Prcticas de Qumica Aplicada V1.

7 Grado en Nutricin humana y diettica

Curso 2011-2012

PRACTICA 1 Determinacin por espectrofotometra de la concentracin de carbohidratos en una muestra alimentaria.

FUNDAMENTO TERICO
El trmino espectrofotometra se refiere al uso de la luz para medir las concentraciones de sustancias qumicas. Cuando una molcula absorbe un fotn, su energa se incrementa. Se dice que pasa a un estado excitado. Si por el contrario emite un fotn, su energa disminuye. El estado de menor energa de una molcula se denomina estado basal o fundamental. En la siguiente figura se describe un esquema bsico de un espectrofotmetro:
Fuente de luz Monocromador (Seleccin de longitud de onda) Celda con el analito Detector de luz

Po

Una fuente de luz se hace pasar por un monocromador. ste permite seleccionar un haz de luz con una nica longitud de onda. Este haz de luz monocromtica incide sobre una celda de ancho b que contiene la solucin con el analito. Si la solucin absorbe la luz, la potencia radiante incidente (Po) (1) del haz de luz disminuye al emerger de la celda. Los valores de la potencia radiante emergente (P) tienen que cumplir necesariamente la siguiente relacin:

P Po
(1) La potencia radiante se define como energa por unidad de tiempo y por unidad de rea o seccin. - Magnitudes en Espectrofotometra La transmitancia se define de la siguiente forma: P T = PO En tanto, la absorbancia se define como:
A = log T = log Po P

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Cuando no se absorbe luz, P = Po y por lo tanto A = 0. Cuando se absorbe 90 % del haz de luz, 10 % de ste se transmite, por lo que P = Po / 10 y A = 1. - Ley de Beer

A = bc
Donde: A es la absorbancia (magnitud adimensional) es un coeficiente de proporcionalidad denominado coeficiente de extincin molar. Indica la absorbancia de una determinada sustancia a una longitud de onda dada y se expresa en M-1. cm-1. b es el ancho o espesor de la celda donde se deposita la muestra y se expresa en cm. c es la concentracin expresada en moles / Litro (M) La ley de Beer establece que la absorbancia es proporcional a la concentracin de las especies absorbentes. Dicha ley se verifica muy bien en un rango definido de concentraciones ( 0.01 M). Las desviaciones aparentes de la ley de Beer en soluciones ms concentradas pueden atribuirse a cambios en las propiedades de las especies absorbentes de la solucin. Conforme una solucin se vuelve ms concentrada, las molculas de soluto interactan entre s debido a su proximidad, modificando sus propiedades de absorber la luz. De ello resulta que la grfica de Absorbancia en funcin de la concentracin pierde su linealidad. - Carbohidratos en mostos y reaccin de color Los hidratos de carbono en los mostos se presentan principalmente en forma de azcares (glucosa y fructosa). Desde el punto de vista qumico, la glucosa y fructosa son monosacridos. La reaccin de color para medir la concentracin de carbohidratos solubles por espectrofotometra se basa en la utilizacin de un compuesto llamado antrona que se disuelve en cido sulfrico concentrado. El medio cido hidroliza el enlace glicosdico de los oligosacridos y los monosacridos resultantes reaccionan con la antrona (estructura al margen) produciendo un color verde azulado.

PROTOCOLO EXPERIMENTAL
AVISO IMPORTANTE: NO SE DEBE PIPETEAR NUNCA CON LA BOCA, SE DEBE USAR SIEMPRE EL PIPETEADOR ADECUADO Y MANTENER LAS PIPETAS LIMPIAS

- Preparacin del reactivo Antrona-Acido Sulfrico. Disolver 0.2 g de Antrona en 100 mL de Acido Sulfrico 96%. El reactivo sirve para 3-4 das conservndolo a 0C y en botella de color topacio. ESTE REACTIVO YA EST PREPARADO Y DEBE SER SOLICITADO AL PROFESOR
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- Preparacin de la curva de calibracin Se preparan soluciones patrn realizando diluciones seriadas de una solucin madre de glucosa de 200 mg/L utilizando tubos de vidrio y preparando un volumen mnimo aproximado de 3 mL de cada una. Las soluciones patrn que se obtendrn tendrn las siguientes concentraciones: - 100 mg/L - 75 mg/L EL DISOLVENTE ES AGUA DESIONIZADA (BOTELLA DE VIDRIO) - 50 mg/L Y ES PREFERIBLE NO INTRODUCIR LA PIPETA DIRECTAMENTE - 25 mg/L EN LA BOTELLA Y USAR UN VASO DE PRECIPITADOS - 10 mg/L MEZCLAR BIEN POR AGITACIN CADA TUBO ANTES DE USAR IMPORTANTE: LA PREPARACIN DE LAS SOLUCIONES PATRN DEBE REALIZARSE CON MUCHA ATENCIN!!

