OBTENCIN DE MICRO Y NANO-PARTCULAS DE POLISTERES BIODEGRADABLES Rafael Alejandro Paiva Alba Miniproyecto de Ingeniera Qumica dirigido por Prof.

Marcos Sabino Departamento de Qumica

RESUMEN A partir de emulsiones usando polisteres biodegradables Policaporlactona (PCL) y Policido Lctico (PLA) se prepararon partculas de tamao micro y nanomtrico, empleando Polivinil Alcohol como agente surfactante. Se estudi el tamao de las partculas obtenidas en funcin a los parmetros de agitacin Adems se recubrieron las micropartculas de PCL con quitosano QN, en una suspensin acuosa con hexano para concederles propiedades hidroflicas y de biocompatibilidad. Por medio de Microscopa Electrnica de Barrido se verific el tamao de las partculas y el recubrimiento de las mismas. Se obtuvieron partculas esfricas con dimetros < 10m, y nanomtricos bajo ultradispersin/ ultrasonido. El recubrimiento del PCL con QN se logr satisfactoriamente, pero poco homogeneo de las particulas recubiertas. INTRODUCCIN En las ltimas dcadas, las investigaciones con biomateriales funcionales han incentivado el desarrollo de nuevos sistemas de transporte de frmacos (Dash , et. al., 2011). Las micro y nanopartculas de polisteres biodegradables evocan un tema de gran inters en diversos estudios actuales, principalmente en el mbito farmacutico, gracias a sus aplicaciones para el encapsulamiento y la administracin de medicinas: proporcionan mayor eficacia al extender su efecto en el organismo; al facilitar el transporte del frmaco hasta una zona especfica deseada dentro del organismo (Sez et. al. 2004); y al mejorar su estabilidad y evitar su pronta degradacin qumica a causa de agentes externos (Guinebretiere et. al. 2002). De esta forma, copolmeros de cido lctico han sido ampliamente estudiados para estas aplicaciones debido a que presentan productos de degradacin inocuos (Bodmeir y McGinity, 1988). As como tambin se ve involucrada la policaprolactona en la produccin de micro y nanopartculas, principalmente por su carcter biocompatible y biodegradable. Muchas de estas partculas polimricas a escala micro/nanomtrica no son capaces de absorber agua o su degradacin puede acelerarse por reacciones con las sustancias qumicas presentes en el organismo, y por ende no son capaces de retener el frmaco por el tiempo deseado o requerido. Estudios con micropartculas hidrofbicas como el poliestireno, sin cargas o cargado positivamente, tienen afinidad con los epitelios asociados a folculos, mientras que su versin cargada negativamente slo muestra una pequea afinidad a tejidos intestinales; y nanopartculas de polmeros hidroflicos han mostrado propiedades bioadhesivas en tales regiones del organismo, lo cual sugiere que una matriz hbrida parte hidrofbica y parte hidroflica tendr un efecto positivo en la zona gastrointestinal (Pinto et. al., 2005). Diversos estudios se han enfocado en solventar este inconveniente, concluyendo que la cantidad de frmaco liberada depender de un balance entre un polmero hidrfilo y un polmero hidrfobo que consoliden un mismo encapsulamiento (Sez, et. al., 2004). Por consiguiente, se han enfocado las investigaciones a recubrir las partculas con polmeros biocompatibles, generalmente de origen natural. Ohya, T., et. al. (2000) reportaron partculas de polmeros recubiertas con quitosano como transporte de insulina, y la incorporacin y liberacin del frmaco dependi de la duracin entre la interaccin polmero-quitosano. Los recubrimientos de estos polmeros permiten un cambio de propiedades fsicas y qumicas (Guild, 2000), para adaptarlas a parmetros que se especficos del frmaco, que mejoren la eficiencia del mismo en el transporte y suministro del mismo. Algunos de estos polmeros son el quitosano, el alginato, el almidn y polixido de etileno en forma de hidrogeles. Para la obtencin de las micro y nanopartculas de polmeros se han desarrollado y patentados diversos mtodos, basados en evaporacin de solvente, nanoprecipitacin, salting out, difusin de disolvente y usando fluidos supercrticos (Rocha et. al., 2009). Uno de los ms comunes es va emulsin, donde se tienen dos fases: en una el o los monmeros de las sustancias polimricas son dispersados en un medio, donde un agente estabilizante es capaz de controlar la polimerizacin dentro de unas micelas, y se puede mantener un tamao microscpico. En este proceso de emulsin, es un factor clave en el tamao de partcula de los polmeros resultantes la velocidad de agitacin y el medio donde se agita (Venier-Julienne y Benoit, 1996). Bajo estas premisas, el siguiente trabajo esta enfocado en establecer los parmetros de agitacin que garanticen la formacin de micro/nanopartculas de dos biopolmeros: la policaprolactona (PCL) y el policido lctico (PLA), en una preparacin va emulsin. Se controlarn variables como el tiempo de agitacin, la concentracin de

