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Ciencia e Investigacin 2009; 12(2)

editorial

Escribir y leer, derechos que debemos utilizar


Muchos hombres se dedican a la ciencia pero muy pocos lo hacen por amor a la ciencia. A. Einstein

un establecimiento de salud. Si seguimos analizando nuestro desempeo profesional encontraremos que estamos dejando de leer ciencia y escribir ciencia. Estos dos aspectos, que pudieran parecer triviales, revisten singular importancia en todo profesional de la salud, ms an cuando algunos nos dedicamos a la docencia, lo cual supone que tambin realizamos investigacin y publicamos sus resultados. Indudablemente, esto implica llevar a cabo esas dos acciones indispensables para la investigacin leer y escribir; pues si no lo hacemos seremos considerados analfabetos cientficos. Como se dice, investigar representa cinco por ciento de inspiracin y noventaicinco por ciento de transpiracin; pero a esto debiramos agregar que se necesita valor para escribir los resultados de tal o cual investigacin, y para esto es indispensable el deseo de hacerlo. Leer es una prctica cultural; consiste en interrogar activamente un texto para comprender su significado y se basa en las experiencias previas, esquemas cognitivos y propsitos del lector. No se lee por leer; se hace para satisfacer necesidades: comunicativas, informativas y estticas. Esto motiva al lector a esforzarse por comprender un texto; permite compartir los conocimientos con grupos de personas (cientficos), ya que los esquemas cognitivos se enriquecen interactivamente. Leemos para obtener una informacin de carcter general, seguir instrucciones, aprender, revisar un escrito propio, por placer, para comunicar un texto a un auditorio, entre otros; por lo que cabra preguntarnos en los ltimos tiempos qu hemos ledo y cul fue nuestro motivo? Nuestras investigaciones tuvieron un buen soporte de lectura o bsqueda bibliogrfica? Recordemos que la lectura enriquece nuestro vocabulario y nos permite hablar y escribir con mayor propiedad.

os farmacuticos, como profesionales de las ciencias de la salud, nos hemos calificado a travs del tiempo como los expertos en el medicamento; sin embargo, muchos de nosotros hemos descuidado este aspecto dejndolo en manos de inexpertos, quienes han distorsionado las funciones farmacuticas en

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Volvemos a subrayar que es necesario escribir, lo cual nos genera una serie de compromisos nunca evidentes en s mismos, para expresarlo mejor: redactar implica que las personas escriban, discutan y lean mucho; recordar que la escritura es una habilidad y que el procedimiento natural para desarrollarla, como cualquier otro tipo de destreza, es la prctica constante. Por stas razones no comentadas en esta pgina, reiteramos que la lectura es una virtud o una prctica agradable, que nos permite atrevernos a escribir, por lo que invitamos a quienes tienen acceso a nuestra Revista a que formen parte activa de sta, haciendo uso de sus derechos fundamentales: leer y escribir.

Dr. Jos R. Jurez Eyzaguirre

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EVALUACIN SEMICUANTITATIVA DE GLUCGENO MEGaCaRIOCTICO PaRa EL DIaGNSTICO DE PRPURa TROMBOCITOPNICA IDIOPTICA


Semiquantitative assessment of megakaryocytes glycogen for diagnosis idiopathic thrombocytopenic purpura
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Unidad de Post-Grado Fac. de Farmacia y Bioqumica, UNMSM, 2Dpto. Acad. de Bioqumica, Facultad de Farmacia y Bioqumica, UNMSM 3 Centro de Anlisis Bioqumicos y Clnicos, UNW.

Juan M. Parreo T1, Luz F. Oyola H2 y Anselma Pardo S 3.

RESUMEN
El objetivo del presente estudio fue determinar semicuantitativamente glucgeno megacarioctico y los parmetros afines como ayuda al diagnstico y tratamiento de la prpura trombocitopnica idioptica (PTI). Las pruebas se aplicaron a 100 pacientes con diagnstico de PTI provenientes de diversos hospitales y clnicas y en 100 sujetos aparentemente sanos, quienes dieron su consentimiento informado de acuerdo a la Declaracin de Helsinki. Se investig la presencia de glucgeno en los megacariocitos del frotis de mdula sea usando el mtodo del cido perydico de Schiff y exmenes complementarios de la hemostasia: recuento de plaquetas por el mtodo de Rees-Ecker, volumen plaquetario medio (VPM) utilizando el analizador automtico Sysmex XE-2100, tiempo de protrombina, tiempo parcial de tromboplastina (TPT), tiempo de sangra, fibringeno, hemoglobina y recuento de glbulos rojos por los mtodos usuales. Se concluye que los pacientes con PTI presentaban disminucin de glucgeno megacarioctico (100%); alteraciones en algunos de los parmetros de la coagulacin como: aumento del tiempo de sangra (98%), disminucin del nmero de plaquetas (100%); mantenindose los tiempos de protrombina, TPT y fibringeno, y aumento en el VPM (88%). Adems, se encontr una correlacin positiva y significativa entre los valores disminuidos de plaquetas y el VPM. Palabras clave: Prpura trombocitopnica idioptica, glucgeno megacarioctico, megacariocitos.

SUMMARY
The aim of this study was to determine semiquantitatively megakaryocyte glycogen and related parameters as an aid to diagnosis and treatment of idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP). The tests were applied to 100 patients diagnosed with ITP from various hospitals and clinics, and 100 apparently healthy subjects who was gave informed consent according to the Declaration of Helsinki. Investigating the presence of glycogen in megakaryocytes of bone marrow smears using the method of peryodic acid-Schiff and complementary tests of hemostasis: platelets by the method of Rees-Ecker, mean platelet volume (MPV) using the automatic analyzer Sysmex XE-2100, prothrombin time, partial thromboplastin time (PTT), bleeding time, fibrinogen, hemoglobin and red blood cell count by the usual methods. We conclude that patients with ITP megakaryocyte glycogen had decreased (100%), alterations in some coagulation parameters such as increased bleeding time (98%), decreased number of platelets (100%) remaining prothrombin time, PTT and fibrinogen, and increased MPV (88%). In addition, we found a significant positive correlation between decreased levels of platelets and the MPV. Keywords: Idiopathic thrombocytopenic purpura, glycogen megakaryocyte, megakaryocyte.

INTRODUCCIN a prpura trombocitopnica idioptica (PTI) es una enfermedad hemorrgica autoinmune (1) que se caracteriza por el desarrollo de autoanticuerpos antiplaquetarios (IgG) dirigidos contra antgenos de algunos de los complejos mayores de glicoprotenas plaquetarias (GpIIb/IIIa, GpIb/IX/V o GpIa/IIa, GpIV), las cuales son destruidas por fagocitosis en el bazo, debido a que ste no reco-

noce a las propias plaquetas y en consecuencia las destruye, y con menor frecuencia en el hgado. En el adulto, la enfermedad es gradual y fluctuante sin ningn sntoma precedente, con un curso crnico mayor a 6 meses y puede ser aguda en un pequeo porcentaje. La gran mayora de los pacientes requieren tratamiento farmacolgico a base de glucocorticoides, quimioterapia inmunosupresora y en casos extremos esplenectoma (2). Se considera una enfermedad de mecanismo inmunolgico idioptico (3).

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Las plaquetas ayudan a que la sangre se coagule, aglutinndose para taponar pequeos agujeros en los vasos sanguneos daados, son metablicamente activas, contienen peptidasa, nucleotidasa, fosfatasa alcalina y fosfatasa cida en cantidades considerables; pirofosfatasa y actividad de deshidrogenasa. Las granulaciones de los trombocitos contienen polisacridos como el glucgeno, y el hialmero segrega retractcima (4,5). No se han encontrado formas inmaduras de las plaquetas, sino ms bien una disminucin de stas; no hay falta de produccin, pero si una velocidad exagerada en su autodestruccin, lo que concuerda con el dficit de glucgeno que se presenta a nivel del megacariocito (6). El Volumen Plaquetario Medio (VPM) es una magnitud calculada por el analizador, que expresa el tamao promedio de las plaquetas. Las plaquetas nuevas son ms grandes, por lo que se presenta aumento del VPM cuando se produce un mayor nmero de plaquetas, siendo este un medio de informacin acerca de la produccin de plaquetas por la mdula sea (7,8). La investigacin comprende los estudios citoqumico, hematolgico y bioqumico en aspirado de mdula sea y sangre venosa, tanto en los pacientes con PTI como en los sujetos control, con el objetivo de hallar la causa de esta patologa y poder as, no slo establecer los protocolos para el diagnstico y tratamiento de esta enfermedad, sino confirmar la deficiencia de glucgeno intracitoplasmtico en los megacariocitos de los pacientes con PTI. MATERIALES Y MTODOS

Sangre capilar: Extrada del pulpejo del dedo y del lbulo de la oreja.

Poblacin de estudio
Grupo de estudio: Conformado por 100 pacientes adultos con diagnstico clnico de PTI. Grupo control: Conformado por 100 sujetos adultos aparentemente sanos, a quienes se les descart clnicamente PTI.

Estudio citoqumico en mdula sea


Investigacin de glucgeno. Se utiliz el mtodo de PAS (11, 12). Fundamento: El cido perydico es un oxidante que rompe los enlaces C-C vecinos de polisacridos (glucgeno), si los dos tomos de carbono llevan grupos hidroxilos se oxidan a aldehdos, los que se combinan con el reactivo de Schiff para dar un producto de color rojo prpura. Presenta reaccin positiva de color rojo prpura para el glucgeno de los megacariocitos y tambin es positiva para las plaquetas (13,14). Recuento de plaquetas (11,15). Mtodo directo de ReesEcker. V.N.: 150 000-400 000 plaquetas por mm. Volumen plaquetario medio (VPM) (15,16). Mtodo automatizado. V.N.: 7,4-10,4 fL. Tiempo de sangra o de hemorragia (3,15). Mtodo de Duke. V.N.: 13 minutos. Tiempo de protrombina (15,16). Mtodo Ortho-Brain. V.N.: 11-13 segundos. Tiempo parcial de tromboplastina (TPT) (3,16). Macromtodo de una sola fase. V.N.: 30-45 segundos. Dosaje de fibringeno (1,15). Mtodo de Gornall Bardawill y David. V.N.: 200-400 mg/dL. RESULTADOS
Tabla 1. Glucgeno en megacariocitos de aspirado de mdula sea. Reaccin de PAS Grupo Problema 100% 0% 100% Control 100% 100% 0%

ESTUDIOS HEMATOLGICOS

Muestras biolgicas Mdula sea


Las muestras fueron obtenidas por el especialista mediante aspiracin de la mdula sea, de preferencia de la cresta iliaca posterior. A partir del aspirado, se realizaron extensiones en lminas portaobjetos para la evaluacin semicuantitativa de glucgeno en los megacariocitos por el mtodo del cido perydico de Schiff (PAS) (9,10) . Los frotis fueron secados durante 30 minutos al aire y luego fijados antes de la reaccin citoqumica.

ESTUDIO BIOQUMICO

Muestras de sangre
Sangre venosa: Extrada de la vena cubital media de la flexura del codo y recibida en tubo de ensayo sin anticoagulante y frasco conteniendo el anticoagulante de Wintrobe.

Glucgeno disminudo o negativo Glucgeno positivo


Chi cuadrado: 201,45 p=0,000<0,05

Total

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Ciencia e Investigacin 2009; 12(2): 60-63 Tabla 2. Investigacin semicuantitativa de glucgeno. Grupo Problema Reaccin de PAS + Nmero de casos 100 58 42 Porcentaje 58% 42% Reaccin de PAS ++++ +++ ++ Control Nmero de casos 66 30 4 Porcentaje 66% 30% 4%

Evaluacin de glucgeno megacarioctico para diagnstico de PTI


Tabla 3. Porcentaje de parmetros hematolgicos y bioqumicos en los grupos problema y control. Grupo Recuento de plaquetas Tiempo de sangra Problema Disminuido Normal Aumentado Disminuido Normal Aumentado Disminuido Normal Aumentado Disminuido Normal Aumentado Disminuido Normal Aumentado 0% 0% 0% 2% 6% 8% 2% 6% 4% 6% 0% 100% Control 92% 100% 94% 100% 96% 100% 0% 4% 0% 0% 0% 4% 0% 0% 2% 2% 0% 6%

Tabla 4. Correlacin del recuento de plaquetas y volumen paquetario medio en el grupo problema. Recuento de Plaquetas Correlacin Pearson p Nmero de casos Volumen plaquetario medio 0,437 0,000 100

100%

Chi cuadrado 177,35 p=0,000<0,05

100

100%

Chi cuadrado 96,07 p=0,000<0,05

Tiempo de protrombina

98% 86% 92% 90% 12% 88%

Chi cuadrado 1,84 p=0,39>0,05

Tiempo parcial de tromboplastina


Chi cuadrado 8,33 p=0,01<0,05

Correlacin positiva y significativa (0,437 P<0,05)

Tabla 5. Comparacin de promedio en parmetros hematolgicos y bioqumicos en los grupos proble ontroles (n=100). Problema Control Control Media+ 17,30 12,20 11,82 40,88 5,70 Desviacin Mnimo estndar 4,69 1,79 10,00 10,00 10,00 4,00 3,00 30,00 9,00

Fibringeno

T. de sangra* T. de protrombina*

Mximo

Chi cuadrado 4,59 p=0,10>0,05

cia de glucgeno en forma de pequeas manchas intracitoplasmticas en las plaquetas, que T. parcial de fueron confirmadas por Jamra y Lorenzi (19) en tromboplastina* Control 35,50 4,05 30,00 45,00 un estudio adicional de glucgeno megacarioProblema 37800,00 9507,04 20000,00 57000,00 ctico. Desde entonces no se han reportado esRecuento de plaquetas* tudios en relacin a este compuesto intracitoControl 317160,00 95431,05 180000,00 450000,00 plasmtico a nivel de los megacariocitos y las Problema 291,60 44,92 190,00 490,00 plaquetas. Fibringeno* Control 365,70 79,43 250,00 500,00 En la presente investigacin se ha demostrado que, en los megacariocitos de la mdula Problema 12,51 1,83 7,90 16,40 Volumen plaquetario sea las concentraciones de glucgeno estn medio* Control 9,42 0,69 7,80 10,30 disminuidas (+) en un 58% o ausentes (-) en un * p<0,05 diferencias significativas + t Student 42% (tablas 1 y 2), lo cual est estrechamente relacionado con una disminucin considerable de plaquetas (tabla 3); esto nos sugiere relacionar la deficiencia de glucgeno como una de las DISCUSIN posibles causas de esta enfermedad, constituyndose En 1953, Storti y col.(17) demostraron la presencia como una prueba de gran valor, no slo para el diagde granulaciones de glucgeno en la periferie de los nstico sino tambin para el tratamiento de la PTI por megacariocitos en muestras de mdula sea. Daniel existir una relacin directa entre la concentracin del (18) en estudios realizados en extensiones coloreadas de glucgeno y la actividad del megacariocito. mdula sea de pacientes con PTI, observ la presen-