- Preparacin de la solucin problema Se preparan dos diluciones de un volumen mnimo de 5 mL de la solucin problema (mosto) en tubo de ensayo usando agua desionizada como disolvente. Las diluciones finales son 1/10000 y 1/20000 y se preparan haciendo diluciones seriadas (1/10 1/100 1/1000 1/10000 1/20000). - Determinacin de la concentracin de azcares solubles en mosto de uva 1. Se rotulan (del 1 al 10) los tubos de vidrio que se utilizarn para medir la curva de calibracin y la muestra problema. Cada una de las soluciones patrn (incluido el blanco) se har por uniplicado y las dos muestras problema diluidas se harn por duplicado. Fjese en la tabla de la pgina siguiente. 2. Se agrega 1.00 mL de solucin patrn al tubo correspondiente, pudiendo emplearse la misma pipeta en cada tubo. 1.00 mL de agua en el caso del blanco. 3. Se agrega 1.00 mL de muestra problema a los tubos correspondientes, pudiendo emplearse la misma pipeta en cada tubo pero no se puede emplear la misma pipeta usada en la solucin patrn. A PARTIR DE AHORA ES IMPRESCINDIBLE EL USO DE GUANTES DE LATEX. 4. Se agregan a cada tubo 2.00 mL del reactivo de color (antrona H2SO4) situado en una botella de color topacio para preservarlo de la luz. 5. Se agita con el agitador de tubos para homogeneizar el reactivo de color (que es muy viscoso) y la muestra. ATENCIN: HAY QUE SUJETAR FIRMEMENTE EL TUBO PARA QUE NO SE SALGA EL LQUIDO (RECUERDE CONTIENE CIDO SULFRICO) 6. Se deja reposar 2 min en un bao de agua fra. 7. Se incuba a 100 C durante 10 min en un bao termostatizado. 8. Se espera hasta que los tubos alcancen la temperatura ambiente en el bao de agua fra (5 min) y se vierten aproximadamente 2 mL en las cubetas del espectrofotmetro. 9. Se mide la absorbancia a 625 nm (zona visible) en el espectrofotmetro haciendo el cero previamente con el blanco (tubo 10) y anote el resultado. 10. Muestre los valores al profesor y lave todo el material enjuagndolo con agua destilada.
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1 2 3 4 5 6y7 8y9 10

Patrn 1 Patrn 2 Patrn 3 Patrn 4 Patrn 5 Muestra 1 Muestra 2 Blanco

1.00 mL sol. Patrn 100 mg/L 1.00 mL sol. Patrn 75 mg/L 1.00 mL sol. Patrn 50 mg/L 1.00 mL sol. Patrn 25 mg/L 1.00 mL sol. Patrn 10 mg/L 1.00 mL solucin Problema diluida (1/10000) 1.00 mL solucin Problema diluida (1/20000) 1.00 mL Agua

2 mL Antrona H2SO4 2 mL Antrona H2SO4 2 mL Antrona H2SO4 2 mL Antrona H2SO4 2 mL Antrona H2SO4 2 mL Antrona H2SO4 2 mL Antrona H2SO4 2 mL Antrona H2SO4

- Clculos 1. Tabule los datos de concentracin (mg de carbohidrato/L) vs Absorbancia (A) en la tabla inferior. (Indique siempre las unidades pertinentes). 2. Dibuje la grfica Absorbancia en funcin de la Concentracin (mg/L) de la solucin patrn (colocando la variable independiente en las abscisas y la dependiente en las ordenadas). 3. Ajuste a la mejor recta posible manualmente o mejor por el mtodo de los mnimos cuadrados con calculadora. 4. Interpole la concentracin en mg/L de los valores de la Absorbancia de las muestras problema. 5. Multiplique el resultado por el factor de dilucin de las muestras problema y haga la media (el factor de dilucin es el inverso de la dilucin). 6. Complete el recuadro inferior y exponga el resultado en unidades de porcentaje Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Solucin Patrn 1 Patrn 2 Patrn 3 Patrn 4 Patrn 5 Muestra 1 Muestra 1 Muestra 2 Muestra 2 Concentracin 100 mg/L 75 mg/L 50 mg/L 25 mg/L 10 mg/L ? ? ? ? MEDIA Concentracin de carbohidratos totales en el mosto = = Concentracin de carbohidratos terica
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Absorbancia

Concentracin [ ] [ ] x factor de dilucin ---------------------------------------------------

g/L % (p/v) % (p/v)

