INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAO, CINCIA E TECNOLOGIA DE MATO GROSSO CAMPUS CUIAB BELA VISTA CURSO ENGENHARIA DE ALIMENTOS DISCIPLINA:

A: ANLISE INSTRUMENTAL

MTODOS TICOS DE ANLISE

Os mtodos ticos ou m fotomtricos, como diz o fotom nome, usa a luz (foto), para medir algo (mtrico), (m geralmente a concentrao de uma concentra substncia que tem capacidade de interagir com a luz.

MTODOS ESPECTROFOTOMTRICOS

Prof Dra. Elaine de Arruda Oliveira Coringa Prof

MTODOS TICOS DE ANLISE

Espectrofotometria = tcnicas baseadas na t interao da matria com a radiao intera mat radia eletromagntica, na forma de emisso e absoro. eletromagn absor tipos: espectrofotometria no ultravioleta (UV) e visvel (VIS), infravermelho (IR). vis

Espectro eletromagntico eletromagn

MTODOS TICOS DE ANLISE

Radiao eletromagntica = luz, forma de Radia eletromagn energia que tem o comportamento de uma onda e de uma partcula de energia: part difrao, refrao = propriedade difra refra ondulatria ondulat absoro/emisso = propriedade absor corpuscular

MTODOS TICOS DE ANLISE

Espectrofotometria UV,Vis e de fluorescncia medem a radiao absorvida. radia Uso em alimentos: anlise de componentes do alimento que an absorvem na regio UV ou Vis (corantes, (corantes, nutrientes inorgnicos, vitaminas); vitaminas); anlise de molculas orgnicas por an mol fluorescncia (deteco de contaminantes como (detec bactrias e alguns resduos de pesticidas). bact res

MTODOS TICOS DE ANLISE

Espectrofotometria de Infravermelho (IR) Uso em alimentos: grupos funcionais moleculares absorvem luz em do IR identificao positiva (protenas, identifica (prote cidos graxos, umidade) umidade) Anlise quantitativa (FTIR = infrared transform An Fourier)

ESPECTROFOTOMETRIA UV / VIS

Espectrofotometria de Absoro no UV/Vis

SO MTODOS QUANTITATIVOS BASEADOS M NA ABSORO DE LUZ VISVEL (380 A ABSOR VIS 760 nm) E ULTRAVIOLETA (200 a 380 nm) nm) POR UMA AMOSTRA MATERIAL nm)

EMPREGO EM ANLISE DE AN ALIMENTOS

determinao determina

Interao da luz com a matria Intera mat

de aditivos (nitrito, nitrato, sorbatos) sorbatos)

conservantes

determinao de corantes artificiais determina anlise de metais, fluoreto, fsforo an f determinao da determina vitaminas (A, B, C). cafena, cafe carotenides, caroten

O processo de absoro da luz:

1. 2.

3.

Quando a amostra estimulada pela aplicao de uma aplica fonte de radiao eletromagntica externa, muitos radia eletromagn processos so possveis de ocorrer: poss A radiao pode ser espalhada ou refletida. radia Uma parte da radiao incidente pode ser absorvida e radia promover algumas das espcies do analito para um esp estado excitado, como pode ser visto na Figura 24-5b excitado, 24Na espectroscopia de absoro, medimos a absor o, quantidade de luz absorvida em funo do comprimento fun de onda. Cada espcie molecular capaz de absorver suas prprias esp pr frequncias caractersticas da radiao eletromagntica, e caracter radia eletromagn esse processo resulta em um decrscimo da decr intensidade da radiao eletromagntica incidente. radia eletromagn incidente. Dessa forma, a absoro da radiao atenua o feixe de absor radia luz incidente.

PARMETROS DE ANLISE: AN
amostras

Qual a importncia do comprimento de onda?