las soluciones, la velocidad de agitacin, entre otros, para definir las variaciones en los resultados nicamente en funcin del tipo de agitacin y del medio donde sta es llevada a cabo.

ASPECTO TERICO Nanotecnologa. La nanotecnologa como ciencia ha tenido su enfoque en la qumica de los polmeros, ante la produccin de nanopartculas y nanocpsulas destinadas a la administracin de frmacos. Las nanocpsulas se definen como sistemas vesiculares en los cuales algn frmaco es confinado a una cavidad con un ncleo interno lquido rodeado de una membrana polimrica (Pinto, C., et. al., 2006) Segn Guinebretire et. al. (2002), en el campo de las aplicaciones farmacuticas de las encapsulaciones de drogas por recubrimientos de polmeros, cpsulas basadas en polmeros biodegradables con tamao promedio de 500nm se han obtenido a travs de un mtodo patentado de emulsin-difusin. Con este fin, las nanopartculas han tenido una ventaja por encima de las micropartculas, pues estn mejor capacitadas para transporte intravenoso, pues existen capilares en el cuerpo con dimetro entre 5-6m, y para estos fines las partculas han de ser significativamente menores y sin riesgos de formar agregados (Hans y Lowman, 2002). La morfologa, el tamao y la estructura de las nanocpsulas definen sus propiedades farmacuticas, en especial la liberacin de frmaco (Guinebretire et. al., 2002). Polmeros Biodegradables. i. Policaprolactona (PCL). La policaprolactona es un polmero sinttico hidrofbico, con una temperatura de fusin alrededor de 60C, buena procesabilidad y solubilidad. Puede ser preparada mediante la polimerizacin por apertura de anillos del -caprolactona con catlisis aninica/catinica, o por polimerizacin de radicales libres con apertura de anillo del 2-metileno-1-3dioxepano (Woodruff y Hutchmacher, 2010). Adems de su adecuada biocompatibilidad y su baja inmunogenicidad, presenta una biodegradacin ms lenta que otros polmeros de uso comn, como el PLGA (cido polilctico cogliclico), lo cual aumenta el tiempo biolgico de frmacos contenidos en su interior, lo cual es til en caso de administracin prolongada de principios activos (Rocha et. al., 2009) El PCL ha sido usado para el suministro controlado de varios frmacos con bajo peso molecular (Cha y Pitt, 1990). Se trata de un polister biodegradable que ha atrado atencin para ser usado como como agente de transporte controlado de frmacos gracias a su carcter no txico y a su bajo precio, al compararlo con otros polmeros semejantes (Sahoo et. al., 2009). Fue uno de los primeros polmeros sintetizados en la dcada de 1930 por el grupo Carothers. La molcula es soluble en cloroformo, diclorometano, tetracloruro de carbono, benceno, tolueno, ciclohexano y 2-nitropropano a temperatura ambiente (Woodruff y Hutchmacher, 2010).

