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UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

FACULTAD DE MEDICINA DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA

PRACTICAS DE LABORATORIO

MICROSCOPIA
Maye Bernal Rivera Profesora Asistente

El MICROSCOPIO
1. 2. 3. 4. 5. 6. Historia Componentes Uso Cuidado Mantenimiento y Precauciones Utilidad para el médico

HISTORIA
La palabra microscopio viene del griego mikro, pequeño y skop, visión. Los microscopios son instrumentos que nos permiten observar objetos pequeñísimos que no se pueden ver a simple vista ni con la ayuda de una lupa. La palabra microscopio fue utilizada por primera vez por los componentes de la "Academia dei Lincei" una sociedad científica a la que pertenecía Galileo y que publicaron un trabajo sobre la observación microscópica del aspecto de una abeja. El primer microscopio fue inventado, por una casualidad en experimentos con lentes según los Italianos hacia 1610 por Galileo y según los holandeses por Zacharías Janssen (15801638) quien inventó un microscopio con una especie de tubo con lentes en sus extremos, de 8 cm. de largo soportado por tres delfines de bronce; pero se obtenía imágenes borrosas a causa de las lentes de mala calidad. Estos primeros microscopios aumentaban la imagen 200 veces. Sin embargo las primeras publicaciones importantes en el campo de la

Microscopio desarrollado por Anthony van Leeuwenhoek’s

y más adelante. en 1683. Durante el siglo XVIII el microscopio sufrió diversos adelantos mecánicos que aumentaron su estabilidad y su facilidad de uso aunque no se desarrollaron mejoras ópticas. potentes. Sus aparatos usaban lentes relativamente grandes. Las mejoras mas importantes de la óptica surgieron en 1877 cuando Abbe publica su teoría del microscopio y por encargo de Carl Zeiss mejora la microscopía de inmersión . bacterias. Durante este siglo muchos estudiosos de las lentes y los microscopios hicieron toda clase de pruebas y ensayos para lograr un resultado de mayor precisión. Entre los intentos fue el del italiano Marcello Malpighi (1628-1694) que en 1660 logró ver los vasos capilares de un ala de murciélago. las bacterias. perfeccionó el microscopio usando lentes pequeñas. También descubrió los espermatozoides del semen humano. El holandés Antonie van Leeuwenhoek (1632-1723). espermatozoides y glóbulos rojos. y su artefacto era de menor tamaño. utilizando microscopios simples de fabricación propia describió por primera vez protozoos. Leenwenhoek. A mediados del siglo XVII un comerciante holandés. de calidad.microscopia aparecen en 1660 y 1665 cuando Malpighi prueba la teoría de Harvey sobre la circulación sanguínea al observar al microscopio los capilares sanguíneos y el inglés Robert Hooke (1635-1701) publica su obra Micrographia. Alrededor del 1676 logró observar la cantidad de microorganismos que contenía el agua estancada. con dibujos de sus observaciones.

). Se continuó perfeccionando hasta llegar a aumentar unos dos millones de veces. OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Los microscopios ópticos actuales permiten agrandar la imagen más de 2000 veces. en 1942 se binocular de óptica avanzada..M. aumentos superiores a 500X o 1000X sin embargo existía un deseo científico de observar los detalles de estructuras celulares ( núcleo. etc. PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO cabezal oculares revólver objetivos platina brazo Desplazamiento platina condensador macrométrico foco micrométrico base Sistema óptico OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. este utiliza un haz de electrones en lugar de luz para enfocar la muestra consiguiendo aumentos de 100. Siglo IX desarrolla el microscopio Microscopio electrónico de barrido (SEM). Posteriormente. - . mitocondria. Amplía la imagen del objetivo.sustituyendo el agua por aceite de cedro lo que permite obtener aumentos de 2000A principios de los años 30 se había alcanzado el limite teórico para los microscopios ópticos no consiguiendo estos. Fue desarrollada por Max Knoll y Ernst Ruska en Alemania en 1931. Pero recién en el Siglo XX llegó el gran cambio. el microscopio electrónico de transmisión (T. Y en la actualidad los Microscopios Electrónicos de efecto túnel amplían la imagen hasta 10 millones de veces.E. Amplía la imagen de ésta.000 X.) fue el primer tipo de microscopio electrónico desarrollado. Estos microscopios podían ampliar las imágenes hasta 7000 veces..

. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo. Bajar la platina hasta el tope 2. FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador. ir separando el objetivo de la preparación con el macrométrico y. Permite.- CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación. Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen. cambiar los objetivos. Pasar al objetivo 10x La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular. Mirar a través de los oculares y lentamente. TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y Micrométrico que consigue el enfoque correcto - - MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO Observación de preparaciones en fresco 1. CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 4. Colocar el objetivo de menor aumento (4x) en posición de observación 3. al girar. PLATINA: Lugar donde se coloca la preparación. - Sistema mecánico SOPORTE: Mantiene la parte óptica. girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino. empleando el tornillo macrométrico. Colocar la preparación sobre la platina 4. cuando se observe algo nítido la muestra. 6. Puede ser monocular o binocular REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación. ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos 5.

La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión y la preparación es mínima. pues se mancharía de aceite. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de x40. Pasar al objetivo de 40x el cual enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión. 3. CUIDADO . Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande. si desea enfocar otro campo. hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica. 8.7. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación. Por tanto. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que colocarse la gota de aceite. Dejar caer una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz. Observación de preparaciones con objetivo de inmersión 1. 6. 7. 4. 2. sin permitir que el gotero toque la preparación 5. Bajar al tope la platina. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión. Mirar directamente al objetivo y lentamente subir la platina hasta que la lente toque la gota de aceite. ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona. 9. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio. 10. En este momento ya se puede retirar la preparación de la platina.

de modo tal que pueda sentarse con comodidad para ver el ocular sin apoyarse. 10. 2. antes de transportarlo a la Sala de Microscopios 9. revólver y condensador). 3.En la observación 1. 2. 2. micrométrico. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular. 8. Colocar el portaobjeto sobre la platina de manera tal que la parte que se quiera observar se encuentre bajo la lente. No bajar la lente mientras se está mirando por el microscopio. Si los objetos son opacos deben ser iluminados desde arriba para poder verlos en detalle. Bajar la preparación Colocar el objetivo de menor aumento en posición de observación Limpiar con papel suave secante la platina Limpiar los objetivos con papel óptico Bajar la intensidad de luz de la lámpara Apagar el microscopio Desenchufar Dejar enfriar el bombillo. 5. Puede golpear el portaobjeto y romperlo o romper la lente. Fijar siempre el portaobjeto con los broches Al finalizar el trabajo 1. No dejar los preparados sobre la platina. secarlo con un papel suave absorbente. Colocar el microscopio en una mesa fija. 4. 7. Si se derrama sobre ella algún líquido. 5. No inclinarlo ya que se pueden caer los oculares. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. 4. 6. Tanto en la lupa como en el microscopio óptico se destruirá . platina. 4. 5. Colocar una mano en la base y la otra en el brazo o columna y desplazarlo en posición erguida. 3. y menos aún si el microscopio está encendido. El objeto a observar debe estar muy bien iluminado. Cubrir el microscopio con la funda y colocarlo en su estuche correspondiente MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES 1. 3. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico.

Apagar mientras no se esté utilizando PRACTICA DE LABORATORIO OBJETIVOS Utilizar el Microscopio de luz corriente como instrumento óptico para visualizar en preparaciones previamente coloreadas. No extraer las lentes ni tocarlas con los dedos.Determinar la función de cada una de estas partes. al acabar el curso. mediano (40X) y gran aumento (100X). no son observables con el ojo desnudo. Enfocar una preparación coloreada con los objetivos de pequeño (10X). Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y. 9. - MATERIALES Microscopio de luz Papel Arroz Aceite de inmersión Solución limpiadora de lentes (Etanol-Éter 9:1) Láminas y laminillas Muestra “en fresco” y gotero Láminas coloreadas PROCEDIMIENTO CONOCIMIENTO DEL MICROSCOPIO . estructuras de diferentes grados de complejidad biológica que. Identificar el microscopio de luz. 8. Enfocar la misma preparación con el objetivo panorámico (4x) Verificar y calcular la ampliación de un objeto de dimensión dado. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo. de acuerdo al objetivo y ocular usados. definir sus partes y especificar la función que cumple cada una. Enfocar una preparación “en fresco” con los objetivos de pequeño aumento (10X) y mediano aumento (40X). NUNCA utilizar xilol para limpiar las lentes.6. por su tamaño. hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o etanol-éter (9:1). 7. encargar a un técnico el ajuste y revisión general de los mismos. (Figura 1). . Describir los principios ópticos y no ópticos que rigen el poder amplificador del microscopio y definir sus límites de amplificación.Ubicar en su microscopio cada una de las partes (óptica y mecánica). MANEJO DEL MICROSCOPIO .

