acumulada en este gradiente. Como ejemplo podemos citar al: -COTRANSPORTE Na+/GLUCOSA (ya citado en difusin facilitada). Esta situacin se da en las membranas apicales de las clulas del intestino delgado o en membranas de clulas renales, donde deber absorberse glucosa desde la luz del intestino o de los tbulos renales, aunque las concentraciones extracelulares sean bajas. Gracias a la accin de la bomba Na+-K+ se expulsan iones Na+ a travs de la membrana basal de la clula. De este modo, la concentracin de Na+ intracelular se mantenida baja. En la regin apical de la membrana se encuentra una permeasa pasiva cotransportadora de Na+ y glucosa. El Na+ ingresa de este modo a favor de su gradiente electroqumico al interior de la clula y arrastra a la glucosa con l, que ingresa de este modo en contra de su gradiente de concentracin, gracias al sistema de cotransporte. Este tipo de transporte tambin se denomina transporte acoplado a gradientes inicos o TRANSPORTE ACTIVO SECUNDARIO (ya que indirectamente est ligado a una bomba). Posteriormente, la glucosa atravesar la clula y saldr por difusin facilitada, a favor de su gradiente de concentracin, hacia el torrente sanguneo.

Fig. 4.27 Mecanismo de co-transporte Na+/glucosa en epitelio intestinal

Hay otro tipo de ATPasa, presente en las membranas internas mitocondriales y de cloroplastos, que juega un papel muy importante en la obtencin de la energa. Acta como una ATPsintetasa (sintetiza ATP), gracias al gradiente de H+ que se genera a ambos lados de las membranas internas de cloroplastos y mitocondrias. Dicho proceso se ver con detenimiento en los captulos de Respiracin y fotosntesis. Existen otro tipo de bombas, como las de las membranas del Retculo endoplasmtico liso de las clulas musculares, que se encargan de bombear iones Ca++ hacia el interior del REL y mantener baja la concentracin citoslica Ca++ , o las de los lisosomas, que bombean H+ hacia el interior de los mismos, disminuyendo as el pH intralisosomal. d) TRANSPORTE EN MASA (Fig. 4.28) Hasta aqu analizamos el modo en el que los iones y las pequeas molculas atraviesan la membrana celular. Pero como ingresan o abandonan la clula partculas de mayor tamao. Esto se realiza por medio del TRANSPORTE EN MASA. Este tipo de transporte involucra siempre gasto de ATP, ya que la clula realiza un movimiento general de su estructura (en particular de la membrana plasmtica y del citoesqueleto -ver funciones del citoesqueleto-). El mecanismo por medio del cual los materiales entran a la clula se denomina endocitosis y aquel por el cual la abandonan, exocitosis. d1) ENDOCITOCIS En este proceso una extensin de la membrana rodea progresivamente al material que ser internalizado, luego se produce una gemacin o invaginacin de la membrana, y finalmente sta se separa de la membrana, formando una vescula endoctica. Posteriormente, el material incorporado es digerido por los lisosomas. Las fibras de actina y miosina del citoesqueleto intervienen en este proceso. Se distinguen 3 tipos de endocitosis: -Fagocitosis -Pinocitosis -Endocitosis mediada por receptor A) Fagocitosis: Implica la ingestin de partculas de gran tamao, como microorganismos, restos celulares, inclusive de otras clulas, por medio de vesculas llamadas fagosomas. Estos fagosomas suelen presentar un gran tamao. La fagocitosis slo se da en determinados tipos de clulas. En algunos organismos unicelulares (protistas) constituye un modo de alimentacin: engloban grandes partculas, por ej. bacterias, por medio de prolongaciones de la membrana plasmtica llamados pseudpodos y las