ii. Policido Lctico (PLA). Tal como explican Sdergnd y Stolt (2002), el cido lctico (cido 2hidroxipropanico) es una de las molculas pticamente activas ms pequeas, y puede presentarse como un esteroismero L o D. Es producido por animales, en plantas y por microrganismos en la naturaleza como bacterias y levaduras. El policido lctico es uno de los biopolmeros que pueden sintetizarse a partir de esta especie qumica, mediante un mecanismo de polimerizacin por apertura de anillos o por procesamiento post-polimerizacin mediante mecanismos descritos por Benoit et. al. (1996) Las nanocpsulas de PLA se caracterizan por un ncleo central aceitoso, rodeado por una delgada pared de polmero (Guterres et. al., 1994). No obstante, se han hecho pocos estudios acerca de las nanocpsulas de este polmero. El policido lctico es un polmero con un punto de fusin cercano a 180C; con una solubilidad que depende altamente de su peso molecular, de su grado de cristalinidad y de la existencia de algn otro monmero en su estructura (Sdergnd y Stolt, 2002). El uso de mezclas de PLA con otros polmeros ofrece la posibilidad de cambiar las propiedades del mismo, por ejemplo, su tasa de degradacin o la tasa de liberacin del frmaco asociado (Sdergnd y Stolt, 2002). iii. Quitosano. El uso del quitosano data del siglo XIX, tras un estudio de Rouget sobre las formas desacetiladas del polmero matriz, quitina (Dash et. al., 2011). La investigacin del Quitosano a finales del siglo XX fue prominente en cuanto a avances tecnolgicos y bioqumicos, inhibicin de biosntesis, combinaciones con polmeros naturales y sintticos e inclusive su implementacin como suplemento alimenticio y conservante (Muzarelli y Muzarelli, 2005). El quitosano es un polisacrido, con grupos funcionales reactivos, capaz de formar geles, con gran capacidad de adsorcin y biodegradabilidad que deriva de fuentes naturales, como el exoesqueleto de insectos, crustceos y algunos hongos. Adems es totalmente biocompatible y no es txico para tejidos vivos (Dash et. al., 2011). Su solubilidad en agua ocurre a pH menor a 6, dependiendo de su densidad, su peso molecular y del mtodo de desacetilacin empleado para su obtencin (Dash et. al., 2011). En ambientes acdicos es empleado como un agente para aumentar la viscosidad, la cual se incrementa proporcionalmente con la concentracin del mismo (Dash et. al., 2011). Ha sido vastamente usado en numerosas investigacines. Lee et. al. (2000), por ejemplo, desarrollaron un mtodo para liberar adriamicina usando agregados de nanopartculas esfricas de quitosano modificado con cido desoxiclico. Sistemas de micro-emulsin. La tcnica de emulsindifusin patentada por Quintanar-Guerrero et. al. es utilizada para producir microcpsulas basadas en polmeros biodegradables. (Guinebretire et. al., 2002), que sirven para almacenar drogas y frmacos que sern transportados dentro del organismo hasta un locus definido. La difusin del soluto, en este caso el frmaco, a partir de un material polimrico puede ser fickiana o no, dependiendo de la velocidad de relajacin del polmero en el proceso de hinchamiento (Sez et. al., 2004). Estos sistemas dependen claramente de la necesidad de transporte para algn frmaco en especfico, y de acuerdo a

ello se define el tipo de polmero que participar en la emulsin. Se ha recurrido incluso al recubrimiento de las nanocpsulas con algn otro polmero que modifique sus propiedades. Diversos investigadores se han interesado en el tpico, entre ellos Rodrguez et. al. (1998), quienes disearon un sistema multiparticulado con un ncleo hidrofbico recubierto con un polmero hidroflico con la capacidad de hincharse para el transporte de frmacos para tratar enfermedades relacionadas con el clon. Plantea Langer y Peppas (1981), el compuesto activo se encuentra disuelto o disperso en un soporte de polmero hidrfilo, el cual se hincha sin disolverse cuando se pone en contacto con un medio acuoso. Estos sistemas polmeros se denominan hidrogeles y han despertado gran inters porque con ellos es posible, al menos en teora, conseguir una velocidad de liberacin constante. Micro/nanopartculas e hidrogeles son vastamente utilizados en el diseo de sistemas teraputicos basados en quitosano (Dash et. al., 2011).

para que las micro/nanopartculas se depositen (fig. 1); stas son lavadas en reiteradas ocasiones para remover cualquier resto de estabilizante en sus estructuras (Rocha et. al., 2009).

