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UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE BIOANLISIS

Manual de Prcticas de Laboratorio de Parasitologa General

Manual de Parasitologa General

INTRODUCCIN La implantacin del Nuevo Modelo Educativo en la Facultad de Bioanlisis genero la reestructuracin del plan de estudios en un sistema de crditos, con Experiencias Educativas ubicadas en 4 reas de formacin, un gran porcentaje de estas Experiencias Educativas incluyen horas paralelas donde los alumnos llevan a cabo prcticas que fortalecen sus conocimientos, habilidades y actitudes, para lo cual es necesario contar con manuales que guen las actividades de los alumnos dentro de los laboratorios. Actualmente la Facultad de Bioanlisis con base al nuevo modelo educativo integral y flexible (MEIF) cuenta con el registro de un manual de prcticas de laboratorio de Parasitologa Clnica; por ello la necesidad de realizar un Manual de Parasitologa General que le va a permitir al alumno contar con material bibliogrfico actualizado, en el cul obtendr nocin sobre la microunidad de competencia y generalidades de la prctica a realizar, as como la importancia de cada una de ellas; ayudar a identificar la morfologa de los parsitos , siendo tico, responsable y cuidadoso en la seleccin de mtodos para coadyuvar en el diagnostico clnico oportuno de estas enfermedades. Su contenido presenta contribuciones fundamentales a su formacin QUMICO CLNICO, se conforma de 10 prcticas de laboratorio con listado de referencia bibliogrficas. Cada unidad abarcara temas generales como miscelnea de reactivos de cada mtodo. La experiencia educativa Parasitologa general se encuentra en el rea disciplinar de la carrera de QUIMICA CLINICA cuenta con 3 horas tericas y 2 de prctica, con un total de 8 crditos basado en el programa de dicha experiencia educativa del Nuevo Modelo Educativo Integral y Flexible. Es importante sealar que un manual de prcticas es un documento que contiene la descripcin de los procedimientos que deben seguirse en la realizacin de las actividades del alumno dentro del laboratorio.
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Se conforma de generalidades, tcnica o procedimiento, material y mtodo, as como el equipo a utilizar y cualquier otro dato que pueda auxiliar al correcto desarrollo de cada prctica. En l se encuentra la informacin bsica referente a cada procedimiento, el cual aumenta la eficiencia de los alumnos. Cada prctica de laboratorio esta estructurada de la siguiente manera:

Nmero y nombre de la prctica Microunidad de Competencia Generalidades Material Tcnica Observaciones (Datos del Parsito) Cuestionario Bibliografas

Este manual introduce al alumno en el campo de la parasitologa general, abordando desde los puntos pedaggicos, cientficos y de distintos ngulos, los conceptos actuales para obtener un mejor entendimiento en lo relacionado a las enfermedades parasitarias que son tan frecuentes en nuestra regin. Debido a la situacin geogrfica prevalencia parasitaria elevada. en reas como en las que nos encontramos

(tropical y subtropical) y el desarrollo socioeconmico deficiente favorece a tener una

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REGLAMENTO DEL DEPARTAMENTO DE LABORATORIOS U.C.S. XALAPA. DISPOSICIONES GENERALES 1.- El responsable de cada prctica es el maestro. 2.- No se permite a los alumnos trabajar en los laboratorios sin la presencia del maestro. 3.- El equipo de proteccin personal dentro de los laboratorios y en los anexos de los laboratorios ser: Alumnos:

Bata de algodn 100 %, de manga larga Lentes de seguridad durante todo el tiempo que dure la prctica. En caso de lentes graduados, que sean de cristal duro inastillable y uso de protectores laterales. El pelo recogido en las prcticas que se utilice mechero Guantes en caso de que la prctica lo exija, a criterio del maestro. Toalla o lienzo de algodn. Bata de algodn 100 %, de manga larga Lentes de seguridad durante todo el tiempo que dure la prctica. En caso de lentes graduados, que sean de cristal duro inastillable y uso de protectores laterales. El pelo recogido en las prcticas que se utilice mechero.

Profesor:

LOS SERVICIOS 4.- El departamento de laboratorios de la unidad de ciencias de la salud prestara los servicios a usuarios de conformidad a las siguientes normas: Los C.C. catedrticos debern: Respetar sus horarios de entrada y salida. Permanecer dentro del laboratorio mientras haya alumnos trabajando.

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Solicitar con anticipacin su material de trabajo, por escrito en las hojas especiales que para ello existen, con un mnimo tiempo de 48 hrs. hbiles. Las hojas de pedido se les proporcionaran en los laboratorios. Ensear oportunamente a los alumnos el manejo y cuidado del material, reactivos y equipo que utilicen en la practica. Informar a los alumnos sobre el manejo de residuos peligrosos biolgico infecciosos.

Los alumnos:

Debern solicitar el material y equipo mediante un vale debidamente requisitado, con especificaciones de cada pieza. El alumno que reciba el material, entregar su credencial vigente, revisando con cuidado el material en presencia del laboratorista. En caso de ruptura o prdida del material, se conservara en el laboratorio su credencial hasta que el material sea repuesto. Se debe de entregar el material limpio al trmino de la prctica. Dejar limpias las mesas de trabajo de los laboratorios. Depositar los desechos qumicos generados en el recipiente que corresponda, segn instrucciones del maestro. Deben de conservar las tarjas de los laboratorios libres de toda basura (algodn, papeles o desechos de cualquier clase). Separaran adecuadamente los residuos biolgicos infecciosos para ser depositados ya sea en bolsas o en contenedores rgidos, segn sea el caso.

NORMAS DE COMPORTAMIENTO 5.- Los usuarios debern abstenerse de dejar, en el lugar de trabajo, cosas de valor a la vista y cerrar las puertas de los cubculos y laboratorios. 6.- Para trabajar en el laboratorio es necesario acadmico utilicen bata y lentes de seguridad. 7.- Durante el desarrollo de las prcticas queda estrictamente prohibido la entrada de personas ajenas al grupo. 8.- En los laboratorios queda prohibido.
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que los estudiantes y personal

Fumar Consumir alimentos Jugar Provocar desordenes El uso de zapatos abiertos (huaraches)

9.- Las tomas de agua y de gas deben mantenerse siempre cerradas cuando no se estn utilizando. 10.- Queda prohibido pipetear con la boca. 11.- No probar, oler ni tocar con las manos ningn producto qumico. 12.- El trabajo con sustancias toxicas y voltiles deber efectuarse dentro de la campana de extraccin de gases. 13.- Antes de desecharse cultivos de microorganismos o muestras biolgicas se debern inactivar. 14.- Cualquier derrame de muestras biolgicas deber ser comunicado al profesor, quien supervisara el proceso de descontaminacin del rea. 15.- La recoleccin de muestras de sangre se realizara con seguridad, por lo cual quienes la toman debern: Revisar sus manos en busca de cortes, raspaduras u otras lesiones cutneas Colocarse los guantes Procurar no contaminar las manos mientras se extrae la sangre Lavar las manos con agua y jabn inmediatamente despus de cualquier accidente de contaminacin con sangre. Colocar las jeringas y agujas en los recipientes adecuados En caso de pinchazo o cortada lavar la herida con agua y jabn.

16.- Cuando se maneje material contaminado, infecciosos o toxico por contacto, se debern usar guantes y seguir las siguientes normas: Se deben evitar usar joyas en el laboratorio. Cuando se termine el trabajo se debern lavar las manos con agua y jabn. Desechar los guantes

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No tocar con las manos enguantadas los ojos, la nariz, otras mucosas ni la piel descubierta. No abandonar el lugar de trabajo ni pasear por el laboratorio o pasillo con los guantes puestos. Mantener el laboratorio limpio y ordenado, evitando la presencia de material y equipo que no tenga relacin con el trabajo. Nunca pipetear lquidos con la boca

SANCIONES: 17.-En caso de ruptura o perdida de material, se conservar en los laboratorios la credencial del alumno hasta que sea repuesto. 18.- Las personas a quienes se les sorprenda haciendo mal uso de equipos, materiales, instalaciones, sern sancionados conforme a la Legislacin Universitaria, segn la gravedad de la falta cometida. 19.- En el caso de los alumnos, las sanciones aplicables sern las que decida el H Consejo Tcnico, conforme a las disposiciones de la Legislacin Universitaria.

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Materia fecal
Heces El examen de las heces comprende dos grandes captulos de la investigacin analtica clnica: la coprologa Qumico Funcional y la Coproparasitologa La investigacin comprende los siguientes puntos: Recoleccin Caracteres organolpticos Macroscpicos como:

