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Practica # 1: Cromatografa de papel, ascendente y descendente

Materia: Qumica Analtica III

Objetivos: -Evaluar el desempeo de los diferentes disolventes polares en la cromatografa de papel (ascendente y descendente).

-Analizar la influencia de la polaridad del Solvente en la Separacin cromatografa. -Conocer la tcnica de cromatografa, sus caractersticas y los factores que en ella intervienen. -Aprendizaje de cromatogrficas. las destrezas necesarias para realizar separaciones

Introduccin Como ya hemos visto la cromatografa es una tcnica de de separacin basada en el principio de retencin selectiva, que permite separar los distintos componentes de una mezcla facilitando su identificacin y cuantificacin. El nombre de la tcnica se debe al botnico ruso Mikhail Semenovich Tswett, quien us columnas de vidrio rellenas de carbonato de calcio para separar pigmentos vegetales. Las tcnicas cromatogrficas son muy variadas, sin embargo, en todas el fenmeno de separacin ocurre al hacer pasar una fase mvil fluida (gas, lquido o fluido supercrtico), que arrastra a la mezcla, a travs de una fase estacionaria constituida por un slido finamente dividido o un lquido fijado en un slido. En este proceso los componentes de la mezcla interaccionan de diversa manera con la fase estacionaria y debido a esto atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades, por lo cual se van separando.

la cromatografa en papel trabaja con el principio de que en un sistema de dos

fases, los solutos se mueven junto con la fase mvil a una velocidad dependiente de su distribucin diferencial entre las dos fases. La celulosa del papel, es el medio de soporte en que se mueven los solventes. El agua se considera como la fase estacionaria y el solvente orgnico la fase mvil. La explicacin es que el agua se une a la celulosa polar, mucho ms fcilmente que el compuesto orgnico, de manera que esencialmente se puede decir que el solvente organico se mueve sobre las fibras hidratadas de celulosa. En cuanto el solvente llega a un rea del papel donde haya soluto, este comenzara a distribuirse entre las dos fases en proporcin a la solubilidad relativa de esas dos fases. Metodologa Ascendente 1.-cortar un el papel con medidas de 20x20 cm teniendo mucho cuidado con no contaminarlo y utilizando guantes para tocarlo. 2.-marcar con un lpiz las lneas de origen ( a 3cm) y frente del solvente ( a 10cm de la lnea de origen) y marcar dos lneas en los mrgenes laterales a 2 cm.

3cm 10 cm

2cm

2cm

3.- prepara 80ml de la solucin que ser la fase mvil en una proporcin de butanol, agua, A. Actico a 5:4:1 *agregar en matraz erlenmeyer 40 ml de butanol, 8 ml de actico y 32 ml de Agua. 4.- agregar la fase mvil a la cmara. 5.- marcar el papel donde pondremos cada una de la soluciones de carbohidratos con un espacio de 1.5 cm. 6.- agregar con un capilar una gota de cada uno de los carbohidratos al papel. 7.- engrapar el papel formando un cilindro, quedando la parte donde se encuentran los carbohidratos hacia afuera y colocarlo en la cmara. 8.- esperar que la fase mvil corra hasta la lnea marcada como frente del solvente.

9.- sacar el papel, marcar con un lpiz la lnea hasta donde corri el solvente y ponerlo a secar. 10.- una vez seco, prepara la solucin reveladora *Agregar 63 ml de butano y 37 ml de agua en un embudo de separacin. *una vez realizado el procedimiento de separacin disolver 4.5 g de acido aftalico (calentar para disolver) *Agregar 5ml de anilina y vaciarlo en el instrumento que usaremos para rociar la muestra. 11.- Rociar el papel con la sustancia reveladora 12.- poner en la estufa (no cerrar la puerta) hasta que de color, aproximadamente 5 min. 13.- sacar y tomar las medidas de las manchas. 14.- calcular los Rfs Descendente 1.-cortar un el papel con medidas de 20x45 cm teniendo mucho cuidado con no contaminarlo y utilizando guantes para tocarlo. 2.-marcar con un lpiz las lneas de origen ( a 3cm) y frente del solvente ( a 10cm de la lnea de origen) y marcar dos lneas en los mrgenes laterales a 2 cm. 3.- prepara la solucin que ser la fase mvil. 5.- marcar el papel donde pondremos cada una de la soluciones de carbohidratos con un espacio de 1.5 cm. 6.- agregar con un capilar una gota de cada uno de los carbohidratos al papel.

7.- poner con cuidado el papel en la cmara, en la parte que corresponde y agregar la fase mvil.

