MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

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PRCTICA NO. 1: USO Y MANEJO DEL MATERIAL DE LABORATORIO

OBJETIVO DE LA PRCTICA Capacitar al alumno en el uso del material ms utilizado en el laboratorio, as como el adecuado manejo de reactivos. IMPORTANCIA Es necesario que el alumno conozca el material ms empleado en un laboratorio de Qumica y de Bioqumica, lo que permitir el desarrollo ptimo de las prcticas experimentales posteriores, que son la base de su carrera y de su prctica profesional. El conocimiento de la clasificacin del instrumental de un laboratorio permite darle el empleo adecuado en todas las operaciones que se realicen.

INTRODUCCION La clasificacin usual del material del laboratorio es la siguiente:

MATERIAL: a) De sostn: Soporte universal, anillo de fierro, rejilla de asbesto, pinza para bureta, pinzas universales, pinzas de refrigerante, pinzas para crisol, pinzas para tubo de ensayo. Frasco de reactivos, vaso de precipitados, matraz Erlenmeyer, matraz baln, frasco gotero, tubos de ensayo, piseta. Pipetas, buretas, probetas, matraz aforado o volumtrico.

b) Recipientes:

c) Volumtricos:

d) De uso especfico: ..

EQUIPO: a) Mecnico: b) ptico: Balanza granataria, balanza analtica. Refractmetro, colormetro, microscopio, polarmetro.

c) Electromagntico Potencimetro, espectrofotmetro.

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO MATERIAL DE VIDRIO:

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El tipo de vidrio que se utiliza en la fabricacin del material de laboratorio es el de borosilicato (pyrex), el cual tiene las siguientes propiedades especiales: Puntos de fusin muy altos Alta resistencia mecnica Coeficiente trmico de expansin mucho menor que el del vidrio ordinario. Altamente resistente a los lcalis.

El material comnmente utilizado es el siguiente: Pipetas Graduadas: Son cilindros de vidrio terminados en punta, su graduacin inicia en el extremo superior. Por su graduacin pueden ser terminales y no terminales. Uso: Se utilizan para medir diferentes volmenes de lquidos a la temperatura que marca el fabricante. Las pipetas son de diferentes capacidad: 0.1, 1, 5, 10, 25 ml. Pipetas Volumtricas: Son tubos cilndricos que se ensanchan formando un bulbo o ampolla. Su extremo inferior termina en punta y en el extremo superior presenta una marca o aforo. Uso: Se utilizan para medir un volumen determinado a la temperatura que marca el fabricante. Bureta: Es un tubo cilndrico graduado, provisto de un mecanismo de llave de paso en su parte inferior. Para utilizar la bureta se requiere de un soporte universal y ajustar la bureta con una pinza especial (pinza para bureta). Uso: Se utiliza para realizar titulaciones. Probetas: Son cilndricos y huecos de vidrio o plstico graduados, con una base. Uso:

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Se utilizan en la medicin de volmenes ms grandes en forma menos exacta que con las pipetas, sus capacidades son de 10, 50, 100, 250 y 500 ml. Vasos de Precipitado: Son recipientes cilndricos anchos con vertedero. Uso: Son utilizados como receptculos de soluciones, para vaciar lquidos a las probetas o a las buretas y para calentar lquidos. Poseen diferentes capacidades y los ms usados son de 50, 100, 250 y 500 ml. Matraz Erlenmeyer: Presenta un cuerpo de forma cnica de base circular y boca ancha, generalmente es de vidrio, de paredes delgadas. Uso: Se utiliza como recipiente en las titulaciones. Tubos de Ensayo: Son tubos de vidrio delgado, los ms usados son los de 1.3 x 10 cm. Uso: Son utilizados para llevar a cabo en su interior las reacciones qumicas en pequeos volmenes. El soporte donde se colocan estos tubos se llama flama. Mechero Bunsen: Es un tubo metlico vertical enroscado en una base por donde entra el gas, un regulador de la entrada de aire y una boca superior por donde sale la flama. Uso: Se utiliza como fuente de calor, generalmente en combinacin con utensilios de sostn tales como soporte universal, anillo de hierro y rejilla de asbesto. Baos de Temperatura Regulada: Son recipientes de acero inoxidable que requieren de corriente elctrica y que tienen un regulador de la temperatura. Uso: Su principal funcin es la de calentar sustancias o soluciones que no puedan tener contacto directo con la flama, ya sea para evaporar solventes flamables o para mantener constante la temperatura durante el transcurso de una reaccin enzimtica (incubacin).