Cantidad Vara segn la alimentacin: con rgimen crnico, de 50 a 100 g/24 h; con rgimen vegetariano, de 250 a 400 g; finalmente, en rgimen mixto, de 100 a 200 g. Todo ello por da y en una sola deposicin. Se puede definir la diarrea, dejando a un lado otras muchas definiciones, como la eliminacin fecal que excede los 200 g por da, cuando el contenido de la dieta en fibras es bajo. El agua es el principal componente, siendo su contenido de aproximadamente un 65 %. Consistencia Normalmente es pastosa-dura. Puede modificarse en distintas circunstancias. En las diarreas la consistencia es lquida, en cantidad abundante cuando se deben a patologa intestino delgado y mucosas si proceden del intestino grueso. Las deposiciones semiblandas indican un trnsito rpido por el intestino delgado o son propias de las afecciones pancreticas o biliares. En el estreimiento son duras, en forma de grandes bolos. Las deposiciones caprinas son propias de los estados espsticos acentuados. Color Pardo. Durante la lactancia, amarillo. Se tornan verdes por la accin del aire en la lactancia natural. Son oscuras si contienen gran cantidad de pigmentos biliares (descargas biliares e ictericia hemoltica); pero son an ms oscuras y de aspecto alquitranado cuando contienen sangre de procedencia alta (si la sangre es de procedencia baja, es de color rojo y no bien mezclada) y en pacientes en tratamiento con sales de hierro. De color amarillo pardo, pero con gran contenido en grasa, en
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las esteatorreas de origen pancretico (conteniendo pigmentos biliares). El color verde es propio de las diarreas de fermentacin del nio. Moco Su presencia en las heces es propia de los estados inflamatorios (enteritis y Colitis), pero tambin se presenta en el sndrome de intestino irritable, en el que no hay inflamacin. Pus Se presenta en pequeas cantidades en la enteritis y colitis de cualquier etiologa. Pero la presencia brusca de pus abundante es indicio de la evacuacin a la luz intestinal de un absceso prximo (perirrectales, prostticos, pioslpinx, etc.). Sangre Muy frecuente en la enteritis y la colitis, parece en cantidades pequeas y mezclada con moco-pus. Si procede de las porciones altas del intestino se presenta bien mezclada con las heces y suele ser negruzca, aun cuando puede persistir roja si el trnsito intestinal ha sido muy rpido. Si la sangre va mal mezclada con las heces sugiere una procedencia baja. En ausencia de enteritis o colitis o, en general, de cualquier infeccin intestinal, la presencia de sangre har sospechar una lesin de la mucosa (lcera, tumor, angiodisplasia, etc.) o tambin en una enfermedad hemorrgica. Debe practicarse siempre un anlisis de sangre (tiempos de hemorragia, coagulacin, protrombina y tromboplastina y plaquetas). En los casos en que existe la sospecha de prdida de sangre a nivel gastrointestinal distal (p.e. anemia ferropnica en el anciano), pero no se obtienen datos macroscpicos de la misma es conveniente su deteccin mediante el estudio de sangre oculta en heces (prueba del guayaco) o el empleo de hemates marcados, con resultados positivos cuando su volumen es de 0,1 ml/min o superior. Examen Microscpico Consistencia:

Acuosa Blanda Pastosa


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Dura Ejemplos Agua de arroz Pur de lentejas Papilla Pegajosa Pegajosa oscura Pastosa espumosa Restos gruesos de alimentos Clera Tifoidea Insuficiencia gstrica Esteatorrea origen biliar, pancretico Melenas Dispepsia Insuficiencia pancretica

Color La coloracin parda habitual se debe a urobilina y estercobilina, el color es segn el alimento. Lactantes Carnvoros Vegetariano Pan o Papas Amarillo canario Castao oscuro (Caf) Verdoso Amarillentas - Ictericia Obstructiva - Hepatitis - Ingestin de Bario (peptobismol) Amarillentas con matices: - Esteatorrea - Diarreas de fermentacin - Insuficiencia pancretica

Blanco grisceo (ceniza):

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Parsitos: Macros y microscpicos

Clulas: epiteliales Irritacin

Leucocitos: se observan colocando una gota de cido actico al 10% ms una gota de materia fecal. Su presencia indica infeccin bacteriana. Si hay ms de 10 por campo, hacer un diferencial. Mayor cantidad de Neutrfilos (Polimorfo nucleares) la infeccin es causada por bacterias. Si hay mayor cantidad de no segmentados la infeccin es viral Cristales:

Oxalato de Calcio Normal y aumentada, su presencia en insuficiencia gstrica De colesterol Clculos vesiculares hematoidina agujas amarillas, se presentan en grupos, aparecen despus de hemorragias. Charcot-Leyden Amibiasis, I. belli

Grasa Trnsito acelerado. Deficiencia enzimatica. Deficiencia en absorcin. Metodologa por el Laboratorio Clnico. Grasas neutras teidas con Sudn III (gotas anaranjadas), ms de 60 gotas indican esteatorrea Sndrome de mala absorcin Definicin Es la dificultad en la digestin o absorcin de los nutrientes de las substancias alimenticias. Tpicamente, la mal absorcin puede ser la insuficiencia para absorber azcares, grasas y protenas especficas u otros nutrientes (tales como las vitaminas) o una mal absorcin inespecfica general de los alimentos. La mala absorcin puede ir acompaada de: Diarrea Hinchazn o clicos
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Retraso del crecimiento Deposiciones difciles y frecuentes Debilitamiento muscular Distensin abdominal

Causas Fibrosis qustica Intolerancia a la lactosa Enfermedad celaca (enteropata inducida por gluten) Enfermedad de whipple (distrofia por medicamentos) Intolerancia a la lacto albmina bovina (protena de la leche de vaca) Intolerancia a la protena de la leche de soya Acrodermatitis enteroptica que causa la mala absorcin del Zinc Mal absorcin de vitamina B-12 Parsitos

Caractersticas macroscpicas Olor : cido Color: Claro Consistencia: de pastosa a liquida Cantidad: abundantes Flotabilidad de las heces Presencia de grasa (gotas oleosas).

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Recoleccin, manejo y conservacin de productos biolgicos (Control de calidad) Generalidades. En el manejo de los productos biolgicos es donde va a radicar el xito o el fracaso de un diagnstico en enfermedades parasitarias. Es necesario seguir ciertos lineamientos preestablecidos para cada producto. Un portaobjetos desengrasado insuficientemente, dar por resultado un frote sanguneo defectuoso, con el que difcilmente se hara un diagnstico adecuado. Una materia fecal recolectada con orina, destruye los embriones de Necator, lo que hace fracasar un examen posterior como el desarrollo de larvas F, en el cultivo de Harada-Mori (1955) para la obtencin de larvas. En suma, las muestras mal recolectadas, inadecuadamente conservadas y con mucho tiempo despus de haber sido obtenidas, no servirn para observaciones y estudios posteriores, e inclusive pueden conducir a resultados errneos o falsos. Recoleccin. La obtencin de la materia fecal se puede hacer de diferentes

maneras; la ms frecuente es por la expulsin natural. La segunda se puede obtener con purgantes y la otra es de qu se toma por medio de la cucharilla rectal. La que se utiliza con mayor frecuencia es la primera, la segunda se utiliza en casos muy especiales como en amebosis intestinal crnica y en estrongiloidosis; Finalmente, la toma con cucharilla rectal se utiliza en los lactantes. Las muestras sern seriadas en tres das consecutivos, salvo otras indicaciones Manejo. Se deben utilizar frascos limpios de boca ancha, se evitar la contaminacin con tierra, agua u orina. Los frascos se guardarn en lugares frescos, pues el calor acelera los fenmenos de fermentacin y con fro se pueden destruir los quistes y trofozotos de protozoos (Goldman y Johnson, 1950; Chang, 1955); debern

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etiquetarse con el nombre de la persona, edad, sexo, fecha, de preferencia, hora de expulsin de las heces. Conservacin. Los conservadores pueden ser fsicos o qumicos. Los medios fsicos, son las temperaturas bajas, de 10 C que es la temperatura del refrigerador; se utilizan sobre todo para heces formadas, las cuales incluso pueden llegar a examinarse 24 y hasta 48 horas despus de evacuadas, lo que no sucede con las heces diarreicas, que deben examinarse en un plazo no mayor de una hora y no debern refrigerarse. Los medios qumicos permiten la conservacin de las muestras durante un tiempo mayor, sin correr el riesgo de que las formas parasitarias se deformen o destruyan. En seguida se anotan algunos de los ms usados:

Conservadores y preservadores

Solucin de formalina* al 10 %. Solucin de formalina al 5%. Solucin de merthiolate-yodo-formaldehdo (MIF).

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Fijador de fenol alcohol y formol (PAF)

Prctica No. 1 Microscopa Microunidad de competencia: El alumno comprender los procedimientos experimentales de muestras biolgicas de forma responsable, para su observacin a nivel microscpico siendo cuidadoso. Generalidades: Sirve para ampliar las imgenes de objetos muy pequeos, tiene un sistema de iluminacin para poder visualizar el objeto y de un sistema de lentes para aumentar la imagen. El microscopio es un aparato frecuentemente utilizado en el laboratorio de diagnostico clnico para observar de clulas microorganismos, etc. Uno de los instrumentos ms valiosos para el parasitlogo es el microscopio y continuacin se indicaran algunas reglas simples para mantener los aparatos en buen estado y, por consiguiente que brinden el auxilio necesario con resultados ptimos. La calibracin del microscopio, le permitir hacer mediciones de las estructuras que observe, lo que le facilitar el diferenciar e identificar clulas, parsitos y otras estructuras. La calibracin consiste en la determinar los coeficientes micromtricos para cada uno de los objetivos de manera que cuando se necesitan saber el tamao de una clula, se establezca el nmero de subdivisiones con la escala micromtrica que al multiplicarse por el factor del objetivo se determine el tamao de la misma en micras.

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Material micrmetro ocular cmara de Neubauer

Tcnica: Instructivo para la calibracin del microscopio con el micrmetro ocular: a) descripcin de la escala de la cmara de Neubauer: En la cmara de Neubauer hay cuatro secciones marcadas con una L, donde se cuentan los leucocitos y una zona central donde recuentan los eritrocitos. En la figura 1 se seala el tamao de los diferentes cuadros. El cuadro central de la cmara es la zona de cuenta de eritrocitos, en esta cuadricula mide 1mm (1000 micras como lo indica la figura 1)

Figura 1.

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La cuadricula para cuenta de eritrocitos esta dividida en 5 x 5 cuadros y cada una mide 0.2 mm 200 micras. A su vez cada cuadro est dividido en 4 x 4 cuadros y cada uno mide 0.05 mm 50 micras; a partir de ellos se obtienen los coeficientes micromtricos (C.M). b) DESCRIPCIN DE LA ESCALA DEL MICROMETRO OCULAR La escala del micrmetro ocular tiene 10 divisiones grandes del mismo tamao, de las cuales de la segunda a la sexta presentan 5 subdivisiones iguales. Para medir una estructura, esta se har coincidir dentro de la escala, contabilizando las divisiones grandes como cinco y las pequeas como uno.