8.- esperar que la fase mvil corra hasta la lnea marcada como frente del solvente. 9.- sacar el papel, marcar con un lpiz la lnea hasta donde corri el solvente y ponerlo a secar. 10.- una vez seco, prepara la solucin reveladora *Agregar 63 ml de butano y 37 ml de agua en un embudo de separacin. *una vez realizado el procedimiento de separacin disolver 4.5 g de acido aftalico (calentar para disolver) *Agregar 5ml de anilina y vaciarlo en el instrumento que usaremos para rociar la muestra. 11.- Rociar el papel con la sustancia reveladora 12.- poner en la estufa (no cerrar la puerta) hasta que de color, aproximadamente 5 min. 13.- sacar y tomar las medidas de las manchas. 14.- calcular los Rfs Resultados Equipo 1 Ascendente Carbohidrato 1.Ribosa 2.Dextrosa 3.Sacarosa 4.Lactosa 5.Galactosa butanol, actico agua (4:1:5)

Rf 0.33 0.2 0.17 -

6.Maltosa 7.Xilosa 8. ? Muestra problema 0.17 = lactosa 0.37= Xilosa

0.37 0.17 y 0.37

Descendente Carbohidrato 1.Ribosa 2.Dextrosa 3.Sacarosa 4.Lactosa 5.Galactosa 6.Maltosa 7.Xilosa 8. ? Muestra problema = posiblemente Ribosa Rf 0.35 0.27 0.31

Equipo 2 y 7 Ascendente Carbohidrato 1.Ribosa 2.Dextrosa 3.Sacarosa 4.Lactosa 5.Galactosa 6.Maltosa 7.Xilosa 8. ? Muestra problema: 0.11= Lactosa Descendente 0.39= Ribosa butanol, actico agua (5:1:4) Rf 0.385 0.285 0.142 0.242 0.342 0.357 0.11 y 0.39

Carbohidrato 1.Ribosa 2.Dextrosa 3.Sacarosa 4.Lactosa 5.Galactosa 6.Maltosa 7.Xilosa 8. ? Muestra problema: 0.14= Lactosa Equipo 3 Ascendente butanol, actico agua (3:1:6) Carbohidrato 1.Ribosa 2.Dextrosa 3.Sacarosa 4.Lactosa 5.Galactosa 6.Maltosa 7.Xilosa 8. ? Muestra problema = posiblemente ribosa Descendente Carbohidrato 1.Ribosa 2.Dextrosa 3.Sacarosa 4.Lactosa 5.Galactosa 6.Maltosa 7.Xilosa 8. ? Muestra problema: Equipo 4 Ascendente butanol, actico agua (6:1:3) 0.3 = Xilosa 0.36= Xilosa

Rf 0.392 0.26 0.13 0.23 0.16 0.34 0.14 y 0.36

Rf 0.41 0.42 0.39

Rf 0.445 0.355 0.3

Carbohidrato 1.Ribosa 2.Dextrosa 3.Sacarosa 4.Lactosa 5.Galactosa 6.Maltosa 7.Xilosa 8. ?

Rf 0.30 0.35 y 0.08

Equipo 5 Descendente butanol, actico agua (6:1:3) Carbohidrato 1.Ribosa 2.Dextrosa 3.Sacarosa 4.Lactosa 5.Galactosa 6.Maltosa 7.Xilosa 8. ? Muestra problema: 0.3857= ribosa 0.2429= galactosa Rf 0.4 0.2771 0.8171 0.1429* 0.2424 0.2143* 0.3143 0.3857 y 0.2429

Discusiones Al revisar los resultados obtenidos podemos ver como la polaridad de los carbohidratos utilizados influye en la distancia recorrida. Logramos ver como entre mas polares eran los carbohidratos menos se desplazaban, ya que son altamente solubles en agua o por su capacidad de formar puentes de hidrogeno la fase estacionaria polar. De esta manera podemos decir que la lactosa fue el carbohidrato con mas polaridad utilizado durante la prctica, ya que fue el que menos se desplazo y al parecer la ribosa fue el menos polar, aunque no tenemos la seguridad debido a la falta de resultados.

Tambin observamos que en los resultados no se obtuvo ninguna mancha en el lugar de la sacarosa, debido a que este es un carbohidrato no reductor. En el equipo 5 se obtuvo una pequea mancha en este lugar pero podemos decir que fue debido a impurezas a la hora de llevar a cabo la practica.

Cuestionario 1. Qu otro tipo de sustancias se pueden separar por cromatografa de papel? La cromatografa en papel es una separacin qumica que se basa en los distintos tipos de afinidad de los productos qumicos por, en este caso, el papel y el disolvente. Los compuestos con ms afinidad con el papel van a ser los que menos migren, mientras que los ms susceptibles de migrar sern los compuestos menos afines con dicho soporte. ejemplos de sustancias que se pueden utilizar en cromatografas en papel: soluciones con aminocidos, tinta de bolgrafo, extractos de colorantes vegetales.

2. Qu papel desempea la celulosa del papel en este sistema de cromatografa?. La celulosa en forma de hojas de papel constituye un medio de Soporte muy til, donde el agua es absorbida entre las fibras de celulosa y forma la fase hidroflica estacionaria.