Cada substncia qumica presente na amostra qu interage com a luz de determinados comprimentos de onda parmetro de anlise instrumental an Absoro ou emisso de luz ocorre em maior Absor intensidade no comprimento de onda da substncia em anlise preciso e exatido do mtodo an m Usado no ESPECTROFOTMETRO e COLORMETRO COLOR

lquidas e lmpidas l l

coloridas: absoro visvel absor vis incolores: absoro no ultravioleta absor comprimento de onda de absoro: absor Visvel Vis 380 760 nm 200 380 nm

Ultravioleta

Comprimento de onda x elemento qumico qu

Elemento Na Li Ca Sr Ba Cor vermelha alaranjada amarela verde azul violeta Comprimento de onda (em nm) 589 671 616 707 624 Intervalo de comprimentos de onda (nm) 780 622 622 597 597 577 577 492 492 455 455 380

Teste de chama emisso de luz de comprimento de onda caracterstico: caracter

ESPECTROFOTOMETRIA
FONTE DE LUZ

MTODOS TICOS DE ABSORO DE LUZ ABSOR

ABSORO X CONCENTRAO ABSOR CONCENTRA

LEI DE BEER-LAMBERT BEERQuando a luz absorvida pela substncia (AMOSTRA) a intensidade do feixe de luz diminui. Essa diminuio diminui proporcional Concentrao da soluo. Concentra solu DETECTOR DE LUZ AMOSTRA ABSORVENTE

LEI DE BEER-LAMBERT BEERLuz incidente I0 SOLUO SOLU AMOSTRA C (mol/L) Luz emergente I1

LEI DE BEER-LAMBERT BEERA Figura mostra a atenuao de um feixe paralelo de radiao monocromtica quando este passa por uma soluo absorvente de espessura de l cm e de concentrao igual a c mols por litro. Em virtude das interaes entre os ftons e as partculas absorventes, a potncia radiante do feixe decresce de Io a I1. I1 = luz transmitida = TRANSMITNCIA Inverso da Transmitncia = ABSORBNCIA (luz absorvida pela amostra)

Lei de Beer-Lambert Beer TRANSMITNCIA = qtde. de luz que passou pela amostra (%T) escala porcentual (0-100%) (0 ABSORBNCIA = qtde. de luz absorvida pela amostra (A) escala logartmica (0 2) logar

LEI DE BEER-LAMBERT BEER-

C A T

C A T

A = - log (T/100)

LEI DE BEER: padres de Fe+2 para anlise espectrofotomtrica, com concentraes variando de 1 mg/L (esquerda) a 10 mg/L (direita). A absorbncia da soluo evidenciada pela intensidade da cor, que proporcional concentrao do ferro em soluo.

Proporcionalidade Cor x Concentrao Concentra

Importncia da Transmitncia: como percebemos a cor de uma soluo solu

Por que uma Soluo Vermelha Vermelha? Solu

Porque transmite a radiao vermelha: radia

Em geral, a radiao empregada em uma anlise radia an colorimtrica deve ser a cor complementar da colorim soluo do analito solu

Limitaes da Lei de Beer: Limita Beer:

Desvios qumicos: qu A lei de Beer descreve o comportamento da absoro somente para solues diludas (at 0,01 absor solu dilu (at mol/L); desvios da lei de Beer aparecem quando a espcie esp absorvente sofre associao, dissociao ou reao associa dissocia rea com o solvente para gerar produtos que absorvem de forma diferente do analito.

Limitaes da Lei de Beer: Limita Beer:

Desvios instrumentais: Radiao policromtica: A lei de Beer se aplica Radia policrom tica: estritamente somente quando as medidas forem feitas com a radiao monocromtica. radia monocrom Correo: instrumentos com maior preciso na Corre seleo do comprimento de onda. sele

INSTRUMENTAO

LEITURA INSTRUMENTAL
ESPECTROFOTMETRO / COLORMETRO: COLOR Aparelho usado para medir absoro de luz por uma absor soluo na regio do Visvel e Ultravioleta; solu Vis ESCALAS DE LEITURA: % Transmitncia (T) - 0 a 100% Absorbncia (A) - 0 a 2 (adimensional)

Espectrofotmetro de Absoro Absor UV/Vis:

Muitos instrumentos espectroscpicos para uso nas regies espectrosc do UV/visvel e IV apresentam cinco componentes: UV/vis uma fonte estvel de energia radiante; est um seletor de comprimento de onda que isola uma regio limitada do espectro para a medida; um ou mais recipientes para a amostra; um detector de radiao, o qual converte a energia radiao, radiante para um sinal eltrico mensurvel; el mensur uma unidade de processamento e de leitura do sinal, sinal, geralmente constituda por um circuito eletrnico e, nos constitu instrumentos modernos, por um computador.