Problema Problema

1,01 0,89 6,97

14,00 14,00 50,00

Disminuido Volumen plaquetario medio Normal


Chi cuadrado 157,14 p=0,000<0,05

Aumentado

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El aporte de la citoqumica ha permitido el hallazgo de una serie de compuestos bioqumicos en los elementos formes de la sangre, as como explicar la etiologa de la PTI mediante el uso de la prueba de PAS (3) . En personas sanas existe una relacin entre la concentracin del glucgeno y la actividad del megacariocito, y las plaquetas presentan glucgeno positivo (11). Con respecto a las otras pruebas hematolgicas y bioqumicas se encontr que, el tiempo de sangra estaba prolongado en el 98% de los casos (tabla 3) debido a su estrecha relacin con las plaquetas que ayudan al taponamiento de la salida de sangre. El tiempo de protrombina y el tiempo parcial de tromboplastina (tabla 3) estn dentro de los niveles normales, ya que en la formacin de fibrina, los factores de coagulacin no interfieren en la actividad de las plaquetas (1). Las concentraciones de fibringeno (tabla 3) son normales en el 90% de los casos de PTI, y esto es explicable debido a que el fibringeno plasmtico no est influenciado por los factores que promueven la destruccin de las plaquetas. Es importante destacar que, el volumen plaquetario (tablas 3 y 4) se encontr incrementado en el 88% de los casos con PTI; esto se explica debido a una respuesta de los mecanismos homeostticos del organismo a fin de compensar la disminucin acelerada de plaquetas, permitiendo la salida de aquellas en fase de maduracin y anormalmente grandes. Al comparar los parmetros de los casos con PTI versus controles, se encontr diferencias significativas (p<0.05) en diferentes variables. Los tiempos de: sangra, protrombina y parcial de tromboplastina son ligeramente mayores; el nmero de plaquetas y valores de fibringeno son ligeramente menores y el volumen plaquetario medio es mayor (tabla 5). Por los resultados obtenidos en el presente estudio pensamos que muy pronto dejara de utilizarse el adjetivo idioptico de la PTI, toda vez que una de sus causas es la deficiencia de glucgeno en los megacariocitos. REFERENCIA BIBLIOGRFICAS
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Manuscrito recibido el: 12/12/2009 Aceptado para su publicacin el: 16/02/2010 Correspondencia: Nombre: Juan M. Parreo Tipian Direccin: Jr. Tacna 233 Chorrillos e-mail: jupartip21@hotmail.com

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EXTRACCIN DE ANTOCIANINAS DE LAS CORONTAS DE Zea mays L. MAz MORADO


Arilm Gorriti G , Fredy Quispe J2, Jorge L. Arroyo A3, Augusta Crdova R1, Bertha Jurado T1, Ilario Santiago A1 y Evelyng Taype E1
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Extraction of anthocyanins from purple corn cobs of Zea mays L.

Facultad de Farmacia y Bioqumica. Universidad Nacional Mayor de San Marcos. 2Unidad de I-D+I. Empresa AGRONEGOCIOS PERUAGRO S.R.L. 3Facultad de Medicina UNMSM.

En el presente trabajo se investigaron las condiciones ptimas de extraccin de antocianinas de las corontas del maz morado mediante el empleo de un diseo completo al azar con arreglo factorial 2A3B4C4D. Los factores estudiados fueron pH, solvente, tiempo y temperatura. Los resultados mostraron antocianinas entre 8,404 y 47,984 mg/g de coronta, determinados segn el mtodo de pH diferencial. Se presenta el anlisis de los cuatro factores. Palabras clave: Zea mays, maz morado, antocianinas, anlisis factorial, coronta. At the present investigation the good conditions for the extraction of anthocyanins from purple corn cobs were investigated, by means of the employment of a complete design at random with factorial arrangement 2A3B4C4D. The factors studied were pH, solvent, time and temperature. The results showed anthocyanins between 8,404 and 47,984 mg/g of cob according to the method of differential pH. Analysis of four factors were presented. Keywords: Zea mays, purple corn, anthocyanins, factorial analysis, cob.

RESUMEN

SUMMARY

INTRODUCCIN os colorantes naturales presentan demanda considerable en la industria alimentaria, cosmtica y farmacutica para reemplazar a los colorantes sintticos, debido a su naturaleza qumica, inocuidad y funcionalidad. Entre estos colorantes naturales se encuentran las antocianinas que se distribuyen ampliamente en el reino vegetal y estn presentes en races, tallos, hojas, flores y frutos de las plantas superiores (1,2,3,8). El maz morado es una variedad pigmentada del Zea mays L., cuyos granos y coronta presentan color morado. Investigaciones recientes han revelado la presencia de compuestos tales como: un dmero de cianidina, derivados mono y di-glicosidados de cianidina, pelargonidina, peonidina y otros fenlicos (1,2,3). Las caractersticas estructurales de las antocianinas, su relativa estabilidad en medio acuoso segn el pH, con la presencia de estructuras tales como el catin flavilium, una base quinoidal, una pseudo base carbinol y una chalcona (4,5,6), determinan una mayor estabilidad frente a cambios de pH, temperatura y exposicin a la luz, debido a procesos de copigmentacin y asociacin intermolecular e intramolecular que se desarrollan en el medio (1,7), convirtiendo a estos compuestos en fuentes potenciales de colorantes natu-

rales (1,8,9), sustancias activas de alimentos funcionales, nutracuticos y medicamentos (10,11). En este trabajo se investigaron los factores pH, solvente, temperatura y tiempo relacionados a la extraccin de antocianinas, siendo el objetivo la identificacin de las condiciones ptimas para la extraccin de antocianinas de las corontas de maz morado. MATERIALES Y MTODOS Las corontas de maz morado del cultivar testigo Joya (TJ), utilizados en la investigacin, se obtuvieron de mazorcas recolectadas en un campo experimental del distrito de la Joya de la Regin de Arequipa-Per, ubicado en latitud sur 16O2527 y longitud oeste 71O4843 sobre los 1644 msnm, entre los meses de febrero y abril del 2008. Todos los reactivos y solventes utilizados fueron de grado analtico Sigma Aldrich Chemical Co. y Merck.

Preparacin del extracto y determinacin de antocianinas segn el mtodo de pH diferencial


Se pes 2,5 g de coronta de maz morado molida y tamizada a de 1 mm extrados con 200 mL de agua destilada y solucin etanlica al 20 y 40%, pH 2 y

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Gorriti A, Quispe F, Arroyo J, Crdova A, Jurado B, Santiago I, Taype E.

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4 ajustados con HCl concentrado, durante tiempos de extraccin de 30, 60, 120 y 240 minutos, a temperaturas de 25, 60, 75 y 90 OC segn un diseo completo al azar con arreglo factorial 2A3B4C4D. Los extractos obtenidos fueron filtrados utilizando papel filtro Whatman N1 con la ayuda de un equipo de vaco. Una alcuota del extracto se diluy en una fiola de 25 mL con soluciones buffer de cloruro de potasio (pH 1) y acetato de sodio (pH 4,5). En las soluciones preparadas se determin el contenido de antocianinas segn el mtodo de pH diferencial, de acuerdo a Giusti & Wrosltad (2001) utilizando espectrofotmetro UV-VIS y su contenido se expres como cianidina-3-glucsido de acuerdo a la siguiente expresin:

Total antocianinas(mg/L)= APMFD1000/( l)


Donde: A = (A510 - A700) pH 1,0 - (A510 - A700) pH 4,5; PM (Peso molecular) = 449,2 g/mol para cianidina-3-glucsido; FD = factor de dilucin; l = longitud de paso de celda en cm; = 26900 coeficiente de extincin molar para cianidina-3-glucsido; 1000 = factor de conversin de g a mg. Todos los anlisis fueron realizados por triplicado (n = 3) (5;12). Anlisis estadstico. Todos los resultados fueron analizados en el paquete estadstico SAS V7 (SAS Institute Inc.); el anlisis factorial implementado a nivel de laboratorio para la preparacin de los extractos contempl los factores: solvente de extraccin (agua, EtOH 20%, EtOH 40%), medio de extraccin (pH 2 y 4), temperatura de extraccin (25, 60, 75 y 90 OC) y tiempo de extraccin (30, 60, 120 y 240 minutos). Los resultados fueron sometidos a un anlisis de varianza y prueba de rangos mltiples de Duncan (p 0,05) empleando el procedimiento GLM en un diseo completo al azar con arreglo factorial en el programa SAS. La hiptesis planteada en los experimentos fue que todos los tratamientos a la muestra (solvente de extraccin, medio de extraccin, temperatura de extraccin y tiempo de extraccin) tienen el mismo efecto sobre la concentracin de antocianinas. Los grficos interactivos en tres dimensiones fueron realizados en SPSS V10.07 (13,14). RESULTADOS Y DISCUSIN

traccin a pH 2 y 4; temperatura de extraccin a 25, 60, 75 y 90 OC; y tiempo de extraccin a 30, 60, 120 y 240 min, para as determinar las mejores condiciones de extraccin de antocianinas del testigo TJ (Tabla 1). El nmero de experimentos realizados de acuerdo a la combinacin de factores fue de 96, que en triplicado hacen un total de 288 determinaciones. Al evaluarse los valores promedio segn el anlisis de varianza (ANOVA) se observa que existen diferencias altamente significativas, p < 0,0001 en el modelo experimental planteado (Tabla 2). El ANOVA de los factores que participan en el modelo experimental, as como las interacciones derivadas de los factores se muestran en la Tabla 3. De acuerdo a la tabla presentada, el ANOVA para las fuentes de variabilidad: solv. (solvente de extraccin), pH (medio de extraccin), temp (temperatura de extraccin), tiempo (tiempo de extraccin), interaccin solv.pH, interaccin pHtemp, interaccin solv.temp e interaccin solv.pHtemp, indican diferencias altamente significativas para p<0,0001. Las interacciones solv.tiempo y temptiempo muestran diferencias significativas para p<0,01, y la interaccin de 4 factores solv.pHtemptiempo muestra diferencias significativas, p<0,05. Las interacciones pHtiempo; solv.pHtiempo; pHtemptiempo, y solv.temptiempo no presentan diferencias significativas.

Anlisis de un factor
Al analizar la significancia de los factores individuales segn la prueba de rangos mltiples de Duncan para p<0,05 y conocer las mejores condiciones de extraccin de antocianinas, para el factor solvente de extraccin las mejores condiciones se logran con EtOH al 20% (Figura 1a); y para el factor medio de extraccin las mejores condiciones se obtienen a pH 2 (Figura 1(b)). Yang et al.(16) en una investigacin sobre extraccin de antocianinas de un cultivar de China en un anlisis factorial utilizando los cidos ctrico y actico al 0,25; 0,50 y 1% (v/v) en medio etanlico y metanlico al 80, 90 y 100% (v/v) encontr antocianinas entre 0,78 y 5,90 mg/g coronta, inferiores a lo hallado en la presente investigacin. El anlisis del factor temperatura de extraccin indica que las mejores condiciones se dan a 90 OC. La prueba de rangos mltiples de Duncan para p<0,05 ordena al factor de la siguiente manera: 90 OC > 75 OC > 60 OC > 25 OC, el valor de R 2= 0,9997 indica una relacin altamente significativa entre la temperatura y

Extraccin de antocianinas del maz morado


Se expresa como mg de antocianina/g de coronta, de acuerdo al diseo completo al azar con arreglo factorial que evalu los factores: solvente de extraccin en los niveles: agua, EtOH al 20 y 40%; medio de ex-

65

Ciencia e Investigacin 2009; 12(2): 64-74 Tabla 1. Extraccin de antocianinas en los diferentes experimentos.
No. 1 2 3 4 5 6 7 8 10 11 12 13 14 15 16 17 18 9 Solv. A A A A A A A A A A A A A A A A A A pH 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 T t A (C) 25 25 25 25 60 60 60 60 75 75 75 75 90 90 90 90 25 25 25 25 60 60 60 60 75 75 75 75 90 90 90 90 (min) 30 60 (mg/g)
20,373 1,325 22,655 0,919 23,545 1,874 23,666 2,557 17,556 1,272 23,931 2,285 27,409 1,420 30,041 2,051 30,879 0,946 31,007 1,427 32,769 2,744 33,008 3,407 32,094 2,101 33,180 2,717 33,398 0,728 33,509 3,637 10,131 1,112 17,423 0,461 14,743 1,383 15,467 0,461 19,367 0,726 22,655 0,420 26,974 0,482 28,351 0,657 24,547 1,261 24,658 3,103 30,983 1,863 31,779 1,268 20,150 1,061 21,041 1,016 21,396 1,005 23,424 0,548

Extraccin de antocianinas de corontas de Zea mays L.

No. 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64

Solv. B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B B

pH 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4

T (C) 25 25 25 25 60 60 60 60 75 75 75 75 90 90 90 90 25 25

t (min) 30 60

A (mg/g)
11,567 1,272 15,322 0,563 15,721 0,717 21,999 0,839 21,130 2,039 29,437 3,329 34,629 2,289 34,734 3,793 25,939 1,543 32,649 0,986 35,233 0,733 37,127 10,226 26,177 3,493 32,841 4,605 33,286 2,705 34,010 10,421 11,773 0,973 14,417 0,409 14,472 2,179 15,817 1,862 20,067 2,254 22,989 0,704 25,694 1,961 31,562 1,056 27,943 5,909 30,017 1,963 30,958 0,365 31,031 3,527 27,361 2,261 36,561 3,328 47,138 5,154 47,984 5,445

No. 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96

Solv. C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C

pH 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4

T (C) 25 25 25 25 60 60 60 60 75 75 75 75 90 90 90 90 25 25 25 25 60 60 60 60 75 75 75 75 90 90 90 90

t (min) 30 60

A (mg/g)
10,686 1,281 10,687 1,882 11,689 3,199 12,524 4,234 18,787 0,923 21,323 1,340 28,930 3,287 29,501 4,683 21,371 1,138 29,341 4,373 31,478 1,076 32,228 1,653 28,109 3,256 28,388 3,777 34,901 9,948 35,179 10,241 9,321 0,839 8,404 0,204 10,505 0,307 15,697 6,232 14,948 0,988 18,232 2,115 22,627 0,326 28,326 0,878 18,401 2,105 20,874 1,645 22,941 1,492 30,893 1,095 41,560 2,218 44,335 1,299 45,255 0,110 46,534 1,769

120 240 30 60

120 240 30 60

120 240 30 60

120 240 30 60

120 240 30 60

120 240 30 60

120 240 30 60

120 240 30 60

120 240 30 60

120 240 30 60

120 240 30 60

120 240 30 60

19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32

A A A A A A A A A A A A A A

120 240 30 60

25 25 60 60 60 60 75 75 75 75 90 90 90 90

120 240 30 60

120 240 30 60

120 240 30 60

120 240 30 60

120 240 30 60

120 240 30 60

120 240 30 60

120 240 30 60

120 240

120 240

120 240

Solv. A= agua, Solv. B= EtOH 20%, Solv. C= EtOH 40%, T= temperatura, t= tiempo, A= antocianina (mg/g muestra), valores promedio de 3 repeticiones desviacin estndar.