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PRACTICA 2 Determinacin de la concentracin de protenas en leche por espectrofotometra mediante el mtodo de Biuret
FUNDAMENTO TERICO
El objetivo experimental es medir la absorcin de luz por muestras problema para determinar la cantidad de protena contenida en una muestra de leche. Para ello se utilizar un mtodo colorimtrico cuyo fundamento terico est explicado en la prctica 1. - Protenas en la leche y reaccin de color La Casena es la principal protena de la leche y se encuentra dispersa como un gran nmero de partculas slidas tan pequeas que no sedimentan, y permanecen en suspensin. Estas partculas se llaman micelas y la dispersin de las mismas en la leche se llama suspensin coloidal. La reaccin de color para medir la concentracin de protenas solubles por espectrofotometra se basa en la formacin de complejos entre el in cprico y dos cadenas polipeptdicas contiguas que tengan al menos dos enlaces peptdicos sucesivos. El reactivo del Biuret lleva sulfato de Cobre(II) y sosa, y el Cu, en un medio fuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptdicos formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentracin de protenas. Esta reaccin la producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptdico (- CO- NH -)que se destruye al liberarse los aminocidos. Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada biuret, de frmula: que, en contacto con una solucin de sulfato cprico diluida, da una coloracin violeta caracterstica.

PROTOCOLO EXPERIMENTAL
AVISO IMPORTANTE: NO SE DEBE PIPETEAR NUNCA CON LA BOCA, SE DEBE USAR SIEMPRE EL PIPETEADOR ADECUADO Y MANTENER LAS PIPETAS LIMPIAS

- Preparacin de la curva de calibracin Se preparan soluciones patrn realizando diluciones seriadas de una solucin madre, ya preparada, de la protena albmina de suero bovina (BSA) de 10 mg/mL utilizando tubos de vidrio y preparando un volumen mnimo aproximado de 5 mL de cada una. 5

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Las soluciones patrn que se obtendrn tendrn las siguientes concentraciones: - 5 mg/mL - 3 mg/mL EL DISOLVENTE ES AGUA DESIONIZADA (BOTELLA DE VIDRIO) - 2 mg/mL Y ES PREFERIBLE NO INTRODUCIR LA PIPETA - 1 mg/mL DIRECTAMENTE EN LA BOTELLA MEZCLAR BIEN POR AGITACIN CADA TUBO ANTES DE USAR - 0.5 mg/mL IMPORTANTE: LA PREPARACIN DE LAS SOLUCIONES PATRN DEBE REALIZARSE CON MUCHA ATENCIN!!

- Preparacin del reactivo de Biuret Se preparan, en un tubo de plstico de 50 mL con tapn azul, 22 mL del reactivo diluyendo el reactivo de Biuret comercial con NaOH al 10% (p/v) en una relacin de volmenes: 3 de Biuret ms 2.5 volmenes de NaOH. Mezclar bien con agitacin. - Preparacin de la solucin problema Se preparan dos diluciones de aproximadamente 10 mL de la solucin problema (leche) en tubo de ensayo usando agua desionizada como disolvente. Las diluciones finales son 1/10 y 1/20 y se preparan haciendo diluciones seriadas. - Determinacin de la concentracin de protenas totales en leche 1.- Se rotulan (del 1 al 10) los tubos de vidrio que se utilizarn para medir la curva de calibracin y la muestra problema. Cada una de las soluciones patrn (incluido el blanco) se har por uniplicado mientras que las muestras problema diluidas se harn por duplicado. Fjese en la tabla de la pgina siguiente. 2.- Se agregan 2.00 mL de solucin patrn al tubo correspondiente, pudiendo emplearse la misma pipeta en cada tubo. 2.00 mL de agua en el caso del blanco. 3.- Se agregan 2.00 mL de muestra problema a los tubos correspondientes, pudiendo emplearse la misma pipeta en cada tubo pero no se puede emplear la misma pipeta usada en la solucin patrn. 4.- Se agregan a cada tubo 2 mL del reactivo de Biuret (sulfato de Cobre(II)-NaOH). 5.- Se mezcla con el agitador de tubos para homogeneizar el reactivo de color y la muestra. ATENCIN: HAY QUE SUJETAR FIRMEMENTE EL TUBO PARA QUE NO SE SALGA EL LQUIDO (RECUERDA CONTIENE HIDRXIDO SDICO) NO HACE FALTA USAR GUANTES DE LATEX 6.- Se dejan reposar los tubos 20 minutos a temperatura ambiente para desarrollar el color. 7.- Se vierten aproximadamente 2 mL en las cubetas de plstico de espectrofotmetro. 8.- Se mide la absorbancia a 540 nm (zona visible) en el espectrofotmetro haciendo el cero previamente con el blanco (tubo 10) y anotando el resultado. 9.- Muestre los valores al profesor y lave todo el material enjuagndolo con agua destilada.
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1 2 3 4 5 6y7 8y9 10 Patrn 1 Patrn 2 Patrn 3 Patrn 4 Patrn 5 Muestra 1 Muestra 2 Blanco 2.00 mL sol. Patrn 5 mg/mL 2.00 mL sol. Patrn 3 mg/mL 2.00 mL sol. Patrn 2 mg/mL 2.00 mL sol. Patrn 1 mg/mL 2.00 mL sol. Patrn 0,5 mg/mL 2.00 mL solucin Problema diluida (1/10) 2.00 mL solucin Problema diluida (1/20) 2.00 mL Agua