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO MATERIALES E INSTRUMENTAL POR EQUIPO DESCRIPCION (por equipo) 2 Vaso de precipitados 100 ml. 1 Pinzas para Bureta 1 Mechero Bunsen 1 Soporte Universal 1 Rejilla 1 Anillo de Hierro 1 Embudo de Vidrio 1 Pinzas para tubo de Ensayo 1 Propipeta 1 Papel Filtro 1 Gradilla 1 Tubo de Ensaye 1 Piseta 1 Probeta de 100 ml. 1 Mataz Erlenmeyer de 250 ml. 2 Pipetas 5, 10 ml. 1 Matraz Aforado de 100 ml. 1 Pipeta Volumtrica de 10 ml. 1 Placa de Pruebas 1 Balanza Granataria DESARROLLO DE LA PRCTICA MATERIAL QUE DEBE TRAER EL ALUMNO

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MATERIAL QUE PROPORCIONA EL LABORATORIO X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X

1. Lavar el material de vidrio. 2. Realizar actividades de pipeteo: medir 0.5, 2 y 5 ml. de agua de la llave y transferirlos de un recipiente a otro. 3. Medir 100 ml. de agua de la llave en un matraz aforado, en una probeta y en un vaso de precipitados. Cul es la medida ms exacta? 4. Pesar 1 g de carbn activado y mezclarlo con 50 ml. de agua de la llave en un vaso de precipitados, aadir dos gotas de azul de metileno. Posteriormente filtrar la mezcla utilizando un embudo provisto de papel filtro. CUESTIONARIO (Previos o posteriores de la prctica) 1. Cul es la clasificacin del material de Laboratorio? 2. Cul es la clasificacin del equipo del Laboratorio? 3. Qu caractersticas tiene el vidrio empleado en la fabricacin del material de Laboratorio?

SISTEMA DE CALIFICACION

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(Puntos de consideracin para la evaluacin de la prctica) Incluir en el reporte el siguiente cuestionario: 1. 2. 3. 4. Describir el material que utilizara con ms frecuencia en las prcticas de Bioqumica. Identificar el material de vidrio y esquematizarlo en el reporte de la prctica. Investigar los diferentes usos del Matraz Erlenmeyer. Cul es la funcin del carbn activado.

BIBLIOGRAFIA

1. Ayres, G.H. AnlisisQumico Cuantitativo. Ed. Harla, S.A. de C.V. Mxico, (1970) 2. Timm, J.A. Qumica General Ed. McGraw Hill, Mxico, (1978)

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO PRCTICA NO. 2 QUIMICA DE CARBOHIDRATOS

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OBJETIVO DE LA PRCTICA El alumno realizara pruebas qumicas de identificacin de carbohidratos y diferenciara entre un azcar reductor y uno no reductor. IMPORTANCIA Observar el comportamiento de los sacridos y como pueden ser detectados mediante pruebas qumicas. INTRODUCCION Reaccin de Molish (alfa-naftol) Es una prueba general de identificacin de carbohidratos. Se basa en la deshidratacin de los carbohidratos en presencia de cido sulfrico concentrado y una reaccin colorida con el reactivo de molish (alfa-naftol), dando como producto un complejo de color violeta intenso. Reaccin de Benedict (CuSO4) Es una prueba de identificacin de azucares reductores (presencia de grupos CHO y CO- libres). Se basa en la propiedad de los grupos aldehdo y cetona de reducir al cobre del reactivo de Benedict, dando un precipitado de color ladrillo. Hidrosis de la Sacarosa Es la reaccin del rompimiento del enlace glucosidico de la sacarosa en medio acido, por la adicin de una molcula de agua. Los productos son fructosa y glucosa libres.