66

Gorriti A, Quispe F, Arroyo J, Crdova A, Jurado B, Santiago I, Taype E. Tabla 2. ANOVA para la extraccin de antocianinas en el modelo planteado. Fuente de variabilidad Modelo Error Total GL 95 178 216,717,039 18,343,670 SC

Ciencia e Investigacin 2009; 12(2): 64-74

R2 = 0,9219, CV = 12,3392, GL = grados de libertad, SC = suma de cuadrados, CM = cuadrado medio, F = valor de F,

Solv. pH

Tabla 3. ANOVA de la extraccin de antocianinas en los factores e interacciones del modelo experimental. Fuente de variabilidad GL 2 1 3 3 6 9 6 6 9 3 6 3 2 SC Tipo III 4,278,767 2,266,746 6,031,690 1,812,433 2,742,699 475,553 948,235 2,993,452 3,619,146 283,624 581,862 2,139,383 2,266,746 8,358,680 3,015,845 1,939,540 302,072 304,744 105,359 166,303 201,064 79,259 94,541 CM 20,76 22,00 81,11 29,26 18,82 2,93 2,96 0,77 1,02 1,61 1,95 0,92 F

273

235,060,709

2,281,232 103,054

CM

22,14

< 0,0001
Pr= probabilidad

Pr > F

Temp

Tiempo

Solv. pH

121,552,093 25,076,040

40,517,364

393,17

< 0,0001 < 0,0001 < 0,0001 < 0,0001 < 0,0001 < 0,4337 < 0,0001 < 0,0094 < 0,0001 < 0,0027 < 0,5952 < 0,0001 < 0,4239 < 0,0607 < 0,0147

Pr > F

pH tiempo pH temp Solv. temp

Solv. tiempo

Temp tiempo

Solv. pH tiempo Solv. pH temp

22,040,112 16,120,438

3,673,352 2,686,739

35,64 26,07

pH temp tiempo

Solv. temp tiempo

GL= grados de libertad, SC= suma de cuadrados, CM= cuadrado medio, F= valor de F, Pr= probabilidad, Solv.= solvente, temp= temperatura

Solv. pH temp tiempo

18 18

(a)
Solvente de extraccin pH de solucin

(b)

EtOH 40%

24.603 11.034 b

25,230 10,397 b

EtOH 20%

28.082 9.409 a
2

Agua

25.362 6.318 b
0 10 20 30 40 0 10 20

26,780 7,646 a

30

40

Antocianina (mg/g muestra)

Figura 1. Extraccin de antocianinas segn el factor solvente y factor pH.

Antocianina (mg/g muestra)

67

Ciencia e Investigacin 2009; 12(2): 64-74

Extraccin de antocianinas de corontas de Zea mays L.

(a)
40 40

(b)

Antocianina (mg/g muestra)

20

y=

0 ,28

5x

,1 +8

53

29,006 4,751 b

Antocianina (mg/g muestra)

30

0 2=

,99

97

33,508 8,419 a

30

9x y = 0,033

+ 22,187

158 R2 = 0,8
29,507 8,876 a

25,036 5,459 c

20

21,568 7,926 d

25,033 8,482 c

27,905 9,589 b

10

15,183 4,612 d

10

0 0 30 60 90 Temperatura de extraccin (C)

Figura 2. Extraccin de antocianinas segn el factor temperatura y factor tiempo.

60

120

180

240

Tiempo de extraccin (min)

Solvente de extraccin pH 4: 25,185 EtOH 40% pH 2: 24,022

purified purple corn colour agent) que recomienda mezclas hidroalcohlicas y pHs cidos, utilizados en la presente investigacin (15).

Anlisis de dos factores

La Tabla 3 muestra que la interaccin de los 2 factores solv.pH, presenEtOH 20% ta diferencias altamente significativas, pH 2:28,138 p<0,0001. De acuerdo a la Figura 3, las mejores condiciones de extraccin ocurren en EtOH al 20% y agua ambos a pH pH 4: 22,481 2, y en EtOH al 20% a pH 4, resultados Agua que se encuentran dentro de lo observapH 2: 28,037 do cuando se analiz el factor solvente que report a EtOH al 20% como la me0 10 20 30 jor solucin de extraccin (Figura 1). Antocianina (mg/g muestra) El anlisis de varianza para la inteFigura 3. Extraccin de antocianinas segn factores solvente y pH. raccin de los factores pHtiempo indica que no existen diferencias significativas la extraccin de antocianinas, Figura 2(a). El anlisis del factor tiempo de extraccin indica que las mejo- para la interaccin de los 2 factores; los resultados de la res condiciones de extraccin ocurren a los 240 minu- Figura 4 muestran que las mejores condiciones de extos, la prueba de Duncan para p<0,05 ordena el factor traccin se encuentran a pH 2 a los 120 y 240 minutos, y tiempo de la siguiente manera: 240 min > 120 min > a pH 4 los 240 minutos; resultados que concuerdan con 60 min > 30 min, el valor de R2= 0,8158 muestra una el anlisis de los factores individuales tiempo (Figura relacin significativa entre el factor tiempo de extrac- 2b) y pH (Figura 1b) analizados anteriormente. cin y extraccin de antocianinas, Figura 2(b). Las Para la interaccin entre los factores condiciones de extraccin en medio acuoso y mezclas pHtemperatura, segn el anlisis de varianza indihidroalcohlicas en medio cido se consideran en la ca diferencias altamente significativas, p<0,0001. Las patente No. US 7,192,456 B2 (Method of preparing a mejores condiciones de extraccin considerando los 2
pH 4:28,025

68

Gorriti A, Quispe F, Arroyo J, Crdova A, Jurado B, Santiago I, Taype E.

Ciencia e Investigacin 2009; 12(2): 64-74

factores son 90 OC a pH 2 y 4, mientras que los valores mas bajos se encuentran a 25 O 240 C a pH 2 y 4 (Figura 5); resultados que se pH 4: 29,290 encuentran de acuerdo con lo hallado para el factor pH (Figura 1) y el factor tempepH 2: 29,724 ratura (Figura 2). 120 El anlisis de varianza de la intepH 4: 26,936 raccin de los factores solventetiempo, pH 2: 28,876 muestra diferencias significativas, p<0,01. 60 De acuerdo a los resultados de la Figura 6, pH 4: 23,758 las mejores condiciones de extraccin fueron en EtOH al 20% a los 240 minutos y pH 2: 26,199 120 minutos, sin embargo las condiciones 30 de extraccin que produjeron las cantidapH 4: 20,731 des mas bajas de antocianinas se dieron a los 30 minutos para EtOH al 20%, al 40% pH 2: 22,381 y agua. 0 10 20 30 40 Cuando se evaluaron los factores Antocianina (mg/g muestra) individuales solvente y tiempo se obserFigura 4. Extraccin de antocianinas segn factores tiempo y pH. varon que en EtOH al 20% (Figura 1a) y en el tiempo de 240 minutos (Figura 2b) se extrajeron las mayores cantidades de antocianinas, confirmando lo observado para la interaccin de los 2 factores 90 pH 4: 34,968 solventetiempo, Figura 6. La Figura 7, muestra la interaccin entre los factores pH 2: 32,089 solventetemperatura, que revela un comportamiento similar en los tres medios de 75 pH 4: 27,085 extraccin: agua, EtOH al 20% y al 40%; donde las mejores condiciones de extracpH 2: 31,041 cin alcanzaron los 37,759 8,596 mg de antocianina/g muestra en EtOH al 40% y 60 pH 4: 23,581 35,670 8,900 mg de antocianina/g muespH 2: 26,451 tra en EtOH al 20%, ambos a 90 OC. El rendimiento ms bajo se encontr en EtOH al 25 pH 4: 13,165 40% a los 25 OC, resultados que se encuentran de acuerdo con lo observado para el pH 2: 16,956 factor temperatura donde la extraccin de antocianinas depende de la temperatu0 10 20 30 40 ra (Figura 2a), y el factor solvente (Figura Antocianina (mg/g muestra) 1a). Figura 5. Extraccin de antocianinas segn factores pH y temperatura. La tabla 3 para los factores temperaturatiempo, muestra diferencias significativas, p<0,01, segn el ANOVA. Los resultados se encontraron resultados parecidos entre los 120 y 240 promedio en la Figura 8, muestran que a 25 OC la mejor minutos, siendo este ltimo el mejor (36,773 10,231). El extraccin de antocianinas se consigue a los 240 minu- comportamiento observado entre la interaccin de los tos; mientras que entre los 60 y 120 minutos no existen dos factores temperaturatiempo es similar al reportado diferencias sustanciales. A las temperaturas de 60 y 75 para el factor temperatura y el factor tiempo (Figura O C las mejores condiciones de extraccin de antociani- 2a y 2b). nas se consiguen a los 240 minutos, mientras que a 90 OC
Temperatura de extraccin (C)

Tiempo de extraccin (min)

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Ciencia e Investigacin 2009; 12(2): 64-74

Extraccin de antocianinas de corontas de Zea mays L.

Solvente de extraccin EtOH 40%

240 min: 28,714 120 min: 26,500 60 min: 22,364 30 min: 20,821 240 min: 31,783

EtOH 20%

120 min: 30,247 60 min: 27,862 30 min: 22,001 240 min: 27,925

Agua

120 min: 26,909 60 min: 24,880 30 min: 21,887

Solvente de extraccin

Figura 6. Extraccin de antocianinas segn factores solvente y tiempo.


Antocianina (mg/g muestra)
75C: 25,404 60C: 22,835 25C: 11,378

10

20

30

40

90C: 37,759 EtOH 40%

90C: 35,670 EtOH 20% 25C: 15,302 90C: 27,274 Agua 75C: 29,954 60C: 24,536 25C: 18,875 75C: 31,362 60C: 27,855

Figura 7. Extraccin de antocianinas segn factores solvente y temperatura.


Antocianina (mg/g muestra)
90C: 36,773 240 25C: 17,650 90C: 35,896 75C: 32,704 60C: 30,419

10

20

30

40

Tiempo de extraccin (min)

120 25C: 15,404

75C: 30,683 60C: 27,711

90C: 32,042 60 25C: 15,083 90C: 29,242 30 25C: 12,443 75C: 24,847 60C: 18,559 75C: 28,091 60C: 23,095

Figura 8. Extraccin de antocianinas segn factores tiempo y temperatura.


Antocianina (mg/g muestra)

10

20

30

40

70

Gorriti A, Quispe F, Arroyo J, Crdova A, Jurado B, Santiago I, Taype E.

Ciencia e Investigacin 2009; 12(2): 64-74

pH 2
Antocianina (mg/g muestra) 40 . 0
31 . 9 33 . 0

pH 4
39 .

31 . 32 . 6

28 .

44.

30 .

31
28 . .6 24 .

0
24 , 7 30 .

21 .

30 . 0
25 . 5

20 .

22 .

24 . 6 16 .

23 . 3
14 .

10 .

0 Ag u a


a ve
14 . 3

21 .

Ag u

So l

Figura 9. Extraccin de antocianinas segn los 3 factores solvente, temperatura y pH.

EtO 90 n H2 ve 7 5 cci 11 . 5 0% n te a 6 0 extr de EtO ex t e H4 rac ad 0% ci 2 5 atur n er mp Te

So l

n te

EtO 90 n H2 1 7 5 cci 0% 1.3 a 6 0 extr de EtO ex t e H4 rac ad 0% ci 2 5 atur n er mp Te

pH 2

pH 4

Antocianina (mg/g muestra)

32 .

0
29 .

30 .


31 . 0

32 .

32 .

25 . 6 29 . 6 27 . 0

31 .

28 .

0
25 .

27 .

7 28 . 7

28 .

0. 3

24 .


26 . 3

26 .

24 .

24 .

0
21 . 8


23 .

26 . 7
0

20 .

Ag u a

21 .

20 .
2

0
18 . 5

22 . 4 20.6
120 r 60 ex t 30 de o mp T ie 240 in) (m i n a cc

Ag u

So l

ven

Figura 10. Extraccin de antocianinas segn los factores solvente, tiempo y pH.
40 . Antocianina (mg/g muestra) 0

EtO H2 0% te EtO de H4 ex t rac 0% ci n

So l

ven

EtO H2 0% te EtO de H4 ex t rac 0% ci n

22 . 3 21.
1

120 ci rac 60 ex t 30 de o mp T ie

240 ) mi n n(

pH 2

pH 4

28 .

31 . 8

30 .

26 .

31 .

3
3.4

33 .

32 . 9 34 .

29 . 7 34 . 4 31
.4 17 .

37 .

9 39 . 3

25 . 2

4 .9

2 23 .

2
20 .
19 .

30 .


25 .

28 .

1 29 .

31 .

0
14 . 6

21 .

16 .

10 .

0 30 60 Tie

17 .

10 .

13 . 2

19.
12 0

4 13 .

30

Figura 11. Extraccin de antocianinas segn los factores temperatura, tiempo y pH.

C) 9 0 n ( mp 7 5 ci od 0 ee ac 6 xtr xtr a cc ee 24 2 5 i n 0 ad (m ur in) at er mp Te

60 Tie mp o 12 de 0 a cc i n

15.7
ext r

60
(m in) 0 25 ra tu ra pe em T 24

C) ( 90 n ci ac tr ex de

75

71

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Agua
47 . 2

EtOH 20% EtOH 40%

40 .

0
34 . 7


0 34 . 6 41 .

3
25 . 4.8

33 . 1 34 . 1

40 .

40 .

30 .

27 .

27 .

0 3
3.1 .2

31 . 9

31 .

26 . 1


19 . 9

31 . 28 .

20 .

27 . 27 . 1 4 26 . 1 27 .2 23 . 3 9.2 2 20 . 7

32 . 9 28 . 5 2
15 . 0

26 . 26 . 8 9 26 .
16 .

2 19 . 9
9.9 8

5.8

Antocianina (mg/g muestra)

Antocianina (mg/g muestra)

72

0
20 . 4 14 .

2
9

18 . 5
9 18 .

0.6

5 1
11 . 6

0.0

.3

10 .

30 24

9. 8

11 .

24

14 .