Mide 100 micrmetros

DETERMINACIN DE LOS COEFICIENTES MICROMETRCOS Se deben establecer los coeficientes micromtricos de cada objetivo (10X, 40X, y 100X). Colocar el micrmetro ocular en el orificio izquierdo del microscopio, la cmara de Neubauer en la platina, enfocar con el objetivo de 10X y centrar en el campo la cuadrcula de eritrocitos. Hacer coincidir la escala del micrmetro ocular en la lnea media de la cuadricula para hacer cuenta de eritrocitos. Buscar donde una de las divisiones de la escala del micrmetro coincida con el borde de un cuadro de la cmara de Neubauer y establecer los coeficientes micromtricos (C.M)

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MEDICIN DE ESTRUCTURAS MICROSCPICAS Para determinar el tamao de una estructura microscpica se deber hacer coincidir la estructura, en la escala del micrmetro ocular, moviendo la platina. Una vez que coincida el borde izquierdo de la estructura con una lnea, establecer el nmero de subdivisiones que abarca, contabilizando como 5 las que no tienen subdivisiones y como uno cada uno de las mismas. Calcular la medida de la estructura, en micrmetros, multiplicando el nmero de subdivisiones por el coeficiente micromtrico del objetivo correspondiente.

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Cuestionario
1.

Cul es la finalidad de la utilizacin de la micrometra en parasitologa? ______________________________________________________________ ______________________________________________________________

2.

Menciona

ventajas

desventajas

del

uso

de

la

micrometra

______________________________________________________________ ______________________________________________________________
3.

Cmo

calculamos

la

micrometra

del

objetivo

de

inmersin?

______________________________________________________________ ______________________________________________________________ Bibliografa:


1. 2.

http://equipo1.files.wordpress.com/2007/10/dsc00078.jpg http://www.scielo.cl/scielo.php? pid=S071822442005000200002&script=sc_arttext. http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/parasitologia/trematodos/ge neralidades.php

3.

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Prctica No. 2 Examen Directo Microunidad de competencia El alumno aprender a reconocer la morfologa de los protozoos mediante examen directo de una manera responsable. Generalidades: Buscar, principalmente en muestras frescas, la presencia de formas evolutivas mviles de parsitos de tamao microscpico (trofozotos, quistes de protozoos: Entamoeba histolytica, Giardia lamblia, Balantidium coli, etc.; as como larvas o huevos de helmintos: Strongyloides stercoralis, Ancylostoma duodenale, Necator americanus, Trichostrongylus sp., Paragonimus, Fasciola, etc.). Material: Portaobjetos Cubreobjetos Pipetas Pasteur Microscopio compuesto Aplicadores de madera o palillos. La muestra utilizada es tan pequea, que es poco representativa. Reactivos: Cloruro de sodio, agua destilada, yodo cristaloide, yoduro de potasio Soluciones: (ver miscelnea de reactivos)) Solucin salina isotnica Lugol parasitolgico: solucin madre: Solucin de trabajo.

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Tcnica: 1. En un portaobjeto se colocan, separadamente, una gota de solucin salina y otra de lugol. 2. Con el aplicador de madera, se toma una muestra de 1 a 4 mg de heces y se mezcla con la solucin salina. 3. Con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos gruesos. 4. Se coloca el cubreobjetos. 5. Se efecta la misma operacin en la gota del lugol y se observa. Bibliografa:
1. 2.

http://bvs.minsa.gob.pe/archivos/INS/165_NT37.pdf http://www.facmed.unam.mx/dirije/index.php?dir_ver=11 a la enfermedad. Mxico, DF: McGraw-hill Interamericana.

3. Becerri Flores, Romero Cabello (2004). Parasitologa mdica de las molculas 4. Francisco Trujillo Contreras, ngeles Villanueva Yerenas, Miguel Raygoza Anaya (2001). Enfermedades Parasitarias. Guadalajara, jal.: Ediciones Cullar.

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Prctica No. 3 Bsqueda De Parsitos Intestinales Microunidad de competencia: Que el alumno aprenda a identificar los diferentes tipos de morfologa de parsitos intestinales. Por medio de examen directo y en fresco siendo tico y responsable. Generalidades: Grupo de animales que viven a expensas de seres vivos, en cuyo aparato digestivo se alojan y con el que compite por el consumo de las sustancias alimenticias que ingiere el husped. Su tamao va desde ser diminuto (y slo es posible verlos a travs del microscopio), o medir desde centmetros hasta metros. Su presencia en el organismo humano est directamente relacionada con la falta de higiene, tanto personal como al preparar alimentos y las condiciones del lugar donde se consumen. Existen muchos parsitos causantes de afecciones en el ser humano Material:

Materia Biolgico ( Heces, Secreciones) Formaldehdo al 10 % (ver miscelnea de reactivos) Abatelenguas Lugol (ver miscelnea de reactivos) NaCl 0.85 % (ver miscelnea de reactivos) Aplicador de madera Cubreobjetos Portaobjetos Microscopio Laminillas permanentes de las diversas especies.

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Tcnica: Coproparasitoscpico microscpico en fresco: 1. Colocar una gota de solucin NaCl al 0.85%, en un portaobjetos. 2. Con un aplicador obtener aproximadamente 2 mg de la materia fecal y mezclarla en la gota de solucin salina. 3. Hacer una suspensin uniforme y retirar los detritos macroscpicos. 4. Colocar un cubreobjetos y hacer la observacin microscpica inmediatamente con los objetivos 10X y 40X. Coproparasitoscpico microscpico directo: 1. En un portaobjeto se colocan, separadamente, una gota de solucin salina y otra de lugol. 2. Con el aplicador de madera, se toma una muestra de 1 a 4 mg de heces y se mezcla con la solucin salina. 3. Con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos gruesos. 4. Se coloca el cubreobjetos. 5. Se efecta la misma operacin en la gota del lugol y se observa. Resultados de la observacin Microscpica. a) Nombre del parsito__________________________________________________ c) Estado desarrollado _________________________________________________ d) A que rgano (s) sitio (s) invade o parsita ______________________________ e) Menciona que tipo de tcnica se llevo a cabo, especificando si fue en fresco en tincin __________________________________________________________ f) Describe las caractersticas y /o criterios morfolgicos. ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________

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Cuestionario 1. Cul es el examen de laboratorio de eleccin para la bsqueda de huevos, quistes o larvas en heces?: ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________

2. Cul es el examen de laboratorio de eleccin para la bsqueda de trofozotos en heces? ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________

3. Qu entiende por examen coproparasitoscpico cualitativo? ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________

Bibliografa
1. http://74.125.47.132/search?

q=cache:uTJ0VqepWRAJ:www.higiene.edu.uy/cefa/parasito/2007/PROTINTce fahtm.doc+morfologia+de+protozoos+intestinales+de+importancia+MEDICA&c d=12&hl=es&ct=clnk&gl=mx


2. http://www.facmed.unam.mx/dirije/index.php?dir_ver=11

3. Becerri Flores, Romero Cabello (2004). Parasitologa mdica de las molculas a la enfermedad. Mxico, DF: McGraw-hill Interamericana.

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Prctica No.4 Morfologa de los protozoos intestinales Microunidad de competencia: El alumno identificar los protozoos intestinales de importancia medica mediante la observacin de mtodos directos, de una manera tica y responsable. Generalidades: Los protozoarios son microorganismos unicelulares pertenecientes al Reino Protista, subreino Protozoa. Se caracterizan por ser eucariota, pueden reproducirse asexuada o sexuadamente, tienen movilidad variable dependiendo de sus rganos de locomocin. Pueden vivir libremente o actuar como parsitos. Pueden parasitar a distintos animales y a la especie humana. Los parsitos humanos se pueden clasificar taxonmicamente en 4 Phylum basndose en sus caractersticas nucleares, de reproduccin y de locomocin. Segn la clasificacin de la sociedad de protozologos parsitos pertenecen fundamentalmente a tres de 1980, los protozoos Sarcomastigophora, phyla:

apicomplexa, y Cilophora. Los Sarcomastigforos se subdividen, a su vez, en dos grandes subphyla: Mastigophora y Sarcodina, respectivamente los flagelados tisulares intestinales y la amibas. Morfologa: Entamoeba histolytica (amebosis) Trofozotos: es la forma patgena, mide de 20 a 50 m. las cepas patgenas contienen hemates en su interior. Prequiste: tiene un solo ncleo, barras de cromatina con sus extremos romos y una vacuola de glucgeno. Quiste: es la forma infectante, posee de uno a cuatro ncleos

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cuyos cariosomas centrales se observan a veces en las preparaciones en fresco, y siempre en las preparaciones coloreadas. Entamoeba Coli: morfolgicamente es semejante a la Entamoeba histolytica, se diferencia por las caractersticas de la cromatina perinuclear y la posicin excntrica del cariosoma, se presenta como trofozotos, prequiste y quiste. Entamoeba hartmanni: esta especie es semejante en cuanto a las fases que posee a E. histolytica, con excepcin de sus tamao; Entamoeba hartmanni desarrolla trofozotos de 4-10m de dimetro, tiene un citoplasma vacuolado parecido al que muestra Entamoeba coli; el ncleo nico en esta fase muestra un endosoma central y la cromatina perifrica se distribuye de manera homognea. La media de los quistes oscila entre 5-10 m de dimetro, pueden ser vacuolados y mostrar con una tincin permanente cuerpos cromatoides de aspecto baciloide o similares a un grano de arroz. Endolimax nana: es ms pequea que la Entamoeba histolytica, morfolgicamente se destaca porque tanto los Trofozotos como los quistes poseen un ncleo con un cariosoma central muy marcado, y no se observa membrana nuclear en los preparados microscpicos observados en fresco. Material: Materia Biolgico ( Heces, Secreciones, Viales positivo proporcionados por el catedrtico ) Formaldehdo al 10 % (ver miscelnea de reactivos) Abatelenguas Lugol (ver miscelnea de reactivos) NaCl 0.85 % (ver miscelnea de reactivos) Aplicador de madera Cubreobjetos Portaobjetos Microscopio
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Laminillas permanentes de las diversas especies

Tcnica: Coproparasitoscpico microscpico directo: 1. En un portaobjeto se colocan, separadamente, una gota de solucin salina y otra de lugol. 2. Con el aplicador de madera, se toma una muestra de 1 a 4 mg de heces y se mezcla con la solucin salina. 3. Con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos gruesos. 4. Se coloca el cubreobjetos. 5. Se efecta la misma operacin en la gota del lugol y se observa.