Fig. 1. Representacin esquemtica del mtodo de Vanderhoff (Pinto et al., 2006) El tamao de las partculas a escala micro y nanomtrica depende de diversos factores, como el peso molecular de los polmeros con los que se trabaja, caractersticas propias de dichos polmeros, como el grado de cristalizacin, la tcnica de preparacin usada, los tiempos de preparacin, agitacin, agregacin. El factor del tipo de agitacin tambin destaca por su influencia en este parmetro, segn describen VenierJulienne y Benoit (1996), pues una mayor dispersin durante la emulsin donde se sintetizan las micropartculas facilita su formacin en tamaos ms diminutos. Por ello se evalan cuatro (4) sntesis de un mismo polmero (PCL) bajo distintos regmenes de agitacin, con el fin de corroborar estos estudios y evaluar el mecanismo ms beneficioso. Para el recubrimiento de las micro/nanopartculas ya formadas con el biopolmero a trabajar (quitosano), se ha de recurrir al mtodo de emulsin-difusin segn QuintanarGuerrero et. al. (1999), en el cual bsicamente se produce una emulsin entre una fase acuosa donde se diluye un agente surfactante (PVA), y una fase oleosa con el polmero concentrado que se agrega bajo agitacin a la primera; y luego se procede a una dilucin de la emulsin final empleando un agente capaz de romper la emulsin, que conlleva a la deposicin de las micro/nanopartculas formadas. Trabajos previos han estimado que las emulsiones resultantes de este tipo deben presentar tamaos de partculas que oscilen entre los 0,4 y 1,3 m (Guinebretire et. al., 2002). Preparacin de las Micro y Nanopartculas de Policaprolactona PCL. Se prepar una solucin de Polivinil alcohol (PVA) en agua destilada al 0,5% P/V (2g de polmero), la cual se mantuvo bajo agitacin magntica hasta lograr homogeneidad. Por otro lado, se disolvi Policaprolactona (PCL) al 10% en 6ml de cloroformo, bajo agitacin magntica. Se aplic el mtodo ya mencionado diseado por Vanderhoff para cuatro casos de sntesis de micro/nano partculas. El primer caso se hizo con una alcuota de 100ml de la disolucin de PVA dentro de un beaker comn de 100ml. Se coloc y se puso en funcionamiento el ultradispersor sobre el recipiente, sumergiendo la punta agitadora en la solucin; durante 20 minutos se agreg la solucin de PCL en cloroformo gota a gota, con una micropipeta de 500l; las gotas eran liberadas desde una altura significativa y no directamente sobre la superficie de la solucin, para garantizar la mayor penetracin posible en

MATERIALES Y MTODOS I. Materiales Reactivos. Se utilizaron los polmeros Policaprolactona (PCL) (Aldrich Chemical, USA) con un peso molecular reportado de 4x104g/mol, y Policido lctico (PLA) (Mv1x105g/mol) en sus versiones comerciales en forma de pellets. Se dispuso de Polivinil Alcohol (PVA) (Mw2x105g/mol) en su versin en polvo. El polmero Quitosano (Qn) puro, en forma de un polvo fino (Aldrich Chemical, USA; de alto peso molecular, Mw 1,90-3,75 x105 g/mol). Agua destilada, cloroformo, cido actico, tween80 como surfactante y hexano tcnico. Todos los materiales fueron suministrados por el Laboratorio de Qumica Orgnica, Grupo B5IDA. Vale acotar que los valores para el peso molecular de los polmeros fueron determinados mediante anlisis viscosimtrico en el laboratorio. Equipos. Los instrumentos de laboratorio implementados fueron materiales de uso comn: beakers, pipetas, balones, micropipetas, agitadores magnticos. Adicionalmente se emple una Balanza Analtica, un equipo de Ultrasonido VWR, una centrifugadora, un ultradispersor elctrico IKAT10 Basic Ultra-Turrax a unas 15mil RPM, un rotavaporador, un vrtex Fischer Genie 2; y un beaker, cumpliendo funciones de reactor, cuyas paredes internas fueron modificadas en forma de aletas para garantizar mayor turbulencia al efectuar agitacin. II. Metodologa