MATERIALES E INSTRUMENTAL POR EQUIPO DESCRIPCION (por equipo) 8 Tubos de Ensaye 1 Gradilla 3 Agitadores de Vidrio 4 Pipetas graduadas de 5 ml. 1 Vaso de Precipitados de 250 ml. 1 Soporte Universal 1 Mechero Bunsen Reactivo de Molish (alfa-naftol) H2SO4 conc. Reactivo de Benedict (CuSO4) MATERIAL QUE DEBE TRAER EL ALUMNO MATERIAL QUE PROPORCIONA EL LABORATORIO X X X X X X X X X X

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO NaOH 10% HCI conc. Soluciones de Glucosa al 1% Solucin de Lactosa al 1% Solucin de Sacarosa al 1% Solucin de Almidn al 1% DESARROLLO DE LA PRCTICA

BIOQUMICA X X X X X X

1. Prueba general de carbohidratos. Reaccin de Molish. - Pngase en una serie de 4 tubos de ensaye 2 ml. de cada una de las soluciones problema: glucosa, lactosa, sacarosa y almidn. - Agregue a cada tubo, tres gotas de solucin de alfa-naftol. - Con mucho cuidado agregue 0.5 ml. de cido sulfrico concentrado de tal manera que resbale por las paredes. Anote y explique los resultados: __________________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________________ 2. Reduccin de cobre. Prueba de Benedict. Prepare una serie de 4 tubos de ensaye con 1 ml. de las soluciones de glucosa, lactosa, sacarosa y almidn. Aada a cada tubo 3 ml. del reactivo de Benedict. Coloque los tubos de precipitado con agua hirviendo por 10 minutos.

De las soluciones anteriores, Cules de ellas dieron positiva la reaccin? __________________________________________________________________________________ De qu color es el precipitado que se forma? __________________________________________________________________________________ Qu es este precipitado? __________________________________________________________________________________ Explique como demuestra este experimento el poder reductor de la glucosa y de la lactosa __________________________________________________________________________________

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Cules de las soluciones dieron negativa la reaccin, es decir que no tienen grupos reductores? __________________________________________________________________________________ 3. Hidrolisis de la sacarosa. Dio positiva la reaccin de Benedict con la sacarosa? ___________________________________ Agregue una gota de cido clorhdrico concentrado a 5 ml. de solucin de sacarosa, hierva suavemente por tres minutos. Neutralice con solucin de hidrxido de sodio, agregndola gota a gota hasta que la solucin sea alcalina al papel Litmus. Prueba ahora esta solucin con reactivo de Benedict.

Es positiva la prueba? _______________________________________________________________ Qu es lo que se ha formado hirviendo la sacarosa en solucin acida? __________________________________________________________________________________

SISTEMA DE CALIFICACION (Puntos de consideracin para la Evaluacin de la Prctica) 1. Escriba la definicin de monosacrido, disacarid y polisacario. 2. Complete la siguiente tabla: Reaccin positiva (+) y reaccin negativa (-).

SOLUCION PROBLEMA Dextrosa Glucosa Lactosa Sacarosa Almidn BIBLIOGRAFIA Macarulla, J.M. y Goi, F.M. Biomoleculas. Ed. Reverte. Mxico (1978).

REACCION DE MOLISH (anillo color violeta)

REACCION DE BENEDICT (precipitado rojo ladrillo)

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PRACTICA NO. 3: REACCIONES DE IDENTIFICACION DE LAS PROTEINAS

OBJETIVO DE LA PRECTICA El alumno realizara algunas reacciones coloridas especficas para la identificacin de los aminocidos que constituyen una protena.

IMPORTANCIA El propsito de esta prctica es conocer algunas de las propiedades qumicas comunes a las protenas, especialmente aquellas por las cuales las protenas pueden ser distinguidas unas de otras. En general, puede decirse que la protena refleja las propiedades qumicas de los aminocidos que contiene. La mayora de las reacciones coloridas de las protenas depende de la existencia de un aminocido especfico en ellas.

INTRODUCCION Las protenas estn formadas por aminocidos unidos por enlaces peptdicos y aunque presentan propiedades fisicoqumicas y biolgicas caractersticas, estas son reflejo de las de los aminocidos que las constituyen. Existen 20 tipos de aminocidos diferentes, pero todos tienen la misma constitucin general:

R H2N - C C00H H Reaccin del Milln El Reactivo del Milln contiene una mezcla de nitratos y nitritos mercricos y mercuriosos, en HNO3conc. Debido a la presencia del grupo fenlico ( ) se produce un compuesto de color rojo. Todas las sustancias que posean al grupo fenlico dan positiva esta reaccin, tales como: el fenol, cido saliclico, tirosina y todas aquellas protenas que contengan tirosina.