internalizan, formndose as un fagosoma o vescula fagoctica. Posteriormente ser degradada por las enzimas lisosomales. Para ampliar consultar en la bibliografa: Lisosomas. En los animales slo se da en algunas clulas altamente especializadas, llamadas clulas fagocticas (macrfagos de los tejidos y glbulos blancos sanguneos denominados neutrfilos). En estos casos la funcin no es de ndole nutricional, sino defensiva. Las clulas fagocticas defienden nuestro organismo contra infecciones, ingiriendo microorganismos patgenos. Otra funcin sera eliminar clulas muertas o daadas, o restos celulares (por ejemplo glbulos rojos no funcionales). El proceso fagoctico se desencadena por la unin del material a endocitar con ciertos receptores de la membrana plasmtica que reconocen al mismo. B) Pinocitosis: Es la incorporacin de fludo y de partculas disueltas en l por medio de pequeas vesculas. Es un proceso inespecfico y la velocidad de ingestin es muy elevada. Por ejemplo, un macrfago puede ingerir por hora un cuarto de su volumen celular. El tamao de estas vesculas endocticas en mucho menor que el de los fagosomas. C) Endocitosis mediada por receptor: En muchos aspectos es similar a la anterior, salvo que en este proceso, la endocitosis es mucho ms selectiva. Determinadas molculas (ligandos) que la clula desea incorporar son reconocidos por receptores especficos, ubicados en la membrana plasmtica. Los ligandos se unen a estos receptores y estos complejos ligandoreceptor confluyen, gracias a la fluidez de la membrana, a determinadas zonas de la misma, donde sern endocitados. La invaginacin de la membrana se denomina en este caso fosita revestida. Esto se debe a que las vesculas presentan en su cara citosolica un revestimiento de protenas caractersticas, en este caso de clatrina. La funcin de la misma, sera entre otras, permitir que se produzca la invaginacin. A continuacin se forma la vescula recubierta o revestida que se fusionar con un conjunto de vesculas llamadas endosomas, donde se clasifican las molculas endocitadas y se las separa de los receptores. Este proceso puede incrementar mil veces la eficiencia de internalizacin de un determinado ligando, sin tener que incrementar la absorcin de fluido extracelular. Un ejemplo importante de este proceso es la captacin de colesterol por las clulas animales. El colesterol, debido a su carcter hidrofbico, es transportado por la sangre unido a protenas, formando complejos llamados lipoprotenas de baja densidad (LDL). Estas LDL se unen a receptores ubicados en la superficie celular y los complejos LDL-receptor son internalizados en vesculas revestidas y luego transferidas a los endosomas, previa liberacin de la cubierta de clatrina. En el interior de los endosomas, el LDL se disocia del receptor y este es reciclado nuevamente a la membrana plasmtica para captar nuevamente LDL.

Fig.4.28- Tipos de transporte en masa d2) EXOCITOSIS Es el proceso inverso a la endocitosis. En este caso, material contenido en vesculas intracelulares tambin llamadas vesculas de secrecin es vertido al medio extracelular. La secrecin de sustancias comienza generalmente con estmulos provenientes del medio extracelular, que inducen a las vesculas de secrecin, ubicadas en las cercanas de la membrana, a fusionarse con la misma y volcar su contenido al medio extracelular. As por ejemplo se liberan las protenas de exportacin (ver funciones del Aparato de Golgi) y los neurotransmisores (para ampliar esto ultimo consultar Sinapsis nerviosa en la bibliografa) En este caso, la membrana de la vescula pasa a formar parte de la membrana plasmtica. Es decir, hay ganancia de membrana, mientras que en la endocitosis hay prdida de membrana.

AUTOEVALUACIN
1. Esquematice el modelo de mosaico fluido de la membrana plasmtica. Indique sus componentes. 2. Enumere las funciones ms importantes de la membrana plasmtica.