La preparacin de micro/nanopartculas de los polmeros biodegradables usados, PCL y PVA, se llev a cabo siguiendo el mtodo patentado por Vanderhoff et. al. (1979), con las ligeras modificaciones que lo han mejorado a travs de los aos. Consiste en tomar una fase acuosa con un agente estabilizante previamente diluido, a la que se le agrega el polmero diluido en algn solvente orgnico apropiado, bajo agitacin controlada. Al final del proceso, la suspensin es sometida a la evaporacin del solvente

el seno de la sustancia. Cualquier pelcula superficial que apareca era removida para evitar su interferencia en la interaccin gota-solucin. Al terminar la agregacin, se continu la agitacin de la mezcla por 100 minutos, para luego remover el ultradispersor. Se mantuvo bajo agitacin magntica hasta el da siguiente para garantizar la evaporacin del solvente (cloroformo). La solucin final fue centrifugada dos veces, y el sobrenadante fue eliminado. Las partculas sedimentadas fueron lavadas con agua destilada y finalmente liofilizadas (muestra PCL1-JP), luego preparadas para la Microscopa Electrnica de Barrido (MEB). El mismo procedimiento se repiti en una segunda ocasin, bajo los mismos parmetros de agitacin, pero esta vez cambiando el recipiente contenedor de la emulsin por el reactor con aletas (fig. 2). De tal forma, se obtuvo la muestra PCL-RP1.

se mezclaron 460ml de agua destilada y 2,5g de quitosano comercial en polvo, bajo agitacin magntica. Cuando el polvo de Qn estuvo disperso en todo el volumen, se agregaron 40ml de cido Actico concentrado y se mantuvo la agitacin hasta obtener una solucin uniforme. Recubrimiento de las micro/nanopartculas de Policaprolactona. Se prepar una solucin al 1% P/V de las micro/nanopartculas de Policaprolactona correspondientes a la muestra PCL-RP1 en la solucin de quitosano 0,5% previamente obtenida, empleando un agitador magntico; dado que slo se dispuso de 0,15g de polmero, se prepararon 15ml de solucin. Con una agregacin muy minuciosa, aadiendo pocas partculas del polmero slo cuando no se perciban rastros de los slidos en la disolucin, el tiempo de esta etapa fue cercano a los 20 minutos. Por otro lado se prepar una emulsin con 25ml de agua destilada y 75ml de hexano tcnico. El agente emulsionante o surfactante fue Tween80, del cual se aadieron 0,5ml (2% V /V). Las sustancias se mantuvieron bajo fuerte agitacin magntica con el fin de conservar la suspensin de las partculas. Con una micropipeta se agregaron muy lentamente, en un lapso cercano a los 30 minutos, los 15ml de solucin PCL-Qn en la suspensin agua/hexano. Se elimin el hexano presente en la mezcla por medio del rotovaporador, a una temperatura cercana a los 80C. Las partculas del fondo del baln fueron lavadas dos veces con agua destilada y finalmente liofilizadas. La muestra resultante (PCLR-RP1) fue preparada para la Microscopa Electrnica. Caracterizacin por Microscopa Electrnica de Barrido. Utilizando el microscopio electrnico de barrido modelo JEOL JSM 6460 a 25 kV, de la seccin de Microscopa Electrnica del Laboratorio de Superficies (Laboratorio E) de la Universidad Simn Bolvar, fue posible analizar las muestras de partculas sintetizadas en el laboratorio: PCL-RP1, PCL-RP2, PCL-RP3, PLA-RP1 y PCLR-RP1, tras recubrirlas con una fina capa de oro. El estudio habra de delimitar parmetros como tamao promedio de partculas, forma, texturas, distribucin de partculas, y para el caso de la muestra recubierta: forma del recubrimiento, textura y distribucin.