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2 mL Reactivo de Biuret-NaOH 2 mL Reactivo de Biuret-NaOH 2 mL Reactivo de Biuret-NaOH 2 mL Reactivo de Biuret-NaOH 2 mL Reactivo de Biuret-NaOH 2 mL Reactivo de Biuret-NaOH 2 mL Reactivo de Biuret-NaOH 2 mL Reactivo de Biuret-NaOH

- Clculos 1.- Tabule los datos de concentracin (mg de protena/mL) vs Absorbancia (A) en la tabla inferior. (Indique siempre las unidades pertinentes). 2.- Dibuje la grfica: Absorbancia en funcin de la Concentracin (mg/mL) de la solucin patrn (colocando la variable independiente en las abscisas y la dependiente en las ordenadas). 3.- Ajuste a la mejor recta posible manualmente o mejor por el mtodo de los mnimos cuadrados con calculadora. 4.- Interpole la concentracin en mg/mL de los valores de la Absorbancia de las muestras problema. 5.- Multiplique el resultado por el factor de dilucin de las muestras problema y haga la media (el factor de dilucin es el inverso de la dilucin). 6.- Complete el recuadro inferior y exponga el resultado en unidades de porcentaje. Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Solucin Patrn 1 Patrn 2 Patrn 3 Patrn 4 Patrn 5 Muestra 1 Muestra 1 Muestra 2 Muestra 2 Concentracin Absorbancia Concentracin [ ] [ ] x factor de dilucin 5 mg/mL 3 mg/mL 2 mg/mL 1 mg/mL 0,5 mg/mL ? ? ? ? MEDIA ---------------------------------------------------

Concentracin de Protena total en la leche

= =

g/L % (p/v) % (p/v)

7 Concentracin de Protena indicada en el bote =

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PRACTICA 3 Determinacin de la capacidad amortiguadora de un tampn

FUNDAMENTO TERICO
Una disolucin reguladora, buffer, amortiguadora o tampn, es aquella cuyo pH se mantiene constante, a pesar del agregado de una pequea cantidad de cido o base. Tanto para sistemas qumicos como biolgicos, la regulacin del pH es de capital importancia. Por ejemplo, en algunos sistemas qumicos, es necesario mantener el pH constante para que una reaccin pueda llevarse a cabo. En Electroqumica, los potenciales de electrodo y la presencia de especies oxidadas o reducidas de algunos metales es dependiente del pH y, por ende, se observan cambios de potencial. De esta forma, en algunas ocasiones, para asegurar la presencia de un metal bajo un determinado estado redox o forma qumica, es necesario mantener el pH dentro de un rango. En los sistemas biolgicos es fundamental el mantenimiento del pH dentro de un rango, de ello depende el ptimo funcionamiento de algunas enzimas y el balance de la presin osmtica. - Cmo funciona un sistema tampn? Para comprender la forma en que un sistema tampn es capaz de mantener constante el pH, analizaremos el caso del sistema cido actico/acetato de sodio. La constante de disociacin del cido actico (Ka) se puede expresar como: Ka = _[H+] [Ac]_ [HAc] (1) [H+] = Ka _[HAc]_ [Ac] (2)

Tomando el logaritmo negativo a ambos lados de la igualdad : -log[H+] = -logKa + log[Ac]/[HAc] Que por definicin, se puede expresar como : pH = pKa + log [Ac]/[HAc] (4) (3)

La ecuacin (4) se conoce como ECUACIN DE HENDERSON-HASSELBACH. De acuerdo con la misma, el pH de una disolucin que contenga un cido y su base conjugada, depender del pKa del cido y del cociente de las concentraciones de ambas especies. Si ambas especies se encuentran en la misma concentracin, la adicin de un cido o una base producir poco cambio en el valor del pH. Veamos un ejemplo numrico. Si las concentraciones del cido y su base son de 1M, el pH de esta disolucin, de acuerdo con la ecuacin (4) ser: pH = pKa = 4.76