T ie m p

60 12 0 o de e x tr a c c i n ( C)

30 60 12 90 0 T ie m p 75 o de e 60 ( C ) x tr a c c 24 c c i n 5 a i n ( 0 2 e e x tr C) d tu r a era Te m p

Extraccin de antocianinas de corontas de Zea mays L.

Figura 12. Antocianinas segn los factores temperatura, tiempo y solvente.

30 60 90 12 75 0 60 ( C ) T ie m p o d e ex c c i n 5 tr a tr a c c i 0 2 d e ex n ( C ) tu r a era Te m p

90 75 C) 60 i n ( 25 tr a c c 0 ex ra de e r a tu Te m p

Gorriti A, Quispe F, Arroyo J, Crdova A, Jurado B, Santiago I, Taype E.

Ciencia e Investigacin 2009; 12(2): 64-74

Anlisis de tres factores


Entre las consideraciones del modelo experimental planteado en la investigacin, que consta de 4 factores con sus niveles correspondientes, se procedi a evaluar la interaccin entre 3 factores, dentro de los que se encuentran: solv.pHtiempo, solv.pHtemp, pHtiempotemp y solv.temptiempo. La figura 9 muestra la interaccin de los factores: solvente temperatura pH, donde se observa que las mejores condiciones de extraccin de antocianinas se alcanzaron a pH 4 y 90 OC en EtOH al 20 y 40%. En el medio de extraccin a pH 2 se alcanzaron las mayores extracciones de antocianinas a las temperaturas de 60, 75 y 90 OC en EtOH al 20% y en medio acuoso. Los valores ms bajos de antocianinas se encontraron en EtOH al 40% a la temperatura de 25 OC a pH 2 y 4; resultados que concuerdan con lo observado para el factor temperatura donde la extraccin de antocianinas dependen significativamente de la temperatura (Figura 2a). El anlisis de los factores solventepHtiempo revela que las mejores extracciones de manera general se dan en EtOH al 20% para los tiempos de 30, 60, 120 y 240 minutos a pH 2 y 4, con excepcin del promedio observado a pH 2 para los 30 minutos (Figura 10). Cuando se analiz el factor solvente (Figura 1a) la conclusin fue similar para la mezcla EtOH al 20%, otra coincidencia del presente anlisis es con el factor temperatura (Figura 2a) donde la extraccin de antocianinas depende de la temperatura y que en la Figura 10 se muestra para la interaccin de los 3 factores. En ambos pH se observ que la extraccin de antocianinas decae al utilizar EtOH al 40%. La interaccin de los 3 factores tiempo temperatura pH, que se describen en la Figura 11, revela que la extraccin de antocianinas se incrementa en general con el aumento de la temperatura y el tiempo de extraccin. Al comparar los valores encontrados segn el pH se observa que a 25, 60 y 75OC a un pH 2 se extraen mayores cantidades de antocianinas a los 30, 60, 120 y 240 minutos, mientras que a 90 OC a pH 4 en los tiempos de 30, 60, 120 y 240 minutos se observaron las mayores extracciones, resultados que confirman el anlisis de los factores tiempo y temperatura reportados en la Figura 2a y 2b, y los que se discuten en las Figuras 4-10. El efecto de los factores temperatura tiempo solvente sobre la extraccin de antocianinas, Figura 12, muestra que se incrementan a medida que aumenta la temperatura y el tiempo de extraccin en medio acuoso, EtOH al 20% y al 40%, al evaluar el medio de

extraccin ms favorable segn la interaccin de los 3 factores se observa que a 25 OC el medio acuoso favorece la extraccin de antocianinas, a 60, 75 y 90 OC. El EtOH al 20% presenta los valores ms altos de extraccin de antocianinas a los 30, 60, 120 y 240 minutos de manera general, con excepcin de los 30 minutos a 90 OC; estos resultados se encuentran de acuerdo al anlisis de un 1 factor para tiempo, temperatura y solvente de las Figuras 1-11.

Anlisis de cuatro factores


El anlisis de varianza para la interaccin de los factores: solventepHtemperaturatiempo, de acuerdo a la Tabla 3, indica diferencias significativas, p<0,05. Al observar los datos se concluye que, las mejores condiciones de extraccin de antocianinas (mg/g muestra) considerando los 4 factores se consiguen a 90 O C para EtOH al 20% a pH 4 y en los tiempos de 120 y 240 minutos, y EtOH al 40% a pH 4, a los 30, 60, 120 y 240 minutos; mientras que las condiciones experimentales en las que se extrajeron las menores cantidades fueron EtOH al 40% a pH 4, temperatura de 25 OC y a los 30 y 60 minutos, EtOH al 40% a pH 2, a 25 OC en 30 y 60 minutos, y en medio acuoso a pH 4, 25 OC y 30 minutos (Tabla 1). Yang et al. (16) en un trabajo relacionado con la extraccin ptima de antocianinas de corontas del maz morado de un cultivar de la China en mezclas etanlicas y metanlicas al 80, 90 y 100% (v/v) acondicionadas convenientemente en medio cido con los cidos actico y ctrico al 0,25, 0,5 y 1% (v/v) encontraron valores cercanos a 6 mg/g muestra (5,90 mg de antocianina/g muestra) en un diseo factorial 22x33, siendo estos inferiores a los encontrados en la presente investigacin (16); ese mismo ao Yang et al. (12) en una investigacin relacionada con la cintica de degradacin trmica de antocianinas del maz morado en medio acuoso report el valor de 0,680 mg de antocianina/g muestra, siendo inferior a los encontrados en medio acuoso en la presente investigacin (12). Escribano-Bailn et al. (1), en una revisin de antocianinas en cereales menciona contenidos de 1642 mg/100 g en base hmeda para el maz morado y 1779 mg/100 g en base seca (1), cercanos a los encontrados en la investigacin. Una investigacin reciente de Pedreschi y Cisneros-Zevallos (17) sobre antocianinas en un extracto comercial de antocianinas del maz morado proveniente de Per determinaron contenidos de antocianina/g de la fraccin acuosa (FA) segn HPLC-DAD en los niveles de 15,43 mg de cianidina 3-glucsido/g de FA; 2,33 mg de

73

Ciencia e Investigacin 2009; 12(2): 64-74

Extraccin de antocianinas de corontas de Zea mays L.

pelargonidina 3-glucsido/g de FA; 4,44 mg de peonidina 3-glucsido/g de FA; 10,37 mg de cianidina acilada 3-glucsido/g de FA; 2,83 mg de pelargonidina acilada 3-glucsido/g de FA y 4,85 mg de peonidina acilada 3-glucsido/g de FA, que hacen un total de 40,25 mg de antocianinas/g de FA, valores en algunos casos superiores a los encontrados en la investigacin, pero similares a los encontrados en EtOH al 40% y que se justifican por la naturaleza de la muestra investigada y adems porque la determinacin de antocianinas por el mtodo de pH diferencial cuantifica otros flavonoides del tipo antocianina, que por el HPLC son excluidos (17). CONCLUSIN El anlisis individual de los factores y sus interacciones corroboran que la extraccin de antocianinas de las corontas del maz morado depende de la temperatura y el tiempo de extraccin, siendo favorecidas por el medio etanlico al 20% y pH entre 2 y 4, alcanzando valores de 46,534 mg de antocianina/g muestra. AGRADECIMIENTOS Los autores expresamos nuestro agradecimiento al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa del Per CONCYTEC, por el financiamiento a la presente investigacin del Proyecto No. 317-2007-CONCYTEC. BIBLIOGRAFA
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Manuscrito recibido el: 30/11/2009 Aceptado para su publicacin el: 23/02/2010

4. 5.

Correspondencia: Nombre: Arilm Gorriti Gutirrez Direccin: Block N 47, dpto 417, Residencial San Felipe - Lima 11. e-mail: arilmigorritig@gmail.com

6. 7.

74

Ciencia e Investigacin 2009; 12(2): 75-78 Facultad de Farmacia y Bioqumica UNMSM 2009

ISSN 1561-0861

NIVELES DE CARNITINA EN PACIENTES QUE RECIBEN NUTRICIN PARENTERAL TOTAL


Carnitine levels in patients receiving total parenteral nutrition
1

Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Martins

Lizbeth Cajalen F1, Roco Pucar B1, Mara Ocaa P2, Elena Benavides R1.
2

Hospital Nacional Edgardo Rebagliati

RESUMEN
El aporte de lpidos en la Nutricin Parenteral Total (NPT) viene administrndose mediante cidos grasos de cadena larga en los pacientes del Hospital Edgardo Rebagliati Martins. En el presente estudio se compararon los niveles plasmticos de carnitina de pacientes que reciben NPT basada en triacilglicridos de cadena larga (TCL) y los que reciben NPT basada en TCL/TCM (triacilglicridos de cadena media) por tiempo prolongado (7 das). Previamente se determinaron los niveles plasmticos de carnitina en personas aparentemente sanas, en pacientes con desnutricin severa y pacientes que recibieron NPT por ms de 20 das. Al final del estudio se hallaron los siguientes valores medios de carnitina plasmtica, expresadas en mol/L: personas aparentemente sanas 34,26, que se halla dentro de los valores normales; en pacientes con desnutricin severa, 68,29; pacientes con NPT por ms de 20 das 23,64, pacientes con NPT basada en TCL (7 das) 43,27; pacientes con NPT basada en TCL/TCM (7 das) 26,68; hallndose slo diferencia significativa al comparar los grupos que reciben NPT basada TCL y los que reciben NPT basada en TCL/TCM (7 das), p<0.05. Palabras clave: Carnitina, cidos grasos, nutricin parenteral total, lpidos.

SUMMARY
The contribution of lipids in the Total Parental Nutrition (TPN) is given by for long chain fatty acids (LCT) in patients Edgardo Rebagliati Martins Hospital. In the present study compared the plasma levels of carnitine in patients receiving TPN based on long chain and medium chain triacilglicridos (LCT/MCT) for prolonged time ( 7 days). Previously identified carnitine plasma levels in apparently healthy persons and patients with severe hunger and those who receive TPN for more than 20 days. At the end of the study found the following average values of plasma carnitine, expressed in umol / L: 34, 26 for apparently healthy people who are within the normal range, in patients with severe malnutrition ( 7 days) 43,27 ; TPN patients based on LCT / TCM ( 7 days) 26,68. We found only significant difference when comparing groups based on TPN receiving LCT and TPN-based TCM / TCL ( 7 days), p<0.05. Keywords: Carnitine, total parental nutrition, lipids.

INTRODUCCIN os pacientes sometidos al estrs hipermetablico y desnutricin presentan un estado metablico alterado en comparacin con sujetos normales (1). El aporte energtico viene dado por los nutrientes que nos brindan los alimentos. Los pacientes que no pueden recibir este aporte por la dieta y digestin tradicional, cubren sus requerimientos gracias al Soporte Nutricional Especial, en el que una de las principales fuentes de energa proviene de los lpidos (2). Es importante el buen aprovechamiento de este nutriente. Los cidos grasos libres deben ser transportados al interior de la mitocondria para su posterior -oxidacin

y con lo cual se lograr el aporte energtico (2). La carnitina es una molcula esencial para el transporte de cidos grasos de cadena larga al interior de la membrana mitocondrial (3). Es sintetizada a partir de lisina y metionina en el hgado y el rin (4) . La carnitina libre en plasma vara segn el sexo, la raza y principalmente el estado de salud de la persona (3) , siendo los valores plasmticos normales de 30-50 mol/L y deficiente si est por debajo de 20 mol/L (5). El aporte de lpidos en la Nutricin Parenteral Total (NPT) viene dndose principalmente por cidos grasos de cadena larga. Sin embargo, estos lpidos son asociados con infiltracin de grasa a los tejidos, bajo aclaramiento de la circulacin, hipertrigliceridemia, deterioro de la funcin inmunitaria e interferencia en

75

Ciencia e Investigacin 2009; 12(2): 75-78

Niveles de carnitina en pacientes con Nutricin Parenteral Total

el sistema retculoendotelial (6). Se considera que, las nuevas emulsiones que contienen cidos grasos de cadena mediana son una mejor fuente de energa, ya que son removidos rpidamente de la circulacin, oxidados eficientemente y su almacenamiento en tejido adiposo e hgado es limitado (6). Estos llegan a ser la fuente de energa de pacientes en estado crtico hipermetablico. Los cidos grasos de cadena mediana pueden ingresar a la mitocondria para su posterior -oxidacin, independientemente del sistema de transporte mediado por la carnitina (7). Usualmente, los pacientes quirrgicos con NPT no reciben carnitina (8) debido a que el estrs quirrgico incrementa la oxidacin de cidos grasos (9,10). Numerosos estudios plantean mejorar el aporte energtico de la NPT con la adicin de suplementos de carnitina, especialmente en aquellas cuya fuente energtica de lpidos la constituyen los cidos grasos de cadena larga. En el Per no existen datos respecto a niveles de carnitina que permitan estimar valores normales y de deficiencia para nuestra poblacin, ni sobre la importancia del uso de un determinado tipo de emulsin basada en TCL o una mixtura de TCL/TCM que nos pueda dar luces sobre la mejor fuente de energa para estos pacientes. METODOLOGA El estudio experimental se realiz entre los meses de enero y junio del ao 2007 en el Hospital Edgardo Rebagliati Martins ubicado geogrficamente en el distrito de Jess Mara, Lima Per. Se realiz previamente un estudio de campo para estimar los valores reales en nuestra poblacin, formndose tres grupos: Personas aparentemente sanas: 10 Pacientes con desnutricin severa que no reciben NPT: 04 Pacientes que reciben NPT 20 das : 06 Luego del estudio de campo se procedi con el anlisis de los grupos de la poblacin en estudio: Pacientes adultos con NPT basada en cidos grasos de cadena larga (TCL) por tiempo prolongado (7 das): 10 Pacientes adultos con NPT basada en cidos grasos de cadena larga y cadena mediana (TCL/TCM) por tiempo prolongado (7 das): 08

La toma de muestra de sangre fue realizada por el personal de enfermera de la Unidad de Soporte Nutricional Artificial (USNA). Das de toma de muestra de sangre: En el da 0 (da antes de recibir la Nutricin Parenteral Total). En el da 7 (sptimo da de administracin de la Nutricin Parenteral Total).