Fig. 2. Diagrama de rgimen de flujo en el reactor con aletas (A) contra el reactor simple (B), proyeccin en el plano. Puede verse como las aletas generan mayor turbulencia durante la agitacin. La tercera y cuarta ocasin fue una simple variacin de la experiencia con el reactor con aletas. En una la agitacin, durante la etapa de mezclado de las soluciones de PVA y de PCL, se efectu con el ultradispersor y un agitador magntico adicional (muestra PCL-RP2); y en la otra, la agitacin fue gracias al ultradispersor y al equipo de Ultrasonido (muestra PCL-RP3), respectivamente. Preparacin de las Micro y Nanopartculas de Policido Lctico PLA. El procedimiento fue similar a la preparacin de partculas de PCL. Se prepar una solucin de 100ml de solucin de Polivinil Alcohol en agua al 0,5% P /V y a ella se le aadieron 6,0ml de una solucin al 10% P /V de Policido Lctico en cloroformo, lentamente durante 20 minutos y utilizando una micropipeta. La agregacin fue bajo agitacin con el ultradispersor en conjunto con el equipo de ultrasonido, durante un tiempo total de 120 minutos. Una vez terminado el proceso, se dej reposar hasta el da siguiente. La solucin fue centrifugada; y las partculas sedimentadas fueron lavadas con agua destilada. Por ltimo, la muestra (PLA-RP1) fue liofilizada, y posteriormente preparada para la Microscopa Electrnica de Barrido. Preparacin de la solucin de Quitosano. El objetivo fue preparar una solucin de Quitosano (Qn) al 0,5% P/V en una solucin acuosa de cido actico al 8% V/V. Para ello,

RESULTADOS Y DISCUSIN Tabla 1. Dimetros promedio y desviacin estndar de los mismos para los casos experimentales, en base a las imgenes de la fig. 1

3.1

hallada para 50 partculas diferentes (fig. 3.1). No obstante, esto no implica que no se hayan podido obtener partculas de dimetros menores cercanos a la escala nanomtrica, pues una de estas partculas puede observarse aislada (fig. 4.b), aunque existen en muy poca cantidad segn el anlisis con el microscopio.

3.2

3.3

3.4

Fig. 4. A. Partculas de PCL1-JP, donde puede apreciarse una de ellas abierta, demostrando que son huecas. B. Partculas de la muestra PCL1-JP en una escala de 2m. Micropartculas de Policaprolactona producto de agitacin mecnica empleando un microdispersor en un reactor modificado con aletas. La muestra PCL-RP1 mantuvo las mismas caractersticas bsicas de las micropartculas obtenidas usando un beaker cilndrico, en cuanto a formas y texturas. Sin embargo, la inclusin de un reactor que influye en la agitacin interna del sistema emulsionante es notable al analizar el tamao promedio de las partculas (fig. 3.2). En general, cualitativamente puede apreciarse un desorden y una heterogeneidad en cuanto al tamao de las molculas para ambos casos A y B, aunque el caso A muestra una seccin donde hay un predominio de partculas ms pequeas. Con el cambio de la forma del medio de agitacin se ha logrado conseguir un mayor nmero de micropartculas de menor dimetro, bajo los mismos parmetros de agitacin. Para una escala de 100m, no se evidencia ningn cambio aparente (fig. 5.a). Sin embargo, con las mediciones de los dimetros promedios (en especial los de la fig. 1.2.B), el valor decrece de un rango de 18-28 m hasta uno que abarca el intervalo 3-12 m (fig. 5.B). La desviacin de estos valores tambin disminuye notablemente, lo que se traduce en un menor grado de heterogeneidad, sin llegar todava a un perfil homogneo. Las partculas aisladas de dimetros diminutos, que representan una minora, alcanzan valores cercanos a 1m, ligeramente menores a las sintetizadas en la muestra anterior. Micropartculas de Policaprolactona producto de agitacin mecnica empleando un microdispersor y un agitador magntico en un reactor modificado con aletas. Las imgenes obtenidas por el mtodo de microscopa electrnica muestran el mismo patrn visto en casos anteriores: partculas esfricas y lisas agrupadas en aglomerados. Un estudio exhaustivo del dimetro de partculas para este caso en particular, donde adems de emplear una agitacin a 15.000 RPM se inclua una agitacin magntica moderada, arroja valores semejantes al