Datos del parsito. a) Nombre del parsito _________________________________________________ b) A que grupo taxonmico pertenece _____________________________________ c) Estado desarrollado _________________________________________________ d) A que rgano (s) sitio (s) invade o parsitan ______________________________ e) Menciona que tipo de tcnica se llevo a cabo, especificando si fue en fresco en tincin __________________________________________________________ f) Describe las caractersticas y /o criterios morfolgicos. ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________

Cuestionario
1. Qu caractersticas son importantes para diferenciar Entamoeba histolytica

de Entamoeba hartmanni? ______________________________________________________________ ______________________________________________________________

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2. Qu recursos de laboratorio son esenciales para identificar las amebas

comensales? ______________________________________________________________ ______________________________________________________________


3. Aun cuando Entamoeba coli, Endolimax nana no son amebas patgenas, en

qu radica la relevancia de su hallazgo? ______________________________________________________________ ______________________________________________________________

Bibliografa:
1. 2.

http://www.facmed.unam.mx/dirije/index.php?dir_ver=11 Becerri Flores, Romero Cabello (2004). Parasitologa mdica de las molculas a la enfermedad. Mxico, DF: McGraw-hill Interamericana.

3. Tay Zavala J., Gutirrez Quiroz M., Gracia Yez Y. (2003) Parasitologa Clnica De Craig Editorial Masson Doyma Mxico S. A. Tercera edicin. 4. De Haro Arteaga I., Salazar Schettino P., Cabrera Bravo M. (1995) Diagnostico Morfolgico de las Parasitosis Editorial Mndez Editores. Segunda edicin.

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Prctica No. 5 Morfologa de los protozoarios flagelados intestinales Microunidad de competencia: El alumno identifique las caractersticas morfolgicas del los protozoarios flagelados mediante tcnicas permanentes, efmeras obteniendo as una conciencia social. Generalidades:
Morfologa de Giardia:

Presentar un tamao inferior a 20 m. Carecen de ciertos orgnulos como son las mitocondrias y el aparato de Golgi. nicamente tiene un hospedador (monoxeno), es cosmopolita y tiene dos formas de vida en su ciclo vital: Trofozoto: presenta un tamao en torno a 20 m de longitud y 15 m de ancho con una morfologa piriforme y una simetra bilateral. Proyectada en un plano se asemeja a una pera. Posee 8 flagelos, 2 anteriores, 2 posteriores, 2 ventrales y 2 caudales, cuya funcin es la motilidad celular. En la cara ventral presenta una estructura con forma de disco bilobulado, cuya funcin es permitir la fijacin del parsito a la superficie del epitelio intestinal. En la cara dorsal y coincidiendo en posicin con el disco bilobulado se sitan dos ncleos ovalados con grandes endosomas. A lo largo de la superficie ventral se disponen unos elementos denominados cuerpos mediales, cuya funcin an permanece desconocida. El trofozoto es la forma vegetativa que se alimenta y se reproduce. Quiste: presenta un tamao en torno a 15 m de longitud y 10 m de ancho con una morfologa ovalada. Posee 4 ncleos que siempre aparecen dispuestos en alguno de los polos. No presenta flagelos aunque se pueden apreciar los axonemas flagelares (restos de los flagelos) y los cuerpos mediales duplicados con respecto al trofozoito. La pared es transparente y muy resistente tanto a factores fsicos como qumicos. El quiste es la forma vegetativa infectante y de resistencia.
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Alimentacin por fagocitosis y pinocitosis del contenido intestinal a travs de la superficie dorsal. Reproduccin por divisin binaria longitudinal. Se produce tan rpido que en poco tiempo pueden formarse millones de parsitos. No presentan reproduccin sexual. Material:

Materia Biolgico ( Heces) Formaldehdo al 10 % (ver miscelnea de reactivos) Abatelenguas Lugol (ver miscelnea de reactivos) NaCl 0.85 % (ver miscelnea de reactivos) Aplicador de madera Cubreobjetos Portaobjetos Microscopio

Tcnica: Coproparasitoscpico microscpico directo:


1. En un portaobjeto se colocan, separadamente, una gota de solucin salina y

otra de lugol. 2. Con el aplicador de madera, se toma una muestra de 1 a 4 mg de heces y se mezcla con la solucin salina. 3. Con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos gruesos. 4. Se coloca el cubreobjetos. 5. Se efecta la misma operacin en la gota del lugol y se observa.

Datos del parsito. a) Nombre del parsito _________________________________________________ b) A que grupo taxonmico pertenece _____________________________________
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c) Estado desarrollado ________________________________________________ d) A que rgano (s) sitio (s) invade o parsita ______________________________ e) Menciona que tipo de tcnica se llevo a cabo, especificando si fue en fresco en tincin ___________________________________________________________ f) Describe las caractersticas y /o criterios morfolgicos. ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________

Cuestionario
1. Mencione dos productos biolgicos tiles para realizar el diagnstico de la

giardiosis ______________________________________________________________ ______________________________________________________________

Bibliografa: 1.- http://ciencianet.com.ar/77/vacuna-contra-el-chagas-pero-para-animales-dom-sticos 2.- http://www.facmed.unam.mx/dirije/index.php?dir_ver=11 3.- Becerri Flores, Romero Cabello (2004). Parasitologa mdica de las molculas a la enfermedad. Mxico, DF: McGraw-hill Interamericana.

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Prctica No. 6 Morfologa de Protozoarios Ciliados Intestinales Microunidad de competencia: El alumno aprender a identificar las diferentes estructuras morfolgicas de los ciliados por medio de tcnicas de fijacin de manera cuidadosa y ordenada. Generalidades: Son formas unicelulares, relativamente grandes, con una estructura interna compleja. Hay tres caractersticas que los definen:

Su superficie aparece cubierta de cilios alineados regularmente, con los que se mueven de forma activa y veloz. Tienen dos ncleos, macroncleo y microncleo, este ltimo reservado para la reproduccin sexual, que realizan espordicamente. La mayora realiza la fagocitosis mediante la que se alimentan a travs de una zona especializada, hundida, llamada citostoma, es decir, boca celular.

Morfologa: Balantidium Coli Es el protozoario parastico ms grande en el ser humano. Trofozotos. Tienen un tamao usual de 40-50 m, tiene forma ovoide con la parte anterior afiliada, movilidad rotatoria. Ncleos: 1 largo, macroncleo en forma de rin, 1 pequeo, microncleo esfrico adyacente al macroncleo, el cuerpo esta recubierto de cilios. Se observan vacuolas contrctiles. Quiste: Tamao usual de 50-55m, es esfrico u oval, posee un macroncleo grande visible en preparaciones no teidas. El macroncleo y vacuolas contrctiles visibles en quistes jvenes. En los maduros apariencia granular
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las estructuras internas tienen

Material: Materia Biolgico ( Heces) Formaldehdo al 10 % (ver miscelnea de reactivos) Abatelenguas Lugol (ver miscelnea de reactivos) NaCl 0.85 % (ver miscelnea de reactivos) Aplicador de madera Cubreobjetos Portaobjetos Microscopio Preparaciones fijas de la especies.

Tcnica: Coproparasitoscpico microscpico directo: 1. En un portaobjeto se colocan, separadamente, una gota de solucin salina y otra de lugol. 2. Con el aplicador de madera, se toma una muestra de 1 a 4 mg de heces y se mezcla con la solucin salina. 3. Con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos gruesos. 4. Se coloca el cubreobjetos. 5. Se efecta la misma operacin en la gota del lugol y se observa. Datos del parsito. a) Nombre del parsito _________________________________________________ b) A que grupo taxonmico pertenece ____________________________________ c) Estado desarrollado _________________________________________________ d) A que rgano (s) sitio (s) invade o parsita _______________________________

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e) Menciona que tipo de tcnica se llevo a cabo, especificando si fue en fresco en tincin ___________________________________________________________ f) Describe las caractersticas y /o criterios morfolgicos. ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________ Cuestionario: 1.- Que regin del cuerpo humano invade el Balantidium coli? ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________ 2.- Cul es la va de entrada para el ser humano y cul es la fase infectante del ciliado? ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________ 3.- Cules son las manifestaciones clnicas ms frecuentes de la Balantidiosis? ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________

Bibliografa: 1.- http://www.uprm.edu/biology/profs/bunkley/lab4.htm 2.- http://webpages.ull.es/users/jpinero/Tablas%20e%20imagenes/7.pdf 3.- wapedia.mobi/es/Ciliophora 4.- http://mundo-pecuario.com/tema132/trematodos.html

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Prctica No. 7 Morfologa de los protozoarios sanguneos flagelados Microunidad de competencia: El alumno identifique las caractersticas morfolgicas del los protozoarios flagelados mediante tcnicas permanentes, efmeras obteniendo as una conciencia social. Generalidades: Morfologa de Leishmania Leishmania presenta 2 estados morfolgicos, el promastigote, presente de forma extracelular y ubicado en el intestino de los flebtomos, se caracteriza por tener un cuerpo alargado y un flagelo que les permite el movimiento, sta forma al ser inoculada dentro de los hospederos se transforma en el segundo estado morfolgico conocido como amastigote. Los amastigotes se caracterizan por ser redondeados, sin la presencia del flagelo, de 2 a 4 micras de dimetro con un ncleo y un kinetoplasto (estructura mitocondrial especializada que contiene ADN), sta forma parasitaria es la visualizada en los frotis y biopsias para el diagnstico de la enfermedad. Los amastigotes son exclusivamente intracelulares pero pueden encontrarse en el intersticio en los casos en los que el parsito se replica hasta producir la ruptura de la clula hospedera. Morfologa de Trypanosoma: Presenta tres formas distintas: amastigota, epimastigota y tripomastigota.