Determinacin de carnitina
Las concentraciones fueron determinadas en plasma mediante el mtodo enzimtico espectrofotomtrico. El ensayo se basa en la reaccin entre la L-carnitina y acetil-CoA en presencia de la enzima carnitina aciltransferasa (CAT). La coenzima A (CoA-SH) obtenida reacciona con el reactivo 5-5 di-tiobis 2-nitrobenzoato (DTNB) formando 5-tio-2-nitrobenzoato (TNB) el cual absorbe la luz a 412 m.
L-carnitina + AcCoA

Acetil L carnitina + CoA SH CoASH + DTNB CoASNB +TNB + H


+

cat

RESULTADOS Y DISCUSIN En la figura 1 se muestran los valores promedio de carnitina obtenidos en el trabajo de campo; asimismo, la tabla 1 presenta la comparacin de medias por grupos. El grupo de personas aparentemente sanas, tiene una media de 34,26 mol/L, este valor se encuentra dentro del rango de los valores normales establecidos internacionalmente (Sigma Tau Pharmaceutical) (5). Los pacientes con desnutricin severa no tenan una fuente exgena de combustible pues no reciban ningn tipo de alimentacin. Segn Steiber y Cecil (11,12) ; aproximadamente el 60 a 75 % de carnitina total proviene de alimentos que contienen carnitina, lisina y metionina, por lo que se podra esperar una disminucin en los niveles plasmticos de carnitina en este grupo de pacientes; sin embargo presentaron valores por encima de los normales (68,29 mol/L). Khan (13) reporta bajos niveles plasmticos de carnitina en pacientes con desnutricin proteico-calrica; esto contradice los resultados obtenidos, posiblemente por el nmero limitado de pacientes para este grupo (4 sujetos) y la seleccin en un nmero limitado de parmetros bioqumicos. El grupo de pacientes con NPT por ms de 20

76

Cajalen L, Paucar R, Ocaa M, Benavides E. Tabla 1. Comparacin de medias por grupos. Aparentemente sanos Desnutricin Severa NPT 20 das Grupos 10 4 6 n

Ciencia e Investigacin 2009; 12(2): 75-78

Media (mol/L) 34,26 68,29 23,64

das, tiene una media de 23,64 mol/L, este valor se encuentra por debajo del rango de los valores normales. Al respecto Bowyer et al. (4), reportan la deficiencia de carnitina en adultos que reciben NPT por ms de 20 das, lo que se confirma con nuestros resultados.

de cidos grasos de cadena media, los cuales ingresan a la mitocondria de manera independiente del sistema de transporte de carnitina, utilizando sus reservas en menor cantidad. Las varianzas son homogneas. Aplicando la prueba t de Student se halla una diferencia estadsticamente significativa, p < 0,05. Por tanto, se concluye que la diferencia de medias observada es significativa ( = 0,05)

Comparacin entre medias del estado basal y primera toma de muestra


En la figura 2 se presentan los valores promedio de carnitina basal y luego de la 1ra toma de muestra para el grupo que recibe NPT basada en TCL (n = 10). La diferencia entre las medias no es significativa (p = 0.996 ) La figura 3 presenta los valores de carnitina basal y luego de la 1ra toma de muestra para el grupo que recibe NPT basada en TCL/TCM (n = 8). La diferencia entre las medias del basal y 1ra toma de muestra no es significativa para = 0,05 (p = 0,069); pero s es significativa para = 0,1.
Carnitina mol/L

75

50

25

Sanos

Figura 1. Valores de carnitina.

NPT>20

Desnutridos

Comparacin de las medias de la primera toma de muestra entre NPT basada en TCL y NPT basada en TCL/ TCM
Luego de 7 das de NPT con los lpidos respectivos se encontraron: en el caso de pacientes con NPT basada en TCL, valores plasmticos de carnitina por encima de los hallados en los pacientes con NPT basada en TCL/TCM, 43,27 mol/L y 26,68 mol/L respectivamente; la diferencia se podra atribuir a que los lpidos de cadena larga necesitan de carnitina como lanzadera para su -oxidacin y por lo tanto sta ser transportada del rea de almacenamiento o sntesis por medio del torrente sanguneo al rea de necesidad metablica. En el caso de la mezcla se necesita de este transportador en menor cantidad porque contiene un 50%

75

Carnitina mol/L

68,31
50

25

26,68

Figura 2. Carnitina en NPT con TCL.

Basal

Toma 1

77

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Niveles de carnitina en pacientes con Nutricin Parenteral Total

9.
50

10.
Carnitina mol/L 40

43,31

43,27
11.

30

20

12.

10

13.
Figura 3. Carnitina en NPT con TCL/TCM.

Basal

Toma 1

zation. Am J Clin Nutr 1989; 49:283-289. Hill GL, Church J. Energy and protein requirements of general surgical patients requiring intravenous nutrition. Br J Surg l984; 71: 1-9. Nordenstrm J, Carpentier YA, Askanazi J et al. Metabolic utilization of intravenous fat emulsion during total parenteral nutrition. Ann Surg 1982; 196: 221-231. Steiber K, Hoppel. Carnitine: a nutritional, biosynthetic, and funtional perspective. Molecular Aspects of Medicine 2004; 25: 455473. Cecil J. Nutritional Supplements: Amino acids and their derivatives. American Journal of Pharmaceutical Education 2003; 66: 159161. Khan L and Bamji MS. Plasma carnitine levels in children with protein calorie malnutrition before and after rehabilitation. Clin Chim Acta 1977; 75:163-166.

CONCLUSIN

Se han hallado mayores niveles plasmticos de carnitina en el grupo de pacientes que reciben NPT basada en TCL que en los que reciben NPT basada en TCL/TCM. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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Manuscrito recibido el: 30/11/2009 Aceptado para su publicacin el: 23/02/2010 Correspondencia: Nombre: Elena Rafaela Benavides Rivera Direccin: Jr. Apurmac N 3672, Urb. Per Lima 31. e-mail: elenabenavidesr@gmail.com

7. 8.

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Ciencia e Investigacin 2009; 12(2): 79-82 Facultad de Farmacia y Bioqumica UNMSM 2009

ISSN 1561-0861

DETECCIN DE RESIDUOS DE ANTIBITICOS -LACTMICOS Y TETRACICLINAS EN LECHE CRUDA COMERCIALIzADA EN EL CALLAO


Detection of residues of -lactamic antibiotics and tetracyclines in raw milk marketed in Callao
1

Facultad de Ingeniera Pesquera y de Alimentos - UNAC, 2Facultad de Medicina Humana - URP, 3Facultad de Farmacia y Bioqumica - UNMSM.

Dniza M. Guerrero A1, Rodrigo Motta G2, Gerardo Gamarra B3, Elena R. Benavides R3, Mirtha Roque A3, y Mara E. Salazar S 3.

RESUMEN
Se analizaron cuarenta muestras de leche cruda comercializada en mercados del distrito del Callao, entre enero y marzo del 2009, empleando el mtodo presuntivo para antibiticos -lactmicos y tetraciclinas de IDEX Laboratories, el cual cumple con los lmites de sensibilidad de residuos de la FDA. Se encontr 40% de muestras con resultado positivo para residuos de -lactmicos en leche cruda. No se registran resultados positivos al analizar tetraciclinas. Los resultados sugieren que se deberan establecer polticas de legislacin, regulacin y capacitacin, y que la NTP 202.001.2003 debera ser revisada. Palabras clave: Leche cruda, residuos de antibiticos -lactmicos y tetraciclinas.

SUMMARY
We are analyzed forty samples of raw milk commercialized at the Callao Market between January and March 2009 using presumptive method for -lactamics and tetracycline antibiotic residues from IDEX laboratories, to comply with the limits of sensitivity of residues of the FDA. We found 40% of samples tested positive for -lactamic residues in raw milk. There were no positive outcame to analyze tetracyclines. The results suggest that we should establish policies for legislation, regulation and training and that the NTP 202.001.2003 should be reviewed. The results suggested that should be established policies for legislation, regulation and training, and the NTP 202. 00102003 should be reviewed. Keywords: Raw milk, -latamic and tetracycline antibiotic residues.

INTRODUCCIN l trmino antibitico se restringe a compuestos qumicos producidos por microorganismos que tienen la capacidad de inhibir el crecimiento o destruir bacterias u otros microorganismos, incluyendo compuestos antimicrobianos obtenidos por sntesis. Actualmente esta distincin es ms bien acadmica, ya que la palabra antibitico se emplea para incluir ambos grupos de agentes antimicrobianos (1). Los antibiticos -lactmicos inhiben la sntesis de la pared bacteriana constituida por peptidoglucanos. El sitio de accin de estos antibiticos es la muramoilpentapptido carboxipeptidasa, enzima indispensable para el entrecruzamiento de la pared celular bacteriana (2). Su consumo puede producir reacciones adversas como: erupciones maculopapulares, urticariana, fiebre, broncoespasmo, vasculitis, enfermedad del suero, dermatitis exfoliativa, sndrome de Stevens-Johnson y anafilaxia.

Las tetraciclinas tienen como punto de ataque los ribosomas bacterianos. Ejercen su efecto sobre un nmero grande de bacterias gram positivas y negativas, aerobias y anaerobias, micoplasmas, ricketsias, clamidias y espiroquetas. Frecuentemente originan resistencia. Las reacciones adversas consisten en irritaciones digestivas por administracin oral: molestia por dolor epigstrico y abdominal, nuseas, vmitos y diarreas. Tambin pueden producir en el ser humano fotosensibilidad por exposicin cutnea al sol, toxicidad heptica o renal. En nios que reciben dosis elevadas por perodos de tiempo corto o largo pueden producir manchas oscuras en los dientes. Es posible que deprima el crecimiento seo en lactantes prematuros, con efecto reversible si la exposicin fue breve (3). La leche posee inhibidores naturales, tal es el caso de las lacteninas, inmunoglobulinas, pseudoglobulinas, cidos grasos libres y leucocitos; sin embargo, la deteccin de inhibidores se efecta mediante el anlisis de residuos de antibiticos.

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Deteccin de residuos de -lactmicos y tetraciclinas en leche cruda

En el hato lechero, la infeccin que demanda mayor suministro de antibiticos es la mastitis, y debido a que los antibiticos de uso intramamario son de fcil aplicacin y generalmente baratos, no se hace la consulta respectiva al mdico veterinario, constituyndose en la principal causa de aparicin de residuos de antibiticos en la leche. Al ganadero le es muy difcil eliminar leche producida por vacas con tratamiento por mastitis, pues le representa prdida econmica, por ello incurre en la prctica inadecuada de comercializarla derivndola a la industria de leche fluida pasteurizada o esterilizada y a los mercados como leche cruda o en mezcla con leches de buena calidad, para que no sea posible detectarla y que sus deficiencias pasen desapercibidas. La presencia de residuos de antibiticos en la leche es considerada ilegal (4) y reduce la produccin de acidez y aroma durante la manufactura de la mantequilla y el yogurt (5). Adems, dificultan la maduracin de los quesos por disminuir la retencin de agua, originando textura blanda y sabor amargo. Las bacterias empleadas en la fabricacin de yogurt resultan ser muy sensibles a los antibiticos, presentan cambios morfolgicos y pueden darse situaciones en que los cultivos iniciadores sean reemplazados por microorganismos indeseables, provocando la inutilizacin del producto o que se convierta en peligroso para el consumo humano (6). Por muchos aos la prueba estndar de uso regulatorio para la determinacin de antibiticos ha sido la prueba del disco con Bacillus stearothermophilus (7). Actualmente los mtodos desarrollados se clasifican en mtodos presuntivos y de confirmacin. Los presuntivos tienen como objetivo detectar la presencia de uno o varios residuos de antibiticos en una muestra sospechosa. Se considera en este grupo los mtodos de inmunoensayo y los microbiolgicos de ensayo receptor, en el que el analito se une al receptor, siendo el modo de deteccin el colorimtrico. Los de confirmacin pueden emplear cromatografa lquida de alta performance, cromatografa lquida/espectrofotometra de masa y espectrofotometra de masa; estas metodologas son recomendadas por su elevada capacidad de cuantificacin, especificidad y sensibilidad (8). Debido a las repercusiones para la salud de la poblacin con menor poder adquisitivo y que consume habitualmente leche cruda por su menor costo, se plante la necesidad de detectar la posible presencia de residuos de antibiticos -lactmicos y tetraciclinas en leche cruda comercializada en el mercado del dis-

trito del Callao. MATERIALES Y MTODOS Cada una de las 40 muestras fueron tomadas, de acuerdo a la norma correspondiente (9), del contenedor en la que se comercializa la leche en el mercado del distrito del Callao, en envase de vidrio de un litro de capacidad, siendo inmediatamente codificada y transportada al laboratorio a una temperatura de 4 OC, una por vez y en diferentes das entre los meses de enero a marzo de 2008. A todas las muestras de leche se les hizo el anlisis de residuos de antibiticos -lactmicos y de tetraciclinas por duplicado. De acuerdo a las indicaciones de la empresa comercializadora, se homogeniza la muestra de leche y se vierte en el tubo de ensayo empleando la pipeta que incorpora el kit, aproximadamente 450 50 L de muestra, agitando la mezcla hasta disolver el botn reactivo que contiene el tubo de ensayo. Se incuba el tubo y el dispositivo del instrumento a 45 5 OC por cinco minutos (kit para -lactmicos kit para tetraciclinas). Concluida la incubacin se aade el contenido del tubo sobre el pocillo de prueba del snap, observando la trayectoria hasta el crculo de activacin y cuando ste desaparece, se presiona el activador hasta ajustarlo en el cuerpo del snap. Se considera resultado positivo cuando el rea de la muestra es ms clara que el rea control y como negativo cuando el rea de la muestra es ms oscura o de igual color que el rea control. El kit para detectar residuos de antibiticos lactmicos en leche cruda tiene el siguiente nivel de sensibilidad en ppb: bencilpenicilina G (3,0), amoxicilina (7,3 ), ampicilina (5,8 ), ceftiofur (5,4 ) y cefapirina (11,7) en forma individual o en mezcla; siendo el nivel de tolerancia de seguridad, segn la Food and Drug Administration (FDA) para amoxicilina y ampicilina 10 ppb, ceftiofur 50 ppb, cefapirina 20 ppb y de penicilina G 5 ppb. El nivel de sensibilidad que detecta el kit para residuos de tetraciclinas en forma individual o en mezcla, en ppb, es el siguiente: tetraciclinas (50), clortetraciclina (100) y oxitetraciclina (50). RESULTADOS Se detectaron residuos de antibiticos -lactmicos en 16 de las 40 muestras estudiadas, lo que equivale al 40% del total de las muestras de leche cruda, y no se detect residuos de tetraciclinas.

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Guerrero D, Motta R, Gamarra G, Benavides E, Roque M, Salazar M.