3.5

Fig. 3. Imgenes de la Microscopa electrnica que muestran las Micro/nanopartculas de las muestras de policaprolactona y policido lctico usadas en la determinacin del tamao promedio Micropartculas de Policaprolactona producto de agitacin mecnica empleando un microdispersor en un reactor cilndrico. Siguiendo las pautas del mtodo de Vanderhoff, sin hacer mayor nfasis en la agitacin del sistema en emulsin, slo con un ultradispersor funcionando a unas 15.000 RPM, se obtuvieron partculas a nivel micromtrico, con un dimetro promedio segn el descrito en la tabla 1 (fig. 3.1). Las partculas se aprecian totalmente esfricas, con una superficie lisa, unidas entre s en aglomeraciones, con cierta flexibilidad al observarse algunas ligeramente deformadas en las zonas de contacto con otra partcula, y huecas (fig. 4.A). Al tomar como referencia el experimento llevado a cabo por Guinebretiere et. al. (2002), tambin usando PCL, el tamao de las micropartculas obtenidas fue mayor al esperado, aunque es posible atribuir las diferencias a las diferencias en el peso molecular de los polmeros usados (80KDa reportado en la literatura), y al mecanismo de preparacin de las micropartculas, que en su caso fue va emulsin-difusin. Pueden verse partculas bastante grandes a una escala ptica de 100m, en una distribucin que puede considerarse muy heterognea (en lo que a tamaos se refiere), segn el valor arrojado por la desviacin estndar

organizacin de las partculas bastante homogneo, respaldado por el valor experimental de la desviacin estndar que surge al determinar el dimetro promedio (fig.7.A); y se aprecian secciones espordicas con esferas de menor dimetro (menor a 1m) adheridas a alguna partcula de tamao promedio. Tambin son apreciables partculas de dimetros nanomtricos (fig. 7.B) menores a los de partculas obtenidas con los otros regmenes de agitacin, y en mayor cantidad a pesar de no ser los tamaos que rigen el sistema.

A
Fig. 5. A. Partculas de la muestra PCL-RP1 ante una escala de 100m. B. Micropartcula aislada de PCL en la muestra PCL-RP1. caso donde se obvia dicha agitacin. Las imgenes estudiadas (fig. 4.3) tienen un tamao comprendido entre los 8 y los 13 m. La distribucin ordenada de las partculas, en cuanto a su tamao, sigue siendo poco apreciable ante una escala de 100m (fig. 6.A). Sin embargo, s existe una diferencia importante que restringe el descarte de este caso experimental: los dimetros de las partculas aisladas presentes en minora son mucho menores que en el caso anterior, abarcando ahora el orden nanomtrico (fig. 6.B).