. subir.Enfoque de preparaciones “en fresco” en 10X y 40X . Dibujar los hallazgos - Enfoque con el objetivo 40X Señalar con una flecha en el esquema que acaba de realizar. NOTA: En algunos microscopios antiguos se mueve el tubo del ocular hasta colocar el objetivo a esta distancia de la platina.La platina en su tope inferior .La distancia que queda del objetivo 10X es de aproximadamente 0.Conectar el microscopio . . girar el revolver hasta colocar el objetivo 40X en posición.5 cm. o la estructura que desea estudiar con el objetivo 40X Centrar sobre la parte iluminada de la platina la célula o estructura señalada. Obtener el contraste óptimo de la imagen regulando: La intensidad de la lámpara La posición del condensador y la apertura del diafragma.Hacer el ajuste de las lentes oculares a su distancia interpupilar desplazando los tubos porta-oculares con ambas manos hasta que en el campo microscópico aparezca solamente una imagen.Observar que el campo del microscopio se encuentre uniformemente iluminado. la célula. .El condensador en su tope inferior .Ajustar la nitidez de la imagen moviendo lentamente el tornillo micrométrico de ajuste. Sin mover la posición de la platina. - .Colocar la preparación “en fresco” . . Abrir un poco el diafragma Subir a la mitad el condensador La imagen aparecerá en el microscopio con aspecto borroso. aumentando la profundidad de foco de la imagen.Mirar ahora por el ocular y bajar suavemente la platina hasta lograr captar la imagen del objeto en observación.Objetivo 10X abajo . . mayor contraste de tal modo que este se obtiene básicamente cerrado el diafragma y colocando el condensador en su tope inferior. Este paso es muy importante pues de no quedar centrado podría salirse del campo microscópico ya que al cambiar el objetivo 10X a 40X el campo queda reducido en la misma proporción. Podemos afirmar que a menos luz.Sujetar la lámina con la palanca del carro de transporte.Prender la fuente de luz .Centrar la preparación sobre la fuente de luz en la apertura circular de la platina. Con el diafragma podemos graduar la magnitud del cono de luz que sale del condensador.Revisar que las siguientes partes del microscopio estén en posición: . .Colocar sobre un porta objetos una gota de la preparación “en fresco” y cubrir con una laminilla .El diagrama casi cerrado .Mirar la platina por el lado y mover el botón de ajuste.El carro de transporte centrado . . hasta llegar al tope.

5) e impide la refracción de los rayos de luz que salen de la preparación antes de entrar al objetivo. Obtener la nitidez de la imagen con el tormillo micrométrico . - Devolución del microscopio Antes de abandonar su mesa de trabajo limpiar perfectamente su microscopio como se indica a continuación: Apagar el microscopio Colocar la platina en su tope inferior Colocar el objetivo 10X en posición. Colocar la lámina coloreada sobre la platina Enfocar en 10X Por la parte posterior dejar caer sobre la preparación una gota de aceite de inmersión.Dibujar los hallazgos Bajar la lámina y limpiarla suavemente con papel de arroz Colocar la lámina en la bandeja destinada para ello. Mirar ahora por el ocular y observar la imagen de nuevo en el campo. teniendo el cuidado de no tocar la lámina. NOTA: El aceite de inmersión tiene el mismo índice de refracción del vidrio (1. este se seca sobre la lente objetivo formando una capa espesa que interfiere con la función de la lente. Limpiar la platina completamente y centrar el carro de transporte Revisar todas las partes - . Al no utilizar el aceite y dejar la capa de aire que tienen un índice de refracción 1.Nota: Al no retirar el aceite. parte de los rayos luminosos no penetran al objetivo que por su alta curvatura tiene un diámetro muy pequeño y la imagen aparece borrosa. Revisar que las siguientes partes del microscopio estén en posición: La platina en su tope inferior Objetivo 10X abajo El carro de transporte centrado El condensador en su tope inferior El diagrama casi cerrado Observar que el campo del microscopio se encuentre uniformemente iluminado. Con el papel arroz limpiar la parte óptica del microscopio empezando por los objetivos 10X y 40X: Retirar ahora el aceite del objetivo 100X. . Dibujar los hallazgos Bajar la lámina de la platina y descartarla en el recipiente de descarte que contiene hipoclorito Enfoque con el objetivo 100X.- Ajustar la nitidez de la imagen moviendo lentamente el tornillo micrométrico de ajuste. Sin mover la posición de la platina. girar el revolver hasta dejar el objetivo 100X en su tope Subir el condensador Abrir completamente el diafragma Bajar el objetivo de 100X hasta que quede en contacto con el aceite.

. antes de transportarlo a la sala de Microscopios.- Dejar enfriar completamente la lámpara.