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Ahora supongamos que se agregan 0.10 moles de HCl. Los H+ del mismo reaccionarn con la base presente de acuerdo con : Ac + H+ HAc Observar que se ha despreciado el efecto de la disociacin del HAc. De esta manera, las concentraciones para el cido y su base sern : [HAc] = 1.0 + 0.1 = 1.1 M [Ac] = 1.0 0.1 = 0.9 M Lo que sustituyendo en la ecuacin (4), nos da un valor de pH de 4.67. Es decir, que se produce un cambio de tan slo 0.10 unidades de pH. Ahora supongamos que son 0.10 moles de NaOH los que se agregan. En este caso, se producir la neutralizacin de una cantidad equivalente del cido, de acuerdo con : HAc + OH Ac + H2O Por tanto, las concentraciones del cido y su base conjugada sern : [HAc] = 1.0 - 0.1 = 0.9 M [Ac] = 1.0 + 0.1 = 1.1 M Con lo que en este caso, el pH ser de 4.84, es decir, se produce un cambio de menos de 0.1 unidades de pH. Para comprender mejor el efecto de un sistema tampn en la regulacin del pH, basta con calcular cul hubiera sido el pH de la disolucin despus del agregado de HCl y de NaOH. En estos casos, por tratarse de cidos y bases fuertes, sus concentraciones sern las que determinen el pH. Por lo tanto, luego del agregado de HCl, el pH hubiera sido: pH = - log 0.1 = 1.0 Y luego del agregado de la sosa : pH = 14 - pOH = 13.0 - Comparacin de distintos tampones: En el momento de elegir un tampn, debe tenerse en cuenta previamente el valor del pH que se desea mantener. Para ello, existen tablas donde se tienen los distintos tampones y sus respectivos pHs. Por ejemplo, en la tabla siguiente se resumen algunos de estos valores, que cumplen un amplio rango de pH .
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Tampn Rango de pH NaAc/HAc 3.8-5.8 Ftalato de Na y K/Biftalato de K 4.4-6.4 H2CO3/NaHCO3 5.3-7.3 Na2HPO4/KH2PO4 6.2-8.2 Tris/HCl 7.1-9.1 Borato de Na/Ac. Brico 8.1-10.1 Na2CO3/NaHCO3 9.3-11.3 Na3PO4/NaHPO4 11.3-13.3 El otro punto que se debe tener en cuenta es su capacidad reguladora. - Capacidad reguladora de un tampn. La capacidad reguladora de un tampn permite conocer la efectividad de su accin amortiguadora, es decir, la capacidad de mantener su pH constante con el agregado de pequeas cantidades de cidos y bases. En 1922, se defini la capacidad reguladora de un tampn como la cantidad de cido o base que debe agregarse al tampn para producir un cambio de una unidad. B = d(B)/dpH En las curvas de variacin de capacidad reguladora de los tampones se pueden distinguir tres zonas: una primera porcin donde la capacidad tamponadora disminuye desde un valor mximo inicial, una segunda zona donde se observa una campana con un mximo definido de la capacidad amortiguadora y una ltima porcin donde la capacidad amortiguadora aumenta nuevamente. La primera y ltima zona corresponde al cido solo sin el agregado de la sosa y al cido neutralizado, es decir, donde predomina la presencia de la base agregada. El hecho de que exista un valor relativamente alto de capacidad reguladora en ambas zonas indica que un cido y una base son capaces, de por s, de regular el pH. En ambos casos, cuanto ms fuertes sean stos, mayor ser su capacidad reguladora, puesto que el pH quedar determinado por su concentracin. La zona intermedia de la curva es la que nos interesa, puesto que corresponde a la presencia en la disolucin tanto del cido como de su base conjugada. En ambos casos, se observa que el mximo de la capacidad reguladora se da en un valor prximo al pKa del cido cido Actico pKa = 4.8 Bicarbonato/Carbonato pKa = 10.3 Carbnico/Bicarbonato pKa = 6.3 Volviendo a la ecuacin (4), vemos que el pH se iguala al pKa cuando las concentraciones del cido y su base conjugada son iguales. En otras palabras, la mxima capacidad reguladora se dar en un sistema tampn compuesto por iguales concentraciones del cido y su base conjugada. En las grficas se aprecia tambin que el rango de pH en el que se produce el mximo est en el entorno de dos unidades. De hecho, el rango til de una disolucin tampn se considera que corresponde a un pH dado por: pH = pKa 1
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PROTOCOLO EXPERIMENTAL

ATENCIN CADA BURETA EST PREPARADA PARA UNA DISOLUCIN DIFERENTE LOS pH-METROS SOLO DEBEN SER CALIBRADOS UNA VEZ AL DIA Y EN PRESENCIA DEL PROFESOR TAMPON ACETICO-ACETATO - Materiales y equipamiento -Disolucin 0.1M de cido actico (50mL) a partir del Ac. Actico glacial. -Disolucin 0.1N de NaOH (100mL) a partir de la solucin valorada 1N. -pH-metro. -Agitador magntico y barrita metlica. -Pipetas y probetas -Bureta de 25mL. -Vaso de precipitados de 50mL. La densidad del Ac. Actico glacial es 1,050 Kg/L Masas molares: cido actico: 60.05 g/mol

Datos:

- Procedimiento 1. Llene la bureta con la solucin de NaOH (0.1N) y enrase a 0 mL abriendo la espita. 2. Vierta 20mL de la solucin de cido actico (0.1M) en el vaso de precipitados de 50mL con la barrita metlica. 3. Calibre el pH-metro segn las instrucciones y en presencia del profesor. 4. Coloque el vaso sobre el agitador magntico e introduzca el electrodo del pH-metro con cuidado para que, al girar, la barrita no golpee en el electrodo. Encienda el agitador. 5. Anote el pH de la disolucin de cido actico (mL de base = 0). 6. Vierta el NaOH desde la bureta en porciones de 1 mL apuntando el pH en la tabla de la pgina siguiente (mL Base/pH). El pH debe variar con cada adicin aunque sea poco. 7. Termine la valoracin cuando el pH llegue a un valor superior a 12.0. Si es necesario rellene la bureta con ms solucin de NaOH controlando el volumen aadido. 8. Sin apagar el pH-metro lave el electrodo y coloque su protector. 9. Lave el vaso (atencin con la barrita) y pase las soluciones preparadas y bien etiquetadas al otro grupo para que realicen ellos la prctica. Pasen a la prctica de sus compaeros. - Clculos 1. Llene la tabla de datos de la pgina siguiente (mL Base/pH). 2. Traze en una grfica la relacin mL de base agregados vs. pH. 3. Seale en la grfica la zona de amortiguacin y el punto de equivalencia. 4. Determine el pH en el que se produce la mxima capacidad amortiguadora. 5. Compare el valor de pH determinado en el punto anterior con el valor de pKa del cido actico. pH en el que se produce la mxima capacidad amortiguadora = 11 pKa del cido actico =

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mL base 0 1 2 3 4 5

pH

mL base

pH

TAMPON CARBONATO-BICARBONATO - Materiales y equipamiento -Disolucin 0.1M de carbonato de sodio (100mL) a partir del compuesto puro. -Disolucin 0.2M de HCl (100mL) preparada a partir de la solucin de 1M. -pH-metro. -Agitador magntico y barrita metlica. -Pipetas, probetas y esptula -Bureta de 25mL. -Vaso de precipitados de 50mL. Datos: La Masa molar del carbonato de sodio es: 106.0 g/mol

- Procedimiento 1. Llene la bureta con la solucin de HCl (0.2M) y enrase a 0. 2. Vierta 20mL de la solucin de carbonato de sodio (0.1M) en el vaso de precipitados de 50mL con la barrita metlica. 3. Calibre el pH-metro segn las instrucciones y en presencia del profesor. 4. Coloque el vaso sobre el agitador magntico e introduzca el electrodo del pH-metro con cuidado para que, al girar, la barrita no golpee en el eletrodo. Encienda el agitador. 5. Anote el pH de la disolucin de carbonato (mL de cido = 0). 6. Vierta el HCl desde la bureta en porciones de 0.5 mL apuntando el pH en la tabla de la pgina siguiente (mL cido/pH). El pH debe variar con cada adicin aunque sea poco. 7. Termine la valoracin cuando el pH llegue a un valor inferior a 2.0. Si es necesario rellene la bureta con ms solucin de HCl controlando el volumen aadido. 8. Sin apagar el pH-metro lave el electrodo y coloque su protector. 9. Lave el vaso (atencin con la barrita) y pase las soluciones preparadas y bien etiquetadas al otro grupo para que realicen ellos la prctica. Pasen a la prctica de sus compaeros.
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- Clculos 1. Llene la tabla de datos adjunta (mL cido/pH). 2. Traze en una grfica la relacin mL de cido agregados vs. el pH. 3. Seale en la grfica las zonas de amortiguacin y los puntos de equivalencia. 4. Determine los pHs en los que se produce la mxima capacidad amortiguadora. 5. Compare el valor de los pHs determinados en el punto anterior con los valores de pKa del in bicarbonato y del cido carbnico. 6. Explique las diferencias con la curva de la disolucin reguladora de Actico-acetato. mL cido 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 pH mL cido pH

pHs en los que se produce la mxima capacidad amortiguadora = pKa del in bicarbonato = pKa del cido carbnico =