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO Reaccin Xantoproteica

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La reaccin consiste en una nitracin que por alcalinizacin da un compuesto amarillo. Esta reaccin es positiva para protenas que contienen aminocidos aromticos (que poseen un grupo bencnico), tales como: la fenilamina, la tirosina y el triptfano. Reactivo del Biuret (CuSO4) Prueba general de protenas. La reaccin es positiva para cadenas mayores de tres aminocidos. Cuando una protena o un polipeptido se hace reaccionar con sulfato de cobre en una solucin alcalina se produce un color caracterstico purpura o violeta. MATERIALES E INSTRUMENTAL POR EQUIPO DESCRIPCION (por equipo) 12 Tubos de ensaye 2 Pipetas de 5 ml. 1 Pipeta de 1 ml. 1 Vaso de Precipitados de 100 ml. 1 Soporte Universal 1 Rejilla de Asbesto 1 Anillo de Hierro 1 Mechero Bunsen HNO3 conc. Reactivo de Biuret NaOH al 30 % Reactivo de Milln Solucin de Albumina de Huevo al 1% Solucin de Gelatina al 1% Solucin de Casena al 1% Solucin de Fenol al 1% DESARROLLO DE LA PRCTICA 1. Reaccin del Milln Prepare una serie de 4 tubos de ensaye conteniendo 2 ml. de las soluciones problema: albumina, gelatina, casena y fenol. Agregue unas gotas de reactivo del Milln a cada tubo. Mezcle bien y observe si se forma un precipitado blanco. Posteriormente caliente la solucin en bao mara (utilizando un vaso de precipitados con agua de la llave) hasta que aparezca un color rojo, que indica que la reaccin es positiva. MATERIAL QUE DEBE TRAER ELALUMNO MATERIAL QUE PROPORCIONA EL LABORATORIO X X X X X X X X X X X X X X X X

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2. Reaccin Xantoproteica Prepare una serie de 4 tubos de ensaye con 2 ml. de las soluciones: albumina, gelatina, casena y fenol. Agregue 0.5 ml. de HNO3 conc. a cada tubo, mezcle y observe la aparicin de cualquier precipitado denso y blanco. Caliente en bao mara los 4 tubos y observe si las soluciones cambian a amarillo. Deje que las mezclas se enfren y con precaucin agregue NaOH al 30%, hasta reaccin alcalina con el papel litmus. Observe si el color se vuelve anaranjado intenso, esto indica que la reaccin es positiva. 3. Reaccin del Biuret Prepare una serie de 4 tubos con 2 ml. de las soluciones problema. Adicione 1 ml. de NaOH y mezcle bien. Agregue a cada tubo, 1 gota de sulfato de cobre (reactivo de Biuret) y observe si se forma un anillo violeta. Si no es as, aada ms gotas (hasta diez). La aparicin de un anillo color violeta indica que la reaccin es positiva. CUESTIONARIO (Previos o posteriores de la prctica)

1. Qu es una Protena? 2. Cul es la Constitucin de un Aminocido? 3. Cules son los Aminocidos que contienen un grupo Bencnico? 4. Cules son los Aminocidos que contienen un grupo Fenlico?

SISTEMA DE CALIFICACION (Puntos de consideracin para la Evaluacin de la Prctica) 1. Complete el siguiente cuadro: Reaccin positiva (+), Reaccin negativa (-). SUSTANCIA REACCION DEL MILLON (complejo rojo) REACCION XANTOPROTEICA (complejo amarillo) REACCION DEL BIURET (complejo violeta)

Albumina Gelatina Casena Fenol

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2. Explique el significado de los resultados positivos y de los negativos. 3. Explique por qu se tie de amarillo la piel al contacto con el cido ntrico (HNO3). 4. Se puede considerar al Biuret como una reaccin caracterstica para todas las Protenas?, Por qu?

BIBLIOGRAFIA 1. Rendina, G. Tcnicas de Bioqumica Aplicada. Ed. Interamericana, Mxico (1974). 2. Yez, A. R. Manual de Prcticas de Bioqumica. Instituto Politcnico Nacional, Mxico, D.F. (1996).

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PRACTICA NO. 4: EFECTO DE LA TEMPERATURA EN LA ACTIVIDAD DE LA ENZIMA AMILASA

OBJETIVO DE LA PRCTICA El alumno determinara el efecto de la temperatura en la actividad enzimtica de la amilasa (ptialina).