Amastigota: esfrico u ovalado, es la forma reproductiva en el interior de las clulas mamferas.


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Epimastigota: Alargada y con el cinetoplasto localizado anteriormente al

ncleo, es la forma reproductiva en el tracto digestivo de los invertebrados y en medios de cultivo.

Tripomastigota: tambin alargado, pero con el cinetoplasto localizado

posteriormente al ncleo. Se encuentra en la sangre de los mamferos y es la forma infectante de ellos. Esta forma no se divide.

Material:

Materia Biolgico ( sangre) Portaobjetos Microscopio colorante de Wright colorante de Giemsa

Tcnica: 1. En un portaobjetos dejar caer 2 gotas de sangre y hacer una extensin, dejar secar al aire. 2.- Teir con solucin colorante de Wright durante 1 a 3 minutos. 3.- Pasado este tiempo lavar con agua destilada. Dejar escurrir y secar al aire. 4.- Observar con objetivos de 10X, 40X y 100X utilizando con ste ltimo aceite de inmersin.

Datos del parsito. a) Nombre del parsito _________________________________________________ b) A que grupo taxonmico pertenece _____________________________________
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c) Estado desarrollado ________________________________________________ d) A que rgano (s) sitio (s) invade o parsita ______________________________ e) Menciona que tipo de tcnica se llevo a cabo, especificando si fue en fresco en tincin ___________________________________________________________ f) Describe las caractersticas y /o criterios morfolgicos. ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________

Cuestionario
2. De qu color se observa el ncleo de los trofozotos de Plasmodium teidos

con el colorante de Giemsa? ______________________________________________________________ ______________________________________________________________


3. Cmo se transmite la Leishmaniosis?

______________________________________________________________ ______________________________________________________________

Bibliografa: 1.- http://ciencianet.com.ar/77/vacuna-contra-el-chagas-pero-para-animales-dom-sticos 2.- http://www.facmed.unam.mx/dirije/index.php?dir_ver=11 3.- Becerri Flores, Romero Cabello (2004). Parasitologa mdica de las molculas a la enfermedad. Mxico, DF: McGraw-hill Interamericana.

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Prctica No. 8 Morfologa de los protozoarios flagelados en cavidades Microunidad de competencia: El alumno identifique las caractersticas morfolgicas del los protozoarios flagelados mediante tcnicas permanentes, efmeras obteniendo as una conciencia social. Generalidades: Morfologa de trichomonas: Trichomonas vaginalis es un protozoo flagelado patgeno, cuyo hbitat es el tracto genitourinario. Otros tricomonnidos, tales como Trichomonas tenax y Pentatrichomonas hominis se han asociado a patologa bucal y respiratoria, e intestinal, respectivamente. Trofozoto: presenta un tamao 10-20 m de longitud y una morfologa piriforme. Posee 5 flagelos: cuatro son anteriores y libres, y el quinto se dirige hacia la parte posterior del cuerpo celular asociado a la superficie celular formando una membrana ondulante que no tiene porcin libre del flagelo. Paralelo a dicha membrana se dispone, en el interior de la clula, un haz de microtbulos denominado costa. El trofozoto es la forma vegetativa que se alimenta, se reproduce e infecta Trofozotos no teidos En productos biolgicos provenientes de exudados vaginales y uretrales, T. vaginalis presenta varias formas. En algunos organismos se encuentra su clsica forma ovoide con movimientos muy rpidos debido a sus flagelos; en individuos pequeo el axostilo sobre sale el cuerpo hacia la zona ms posterior, aunque en la mayora de los queda dentro del citoplasma. La membrana ondulante es ms corta que el cuerpo. En los exmenes en fresco, debido al movimiento de estos parsitos es difcil observar con detalle algunos de los aspectos morfolgicos descritos.

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Trofozoitos con tincin permanente Con hematoxilina tiene un color gris o azul grisceo, miden 15 de largo por 10 m en promedio; tienen formas variables, son ms grandes que las otras especies. Cuatro flagelos anteriores se extienden recorren dos tercios a partir de sus blefaroplastos, los cuales estn del ordenados dentro de la membrana. La membrana ondulante y la costa son cortas, del cuerpo del parsito. El ncleo se encuentra cerca extremo anterior, contiene un nmero de grnulos, generalmente ordenados en

forma de flor. El citoplasma no se observa con facilidad. El citoplasma se encuentra lleno de vacuolas con restos alimenticios. El axostilo puede o no sobresalir el cuerpo del organismo. Material:

Materia Biolgico (Secreciones) NaCl 0.85 % (ver miscelnea de reactivos) Pipeta Pasteur con bulbo Cubreobjetos Portaobjetos Microscopio

Tcnica: 1.- Se coloca a la paciente en posicin ginecolgica. 2.-Introducir con cuidado el espejo vaginal. 3.- Con un hisopo tomar la muestra del fondo de saco posterior. 4.- Depositar la primera toma en un portaobjetos limpio y hacer un extendido. 5.- La segunda toma depositarla en un tubo de ensaye con solucin salina conservando a 37C. 6.- Una vez seco el extendido se procede a teir con el colorante de Wright de 1 a 3 min. 7.- Se observa al microscopio con objetivos de 10X, 40X y 100X agregando a ste ltimo aceite de inmersin.

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8.- Con una pipeta Pasteur se toma una gota del fondo del tubo de ensaye y se deposita en un portaobjetos y se cubre. 9.- Examinar con objetivos de 10X y 40X. 10.Anotar resultados de observacin y hacer dibujos.

Datos del parsito. a) Nombre del parsito _________________________________________________ b) A que grupo taxonmico pertenece _____________________________________ c) Estado desarrollado ________________________________________________ d) A que rgano (s) sitio (s) invade o parsita ______________________________ e) Menciona que tipo de tcnica se llevo a cabo, especificando si fue en fresco en tincin ___________________________________________________________ f) Describe las caractersticas y /o criterios morfolgicos. ____________________________________________________________________

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Prctica No. 9 Morfologa de los Helmintos de importancia mdica Microunidad de competencia: El alumno identifique las caractersticas morfolgicas de los helmintos importancia medica de una manera tica y responsable. Generalidades: El trmino gusano o verme, es amplio; se utiliza en el lenguaje popular para hacer referencia a invertebrados de forma alargada, sin apndices y que se desplazan arrastrndose: lombriz de tierra, larva de mosca, tenias, etc. Helminto: es un nombre general, no taxonmico, utilizado para designar a los gusanos parsitos y a los de vida libre.
Morfologa de los principales grupos de helmintos:

de

Cstodos: Su morfologa se caracteriza por la presencia de un rgano anterior de fijacin, el esclex, provisto de ganchos y ventosas, que le permite fijarse a la mucosa intestinal, y una parte posterior en forma de cinta de aspecto segmentado, denominada estrbilo, formado de una sucesin continua de progltides. Desde la base del esclex, las progltides del estrbilo quedan encadenadas de modo que las ms antiguas o maduras van quedando en la parte posterior del estrbilo. Las progltides cercanas al esclex se denominan inmaduros, ya que crecern paulatinamente en tamao, formando un aparato reproductor masculino y femenino completo, o dos, a medida que van siendo desplazadas por la formacin de nuevos anillos inmaduros. De esta forma, se pueden observar los distintos estados de maduracin dentro del estrbilo, como si hubiramos recogido una serie de fotogramas de su evolucin y puede llegar a medir ms de 5 metros.

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Tremtodos: Los tremtodos se caracterizan por tener un cuerpo no segmentado, con frecuencia en forma de hoja, y revestido por un tegumento no ciliado formado por una cutcula no quitinosa, generalmente gruesa; por debajo de ella existe un epitelio sincitial y, bajo ste, fibras musculares longitudinales y circulares. En las especies anaerobias, endoparsitos del tubo digestivo el glucgeno se usa en un tipo especial de fermentacin que libera CO2 y cidos grasos. Nemtodos: Los nemtodos son gusanos redondos, tienen el cuerpo alargado, cilndrico y no segmentado con simetra bilateral. Con frecuencia, el macho tiene un extremo posterior curvado o helicoidal con espculas copulatorias y, en algunas especies, una bolsa caudal denominada bursa. El extremo anterior del adulto puede tener ganchillos orales, dientes, o placas en la cpsula bucal, que sirven para la unin a tejidos, y pequeas proyecciones de la superficie corporal conocidas como cerdas o papilas, que se cree que son de naturaleza sensitiva. Se denominan fastidios o deiridios segn la porcin del cuerpo donde se localicen
Material:

Materia Biolgico ( Heces, Secreciones, Viales positivo proporcionados por el catedrtico ) Formaldehdo al 10 % (ver miscelnea de reactivos) Abatelenguas Lugol (ver miscelnea de reactivos) NaCl 0.85 % (ver miscelnea de reactivos) Aplicador de madera Cubreobjetos Portaobjetos Microscopio Laminillas permanentes de las diversas especies.