Espectrofotmetro de Absoro Absor UV/Vis:

MODO DE OPERAO: OPERA
A luz vinda de uma fonte contnua passa por um cont monocromador que seleciona uma estreita faixa de comprimento de onda, passa pela amostra contida na cubeta de comprimento b e a intensidade de luz transmitida medida num detector. detector.

Detector

Monocromador

cubeta

lmpada

1. Fonte de radiao lmpadas: radia

Fontes so lmpadas que emitem feixes de luz na regio do espectro visvel, ultravioleta e vis infravermelho. Tipos: Fonte de radiao UV: lmpada de H2 D2 Xe2. radia UV: Emitem radiao na faixa de 180 a 350 nm. radia Fonte de radiao VIS: lmpada de W. Emitem radia VIS: W. radiao na faixa de 350 a 2.500 nm. radia

1. Fonte de radiao lmpadas: radia

2. Seletor de comprimento de onda monocromador:

Monocromador: Selecionam bandas mais Monocromador: estreitas de comprimentos onda atravs da atrav disperso da luz por um elemento de disperso da luz: prisma tico rede (grade) de difrao. difra

2. Seletor de comprimento de onda monocromador:

3. Recipiente para amostras:

CUBETA DE ABSORO: ABSOR
Recipientes para conter a amostra, os quais so geralmente denominados clulas ou cubetas, devem ter janelas que sejam transparentes na regio espectral de interesse b = caminho tico

Tipos: De vidro para operar nos comprimentos de onda de 340 a 1.000 nm (visvel); (vis De quartzo para operar em comprimentos de onda mais baixos (at 185 nm, UV) (at UV)

4. Detector:
Para a obteno da informao obten informa espectroscpica, a potncia radiante espectrosc transmitida, fluorescente ou emitida deve ser detectada de alguma forma e convertida em uma quantidade mensurvel. mensur Um detector um dispositivo que indica a existncia de algum fenmeno fsico e o f transforma em um sinal eltrico (leitura). el

CALIBRAO CALIBRA

CALIBRAO CALIBRA
ABSORO COM O BRANCO ABSOR BRANCO - Com gua destilada: 1 CALIBRAO CALIBRA

Operao do instrumento:

leitura em A

= zero

leitura em %T = 100
CURVA DE CALIBRAO da substncia CALIBRA 2 CALIBRAO CALIBRA

- Com no mnimo 5 solues padro da substncia m solu -Construo da curva de calibrao no EXCEL o obteno da Constru calibra obten equao da reta equa -Uso da equao da reta para determinao da Ca (x) equa determina

Operao do instrumento:

INTERFERENTES NA ANLISE AN ESPECTROFOTOMTRICA ESPECTROFOTOM

Quanto ao mtodo: m
Proporcionalidade entre COR e CONCENTRAO CONCENTRA (visvel) (vis Estabilidade da cor Limpidez da soluo solu Diluio adequada (amostra = padro) Dilui diluio (f = Vsolvente/Vsoluo) dilui Vsolvente/ Vsolu o) fator de

INTERFERENTES NA ANLISE AN ESPECTROFOTOMTRICA ESPECTROFOTOM Quanto ao instrumento:

Vida til da fonte de luz Comprimento de onda ajustado Calibrao correta (1 - soluo branco e 2 Calibra (1 solu branco 2 padro) padro Curva de calibrao pr-preparada para cada tipo calibra pr de anlise an Cubetas impecveis impec -

DETERMINAO DA DETERMINA CONCENTRAO DA AMOSTRA CONCENTRA

1. Comparao com uma soluo padro, Compara solu padro, usando a equao (Fator de Calibrao): equa (Fator Calibrao): Ca = Aa . Cp Ap
Ca = concentrao da amostra (?) concentra Aa = absorbncia da amostra Cp = concentrao da soluo padro concentra solu Ap = absorbncia da soluo padro solu

Exemplo Fator de calibrao: calibra

Determine a concentrao de uma substncia concentra na amostra (Aamostra = 0,90) atravs do uso de (A atrav uma soluo padro, cujos dados foram: solu Apadro = 0,73 Cpadro = 0,00046 mol/L

2. Pela Curva de Calibrao: mnimo 5 Calibra solues padro uso da EQUAO DA solu EQUA RETA obtida pelo EXCEL (y = ax+b) ax+b)

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Exemplo Curva de calibrao: calibra

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