IMPORTANCIA Las enzimas son protenas que aceleran la velocidad con que se efectan las reacciones del metabolismo celular, por ello se les ha denominado biocatalizadores. Todas las reacciones del metabolismo celular se encuentran catalizadas por una enzima especfica, de ello deriva la gran importancia de las enzimas para los seres vivos. INTRODUCCION La amilasa (ptialina) es una enzima que hidroliza (rompe) los enlaces glucosidicos (1-4) de los polisacridos como el almidn. Existen dos sitios caractersticos donde se encuentra la amilasa, en la saliva y en el jugo pancretico. El mtodo ms usado para la determinacin de las diferentes amilasas es la reaccin de color azul que produce el yodo con el almidn. A medida que se produce la hidrolizacion del almidn por la presencia de lasamilasas, la molcula se hace ms pequea y la coloracin azul va disminuyendo hasta que queda un color mbar (reaccin negativa de la presencia de almidn).

DESNATURALIZACION Las protenas tal como existen en la naturaleza se denominan protenas nativas. Si se modifica su confirmacin tridimensional (estructuras 2, 3 y 4) por variables fisicoqumicas como el pH, la temperatura y la concentracin de sales, se convierte en protenas desnaturalizadas, las cuales generalmente pierden su actividad catalizadora.

MATERIALES E INSTRUMENTAL POR EQUIPO

DESCRIPCION (por equipo) 7 Tubos de Ensaye 1 Gradilla 1 Vaso de Precipitados 100 ml.

MATERIAL QUE DEBE TRAER EL ALUMNO

MATERIAL QUE PROPORCIONA EL LABORATORIO X X X

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MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO 2 Baos Termostticos * 3 Agitadores de Vidrio Solucin de Kl (lugol) Solucin de Almidn 1% 2 Placas de Porcelana 1 Vaso de Precipitados de 250 ml. 1 Mechero, Anillo, Soporte, Rejilla 2 Pipetas de 10 ml. 1 Pipeta de 5 ml. Hielo *POR GRUPO

BIOQUMICA X X X X X X X X X X

DESARROLLO DE LA PRCTICA 1. Preparacin de la saliva diluida: Tomar 2 ml. de saliva en un tubo de ensaye, y transferirlos a un vaso de precipitados con 25 ml. de agua destilada. Mezclar perfectamente. Una vez diluida se utilizara lo ms pronto posible. 2. Agregar a 3 tubos de ensaye 5 ml. de solucin de almidn, a cada uno colocarlo en una temperatura diferente; durante 5 minutos. a) 0C. b) 37C. c) 93C. 3. Agregar a tres tubos de ensaye 3 ml. de saliva diluida (punto 1) y colocarlos en cada una de las temperaturas a), b) y c) durante 5 minutos. 4. Despus de transcurrido el tiempo en cada una de las diferentes temperaturas, vaci el contenido de cada uno de los tres tubos con la solucin de almidn, en cada uno de los tubos con saliva diluida. NOTA: Los tres tubos resultantes deben permanecer en el bao de su temperatura correspondiente durante el resto del experimento. 5. En el momento de la mezcla, tomar inmediatamente 3 gotas de cada una de los tubos (a, b y c), utilizando tres pipetas diferentes, colocarlas en la placa y agregar 2 gotas de lugol, observando y anotando la coloracin en cada una de las diferentes temperaturas. 6. Estas determinaciones se llevaran a cabo cada a los tiempos 0, 3, 6, 9, 14 y 19 minutos.

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MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO CUESTIONARIO (Previos o posteriores de la prctica)

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1. Qu es un Enzima? 2. Qu factores desnaturalizan a una Enzima? 3. Qu es el almidn?

SISTEMA DE CALIFICACION (Puntos de consideracin para la evaluacin de la prctica) 1. Completar el siguiente cuadro: Actividad de la -amilasa: Reaccin positiva (+): Color AMBAR. Reaccin negativa (-): Color AZUL. TEMPERATURA 0 0C. 37C. 93C. 2. Cul fue la temperatura en la cual desapareci el color azul en el menor tiempo?, Por qu? 3. Hubo alguna temperatura en la que no cambio el color azul?, Cul y por qu? 4. Explica el efecto de las diferentes temperaturas en la enzima -amilasa y-amilasa de acuerdo a los resultados, Cul es la temperatura optima de la -amilasa salival?, Por qu? 5. Investiga de qu forma reacciona el yodo con el almidn. BIBLIOGRAFIA 1. Rendina, G. Tcnicas de Bioqumica Aplicada Ed. Interamericana, Mxico (1974). 2. Yez, A. R. Manual de Practicas de Bioqumica Instituto Politcnico Nacional, Mxico, D.F. (1996). 3 TIEMPO ( MINUTOS ) 6 9

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