Describa las principales diferencias experimentales con la curva de la disolucin reguladora de Actico-acetato y razones:____________________________________________
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PRACTICA 4 Determinacin de la acidez de un vinagre comercial mediante una valoracin cido-base utilizando un indicador coloreado
FUNDAMENTO TERICO
ANLISIS VOLUMTRICO En una titulacin o valoracin volumtrica, el objetivo es determinar la concentracin de una sustancia X en solucin. Para ello, se debe disponer de una solucin de una sustancia Y de concentracin exactamente conocida. La reaccin entre X (el analito) e Y (el agente valorante) debe reunir determinados requisitos para ser empleada en una titulacin: ser completa (es decir que debe tener una constante de equilibrio elevada) ser rpida poseer una estequiometra definida no tener reacciones secundarias que interfieran con el anlisis El procedimiento usual de las valoraciones consiste en aadir desde una bureta, pequeos volumenes de agente valorante a un volumen conocido (toma) de la solucin de analito. El momento dnde la cantidad de agente valorante se iguala a la cantidad de analito, se denomina punto equivalente de la valoracin. Hallarlo es el fin ideal que se persigue en una titulacin. Sin embargo, en la realidad, lo que se determina es el punto final, caracterizado por un cambio brusco en alguna propiedad fisicoqumica de la solucin. Los ms usuales consisten en observar el cambio de color de un indicador, el cambio de Absorbancia con un espectrofotmetro o la diferencia de potencial entre pares de electrodos sumergidos en la solucin de analito. La diferencia entre el punto final y el punto equivalente define el inevitable error de titulacin. - Indicadores cido - base Los indicadores cido - base son en general cidos o bases dbiles, cuyas formas disociada y sin disociar presentan un color diferente. Como se mencion anteriormente, se utilizan para visualizar el punto final de una valoracin de neutralizacin. Suponga un indicador cido de frmula HIn, con el siguiente equilibrio: Ka = [H+] . [In-] [HIn] + Dependiendo de cual sea el valor de [H ], este equilibrio se encontrar desplazado hacia uno u otro lado y por lo tanto predominar la especie HIn o la In-. El color que presente la solucin depender de cual sea la especie ms abundante en la solucin. HIn
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H+ + In-

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Cada indicador tiene un rango de pH en el cual se produce el cambio de color. El mismo depende del valor de Ka. Como regla general, se acepta que un color se visualiza cuando la concentracin de la especie responsable del mismo es por lo menos 10 veces mayor que la de la otra especie. En base a esto, el rango de pH en el cual puede apreciarse el cambio de color del indicador, se ubica en: rango de pH = pKa 1 Por lo tanto, el pH de un color a otro vara de pKa +1, esto significa un cambio de pH de dos unidades y el rango de transicin de casi todos los indicadores es de dos unidades de pH. Si una de las especies es incolora, la percepcin del color de la otra especie es mucho ms ntida. Habitualmente, el rango de pH en el cual vira el indicador se determina experimentalmente, pero en el caso de que no se conozca, puede calcularse a partir de la ecuacin. Eleccin de un indicador para una volumetra de neutralizacin El indicador se elige de modo que el pH del punto equivalente est comprendido dentro del rango de viraje del mismo. Como consecuencia de ello, el viraje del indicador definir un punto final de la valoracin que no necesariamente coincide con el punto equivalente. La siguiente tabla muestra una lista de los indicadores cido - base ms comunes, su concentracin y el solvente dnde se preparan sus soluciones, el color de las especies cida y bsica y el rango experimental de pH en el que viran.
Indicador Timolftalena Amarillo de Alizarina Fenolftalena Rojo Fenol p-nitrofenol Verde de BromoCresol Rojo de Metilo Anaranjado de Metilo Amarillo de Metilo solvente EtOH al 90% --EtOH al 60% ----EtOH al 20% EtOH al 60% Agua --pKa (H2O) 9.9 11.1 9.3 7.8 6.6 4.7 5.0 3.5 3.3 Color bsico azul violeta rojo rojo amarillo azul amarillo amarillo amarillo rango pH 10.1 - 12.0 10.0 - 12.0 8.0 - 10.0 6.4 - 8.0 5.6 - 7.6 3.8 - 5.4 4.2 - 6.2 3.1 - 4.4 1.2 - 4.0