3. Conteste las siguientes preguntas con respecto a la estructura de la membrana plasmtica: a) b) c) Cul es la caracterstica comn a todos los lpidos de membrana? Por que se dice que la membrana plasmtica es asimtrica? De qu depende el grado de fluidez de la membrana?

d) Dnde espera encontrar ms protenas en la membrana interna de una mitocondria o en el retculo liso? Por qu? 4. Resuelva el siguiente problema: En sus estudios sobre las clulas, Ud. descubre una nueva protena, a la que llama esgfun. Esta protena tiene un dominio A extracelular y un dominio C intracelular. Ud. descubre que esgfun es mvil, recorre lo largo de toda la membrana en 15 minutos. No importa cuantas veces la observe, el dominio A siempre est del lado extracelular y el C del lado intracelular. a) Explique por qu se mantienen los dominios de esta manera. b) Si Ud. fuera capaz de extraer todo el colesterol de esta membrana, qu cambios observara en los movimientos de esgfingolpidos?. 5. Clasifique a los distintos tipos de transporte considerando los siguientes criterios : a) b) Gasto de energa: pasivos (sin gasto) o activos (con gasto). Uso de protenas transportadoras: mediado (uso) o no mediado (no uso).

c) Nmero y direccin de partculas transportadas: uniporte, simporte y contratransporte. 6. Realice un cuadro comparativo donde indique las semejanzas y diferencias entre el transporte activo y la difusin facilitada. 7. Explique los distintos tipos de ionforos.

8. Resuelva el siguiente problema: A Ud. se le provee de un cultivo de clulas en su medio de cultivo. Se encuentran en dicho medio muchas clulas por ml. Se le agrega una sustancia X y

se puede medir la concentracin interna de esta sustancia a travs del tiempo de esta manera ud puede conocer como es tomada por las clulas. Describa (use grficos recuerde los de enzimas) como podra determinar si X entr a la clula por difusin simple, transporte facilitado o transporte activo. Puede asumir que tiene al alcance de su mano todas las tcnicas que necesita. 9. Conteste las siguientes preguntas sobre tipos de transporte a) Qu tipo de mecanismo utiliza la glucosa para ingresar a las clulas epiteliales del intestino desde la luz de este al interior de las mismas. De dnde se obtiene la energa? b) Los iones de Ca++ son eficientemente incorporados en muchas clulas vivientes, incluso cuando esto se realiza en contra de gradiente. Proponga un mecanismo para explicar esto. c) Las neuronas y otras clulas excitables tienen membranas que son polarizadas. Existe una diferencia de voltaje que es negativo en el interior de la clula y positivo en el exterior. Explique cmo esta polarizacin es mantenida en una neurona en reposo. Cules son los iones ms importantes que participan? existen iones ms importantes que otros? Cmo se crea y se mantiene esta diferencia de potencial? d) Basado en sus conocimientos sobre los distintos tipos de transporte atravs de la membrana, proponga un mecanismo para explicar como estransportada la galactosa al interior de las clulas epiteliales del intestino.Incluya un diagrama de su mecanismo elegido (existe ms de unaposibilidad, Ud. necesita solamente explicar uno) e) Cules son los distintos mecanismos por los que puede ingresar el agua y los iones en la clula? f) Describa los mecanismos de transporte en masa y cite ejemplos.

Responda las siguientes preguntas de opcin mltiple:

1. En que se diferencian las membranas de una clula eucaritica: a- los fosfolpidos se encuentran solo en algunos tipos de membrana. b- solo algunas membranas tienen permeabilidad selectiva. c- solo algunas membranas tienen lpidos anfipticos. d- algunas protenas son propias de cada membrana.

e- todas son correctas. 2. Cul de los siguientes procesos incluye todos los dems de la lista? a- smosis. b- difusin de un soluto a travs de la membrana. c- difusin facilitada. d- transporte pasivo. e- transporte de un ion a favor de gradiente. 3. Si una ameba es isotnica respecto a una solucin que es hipertnica para un cangrejo, en cul de estos organismos ocurrir un ingreso netos de agua al sumergir ambos en la solucin? a- en la ameba. b- en el cangrejo. c- en ninguno de los dos. 4. Cul de los siguientes factores podran influir en la fluidez de la membrana? a- una proporcin grande de fosfolpidos insaturados. b- una baja temperatura. c- una proporcin grande de fosfolpidos saturados. d- un potencial alto de membrana. e- ninguna es correcta. 5. Las clulas incorporan lipoprotenas utilizando: a- fagocitosis b- endocitosis mediada por receptor. c- exocitosis. d- transporte activo.

e- endocitosis a granel.