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DISCUSIN Los resultados obtenidos son comparables a los valores elevados (36,5 y 50%) reportados por otros investigadores en la deteccin de -lactmicos en leche cruda y pasteurizada (10). Los ganaderos estaran utilizando antibiticos de espectro dominante sobre bacterias gram positivas de comportamiento tiempodependiente como los -lactmicos, con extensin a bacterias gram negativas y concentracin-dependiente, si es el caso de la amoxicilina, que tambin podra estar presente en la mezcla de residuos (1), lo cual concuerda con Kang et al. (12), quienes en su investigacin hallaron que los -lactmicos eran antibiticos que mostraban la mayor frecuencia de uso para el tratamiento de mastitis. Por otro lado, se requiere proponer un adecuado programa de control a nivel de los productores, diagnosticar la magnitud y volumen del problema de los comercializadores de antibiticos de uso veterinario, de las instituciones encargadas de la regulacin y vigilancia de la calidad e inocuidad de los alimentos a nivel nacional y regional, normar el descarte de leche con residuos de antibiticos a fin de que sea transformada para uso no alimentario, considerar el pago de estmulo a los productores de leche sin antibiticos, controlar la mastitis, capacitar constantemente en el tema a los ganaderos y empresas procesadoras, acabando con la mala prctica de enviar leche con residuos de antibiticos al procesamiento a alta temperatura (6), y a los expendios de leche cruda de los mercados de abasto. El mtodo detect la presencia individual o en mezcla de residuos de ampicilina, amoxicilina, bencilpenicilina G y ceftiofur, a diferencia del mtodo de disco de Bacillus stearothermophilus modificado, que este no tiene la capacidad de distinguir ceftiofur de los otros antibiticos citados (13), siendo adems tan sensible como el mtodo por biosensor para -lactmicos (14) . El nivel de falsos positivos del kit para -lactmicos es bastante reducido, atribuyndose este error a la presencia de inhibidores naturales en la leche cruda, lo cual fue solucionado con el calentamiento de la muestra entre 90 y 100 OC por 5 minutos, tratamiento que no tiene influencia en muestras positivas. La confirmacin de los casos positivos, obtenidos en el presente trabajo de investigacin en leche cruda, podra ser desarrollada mediante el mtodo de cromatografa lquida de alta performance seguida de espectrometra de masa en tndem, empleando para la extraccin acetonitrilo seguido de una columna en fase reversa. La metodologa ha sido validada por la FDA

para -lactmicos (15) y en la confirmacin rpida de tetraciclina se ha probado con xito una metodologa semejante en muestras de carne de pollo y bovino con agua a 70 OC como solucin extrayente, seguida de cromatografa lquida/espectrometra de masa en tndem equipada con una fuente electrospray de iones (16). El hallazgo de muestras positivas nos indican que el tratamiento de infecciones en el ganado as como la aplicacin de antibiticos por diferentes causas en el establo, se estara focalizando actualmente en los -lactmicos; hecho que puede ayudar a dirigir polticas de legislacin, regulacin y capacitacin, ya que no se detect presencia de residuos de tetraciclinas en ninguna de las muestras analizadas. La existencia de residuos de antibiticos en leche cruda permite entrever que, adems de la regulacin, es necesario mantener la vigilancia constante, empleando mtodos altamente sensibles de presuncin, confirmacin y cuantificacin, con valores lmite permitidos por la FDA o la European Medicine Agency (EMEA). CONCLUSIONES Se encontr 40% de muestras con resultado positivo para residuos de -lactmicos en leche cruda. No se registr resultado positivo al analizar tetraciclinas. Los resultados hacen evidente la necesidad de revisar la norma nacional (16), por ser de vital importancia para la salud de la poblacin, especialmente del segmento que padece alergias por ser el ms vulnerable. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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2. 3. 4.

5.

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Deteccin de residuos de -lactmicos y tetraciclinas en leche cruda

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Manuscrito recibido el: 30/11/2009 Aceptado para su publicacin el: 23/02/2010

Correspondencia: Nombre: Gerardo Gamarra Ballena / Elena Benavides Rivera Direccin: Av. Antnez de Mayolo N. 1095 Urb. Mercurio Los Olivos Lima e-mail: elenabenavidesr@gmail.com

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ISSN 1561-0861

ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DEL ACEITE ESENCIAL DE Minthostachys mollis Griseb RUYAQ MUA
Antibacterial activity of essential oil of Minthostachys mollis Griseb RUYAQ MUA
1

Laboratorio de Qumica Analtica, Facultad de Farmacia y Bioqumica UNMSM. 2Maestra en Ciencia de los Alimentos, Facultad de Farmacia y Bioqumica UNMSM. 3Laboratorio de Investigacin y Desarrollo - LID, UPCH.

Mario Carhuapoma Y1, Sofa Lpez G2, Mirtha Roque A1, Billie Velapatio3, Carlos Bell C1, Delia Whu W1.

RESUMEN
El objetivo del presente trabajo fue determinar la actividad antibacteriana del aceite esencial de Minthostachys mollis ruyaq mua frente a Helicobacter pylori, Shigella dysenteriae, Salmonella typhi y Pseudomonas aeruginosa. Las hojas de M. mollis se colectaron en el distrito de Huamanguilla (3000-3200 msnm), provincia de Huanta, regin Ayacucho. El aceite esencial se obtuvo por destilacin con arrastre de vapor de agua. La actividad antibacteriana se determin por el mtodo de excavacin placa cultivo; resultando en orden de sensibilidad, para S. dysenteriae 21,41 mm; H. pylori 17,07 mm; S. typhi 14,25 mm y P. aeruginosa 11,45 mm. La concentracin mnima inhibitoria (CMI) y la concentracin mnima bactericida (CMB) para H. pylori se determin por el mtodo de dilucin en microplacas, resultando 2 g/mL. Para las dems bacterias se determin por el mtodo de dilucin, siendo para S. dysenteriae 4 g/mL, S. typhi 4 g/mL, y P. aeruginosa 9 g/mL de CMI y 10 g/mL de CMB. Los porcentajes de inhibicin comparados con ciprofloxacino, fueron: H. pylori 177,27; S. dysenteriae 126,11; S. typhi 63,44 y P. aeruginosa 42,29 y comparado con cloranfenicol: P. aeruginosa de 225,56; S. dysenteriae 171,97; S. typhi 135,95 y H. pylori 92,86. La densidad del aceite esencial es 0,9029 g/mL, ndice de refraccin 1,56689 y el porcentaje de rendimiento 2,4 v/p. Se detect presencia de fenoles, los que validan la actividad antimicrobiana del aceite esencial de M. mollis . Palabras clave: Minthostachys mollis, aceite esencial, actividad antibacteriana.

SUMMARY
The aim of this study was to determine the antibacterial activity of essential oil Minthostachys mollis ruyaq mua, against Helicobacter pylori, Shigella dysenteriae, Salmonella typhi and Pseudomonas aeruginosa. The leaves of M. mollis were collected in the district of Huamanguilla (3000-3200 m.s.n.m), Huanta province, Ayacucho region. The essential oil obtained by distillation with water vapor drag. The antibacterial activity was determined by plate cultive excavation method, resulting in order of sensitivity, for S. dysenteriae 21.41 mm; H. pylori 17,07 mm; S. typhi 14.25 mm and P. aeruginosa 11.45 mm. The minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) for H. pylori were determined by the microplate dilution method, resulting in 2 g/mL. For the other bacteria was determined by the dilution method, being for S. dysenteriae 4 g/ml, S. typhi 4 g/ mL, and P. aeruginosa 9 g/mL and MIC 10 g/ml of CMB. The percentages of inhibition compared with ciprofloxacin, were: H. pylori 177,2;, S. dysenteriae 126,11; S. typhi 63,44 and P. aeruginosa 42,29 and compared with chloramphenicol: P. aeruginosa of 225,56; S. dysenteriae 171,97; S. typhi 135,95 and H. pylori 92.86. The essential oil density is 0,9029 g/mL, refractive index 1,56689 and the percentage yield 2.4 v/p. Was showed presence of phenols, which validate the antimicrobial activity of essential oil of M. mollis. Keywords: Minthostachys mollis, essential oil, antibacterial activity.

INTRODUCCIN ctualmente en el mundo moderno la poblacin crece aceleradamente y con ella tambin las enfermedades como las infecciosas producidas por bacterias, virus, hongos, etc. A pesar que existen muchos antibacterianos para su control o tratamiento, el uso irracional de stos viene generando resistencia microbiana y otras secuelas. La biodiversidad vegetal ofrece alternativas antibacteria-

nas; algunas especies con excelentes resultados, debido a sus constituyentes qumicos. Los aceites esenciales son en su mayora sustancias terpnicas y fenilpropnicas, que se almacenan en tejidos secretores de los rganos vegetales aromticos. En recientes estudios se ha demostrado la actividad antibacteriana de diversos aceites esenciales, los cuales pueden contener ms de 150 componentes (1). El Per es conocido como el tercer pas mega-

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Actividad antibacteriana del aceite escencial de M. mollis Griseb Ruyaq mua

biodiverso del mundo, siendo catalogado por algunos cientficos como el segundo o primero, porque posee una extraordinaria riqueza biolgica, fuente natural de molculas bioactivas. La diversidad vegetal peruana llega aproximadamente a unas 50 000 especies detectadas, mientras que todo el continente europeo posee 12 000 especies. Razones nos sobran para maximizar el aprovechamiento sostenible de nuestros recursos naturales, previamente validados cientfica y tecnolgicamente con los respectivos estudios (1). En cuanto a plantas aromticas nativas estas son numerosas, una de estas es Minthostachys mollis ruyaq mua, de la que se reporta virtudes teraputicas en enfermedades de las vas respiratorias y del aparato digestivo, adems de cualidades como preservante de alimentos por su propiedad antimicrobiana, entre otras (2). Por estas consideraciones, se realiz el presente trabajo de investigacin cuyo objetivo fue determinar la actividad antibacteriana del aceite esencial de Minthostachys mollis ruyaq mua frente a Helicobacter pylori, Shigella dysenteriae, Salmonella typhi y Pseudomonas aeruginosa. MATERIALES Y MTODOS El trabajo se realiz en los laboratorios de Microbiologa y Qumica Orgnica de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos UNMSM y en el Laboratorio

de Investigacin y Desarrollo (LID) de la Universidad Peruana Cayetano Heredia. Se utilizaron bacterias Gram negativas como H. pylori, proporcionadas por el LID; Salmonella typhi, Shigella dysenteriae y Pseudomonas aeruginosa, proporcionadas por el Instituto Nacional de Salud. La especie vegetal M. mollis fue recolectada en el distrito de Huamanguilla, Provincia de Huanta, Regin Ayacucho, ubicado entre 3000 a 3200 msnm. Se us la planta fresca y la extraccin del aceite esencial se realiz mediante destilacin por arrastre con vapor de agua. El aceite obtenido se trat con SO4Na2 anhidro, para eliminar el exceso de humedad.

Ensayos

Determinacin de las caractersticas organolpticas y propiedades fsicas. Determinacin de la actividad antibacteriana, como concentracin mnima inhibitoria (MIC) y concentracin mnima bactericida (MBC). Finalmente, se realiz el tratamiento estadstico de los datos obtenidos, sometindolos al anlisis de varianza (ANOVA), pero previa transformacin x + 1, donde X son los valores originales, debido a que stos no presentaban varianzas homogneas. Con las variables que mostraron significancia estadstica se realiz la comparacin de medias mediante el Mtodo de Duncan con la finalidad de identificar las diferencias.

RESULTADOS

Tabla 1. Concentracin mnima inhibitoria y concentracin mnima bactericida del aceite escencial de Minthostachys mollis ruyaq mua. Concentracin del aceite escencial (g/mL) 2 4 9 Bacterias indicadoras Helicobacter pylori SHI 074 col. 1 CMI-CMB ---------Pseudomonas aeruginosa ------Salmonella typhi CMI-CMB ---------Shigella dysenteriae CMI-CMB ----------

CMI: Concentracin mnima inhibitoria CMB: Concentracin mnima bactericida

10

CMB

CMI

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Carhuapoma M, Lpez S, Roque M, Velapatio B, Bell C, Whu D.

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Tabla 2. Halos de inhibicin antibacteriana del aceite esencial de Minthostachys mollis ruyaq mua. Concentracin del aceite escencial (g/mL) 22.5 135.0 180.0 225.0 270.0 450.0 45.0 90.0 4.5 9.0 Bacterias indicadoras S. typhi 12.20 13.03 13.47 13.77 14.03 14.20 15.03 16.00 19.03 11.77 S. dysenteriae 13.93 15.07 16.27 18.13 20.00 22.77 24.90 32.30 37.83 12.93 H. pylori 14.00 15.07 15.77 18.00 18.00 18.33 18.83 19.90 19.50 13.27 P. aeruginosa 10.00 10.00 10.27 11.23 11.67 12.33 12.57 12.87 13.53 10.00

25.00

Halo de inhibicin (mm)

20.00
17.07 b 14.25 c 11.45 d

21.41 a

15.00

10.00

5.00

0.00

Concentracin del aceite escencial (g/mL) Ciprofloxacino Cloranfenicol Amoxicilina 5

Tabla 3. Halos de inhibicin de tres antibiticos estndares. Bacterias indicadoras 32 6 30 22 S. typhi 11 21 33 30 14

Figura 1. Prueba de Duncan de los halos de inhibicin antibacteriana del aceite esencial de Minthostachys mollis ruyaq mua.
Especies bacterianas

Pseudomonas aeruginosa

Salmonella typhi

Helicobacter pylori

Shigella dysenteriae

S. H. P. dysenteriae pylori aeruginosa ND ND ND

Tabla 4. Caractersticas organolpticas del aceite esencial de Minthostachys mollis ruyaq mua. Propiedades Sabor Olor Color Ligeramente amarillento translcido Caractersticas Intenso, a mentol y pulegona Picante, fresco persistente Lquido fluido translcido

30 10

ND: no determinado

Aspecto

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Actividad antibacteriana del aceite escencial de M. mollis Griseb Ruyaq mua

25.00
17.83 b 20.27 a

22.48 a

Halo de inhibicin (mm)

20.00
13.29 ef 13.94 de

15.28 cd

15.93 bc

16.91 bc

15.00

11.99 f

12.53 ef

10.00

5.00

0.00

4.5

22.5

45

90

135

180

225

270

450

Figura 2. Prueba de Duncan de los halos de inhibicin a diferentes concentraciones del aceite esencial de Minthostachys mollis.
Concentracin (g/mL)

180 160 Porcentaje de inhibicin 140 120 100 80 60 40 20 0


Salmonella typhi Shigella dysenteriae Helicobacter pylori Pseudomonas aeruginosa 63.44 42.29 126.11 177.27

Figura 3. Porcentaje de inhibicin de las bacterias indicadoras a la concentracin de 450 g/mL frente a ciprofloxacino.
Bacterias indicadoras

Tabla 5. Principales constantes fsicas del aceite esencial de Minthostachys mollis ruyaq mua. Densidad (20 C) Caractersticas fsicas ndice de refraccin (20 C) Porcentaje de rendimiento 0,9029 g/L 2,4% v/p 156,689

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Carhuapoma M, Lpez S, Roque M, Velapatio B, Bell C, Whu D.