Tcnica:
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Coproparasitoscpico microscpico directo: 1. En un portaobjeto se colocan, separadamente, una gota de solucin salina y otra de lugol. 2. Con el aplicador de madera, se toma una muestra de 1 a 4 mg de heces y se mezcla con la solucin salina. 3. Con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos gruesos. 4. Se coloca el cubreobjetos. 5. Se efecta la misma operacin en la gota del lugol y se observa. Datos del parsito. a) Nombre del parsito _________________________________________________ b) A que grupo taxonmico pertenece ____________________________________ c) Estado desarrollado _________________________________________________ d) A que rgano (s) sitio (s) invade o parsita _______________________________ e) Menciona que tipo de tcnica se llevo a cabo, especificando si fue en fresco en tincin ___________________________________________________________ f) Describe las caractersticas y /o criterios morfolgicos. ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________ Cuestionario 1.- cul es la forma infectante de Fasciola heptica? ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________ 2.- Cmo se realiza el diagnostico de Teniasis? ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________ 3.- Cul es la fase infectiva de scaris lumbricoides para el humano? ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________ Bibliografa:
1.

http://www.facmed.unam.mx/dirije/index.php?dir_ver=11
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2. 3.

http://mundo-pecuario.com/tema132/trematodos.html De Haro Arteaga I.,Salazar Schettino P., Cabrera Bravo M. (1995) Diagnostico Morfolgico de las Parasitosis Editorial Mndez Editores. Segunda
edicin.

Prctica No.10 Morfologa de los Apicomplexa Microunidad: El alumno aprender a identificar las diferentes estructuras morfolgicas de los Apicomplexas mediante tcnicas permanentes de manera ordenada y cuidadosa. Generalidades: Apicomplexas es un extenso grupo protistas caracterizado por la presencia de un orgnulo nico denominado complejo apical. Son unicelulares, forman esporas y exclusivamente parsitos de animales. Las estructuras mviles tales como flagelos o seudpodos estn ausentes excepto en ciertas etapas de los gametos. Algunas enfermedades causadas por estos organismos son:

Malaria (Plasmodium) Babesiosis (Babesia) Coccidiosis, incluyendo:


o o o o

Criptosporidiosis (Cryptosporidium parvum) Ciclosporosis (Cyclospora cayetanensis) Toxoplasmosis (Toxoplasma gondii) Isosporiasis (Isospora belli)

Morfologa

Isospora belli: Apicomplexa: roptrias. Oportunista. Ooquiste: 20-23 m. 23 x13 m. Habita en el intestino delgado. Zoonosis. Contaminacin oro-fecal directa. La fase
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infectante en el ser humano es el ooquiste, producto de la reproduccin sexual del parsito. Isospora belli infecta por va bucal al ser humano cuando ste ingiere alimentos contaminados.

Material:

Material Biolgico Formaldehdo al 10 % (ver miscelnea de reactivos) Abatelenguas Lugol (ver miscelnea de reactivos) NaCl 0.85 % (ver miscelnea de reactivos) Aplicador de madera Cubreobjetos Portaobjetos Microscopio Laminillas permanentes de las diversas especies.

Tcnica: Coproparasitoscpico microscpico directo: 1. En un portaobjeto se colocan, separadamente, una gota de solucin salina y otra de lugol. 2. Con el aplicador de madera, se toma una muestra de 1 a 4 mg de heces y se mezcla con la solucin salina. 3. Con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos gruesos. 4. Se coloca el cubreobjetos. 5. Se efecta la misma operacin en la gota del lugol y se observa. Datos del parsito. a) Nombre del parsito _________________________________________________ b) A que grupo taxonmico pertenece _____________________________________
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c) Estado desarrollado _________________________________________________ d) A que rgano (s) sitio (s) invade o parsita _______________________________ e) Menciona que tipo de tcnica se llevo a cabo, especificando si fue en fresco en tincin ___________________________________________________________ f) Describe las caractersticas y /o criterios morfolgicos. ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________ Cuestionario
1. Cul es la fase Isospora belli en el ser humano?

______________________________________________________________ ______________________________________________________________
2. Cul es la va de infeccin de Isospora belli?

______________________________________________________________ ______________________________________________________________
3. Qu tcnica se emplea para el diagnstico de la Isosporiosis?

______________________________________________________________ ______________________________________________________________

Bibliografa: 1. - http://www.parasitologia.blogcindario.com/2007/05/00001-parasitologia.html - 63k 2.- wapedia.mobi/es/Ciliophora 3.- Becerri Flores, Romero Cabello (2004). Parasitologa mdica de las molculas a la enfermedad. Mxico, DF: McGraw-hill Interamericana. 4. De Haro Arteaga I., Salazar Schettino P., Cabrera Bravo M. (1995) Diagnostico
Morfolgico de las Parasitosis Editorial Mndez Editores. Segunda edicin.

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Prctica No.11 Tinciones permanentes de parsitos Microunidad de competencia: Que el alumno se familiarice con las diferentes tcnicas de tincin de parsitos para poder distinguirlos al microscopio y utilizarlas en el diagnstico de manera tica y responsable. Generalidades: En la mayora de los casos los protozoarios intestinales se pueden observar bien con tinciones temporales, como en el caso de los exmenes directos con lugol, solucin salina y sudn. En algunas ocasiones es necesario teir los parsitos en forma definitiva para obtener preparaciones permanentes; otras veces estas tinciones son necesarias por que se necesita distinguir algunas de sus estructuras celulares, utilizando tinciones especiales permanentes para poder observarse. El inmunodiagnstico puede realizarse recurriendo a las tinciones con anticuerpos marcados con colorantes fluorescentes, permitiendo identificacin ms fcil. Las preparaciones fecales permanentes son hechas por diferentes razones ya que proporcionan informacin sobre el material estudiado. Una buena tcnica de tincin debe reunir los siguientes requisitos:

La coloracin de las estructuras nucleares y citoplasmticas debe ser selectiva. Las soluciones que se utilizan deben ser fciles de preparar
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Deben tener la capacidad de teir las diferentes fases del parsito en la misma muestra Durante su realizacin se deben emplear el menor numero de soluciones El paso en el cual se lleva a cabo diferenciacin debe ser rpido. Que presente una de las tonalidades para facilitar la identificacin de estructuras parasitarias.

Independientemente del mtodo que se elija se deben tener las siguientes precauciones para la obtencin de mejores resultados.

No permitir que la preparacin a teir se seque durante el mtodo de tincin. Todas las soluciones empleadas deben estar perfectamente tapadas para evitar evaporacin Escurrir siempre el portaobjeto antes de introducirlo en la siguiente solucin tocando el extremo por dos segundos con papel absorbente. La solucin de yodo se debe de cambiar de una a tres semanas; pero si al utilizarla se torna plida se remplaza o se le adiciona ms solucin madre lugol.

Cuando se tie un gran nmero de portaobjeto el colorante se va diluyendo, afectando la calidad de la tincin. Cuando se utilice el alcohol etlico absoluto o xilol en la tincin, se deben de mantener en frasco perfectamente cerrado para evitar que se hidraten. Si su resina sinttica se encuentran muy densos, adicione xilol y coloque l frasco a 37% para homogeneizar y utilizar hasta 24 horas

Tcnicas: Preparaciones efmeras. Son fciles rpidas y tiles para poder observar, discriminar y diagnosticar estructuras parasitarias despus de realizar los mtodos coproparasitoscpicos (CPS): directo en fresco, de concentracin/flotacin (faust, Ferreira) o concentracin sedimentacin (Ritchie). La solucin de lugol es de uso generalizado. Lugol Tcnica:
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a) El procedimiento consiste en colocar la muestra de materia fecal sobre un portaobjetos limpio y desengrasado b) Emulsionarla con una gota de lugol, cubrirla con cubreobjetos evitando la formacin de burbujas d aire
c) Observar al microscopio con los objetivos de 10x confirmando la observacin

con el objetivo 40x. d) Anotar resultados de la observacin. Preparaciones permanentes Para fijar trofozoitos flagelados (Trichomonas vaginalis, Giardia lamblia). Tcnica: 1. En una caja petri colocar un triangulo de la varilla de vidrio, y adicione unos cristales de yodo metlico 2. Con la ayuda de una pipeta deposite el material biolgico (secrecin vaginal, sedimento urinario) sobre un portaobjetos sin extenderlo introducir este porta en la caja petri con la gota resuspendida hacia abajo con la finalidad que los vapores de yodo fijen a los protozoarios dejar actuar de 5 a 10 segundos, hasta obtener una mezcla de color mbar homognea. 3. Sacar inmediatamente la preparacin de la caja petri (cuidando de los vapores del yodo ya que fijan la retina del ojo). 4. Inmediatamente despus, adicionar una gota de sangre con EDTA y realizar posteriormente un extendido sanguneo delgado. 5. Dejar secar a temperatura ambiente y posteriormente fijarlo con metanol por un tiempo de 1 minuto. 6. Teir la preparacin con Giemsa o Wrigth segn tcnicas hematolgicas7. Observar al microscopio con aceite de inmersin. 8. Las trichomonas teidas se observan de coloracin rosa tenue con flagelos oscuros.

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9. Se tiene que realizar una dilucin del colorante Giemsa o Wright por cada mililitro de colorante se adicionan 2 ml de agua destilada, se tie por 5 minutos. 10.Se monta con resina sinttica o en su defecto con Entellan de Merck. Merthiolate-yodo-formaldehdo (MIF) El MIF es fcil de hacer. Fija y tie en forma simultnea. Es un buen fijador de quistes, trofozotos, huevo y larvas.

Tcnica 1.- Homogenizar una muestra tamizada de un vial del producto biolgico de protozoo en una relacin de 1 ml de MIF ms 2 ml de la suspensin del vial suspendido en formol al 10%. 2.- se homogeniza el vial, posteriormente se toma con una pipeta de transferencia 100 micro litros aproximadamente en un portaobjetos para despus colocare el cubreobjetos. 3.- se lleva la preparacin al microscopio en seco dbil (10x) para buscar huevos, quistes o larvas 4.- la identificacin se hace por las tonalidades de las propiedades de la eosina que contrasta la morfologa ntida de los quistes, huevos o larvas. Giardia lamblia 1. Poner una gota de material fecal o contenido duodenal. 2. Resuspenda sobre un portaobjetos y extienda la gota. 3. Deje secar a temperatura ambiente 4. Fije con metanol y dejar secar. 5. Tia con Giemsa durante 45 minutos. (2ml de agua de la llave con 1 gota de solucin madre de Giemsa). 6. Montar con Entellan de Merck.