3. Cul es la fase mvil y cul la fase estacionaria en esta cromatografa? Fase mvil: Solvente preparado con agua, butanol y actico Fase estacionaria: el papel

4. Defina bien el concepto de Rf y su utilidad Se define como el cociente de dividir el recorrido de la sustancia por el disolvente, esto es, la distancia media desde el origen hasta el centro de la mancha (X) dividida por la distancia que media desde el origen hasta el frente del disolvente (S). =/

La constante RF es simplemente una manera de expresar la posicin de un compuesto sobre una placa como una fraccin decimal, mide la retencin de un componente. Para averiguar si dos compuestos son iguales, se colocan ambos sobre la misma placa y se desarrolla con varios eluyentes. Una vez desarrollados se calculan los RF y si son distintos, puede deducirse con toda seguridad que no se trataba del mismo compuesto. Por el contrario si los RF son iguales los compuestos pueden ser iguales o no serlo.

5. Qu se puede hacer cuando, en un sistema de cromatografa, dos compuestos no se pueden separar por tener idnticos Rfs? Bastara con cambiar el sistema de solventes, o simplemente variar la proporcin de la muestra de solventes en el sistema para que cada sustancia muestre un Fr distinto. 6. Qu fuerzas intervienen en la interaccin de la Fase mvil estacionaria? Fuerza del solvente, ndice de polaridad. Diferencias en afinidad de los componentes 7. Cul es la constante dielctrica de los solventes usados como fase mvil y como le puede ayudar esto a interpretar sus resultados? Butanol: 18 Acido Actico: 6,2 Agua:82 la constante dielctrica es uno de los parmetros que nos ayudan a medir la polaridad de una sustancia. Entre mayor sea la constante mas polar ser el disolvente y de esta manera podemos tener una idea de cmo reaccionara con la fase estacionaria. 8. Mencione 5 solventes que pudieran usarse como fase mvil adems de los empleados Los disolventes es el factor ms importante en la cromatografa de papel. Su seleccin es crtica, y que los disolventes determinan la selectividad del sistema cromatografico, para seleccionarlos hay que considerar la naturaleza qumica de las sustancias que se desea separar, as como la viscosidad y polaridad del solvente. Hexano, Benceno, acetato de etilo, dicloroetano y cloroformo.

Para cromatografa de carbohidratos se podra utilizar :propanol-acetato de etilo-agua en proporciones 7-2-1 9. De acuerdo con el revelado que compuesto result ms polar y explique su respuesta? El que resulto mas polar fue la lactosa ya que fue este el que se desplazo

Menos, debido a que por su polaridad son altamente solubles o tienen la capacidad de formar puentes de hidrogeno con la fase estacionaria lo que hace que se desplace mas lentamente. 10. Qu fase estacionaria us y que otras fases podran haberse usado? En la cromatografa de papel, la fase estacionaria que se usa es el principal componente del papel, la celulosa (o forma de la misma modificadas qumicamente). 11. Explique en que se basa el sistema de revelado empleado Si los compuestos de la mezcla son coloreados, las manchas son visibles directamente. De lo contrario habr que revelarlas. Luz UV: si los compuestos absorben esta radiacin las manchas se vern con fluorescencia. Reactivos de color: especiales para cada compuesto. Se deber tener en cuenta que no se pueden usar reveladores que destruyan el papel como el cido sulfrico o el calor. Vapores de yodo sublimado: es un revelador universal. 12. Qu otro sistema de revelado pudo haber empleado? Nitrato de plata en hidrxido de amonio, o periodato-benzidina.

Conclusin: Podemos decir que se cumplieron los objetivos de esta prctica ya Que aprendimos las destrezas necesarias para realizar las cromatografas de papel tanto ascendente como descendente dndonos todos las manchas que esperbamos obtener. Tambin observamos la influencia de la polaridad de las sustancias en la cromatografa, vimos como la polaridad de la lactosa hizo que sus desplazamiento fuera ms lento , debido a que por su polaridad son altamente solubles o tienen la capacidad de formar puentes de hidrogeno con la fase estacionaria, lo que hace que la distancia recorrida sea menor. En todos los resultados de cromatografas de los distintos equipos notamos que en ninguna apareci mancha en el lugar de la sacarosa, a excepcin del equipo 5, donde se presento una mancha debido a las impurezas. Pudimos descifrar que este se debi a que la sacarosa es el nico carbohidrato no reductor que utilizamos. Y por ultimo logramos identificar la mayora de las muestras problema, analizando sus Rfs y comparndolo con los obtenidos de las sustancias conocidas.

Bibliografas: Domnguez S. ,Xorge Alejandro (1975). Cromatografa en papel y capa delgada. Monterrey: secretaria general de la organizacin de los estados americanos. Rubinson, Kenneth; Rubinson, Judith (2000). Qumica analtica contempornea. Mxico: pearson educacin, addison wesley, prentice hall. Skoog, Douglas A. ;Chouch, Stanley. ;Holler, James.(2008). Fundamentos de Qumica analtica,(sexta edicin). Mxico: Cengage learning

Vejar Ribera, Eva Irma. (1989). Practicas de Bioqumica descriptiva.

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