Ciencia e Investigacin 2009; 12(2): 83-89

250
225.56

200 Porcentaje de inhibicin


171.97 135.95

150

100
92.86

50

DISCUSIN

Figura 4. Porcentaje de inhibicin de las bacterias indicadoras a la concentracin de 450 g/mL frente a cloranfenicol.
Bacterias indicadoras

Salmonella typhi

Shigella dysenteriae

Helicobacter pylori

Pseudomonas aeruginosa

En la tabla 1, se muestran los resultados de la CMI y CMB del aceite esencial de Minthostachys mollis ruyaq mua, frente a las cuatro bacterias probadas. Fuertes et al. (2) reportan para el aceite esencial de M. mollis un contenido de 2,14% de timol, 2,12% de acetato de timol y 0,11% de metileugenol. Estos compuestos son de tipo fenlico y posiblemente sean los principales compuestos responsables de la actividad antimicrobiana. Bergonzelli et al. (3) concluyen que, el aceite esencial de 30 especies muestran actividad anti-Helicobacter pylori, inhibiendo el crecimiento entre 0,7 a 6,3 cm de dimetro a una concentracin de 20 a 100 g/mL y a un pH 7,4; ellos atribuyen que dicha actividad se debe al carvacrol, isoeugenol, nerol, citral y sabineno. La actividad antimicrobiana del aceite esencial de M. mollis es superior a estos resultados. Asimismo, Silva et al. (4) reportan que, el aceite esencial de Dittrichia viscosa subsp. viscosa presenta actividad frente al H. pylori; dicha esencia inhibe significativamente el crecimiento a las concentraciones de 88,80 a 133,20 g/mL, resultados que validaran su uso en el tratamiento de la gastritis y, por nuestros resultados podemos afirmar que el aceite esencial de M. mollis posee actividad a 2 g/mL frente Helicobacter pylori, por lo que tambin podra emplearse en el tratamiento de la gastritis. El-Kamali et al. (5) ensayaron el aceite esencial de las inflorescencias de Cymbopogon nervatus a una

dysenteriae. Acosta et al. (7) estudiaron la actividad del aceite esencial de Thymus vulgaris en S. typhi y P. aeruginosa mediante el mtodo de excavacin placa cultivo. Para el aceite esencial puro en S. typhi dio 17 mm; diluido 1/10 present 12 mm y bajo la dilucin de 1/20 result 7 mm. Para P. aeruginosa, la esencia pura registr un halo de 20 mm, diluida 1/10 dio 12 mm y 1/20 no present inhibicin. En la figura 1, M. mollis frente a S. typhi presenta un halo de inhibicin de 14,25 mm y de 11,45 mm para P. aeruginosa; estos resultados se aproximan a los obtenidos para el aceite esencial de Thymus vulgaris. Saavedra (8) encontr para el aceite esencial de O. vulgare actividad parcial frente a P. aeruginosa, a las concentraciones de 30 a 35% (p/v). Asimismo, el aceite esencial de M. mollis muestra actividad parcial frente a esta bacteria, lo que podra deberse a que dicha bacteria muestra resistencia. Segn Fuertes (9) el aceite esencial de Ocimum micranthum tiene como componentes principales al metileugenol, cariofileno, -elemeno y otros 30 compuestos. A una concentracin de 1% v/v present actividad inhibitoria frente a Shigella sp, mostrando resistencia Salmonella typhi y Pseudomonas aeruginosa. Este resultado tambin corrobora la actividad parcial del aceite esencial de M. mollis. En la tabla 2 se muestran los valores promedio de actividad antibacteriana de las 10 concentraciones de aceite esencial probadas sobre cuatro bacterias; donde, en trminos generales se observa una tendencia creciente a medida que se incrementa la concentracin.

concentracin de 5 g/mL. La mxima actividad fue sobre la S. dysenteriae, mas no para S. typhi. Se puede observar que, el aceite esencial de M. mollis presenta dicha actividad para ambas bacterias a la concentracin de 4 g/ mL. Bassole et al. (6) reportan que los aceites esenciales de las hojas y flores de Lippia chevalieri y Ocimun canum muestran actividad frente a S. dysenteriae, a una concentracin de 5 g/mL, presentando un halo de inhibicin de 9 mm para las hojas y 6 mm para las flores de L. chevalieri, mientras que para las hojas de O. canum 6 mm, y para las flores 6 mm. Como se puede observar en la figura 1, M. mollis presenta un halo de inhibicin de 21,41 mm para S.

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Actividad antibacteriana del aceite escencial de M. mollis Griseb Ruyaq mua

El ANOVA realizado para diez concentraciones del aceite esencial de M. mollis frente a las cuatro bacterias muestra la existencia de significancia estadstica para ambos factores MIC y MBC. Al realizarse la Prueba de Duncan para las cuatro bacterias (figura 1) se observa que Shigella dysenteriae es la que presenta ms sensibilidad al aceite esencial con un promedio de 21,41 mm, seguido de Helicobacter pylori con 17,07 mm, Salmonella typhi con 14,25 mm y la que menos sensibilidad present fue Pseudomonas aeruginosa con 11,45 mm. En la figura 2 se observa que a mayor concentracin es mayor el efecto inhibitorio; es as que la concentracin 450 g/mL produjo en promedio 22,48 mm de halo de inhibicin, mientras que para una concentracin de 4,5 g/mL fue de 11,99 mm. En la tabla 3 se observan los valores de los halos de inhibicin de tres antibiticos utilizados como estndares sobre las cuatro bacterias. Cabe sealar que Helicobacter pylori fue la nica que se prob con amoxicilina, porque es el frmaco ms especfico para el tratamiento de esta bacteria. En la figura 3 se puede observar el porcentaje de inhibicin a la concentracin de 450 g/mL de aceite esencial frente a ciprofloxacino sobre las cuatro bacterias, resaltando el hecho que Helicobacter pylori muestra mayor valor con 177,27%, seguido de Shigella dysenteriae, Salmonella typhi y Pseudomonas aeruginosa. Los valores presentados para Helicobacter pylori se deben a que el estndar caus menor efecto inhibitorio, lo que estara demostrando que el aceite tiene mayor actividad que el propio estndar; esto posiblemente se deba a que los constituyentes del aceite esencial de M. mollis, como el timol, acetato de timol, metileugenol, pulegona, mentona, limoneno, linalol, entre otros, actan en sinergismo (2). En la figura 4 se muestra el porcentaje de inhibicin a la concentracin de 450 g/mL del aceite esencial frente a cloranfenicol, en el que se puede apreciar que P. aeruginosa present la menor inhibicin en un porcentaje de 225,56%, seguida de S. dysenteriae, S. typhi y H. pylori con valores de 171,97; 135,95 y 92,86%, respectivamente. En la tabla 4 se muestran las caractersticas organolpticas del aceite esencial de M. mollis. Segn Carhuapoma (10) presenta caractersticas similares, con el predominio de la fraccin oxigenada en 67,77%. En la tabla 5 se muestran las principales constantes fsicas del aceite esencial de mua, asimismo Carhuapoma (10) e Inga et al. (11) presentan valores similares a los encontrados en el presente trabajo.

Por nuestros ensayos y otros trabajos revisados, el aceite esencial de M. mollis contiene compuestos fenlicos, entre estos el timol. Adems, el extracto contiene gran cantidad de componentes fenlicos, que se confirman por la coloracin azul oscura con el reactivo de cloruro frrico y estos seran los principales responsables de la actividad antibacteriana, que segn Kuklinski son los compuestos ms activos (12). REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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Minthostachys mollis (mua) contra algunas bacterias y hongos de inters en la salud Tesis para optar al ttulo profesional de Qumico Farmacutico, UNMSM, Facultad de Farmacia y Bioqumica. Lima, 2000. 12. Kuklinski C. Farmacognosia. Estudio de las drogas y sustancias medicamentosas de origen natural. Ediciones Omega S.A. Barcelona, 2003.

Manuscrito recibido el: 20/11/2009 Aceptado para su publicacin el: 23/02/2010


Correspondencia: Nombre: Mario Carhuapoma Yance Direccin: Jr. Rio Piura N. 601 San Luis Lima e-mail: ciplamt@yahoo.es

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ISSN 1561-0861

ESTUDIO QUMICO BROMATOLGICO DEL FRUTO DEL NSPERO DE PaLO (Mespilus germanica L.), PROCEDENTE DE AYACUCHO
Bromatological chemical study of the fruit of the nspero de palo (Mespilus germanica l.) from Ayacucho
Yanet Vargas R, Erika Pisfil E, Nelson Bautista C y Gladys C. Arias A. Laboratorio de Bromatologa. Facultad de Farmacia y Bioqumica. Universidad Nacional Mayor de San Marcos

RESUMEN
Se realiz la determinacin qumico bromatolgica de Mespilus germanica L. (Nspero de palo), procedente de la provincia de Vilcashuamn, Regin Ayacucho - Per. De la evaluacin se obtuvo los siguientes resultados, expresados en gramos por 100 g de muestra fresca: 73,13 de agua, 0,57 de protena total; 0,41 de extracto etreo; 23,04 de carbohidratos; 0,63 de cenizas; 2,22 de fibra cruda; 3,82 de azcares reductores; 12,06 de azcares reductores totales. Minerales, expresados en miligramos por 100 g de muestra fresca: 76,71 de sodio; 265,25 de potasio; 24,03 de magnesio; 92,42 de calcio; 28,48 de fsforo; 2,02 de fierro; 0,76 de cinc; 2,85 de cobre. Asimismo, 14,06 miligramos de vitamina C en 100 g de muestra fresca. Palabras clave: Nspero de palo, nspero del monte, nispolero, nspero europeo, Mespilus germanica L.

SUMMARY
We did the chemical bromatological determination of Mespilus germnca L. (Nispero de palo) from Vilcashuaman province, Ayacucho region - Peru. The evaluation had the following results expressed in grams per 100 g of fresh sample; 73,13 of water; 0,57 for total protein; 0,41 of ether extract; 23.04 of carbohydrates, 0.63 of ash ; 2.22 of raw fiber; 3,82 of reducing sugars; total reducing sugars 12,06. Minerals, expressed in mg per 100g fresh sample: 76,1of sodium, 266, 25 of potassium; 24, 03 of magnesium; 92, 42 of calcium; 28, 48 of phosphorus; 2.02 of iron; 0.76 of zinc; 2, 85 of copper. Also, 14.06 milligrams of vitamin C per 100 g of fresh sample. Keywords: Nspero de palo, nspero de monte, nispolero, nspero europeo, Mespilus germanica L.

INTRODUCCIN os diversos pisos ecolgicos del Per hacen propicio el crecimiento de una gran variedad de plantas alimenticias. Una de estas, que crece y se adapta muy bien a tierras ridas y secas de nuestro territorio es Mespilus germanica L., planta comnmente conocida en muchos lugares de nuestro pas como: nspero, nispolero, nspero de palo, nspero europeo, nspero del monte o nspero andino (1). Esta planta, segn las referencias, es originaria de Europa, en la actualidad crece en casi todos los valles interandinos del Per y en muchos pases en los cuales se ha estudiado se le ha dado mayor importancia con fines medicinales (2, 3). Es un rbol que crece de 3 a 5 m de altura, es muy resistente a sequas, heladas, enfermedades y condiciones ambientales extremas; tiene un fruto que en su ptima maduracin tiene sabor y aroma agradables (4).

En nuestro pas, el fruto es consumido principalmente en forma directa como fruto fresco, pero en algunos lugares, como la provincia de Vilcashuamn, Regin Ayacucho, se elaboran productos derivados como: nspero en almbar y agua de nspero obtenida mediante el licuado de la pulpa del fruto o por simple coccin; en todos los casos, los productos obtenidos son de sabor y olor agradables. La temporada de produccin del fruto en Vilcashuaman se extiende de junio a octubre, perodo soleado en esta zona del pas con escasas precipitaciones (5). De cada planta se obtiene aproximadamente de 500 a 700 Kg de fruto, con cosechas que comprenden varias etapas que se extienden a lo largo de los meses mencionados. Existe una gran confusin cuando se habla slo del nspero; as, en la Costa se refieren al nspero japons que es otra especie originaria del continente asitico, mientras que en la Sierra se refieren al nspero de palo. Estas plantas, a pesar que pertenecen a la misma

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familia, rosceas, tienen diferentes caracterstica botnicas; as por ejemplo, el fruto de nspero japons tiene mayor contenido de agua, es ms suave, en tanto el fruto de nspero de palo tiene menor contenido de agua, es ms fibroso y es una planta ms frondosa (4,6). Por otra parte, el fruto de nspero de palo se caracteriza por el alto contenido de pectina (7). En el Per existen estudios sobre el fruto del nspero de palo desde el punto de vista de su factibilidad para la obtencin de derivados y la instalacin de plantas de elaboracin de conservas, pero todos estos estudios an se encuentran en proyectos (8,10). El nspero de palo an no es considerado como un fruto de explotacin agroindustrial por falta de estudios que permitan conocer su verdadero valor como una fruta de consumo comn (6). Generalmente, el consumo del fruto de nspero de palo por los pobladores de la costa y Los Andes se ve influenciado por sus caractersticas organolpticas agradables, mas no por sus propiedades nutricionales (6). Por otro lado, en nuestro pas su cultivo no alcanza fines de explotacin agroindustrial como alimento. Se cultiva con fines ornamentales y la falta de difusin de informacin de las propiedades del fruto hace que no exista mucho inters de los habitantes para cultivarlo como una planta frutal. El cultivo de esta planta en Vilcashuamn es deficiente debido a que los pobladores no le dan los cuidados que requiere como a otros frutos ms comerciales. Con la difusin de este trabajo se busca, de manera indirecta, revalorar esta planta como un recurso vegetal, fomentando as el aprovechamiento al mximo de su fruto con fines alimenticios y funcionales; promover su cultivo permanente como planta frutal para que pueda desarrollarse una agroindustria sostenible. Asimismo, complementar con informacin sobre su valor nutricional y estudios de factibilidad para la obtencin de diversos derivados (11,12). Por consiguiente, el presente trabajo tuvo como objetivo determinar el valor nutricional del fruto de nspero de palo a fin de otorgarle la importancia que le corresponde en las zonas de procedencia y otras del pas. MATERIALES Y MTODOS

de Vilcashuamn, ubicada a 117 Km al sureste de la ciudad de Huamanga, durante el mes de setiembre. Las muestras se recolectaron en bolsas de polietileno y se transportaron tomando precauciones para no golpear los frutos durante el transporte; adems se conservaron en refrigeracin.

Preparacin de la muestra
Para realizar el estudio qumico bromatolgico, se seleccionaron frutos con caractersticas homogneas, como: ptima maduracin (pintones), los cuales se caracterizan por un color anaranjado intenso, tamao homogneo y libre de dao fsico. Luego se separaron las hojas y las ramas que contenan algunos frutos. La parte estudiada del fruto fue la pulpa; se separaron la cscara y las semillas, y luego se homogeniz la muestra para los anlisis correspondientes.