cido incoloro amarillo incoloro amarillo incoloro amarillo rojo rojo rojo

- Patrones Primarios La validez de un procedimiento analtico depende del conocimiento de la cantidad de uno de los reactivos empleados. Hasta el momento, se ha supuesto que se conoce con exactitud la concentracin del agente valorante Y en la bureta. Se puede conocer dicha concentracin con exactitud si se disuelve una cantidad pesada de reactivo puro en un volumen conocido de solucin. En este caso, el reactivo puro se denomina estndar primario o patrn primario, puesto que tiene suficiente pureza para pesarse y utilizarse directamente. Los patrones primarios son sustancias que deben reunir determinadas caractersticas para ser empleadas como tales, a saber:
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pureza absoluta (100,00%) o pureza elevada y conocida las impurezas que posea eventualmente deben ser conocidas y ser inertes a la reaccin de inters no debe descomponerse en condiciones normales de almacenamiento debe ser estable al secado por calentamiento o vaco debe mantenerse inalterable al aire durante la pesada alto peso equivalente (para disminuir los errores en la pesada) fcil de adquirir y de bajo costo Ejemplos: Para estandarizar soluciones cidas Na2B4O7.10 H2O (Brax) Na2CO3 (Carbonato de Sodio) Para estandarizar soluciones alcalinas H2C2O4.2H2O (cido Oxlico Dihidratado) En la mayora de los casos no se dispone de un patrn primario como agente valorante. En su lugar, se utiliza una solucin de un reactivo (que no constituye patrn primario) de concentracin aproximada que se valora frente a una solucin de patrn primario. Este procedimiento se denomina estandarizacin y determina de manera exacta la concentracin del agente valorante a utilizarse en el anlisis. La solucin alcalina ms empleada como agente valorante es la de NaOH. El NaOH no constituye un patrn primario debido a que es un slido higroscpico (absorbe humedad de la atmsfera) y presenta un peso equivalente bajo. A su vez, debe tenerse en cuenta que las soluciones alcalinas tienen la propiedad de disolver ms fcilmente el CO2 atmosfrico, generndose las siguientes reacciones: CO2 (g) CO2 (ac) CO2 (ac) + H2O H2CO3 (ac) H2CO3 (ac) HCO3- (ac) + H+(ac) HCO3- (ac) CO32- (ac) + H+(ac) La absorcin de CO2 modifica la concentracin de base fuerte debido a la generacin de Hidrogeniones en las dos disociaciones que sufre el cido Carbnico. NOTA Las soluciones alcalinas deben almacenarse en recipientes de plstico ya que disuelven lentamente el vidrio. No deben permanecer en las buretas ms del tiempo necesario.

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PROTOCOLO EXPERIMENTAL

- Materiales y equipamiento -Dilucin 1/10 de vinagre comercial en agua desionizada (50mL) -Disolucin 0.1N de NaOH (100mL) preparada a partir de la solucin valorada 1N. -Solucin Indicadora: Fenolftalena al 1% (p/v) en etanol (suministrada) -Agitador magntico y barrita metlica. -Pipetas y probetas -Bureta de 25mL. -Vaso de precipitados de 100mL. - Procedimiento 1. Llene la bureta con la solucin de NaOH y enrase a 0. 2. Vierta 20mL de la dilucin de vinagre en el vaso de precipitados con la barrita metlica. 3. Coloque el vaso sobre el agitador magntico y aada 3 o 4 gotas de la solucin indicadora. Encienda el agitador. 4. Vierta el NaOH desde la bureta gota a gota pero con fluidez. 5. Cuando se empiece a ver un primer cambio de color en la disolucin problema, aada ms lentamente la disolucin de NaOH. 6. Cierre el paso del NaOH cuando toda la solucin haya virado de color de forma permanente y anote el volumen de NaOH utilizado. Si es necesario rellene la bureta con ms solucin de NaOH controlando el volumen aadido. REPITA TODO EL PROCEDIMIENTO CON OTROS 20 mL DE VINAGRE DILUDO, PARA ELLO DEBE LAVAR PREVIAMENTE EL VASO DE PRECIPITADOS CON AGUA DESTILADA Y DESIONIZADA. SI LA DIFERENCIA ENTRE LAS DOS MEDIDAS FUERA SUPERIOR A 1 ML SE DEBER REPETIR LA PRCTICA PARA DECIDIR CUAL ES EL VALOR REAL. Volumen de NaOH utilizado = 1era mL; 2 mL; (3 mL)...

Muestre los valores al profesor y despus lave el material enjuagndolo con agua destilada - Clculos Las reacciones qumicas de neutralizacin entre un cido y una base siempre tienen lugar equivalente a equivalente. Por tanto en esta reaccin se cumplir: nmero de equivalentes-gramo de cido = nmero de equivalentes-gramo de base Y como: N = n de eq. de soluto/litro de disolucin se tiene: nmero de equivalentes-gramo = Normalidad x Volumen de disolucin en litros
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Y por tanto, en nuestra reaccin se cumplir:

N cido V cido = N base V base

y si conozco la normalidad y el volumen de base o de cido necesario para neutralizar un volumen dado de cido o de base de concentracin desconocida, puedo determinar la concentracin del cido o base problema. La acidez total o grado del vinagre se define como la totalidad de los cidos voltiles y fijos que contiene el vinagre expresada en gramos de actico por 100 mL de vinagre. Datos: La densidad del vinagre comercial es 1008g/L Masas molares: cido actico: 60.05 g/mol; H2O: 18 g/mol

1. Haga la media de las dos medidas del volumen de NaOH utilizado en la valoracin Volumen de NaOH utilizado (media de los valores obtenidos) = mL

2. Calcule la Normalidad y la Molaridad del cido contenido en el vinagre (atencin con la dilucin). 3. Determine la acidez total del vinagre en porcentaje peso/volumen. 4. Compare el resultado con el valor indicado en la botella. Concentracin de Acido actico en el vinagre = = Acidez total del vinagre Acidez indicada en la botella = = N M % (p/v) % (p/v)

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