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Alcohol, formaldehdo, cido actico (AFA) El AFA se utiliza para conservar metazoarios (tremtodos y cestodos) Procedimiento para fijar tremtodos Para no daar la morfologa de los metazoarios, stos se manipularn extremando cuidados, y antes de fijarlos hay que someterlos a una fase de relajacin:
a)

Para relajarlos los trematodos se colocan en agua destilada durante 5 a 10 minutos (no dejar ms de 20 minutos debido a que las estructuras internas se destruyen por la lisis osmtica). La incubacin de los tremtodos adultos en agua tambin favorecen la salida de huevo, lo cual es benfico debido a que se observarn mejor las estructuras internas.

b) El espcimen se coloca entre dos portaobjetos en posicin dorsoventral y se presionan con cuidado sin macerarlo. c) Por un extremo de los portaobjetos se seca el exceso de agua con una gasa; por el otro extremo se aade el fijador (AFA) y se deja reposar 10 minutos. d) Los trematodos se separan de los portaobjetos y se colocan en el fijador (AFA) durante 48 horas e) Se transfieren a un recipiente con etanol al 70%; en estas condiciones, los trematodos se pueden almacenar en forma permanente o quedan listos para la tincin. Procedimiento para fijar cestodos Los cestodos, igual que los tremtodos, primero se relajan. a) Se colocan en agua destilada o solucin isotnica a 37C durante 5 a 30 minutos (ms tiempo ocasionar lisis osmtica de varios rganos internos). Otra opcin es utilizar etanol al 5.0% a temperatura ambiente. b) Si el parsito es de un tamao medio, se coloca entre dos portaobjetos en posicin dorsoventral y se presionan con cuidado sin macerarlo. c) Por un extremo de los portaobjetos se seca el exceso de agua con una gasa; por el otro extremo se aade el fijador (AFA) y se deja reposar 30 minutos.

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d) El ejemplar se retira y se coloca en un recipiente con el fijador (AFA) durante 24 horas. e) Los cestodos se transfieren a un recipiente con etanol al 70%. Procedimientos para fijar nemtodos. Para hacer una buena observacin de las estructuras internas de los nematodos, stos necesitan tinciones. Basta con un procedimiento adecuado para aclararlos y fijarlos. a) Debido a que el fijador puede contraer la estructura de los nematodos vivos, stos se colocan durante 30 segundos en cido actico glacial fro y despus en etanol al 70%. b) Los nematos pueden almacenarse de manera permanente en etanol alo 70% con 5% de glicerol (que suaviza y aclara). Si se desean preparaciones fijas, entonces se usa el glicerogel. Tincin tricrmica de Gomori-Wheatley Al principio la tincin de Gomori se utiliz en tejidos y Wheatley la uso en parsitos. Este mtodo es ms rpido que el de hematoxilina frrica. Es til para diferenciar protozoarios intestinales en donde se pueden ver algunos detalles del citoplasma y el ncleo. La tincin se puede hacer en frotis de muestra previamente preservadas en PVA o en frotis con muestras frescas y fijas con Schaudinn. (Para preparacin de reactivos ver anexos) Fundamento Esta tcnica combina un colorante plasmtico (Cromotropo 2R) y un colorante de fibras conectivas (verde luz/azul de anilina) en una solucin de cido fosfotngstico y cido actico glacial. El tratamiento previo de las secciones con solucin de Bouin caliente intensifica la tincin. El cido fosfotngstico favorece la coloracin roja de msculo y citoplasmas. Las fibras de colgeno toman los iones de tungstato formando un complejo al que se une el verde luz. El bao de cido actico hace los colores ms trasparentes pero no altera el balance de color
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Procedimiento a) La preparacin de las laminillas y la fijacin se realizan de manera similar al descrito en la tincin de hematoxilina. b) Para eliminar el exceso de cloruro de mercurio del fijador de Schaudinn, las laminillas se colocan el alcohol 70%-yodo durante un minuto c) Se lavan dos veces con etanol al 70%, durante minutos. d) Las laminillas se colocan en solucin concentrada durante 5 a 10 minutos e) Se transfieren a etanol al 90% con un 1% de cido actico (10-15 segundos) f) Se sumergen dos veces en etanol absoluto. g) Se ponen en etanol absoluto durante 30 segundos h) Se meten en xileno durante un minuto. i) Las preparaciones se cubren con resina o blsamo de Canad, se les coloca un cubre objeto de numero 1 y se dejan secar.

Resultados 1. Fibras musculares, fibrina y citoplasma: rojo. 2. Colgeno, cartlago, mucinas y membranas basales: verde. 3. Ncleos: azul negruzco Nota: los portaobjetos se pueden teir rpidamente pasando por una serie de frascos Coplin que contengan cada uno de los reactivos. Otra estrategia s usar un solo frasco Coplin, al que se le van cambiando los reactivos. Con cualquiera de esas dos maniobras se pueden colorear por lo menos 10 lamillas en un solo tren de tincin. Los protozoarios adquieren diferentes tonalidades. El fondo se ve sobre todo rojo o verde, en tanto que los protozoarios toman un color ms neutro, casi siempre gris o verde plido. Los cuerpos cromatoides y eritrocitos toman tanto el color rojo

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como el colorante verde con lo que se genera un fuerte contraste con el citoplasma. Por lo regular los elementos nucleares se tien de un color ms oscuro. Ziehl-Neelsen La tincin para organismos resistentes al cido y al alcohol se empez a usar en parasitologa cuando hicieron su aparicin organismos oportunista de los gneros Crytosporidium, Cyclospora y otros ms del grupo de los microsporidios. El procedimiento para realizar la tincin es muy sencillo. Procedimiento: a) Sobre un portaobjeto se hace un frotis de heces, de preferencia delgado. b) La muestra se fija con metanol absoluto (la laminilla se cubre con metanol absoluto y se deja que el alcohol se evapore). c) Se cubre la preparacin con un papel filtro (2X3 cm). d) Se aplican de 5 a 7 gotas de carbolfucsina para que el papel filtro que completamente hmedo, luego se calienta la laminilla hasta que produzca vapores (si que la laminilla se seque). Y se sigue aplicando la carbolfucsina durante 3 a 5 minutos. e) Con una pinza de diseccin se retira el papel filtro, se lava con agua y se deja que la laminilla se seque. f) Se decolora con alcohol-cido hasta que no quede color en el lavado. g) Se lava la laminilla con agua de la llave. h) Luego se aplica el azul de metileno durante un minuto. i) Despus se lava y se seca con el aire durante uno a 2 minutos. j) Observar con el objetivo de inmersin (100X) Hematoxilina frrica modificada La hematoxilina frrica es una de las tcnicas de tincin ms aceptada aunque el procedimiento es largo. Para obtener buenas tinciones se recomienda usar el fijador de Schaudinn. Procedimiento:

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a) Hacer un frotis en un portaobjetos y emulsionarlos con solucin salina isotnica: es necesario que la capa quede delgada. Antes de que las heces se sequen. Se fija con schaudinn durante 60 minutos (se puede dejar toda la noche en fijador). b) Par eliminar los cristales del cloruro de mercurio, las preparaciones se colocan en una solucin de etanol al 70%-yodo durante 5 minutos. (la solucin de alcohol-yodo se preparar aadiendo unas gotas de yodo al 3% al etanol al 70%). Posteriormente en etanol al 95% y en etanol al 70% (en ambos pasos durante 5 minutos). Se lavan con agua durante 10 minutos. c) Los portaobjetos se colocan en solucin de trabajo durante 5 minutos. d) Se lavan con agua durante 10 minutos. e) Se deshidratan en etanol al 70%, 95% y en etanol absoluto (cada paso ser en 5 minutos). f) Las laminillas se transfieren a xileno durante 10 minutos. g) Las laminillas se cubren con blsamo de Canad, se coloca un cubreobjetos del numero 1 y deja secar. En todos los pasos hay que evitar que las laminillas se sequen. El blsamo de Canad debe aplicarse cuando el portaobjeto todava esta hmedo de xileno. En el paso de etanol absoluto a xileno se puede formar precipitados calizos; para evitarlos, se recomienda utilizar etanol absoluto y xileno nuevos. Si hay precipitado se deben repetir esos pasos. Tincin de kinyoun para coccidios Fundamento: La observacin de presencia o ausencia de B.A.A.R sin usar calor. Tcnica: 1. Realizar un extendido de heces frescas o conservadas en formaldehido al 10% sobre un portaobjeto y dejar secar al aire durante 20 minutos.
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2. Fijar los extendidos colocando metanol durante 1 minuto y dejar secar al aire. 3. Colocar sobre el extendido un cuarto de papel filtro de manera que lo cubra en su totalidad y agregar el colorante carbol-fucsina, teir durante 5 minutos, (no es necesario calentar). 4. Lavar con agua de la llave. 5. Decolorar con alcohol cido por goteo hasta que no escurra ms colorante y lave ron agua de llave. 6. Cubrir los extendidos con azul de metileno durante un minuto, lavar con agua de la llave y dejar secar al aire. 7. Observar al microscopio con el objetivo de 100x. si se quiere guardar la lmina hacer montaje con resina sinttica. Solucin de azul de metileno de Loeffler: Fundamento: Se utilizan para observar morfologa, agrupacin, elementos celulares, leucocitos, clulas epiteliales, etc. Tcnica Disolver 0.3 gramos de azul de metileno en 30 ml de alcohol etlico al 95% y adicionar 100 ml de hidrxido de Potasio al 0.01%. 1. Extienda la muestra problema y dejar secar 2. Fije con metanol durante 1 minuto 3. Cubra el extendido con un cuadro de papel filtro, de manera que lo cubra en su totalidad. 4. Adicionar en fro la solucin de Fucsina sobre el papel filtro, tia por 5 minutos. 5. Enjuague con agua de la llave. 6. Decolore con alcohol etlico cido por goteo hasta que no escurra colorante.
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7. Enjuague con agua inmediatamente. 8. Adicione azul de metileno de Loeffler durante un minuto. 9. Lave con agua de la llave y deje secar. 10.Observe la precipitacin en objetivo de 100x con aceite de inmersin-

Cuestionario

1. Por qu es necesario usar colorantes para teir a los protozoarios parsitos?

______________________________________________________________ ______________________________________________________________
2. Cul es la diferencia entre tinciones efmeras y tinciones permanentes? En

qu circunstancias se recomienda se cada una de ellas? ______________________________________________________________ ______________________________________________________________ Por qu es necesario fijar las estructuras parasitarias? ______________________________________________________________ ______________________________________________________________ 3. Cul es la solucin fijadora que se utiliza con mayor frecuencia para las preparaciones permanentes del frotis de heces? ______________________________________________________________ ______________________________________________________________

Bibliografa:
1.

http://bvs.minsa.gob.pe/archivos/INS/165_NT37.pdf a la enfermedad. Mxico, DF: McGraw-hill Interamericana.