Determinaciones analticas
El contenido de agua, protena total, extracto etreo, ceniza y fibra cruda, fueron determinados utilizando los mtodos de la AOAC (13). El factor utilizado para calcular protena fue 6,25. Los carbohidratos fueron obtenidos por diferencia, es decir sustrayendo de 100 la suma de agua, protena total, extracto etreo, ceniza y fibra cruda. Los azcares reductores directos y totales fueron determinados utilizando el mtodo de Lane y Eynon de la AOAC (13) . Los minerales fueron determinados utilizando los mtodos analticos por espectrofotometra de Absorcin Atmica (14), excepto fsforo el cual fue determinado por el mtodo espectrofotomtrico (13) . La vitamina C fue determinada por el mtodo de titulacin con el 2,6-diclorofenolindofenol (13). La determinacin de pH y acidez total se realiz utilizando los mtodos de Egan H. (15) y AOAC (13), respectivamente. Para la determinacin del valor calrico se utiliz el mtodo de USDA (United States Department of Agriculture) (6,17). RESULTADOS La concentracin de vitamina C en 100 gramos de muestra fresca del fruto de nspero de palo (Mespilus germanica L.) fue de 14,06 miligramos. DISCUSIN En la actualidad hay pocos trabajos realizados acerca del nspero de palo, los estudios revisados son principalmente sobre nspero japons que es el fruto

Recoleccin, transporte y conservacin de la muestra


La muestra en estudio se recolect en la provincia

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Estudio qumico bromatolgico de Mespilus germanica L.

Tabla 1. Composicin qumico bromatolgica en 100 gramos del fruto de nspero de palo (Mespilus germanica L.). Agua Descripcin Muestra fresca (gramos) 73,13 23,04 2,22 0,88 3,82 0,3 0,57 0,41 Muestra seca (gramos) 2,12 1,53 2,34 8,26 3,28 -Protena total Cenizas Fibra cruda

Extracto etreo Carbohidratos Acidez titulable *

85,75 14,25 44,98

Energa total (Kcal/100g de muestra)


* En forma de cido ctrico

A.R.D. (g/% glucosa) * *

A.R.T. (g/% glucosa) * * *

12,06 88,51

** A.R.D: Azcares reductores directos

* * * A.R.T: Azcares reductores totales

Tabla 2. Contenido de minerales en 100 gramos del fruto de nspero de palo (Mespilus germanica L.) en muestra fresca y muestra seca. Minerales Fsforo Potasio Calcio Cobre Cinc Fierro Sodio Muestra fresca (miligramos) 28,48 76,71 24,03 92,42 0,76 2,85 2,02 Muestra seca (miligramos) 105,99 285,49 987,16 343,95 10,61 2,83 89,43 7,52

330,13

Magnesio

265,25

ms conocido y comercial. El contenido de agua encontrado en la muestra fue de 73,13%, lo cual se encuentra muy cercano al resultado hallado por Leandres (12) que fue 72,30%; las diferencias pueden deberse al tipo de clima, suelo, cantidad de precipitaciones pluviales y la temporada de recoleccin. En nuestro estudio la recoleccin se efectu en invierno (primeros das de setiembre) ya casi iniciando la primavera, que es la estacin con das soleados en la provincia de Vilcashuamn. El contenido de carbohidratos hallados en la muestra fresca fue de 23,04%, lo cual constituye uno de los componentes que se encuentra en mayor porcentaje, dicho valor se encuentra ligeramente por encima del valor hallado por Leandres (12), que fu de 19,87%;

esto podra deberse al grado de madurez de la fruta y las condiciones ambientales. El contenido del extracto etreo en la muestra fue de 0,41%, resultado ligeramente distante al 0,29% obtenido por Leandres (12). La diferencia puede deberse al mtodo usado para su cuantificacin. El nspero de palo es un fruto con alto contenido de aceites esenciales a lo que se debe su olor muy agradable, en este estudio se tomaron las precauciones necesarias para evitar su prdida durante la cuantificacin del extracto etreo. El contenido de fibra cruda encontrado fue de 2,22%, valor cercano al 2,62% reportado por Leandres (12) . Como se puede observar es un valor considerable, lo que confirma la consistencia fibrosa del fruto.

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El resultado obtenido de protena total en la muestra fue de 0,57%, lo cual se encuentra muy por debajo del 2,38% hallado por Leandres (12). La vitamina C encontrada en la muestra fue de 14,06 mg por 100 gramos de muestra fresca, valor que no se puede comparar porque no hay estudios que mencionen el contenido de esta vitamina; slo podemos hacer una comparacin con 13,80 y 12,00 mg por 100 gramos, reportados por Ludea (8) y Collazos (18), respectivamente, para el nspero japons. La variacin en el contenido de vitamina C depende de las variedades del fruto, las partes del fruto, grado de madurez, cantidad de radiacin solar y precipitaciones (5). El valor de la vitamina C hallado es menor en comparacin con los ctricos; sin embargo, es una buena fuente, sobre todo en aquellos lugares en donde el consumo de ctricos es pobre y, por lo tanto, el nspero de palo puede ser una buena alternativa como fruta fresca o procesada. En cuanto a los minerales expresados en mg por 100 gramos de muestra, se encuentran en mayor cantidad: potasio 265,2, calcio 92,42, fsforo 28,48 y magnesio 24,03. El cinc 0,76 y fierro 2,02, a pesar de encontrarse en menor porcentaje, constituyen cantidades importantes en comparacin a los requerimientos diarios (19, 20, 21). El contenido de cobre 2,85 hallado en 100 gramos de muestra, no slo llega a cubrir las necesidades requeridas (2,0 mg), sino que la sobrepasa, por lo tanto, el fruto de nspero de palo es una fuente muy importante de este mineral. No se pueden hacer comparaciones de todos los minerales estudiados, debido a que no existen referencias cuantitativas anteriores, algunos autores los mencionan slo cualitativamente. CONCLUSIONES La composicin qumica bromatolgica de Mespilus germnica L. (Nspero de palo), procedente de la provincia de Vilcashuamn, regin Ayacucho (Per) es de 73,13; 0,57; 0,41; 23,04; 0,63; 2,22; 3,82 y de 12,06 de agua, protena total, extracto etreo, carbohidratos, cenizas, fibra cruda, azcares reductores y azcares reductores totales, respectivamente por cada 100 gramos de muestra. Tambin contiene 76,71; 265,25; 24,03; 92,42; 28,48; 2,02; 0,76; 2,85 de sodio, potasio, magnesio, calcio, fsforo, fierro, cinc y cobre respectivamente por cada 100 gramos de muestra. Adems de 14,06 miligramos de vitamina C en 100 g de muestra.

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Manuscrito recibido el: 23/11/2009 Aceptado para su publicacin el: 23/02/2010 Correspondencia: Nombre: Gladys Constanza Arias Arroyo Direccin: Av. Javier Prado Oeste N 1460 Urb. Corpac San Isidro - Lima e-mail: ariasarroyo@gmail.com

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notas farmaCutiCas
GRADOS Y TTULOS Durante el segundo semestre de 2009, se han otorgado: Grado Acadmico de Bachiller en Farmacia y Bioqumica
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 1. Arce Portella Jos Antonio Arroyo Marticorena Ivonne Ascanio Yshuisa Silvia Janet Ayala Baez Deybbis Rosario Bravo Ccatamayo Carlos Santos Bulln Zegarra Elizabeth Natalia Cabrera Garcia Carlos Enrique Casas Cauti Paola Melissa Cervantes Meneses Liliam Lisett Cjuro Huanachea Cecilia Mriam Cuba Aquino Milagros Rosa Choque Jalixto Jess Angel Esquivel Cisneros Cristel Natali Estacio Malpartida Vctor Erick Estacio Soria Anbal Eduardo Estrella Colonio Laura Julieta Farfn Snchez Ren Garay Reynoso Manuel Amrico Garca Baltazar Jorge Luis Heredia Luis Oscar Demetrio Huamanyauri Llauca Fray Freddy 22. 23. 24. 25. 26. 27. 28. 29. 30. 31. 32. 33. 34. 35. 36. 37. 38. 39. 40. 41. 42. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. Jimnez Moreto Deybe Vernica Lozano De la Cruz Kety Luque Espino Julio Csar Minaya Bravo Jenny Elisa Mondragn Tarrillo Iris Giovana Morales Enriquez Miguel Antonio Mori Soto Ada Priscila Nez Gallo Cristina Zuleyka Obando Casas Paola Luciana Pea Molina Ida Geraldiny Prez Ormeo Alvaro Virgilio Poma Crdova Mara Elizabeth Requis Chaca Evelyn Roco Romero Ramrez Alex Rolando Silvia Prez Evelyn Karina Sobero Rodrguez Cinthya Sotomayor Torres Abel Edu Villarroel Santisteban Henry Gregorio Villn Lam Mara Alejandra Visa Cabello Fiorella Iris Zacaras Zevallos Christine Judith Mogrovejo Chirinos Giovanna Saby Palma Gutirrez Gabby Victoria Prez Bobadilla Javier Eduardo Rivera Meza Luis Alfredo Segura Guerra Giannina Lisset Torres Vargas Marysol Urruchi Huertas Jack Lee Vsquez Pinedo Roberto Justiniano Ventura Yahuana Geraldine Matilde Vila Porras Gumercindo Ral Visa Diaz Claudia Karina

Ttulo Profesional de Qumico Farmacutico


Arana Olivos Kelly Roco Bautista Chvez Liliana Crdenas Sifuentes Danitza Maud Castro Len Rosa Beatriz Corahua Ventura Liz Noem Flores Espinoza Edwin Robert Hospina Hernndez Luis David Julin Mena Diana Vanessa Junes Olivera Rosmery Landvar Ynami Heidi Sisi Lookuy Avendao Cristina Lizbet Mndez Arana Melissa Marlene

Grado Acadmico de Magster


2. 3. 4. 5. 6.

Apestegua Infantes Jos Alfonso: Farmacologa, con Mencin en Farmacologa Experimental Caldern Snchez Juana del Carmen: Microbiologa Campos Rojas Catherine Lourdes: Recursos Vegetales y Teraputicos Condorhuaman Figueroa Yovani M.: Farmacologa, con Mencin en Farmacologa Experimental Churango Valdz Javier Florentino: Farmacologa, con Mencin en Farmacologa Experimental Del Pino Robles Joyce Dione: Recursos Vegetales y Teraputicos

Daz Tello Jos Alberto: Microbiologa Justil Guerrero Hugo Jess: Farmacologa, con Mencin en Farmacologa Experimental 9. Mamani Sairitupac Dante: Biotecnologa 10. Martnez Heredia Jaime Teodocio: Farmacologa, con Mencin en Farmacologa Experimental 11. Pea Cuadros Mara Elena: Ciencia de los Alimentos 12. Salazar Salvatierra Mara Elena: Microbiologa 13. Samanez Gibaja Elizabeth: Biotecnologa 14. Zuta Arriola Noem: Microbiologa 7. 8.

Doctorado en Farmacia y Bioqumica


1. 2. Aliaga Arauco Jos del Carmen Jos Roger Jurez Eyzaguirre

3.

Yarlequ Mujica Jos Alejandro

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Ciencia e Investigacin 2009; 12(2)

Ttulo de Segunda Especialidad


1. 2. 3. 1.

Mamani Apaza Fernando: Farmacia Clnica Quispe Oncebay Horfelina: Farmacia Clnica Rodrguez Arizbal Julio Csar: Farmacia Clnica

4. 5.

Samam Zatta Teresa Libertad: Farmacia Clnica Serrano Mestanza Nelly Elizabeth: Farmacia Hospitalaria

Diplomado

Solis Yzaguirre Enriqueta Nelly: Asuntos Regulatorios Farmacuticos

JORNADAS DE INVESTIGACIN Siguiendo los lineamientos del Vice Rectorado de Investigacin de nuestra universidad, del 26 al 28 de octubre se llevaron a cabo las Jornadas de Investigacin en Ciencias Farmacuticas y Bioqumicas, que este ao llegaron a su XII edicin y llev el nombre del Decano Dr. Pedro Cotillo Zegarra. El evento se desarroll en nuestra facultad durante su semana de aniversario; llegando a presentarse diecisis trabajos de investigacin correspondientes a los proyectos aprobados en el ao 2008; as mismo se presentaron diecisiete trabajos libres de diferentes investigadores. LXIX ANIVERSARIO DE LA FACULTAD La semana del 26 al 31 de octubre se desarrollaron las actividades conmemorativas por el LXIX aniversario de nuestra creacin como Facultad que anteriormente funcion como Escuela dependiente de la Facultad de Medicina. El programa de la semana comprendi: Competencias deportivas entre las diferentes promociones XII Jornadas de Investigacin en Ciencias Farmacuticas y Bioqumicas Ceremonia Central, el da 29 de, en que tradicionalmente se desarrolla un programa que involucra: a. Izamiento del Pabelln Nacional b. Plantado del rosal nmero 69 en el rosedal de la facultad c. Misa d. Ceremonia Central Participacin de docentes en eventos cientficos Durante el perodo, numerosos docentes de la facultad fueron invitados a participar en diferentes certmenes, vinculados a la profesin farmacutica, quienes supieron mostrar el nivel acadmico-profesional que caracteriza a nuestros docentes. Entre algunos de estos eventos, mencionamos: I Congreso de Ciencias y Tecnologa Farmacutica Arequipa XIX Congreso Cientfico Peruano de Estudiantes de Farmacia y Bioqumica - Iquitos Primer Curso de Farmacotecnia para farmacuticos del Ministerio de Salud Curso de actualizacin del Colegio Qumico Farmacutico de la Provincia Constitucional del Callao Foro de Atencin Farmacutica Lima Premio Medalla de Oro Hiplito Unanue El presente ao, la Fundacin Instituto Hiplito Unannue convoc al Premio Medalla de Oro Hiplito Unanue que permite reconocer la vida profesional, de investigacin y aporte a la sociedad de los profesionales de la Salud. Por tal motivo, la Academia Peruana de Farmacia postul a la Dra. Nancy Mafalda Lozano Reyes, Docente de nuestra Facultad y actual Directora de la Escuela Acadmico Profesional de Ciencia de los Alimentos. Otras instituciones acadmicas y cientficas postularon a los doctores Emilio Guija Poma y Jorge Ruz Dvila. La decisin del Jurado determin que nuestra docente fuera la galardonada con este premio, el mismo que fue entregado en solemne cermonia llevada a cabo en el Swiss Hotel del da 17 de noviembre. El comit editorial de la Revista Ciencia e Investigacin, expresa a la doctora Nancy Lozano su especial felicitacin por tan merecido reconocimiento que permite elevar an ms el prestigio de los docentes de nuestra facultad.

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