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UNIVERSIDAD DE ORIENTE NCLEO BOLVAR ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE CIENCIAS FISIOLGICAS ASIGNATURA: BIOQUMICA

PRCTICA N 3 ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA AMILASA SALIVAL

PROFESOR: Jess Cedeo

BACHILLERES: Jess Daz CI: 20.804.096 Carlos Flores CI: 24.123.549 Lilithay Reyes CI: 23.543.036 Andrea Marcano CI: 23.900.283 Daniel Garca CI: 24.186.102 Grupo viernes A

Ciudad Bolvar, Febrero de 2013

INTRODUCCIN Las enzimas son polmeros biolgicos que catalizan mltiples reacciones, los cuales hacen posible la vida tal como se conoce. Los catalizadores son sustancias que, sin consumirse en una reaccin, aumentan su velocidad. En las reacciones catalizadas por enzimas, la velocidad de la reaccin se ve afectada por determinados factores, como las concentraciones de la enzima y del sustrato, temperatura, pH, entre otros. Uno de los factores claves que afectan la velocidad de la reaccin catalizada por una enzima es la concentracin de sustrato presente. (Lehninger, 2009) Para una enzima representativa, cuando se incrementa la concentracin de sustrato, Vo aumenta hasta que alcanza un valor mximo Vmax (Murray et al, 2010)

En el cuerpo humano encontramos numerosas enzimas, entre ellas encontramos la enzima que se encuentra en la boca segregada por las glndulas salivales, que es la amilasa salival o tambin llamada ptialina, ella hidroliza los enlaces 1-4 del componente -Amilasa para digerir el glucgeno y almidn con el fin de convertirlos en azucares simples que irn a cumplir su funcin a nivel de las diferentes clulas del cuerpo humano. Gracias a esta enzima se logr realizar las experiencias descritas en el presente informe.

RESULTADOS A. EFECTO DE LA CONCENTRACION DE SUSTRATO SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA.

1,0 ml de Almidn 100ml 1ml 1g Almidn X

X= 0,01g Almidn Transformacin de g mg 1g 1000mg 0,01gX X=10mg Almidn

1,5 Almidn 100ml 1,5ml 1g Almidn X

X= 0,015g Almidn

Transformacin de g mg 1g 1000mg 0,015gX X=15mg Almidn

2.0ml Almidn 100ml 2ml 1g Almidn X

X= 0,02g Almidn Transformacin de g mg 1g 1000mg 0,02gX X=20mg Almidn

2.5ml Almidn 100ml 2,5ml 1g Almidn X

X= 0,025g Almidn Transformacin de g mg 1g 1000mg 0,025gX X=25mg Almidn

Concentraciones almidn (mg)

de Tiempo(minutos)

Absorbancia

1 10 3 6 1 15 3 6 1 20 3 6 1 25 3 6

0,942 0,106 0,103 0,410 0,114 0,104 0,657 0,174 0,109 1,057 0,746 0,351

TUBO CONTROL = 3,214

B. EFECTO DE LA CONCENTRACION DE ENZIMA. Enzima (ml) Tiempo(minutos) 1 0,1 3 6 1 0,3 3 6 1 0,6 3 6 1 1 3 6 TUBO CONTROL = 3,214 Absorbancia 0,980 0,964 0,934 0,900 0,660 0,080 0,800 0,298 0,180 0,335 0,132 0,085

C. INFLUENCIA DE LA VARIACIN DEL PH SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA ENZIMA pH Tiempo(minutos) 1 3 3 6 1 5 3 6 1 7 3 6 1 9 3 6 1 11 3 6 Absorbancia 3,010 3,010 3,010 1,742 0,420 0,312 0,250 0,200 0,115 2,752 2,280 0,890 0,398 0,336 0,477

TUBO CONTROL = 3,214

D. INFLUENCIA DE LA VARIACIN DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA ENZIMA

Temperatura (C)

Tiempo(minutos) 1

Absorbancia 2,900 2,737 2,290 1,216 0,726 0,286 0,684 0,334 0,170 1,450 3,010 3,010

3 6 1

37

3 6 1

40

3 6 1

60

3 6 TUBO CONTROL = 3,214

E.INFLUENCIA DE INDUCTORES E INHIBIDORES E INACTIVADORES SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA ENZIMA Inhibidores/inactivadores NaCl Tiempo 1 3 6 1 3 6 1 3 6 TUBO CONTROL = 3,214 Absorbancia 0,038 0,086 0,133 0,427 0,189 0,262 3,010 3,010 3,010

Cloroformo

H2SO4

DISCUSION DE LOS RESULTADOS A. EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE SUSTRATO SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA: Mientras mayor sea la cantidad de sustrato mayor ser su absorbancia, debido a que si hay una mayor cantidad de almidn en la reaccin y una menor cantidad de amilasa, su velocidad ser muy lenta por lo tanto la amilasa no va a degradar mucho el almidn, tenemos que el control tiene un valor de absorbancia de 3,214, si analizamos el resultado de la grfica llegamos a la conclusin de que, se cumple con la expectativa que se tena, ya que notamos que a diferentes concentraciones de sustrato y la misma concentracin de enzima en los distintos tiempos, se ve una disminucin en la rapidez de la reaccin, es decir, una menor rapidez en la degradacin del almidn mientras se va aumentando la concentracin de este, lo que llevara luego a la saturacin de la enzima y a condiciones saturadas o elevadas de sustrato la reaccin enzimtica se vuelve constante en un punto determinado.

B. EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE ENZIMA EN LA VELOCIDAD DE LA REACCIN ENZIMTICA: Las enzimas son catalizadores extraordinarios. Los aumentos de velocidad conseguidos por las enzimas son de 5 a 17 rdenes de magnitud.. Las enzimas son tambin muy especficas, discriminando fcilmente entre sustratos con estructuras muy similares. (Lehninger, 2005)

Al tener concentraciones elevadas de enzimas se obtiene una grfica en la que la velocidad de reaccin mxima se alcanza y muestra una lnea perpendicular ascendente que nos indica que a altas concentraciones de enzima la velocidad de reaccin va en constante ascenso hasta alcanzar la velocidad mxima de reaccin y volverse constante. En la grfica observamos que a medida que aumente la concentracin de amilasa la absorbancia es ms baja, debido a que mientras ms enzima hay en la reaccin la velocidad se acelera y degrada ms rpido el almidn; lo que quiere decir que se obtuvo el comportamiento esperado, y se nota tambin que a concentraciones muy altas de enzima la velocidad de la reaccin aumenta pero de forma poco notoria, tornndose casi constante.

C. EFECTO DE LA VARIACIN DE PH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA: La grafica ideal con respecto a la concentracin de pH debera mostrar niveles altos en la velocidad de reaccin cuando la enzima trabaja con su pH ideal, por lo que la amilasa salival debera mostrar una velocidad de reaccin elevada a un pH de 7 (pH ideal de la amilasa salival) en la grfica que muestra el efecto de la variacin de pH se aprecia que el punto en el que se da una velocidad de reaccin ms alta es en el pH 7, donde se obtuvieron valores muy bajos de absorbancia, indicando una gran degradacin del almidn, en el pH 3 como se esperaba no hubo casi degradacin por ser un pH extremo, en el pH 5 y 9 se vio una actividad enzimtica normal, pero en el pH 11 tambin se obtuvieron valores bajos de absorbancia, lo que podramos decir que se debi a algn error en la prctica, ya que a ese nivel de pH no deba ser tanta la actividad enzimtica.

D.INFLUENCIA DE LA VARIACIN DE TEMPERATURA EN LA ACCIN ENZIMTICA: El comportamiento ideal de una enzima segn la variacin de temperatura, es tener una velocidad de reaccin elevadas a 37C (si es una enzima del cuerpo humano), desnaturalizarse a ms de 60C, y frenar la reaccin en 0C, segn los resultados y la grfica obtenida, se nota que en las temperaturas 37C y 40C fue donde hubo mayor actividad enzimtica, con respecto a la temperatura de 60 a los minutos 1 y 3 se obtuvo el resultado esperado ya que la degradacin fue casi nula, pero en el minuto 6 se expresa un incremento de la actividad enzimtica que no deba haber ocurrido, y que pude ser causado por algn error en la elaboracin de la prctica, y en la temperatura de 0C se vio una actividad enzimtica baja pero igual ms alta de la esperada.

E. EFECTO DE LA PRESENCIA DE ACTIVADORES, INHIBIDORES E INACTIVADORES SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA ENZIMA: Los inhibidores enzimticos son molculas que interfieren en la catlisis, enlentecindola o deteniendo las reacciones enzimticas. (Lehninger,2005) Segn la grfica se puede deducir que el H2SO4 acta como un inactivador, ya que no se nota ninguna variacin en la absorbancia, en los diferentes tiempos estipulados. Los valores de absorbancia obtenidos al usar cloroformo indican que hubo gran actividad, mayor degradacin del almidn, pero que al pasar los minutos la degradacin aumento muy poco, y con el NaCl al principio se obtuvo un valor de absorbancia extremadamente bajo, por lo que indica una gran actividad enzimtica, y al pasar de los minutos los valores de absorbancia fueron un poco ms altos, pero la diferencia fue mnima.

BIBLIOGRAFA

Lehninger, Albert L.; Nelson, David L.; Cox, Michael M., (2009) Principios de Bioqumica. 5 edicin. Ediciones Omega, S.A.

Murray, R.; Bender, D.; Bothan, K,; Kennelly, P; Rodwell,; V. y A.Weil. (2010). Harper Bioqumica Ilustrada. 28 ed. Editorial McGraw Hill. Mxico, DF. .