2. Becerri Flores, Romero Cabello (2004). Parasitologa mdica de las molculas

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3. Francisco Trujillo Contreras, ngeles Villanueva Yerenas, Miguel Raygoza Anaya (2001). Enfermedades Parasitarias. Guadalajara, Jal.: Ediciones Cullar.

ANEXO NO. 1 MISCELNEA DE REACTIVOS: a) Merthiolate-yodo-formaldehdo (MIF) Solucin concentrada: Tintura de merthiolate 200.0ml
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Formaldehdo USP Glicerina Agua destilada Solucin de yodo (lugol): Yoduro de potasio Yodo cristaloide Agua destilada Solucin de trabajo: Solucin concentrada Solucin de yodo

25.0 ml 5.0 ml 250.0 ml 10.0g 5.0g 100.0ml 2.35 ml 0.15 ml

Solucin concentrada. El merthiolate (No.99 Lilly 1:1000) se homogeneiza con el formaldehdo, glicerina y agua. La solucin se almacena en un frasco mbar y puede durar hasta un ao. La solucin de yodo tiene un tiempo de vida corto (menos de una semana) por tal razn se debe preparar slo la necesaria y almacenarla en frascos de color mbar. La solucin de trabajo se prepara en el momento en que se va a preservar la muestra. En un recipiente se mezcla la muestra de matera fecal con la solucin de trabajo, pero conservando una relacin de 1:3-5 (muestra: MIF). b) Hematoxilina frrica modificada Solucin concentrada A Hematoxilina Etanol absoluto 1000.0ml Solucin concentrada B Sulfato ferroso de amonio Sulfato frrico de amonio cido clorhdrico Agua destilada Solucin de trabajo Solucin concentrada A Solucin concentrada B 15ml 15ml 10.0g 10.0g 10.0 ml 1000.0 ml 10.0 g

Las soluciones se almacenan a temperatura ambiente y su vida media es de 6 meses.

La solucin de trabajo tiene vida media de 7 das

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c) Solucin de formalina o formaldehdo al 10 % Reactivos: Formalina Agua de la llave Procedimiento: Se mezclan 10 ml de formalina y 90 ml de agua de la llave, se envasa en frascos con tapn de plstico. La solucin de formalina al 10 %, esta indicada para preservar muestras en la cuales se desconoce su contenido parasitario, se recomienda esta solucin, aunque los huevos de scaris y tricocfalos siguen en desarrollo, esto no importa para su identificacin posterior. Para usar adecuadamente esta solucin, se mezcla una parte de heces con 3 de la misma. Debido que el formol es el conservador ideal para quistes, huevos y larvas, se debe de escoger la parte ms consistente de la muestra. d) Lugol parasitolgico Reactivos: Yodo cristaloide Yoduro de potasio Procedimiento: Se disuelven 10 grs. de yoduro de potasio en 100ml de agua destilada y enseguida se agregan 5 grs. de yodo cristaloide, se agita constantemente para que se disuelva la mayor cantidad posible, se guarda el frasco mbar. No importa que quede exceso de yodo en el fondo; esto se hace para que la solucin permanezca con la concentracin deseada durante mucho tiempo e inclusive se puede reintegrar el volumen con adicin de agua destilada. e) Solucin salina isotnica Reactivos: Agua destilada Cloruro de sodio Procedimiento: Se pesan 8.5 de NaCl, se disuelve en agua destilada y se completa el volumen a 1000 ml en matraz volumtrico. f) Solucin saturada de NaCl (salmuera)
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Reactivos: Cloruro de sodio comercial, resulta ms prctico y econmico utilizar sal de cocina. Agua Procedimiento: En un recipiente de 1 litro, se vierte agua hasta la mitad y se agrega suficiente cloruro de sodio para que se haga una solucin sobre saturada, o sea que quede exceso de la sal sin disolver en el fondo; el sobrenadante es el que se deber utilizar. Para acelerar la disolucin, se puede calentar la mezcla y se deja enfriar; el exceso de la sal cristalizar. g) solucin de alcohol etlico al 70 % Reactivos: Alcohol etlico absoluto Agua Procedimiento: Se disuelven 30 ml de alcohol etlico absoluto en 70 ml de agua de la llave y se guarda en un frasco con tapn. h) hematoxilina concentrada Reactivos: Sulfato doble de aluminio y amonio Alcohol metlico absoluto Glicerina Procedimiento: Primero se va a realizar la solucin acuosa saturada de alumbre de amonio. Se solubiliza el sulfato doble de aluminio y amonio en un recipiente, se pone a calentar y se agrega sal, hasta su disolucin, cuando se enfra la solucin el exceso cristalizara, se utiliza el sobrenadante. Enseguida se pesan 4 grs. de hematoxilina, se disuelven en 25 ml de alcohol y se aaden 400 ml de la solucin de de alumbre de amonio, se deja madurar la solucin con el tapn flojo y a la luz del sol durante 15 das, pasados los cuales se agregan 100 ml de alcohol metlico absoluto y 100 ml de glicerina, ambos qumicamente puros. Se vuelven a guardar, ahora durante un mes expuesta a la luz solar. Antes de usarla deber filtrarse. i) solucin buffer de fosfatos
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Reactivos: Fosfato monopotsico Fosfato disdico Procedimiento: Se pesan 0.49 grs. de fosfato monopotsico y 1.14 de fosfato di sdico, se mezclan y se disuelven hasta completar un volumen de 1000 ml en un matraz volumtrico. j) solucin de trabajo Giemsa Reactivos: Colorante de Giemsa en polvo Glicerina QP. Alcohol metlico Solucin buffer de fosfato Procedimiento: Primero se va a realizar la solucin madre de giemsa. Se pesan 3.8 grs. de giemsa en polvo, se coloca en un mortero de 500 ml, se agregan 250 ml de glicerina, mientras que con el pistilo se mezcla con mucho cuidado hasta que homogeneice y no haya grumos. Se agregan 250 ml de alcohol metlico absoluto libre de acetona. Se dejan 100 ml de alcohol sin incorporar. La mezcla se vaca en un frasco oscuro, con el resto del alcohol se enjuaga el mortero y el pistilo de tal manera que no queden restos del colorante. Despus de haber realizado la solucin madre de giemsa, se mezcla volumen a volumen con la solucin buffer de fosfato. k) Colorante de wright Reactivos: Colorante de wright en polvo Alcohol metlico absoluto, libre de acetona.

Procedimiento: Se pesan 0.60 grs. de colorante de wright y se disuelven en 360 ml de alcohol metlico absoluto y libre de acetona. l) Alcohol, formaldehdo, cido actico (AFA)
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Reactivos Etanol (95%) Formaldehdo Agua destilada cido actico glacial 30.0ml 10.0 ml 50 ml 10.0ml

La mezcla de etanol, formaldehdo y agua destilada dura varios meses. Cuando se agrega el cido actico dura un mes. m) Ziehl-Neelsen Carbolfucsina Solucin A Fucsina bsica Etanol (95%) Solucin B Fenol (cristales fundidos) 5.0g Agua destilada 95.0ml Se mezclan las dos soluciones y antes de su uso se dejan reposar una semana n) Azul de metileno alcalino de Loffler Solucin A Azul de metileno Etanol (95%) Solucin B Hidrxido de potasio (0.10% peso) Se mezclan las dos soluciones. o) Alcohol cido cido clorhdrico (HCl) Etanol (95%9 3.0 ml 97.0 ml 100ml 0.3g 30.0 ml 0.3g 10.0 ml

Primero se vierte el etanol y se le agrega despus el HCl; la reaccin provoca calor.

p) Solucin de formalina al 5%. Se mezclan 5 ml de formalina y 95 ml de agua de la llave, se envasa en frascos con tapn de plstico.

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La solucin de formalina al 10%, est indicada para preservar muestras en las cuales se desconoce su contenido parasitario, se recomienda esta solucin, aunque losa huevos de scaris y tricocfalos siguen en desarrollo, esto no importa para su identificacin posterior. Para usar adecuadamente esta solucin, se mezcla una parte de heces con tres de la misma. Debido a que el formol es el conservador ideal para quistes, huevos y larvas, se debe de escoger la parte ms consistente de la muestra.

q) Fijador de fenol alcohol y formol (PAF) Esta solucin se puede utilizar en lugar del formol; conserva adecuadamente trofozotos y quistes de protozoos, as como huevos y larvas de helmintos. El material previamente con o sin tincin preservado con PAF, se puede utilizar para hacer lecturas inmediatas

temporal, pues si no se utiliza sta, los ncleos se ponen perfectamente de manifiesto para observarse sin otro tipo de manipulacin. En el caso de que se desee hacer tinciones de tipo temporal se recomienda el uso de colorantes como el azul de metileno o el de tionina. Como el primero se encuentra prcticamente en cualquier laboratorio, en este caso se indica la forma de preparacin de la solucin de contraste con este fijador. Si se desea utilizar tionina, se prepara de manera semejante.

ANEXO 2. IMGENES

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