Fig. 7. A. Partculas de la muestra PCL-RP3 ante una escala de 100m. B. Partcula nanomtrica de PCL, con un rado cercano a 200nm, dentro del cmulo que se observa en la imagen A. Existen trabajos previos que han empleado el ultrasonido como procedimiento homogeneizador, tal como se pudo apreciar para este sistema en particular. Sin embargo, establecen que el uso de este mecanismo puede traer consigo una serie de inconvenientes, como un elevado ndice de polidispersin en las nanopartculas, induccin de posibles reacciones qumicas de degradacin, y es de gran dificultad su implementacin a gran escala (Hans y Lowman, 2002). Micropartculas de Policido lctico producto de agitacin mecnica empleando un microdispersor y ultrasonido en un reactor modificado con aletas. A juzgar por las imgenes, las micropartculas obtenidas tienen un tamao comn en los aglomerados. Esto quiere decir que la aplicacin de ultrasonido como mecanismo homogeneizador fue mucho ms eficaz para el PLA que para el PCL. A grandes rasgos, las micro/nanopartculas del policido lctico presentan una forma esfrica, una textura aparente bastante lisa y, como ocurri para el PCL en condiciones idnticas, tambin se aglomeran con partculas de tamaos iguales o muy semejantes. Las partculas de PLA se manejan a niveles nanomtricos. De acuerdo a la tabla 1, el dimetro promedio vara entre los 700 y 900 nm, y la dispersin es mnima con respecto a sistemas de PCL. Existen tambin partculas dispersas mucho ms pequeas (fig. 8.A). Luego, es lgico pensar que el policido lctico maneja alguna propiedad qumica, distinta a la del PCL, que garantiza la formacin de partculas ms pequeas. El peso molecular (100.000 para el PLA y 40.000 para el PCL), en base a la bibliografa, puede

Fig. 6. A. Partculas de la muestra PCL-RP2 ante una escala de 100m.B. Nanopartcula de PCL con un dimetro menor a 1m de la muestra PCL-RP2. Micropartculas de Policaprolactona producto de agitacin mecnica empleando un microdispersor y ultrasonido en un reactor modificado con aletas. Si bien la muestra colectada bajo parmetros de agitacin con microdispersor y con el ultrasonido (PCL-RP3) se compone por partculas iguales a las de muestras anteriores en cuanto a forma, textura y agrupacin, present caractersticas muy diferentes a las de muestras anteriores en cuanto a su tamao. El tamao de partculas promedio dentro de las aglomeraciones de esferas se mantuvo entre 1m y 3m (fig. 4.4), es decir, fueron las partculas sintetizadas ms pequeas de policaprolactona. Asimismo, las imgenes muestran un patrn de

ser el factor crucial que justifica este hecho.

El recubrimiento de las partculas es el adecuado, sin embargo la existencia de trazas del quitosano en la muestra es motivo suficiente para necesitar una alteracin en el procedimiento experimental con el fin de maximizar la cantidad de partculas recubiertas y reducir los restos del polisacrido. Se puede verificar que la partcula est en realidad cubierta al compararla con alguna micropartcula de la muestra antes de su recubrimiento (PCL-RP1). Se evidencia claramente una textura que no estaba presente en la microcpsula original (fig. 10).

Fig. 8. A. Nanopartculas de PLA producidas por agitacin con el microdispersor y el ultrasonido, de dimetros cercanos a 0,2m. B. Aglomerados de nanopartculas adheridos a partculas ms grandes. Es peculiar en este caso es que los grupos de partculas de menor tamao rodean y enlazan las partculas ms grandes (fig. 8.B). Esto puede sugerir que, para unos parmetros parecidos de agitacin, pero aumentando la intensidad en alguno de ellos, podran homogeneizarse ms los aglomerados de nanopartculas de PLA. Micropartculas de PCL recubiertas con quitosano. Con lo que se aprecia en las imgenes de la muestra de Policaprolactona recubierta con Quitosano (PCLR-RP1), los aglomerados de partculas de escala micromtrica dejan de aparecer. Se ven grandes porciones de Quitosano, donde existen partculas de polmero recubiertas y adheridas, que no son muy tiles porque implican un grado de dificultad elevado para separarlas del medio de quitosano. Otras partculas se encuentran aisladas, con un recubrimiento liso y ligeras irregularidades en la superficie. En estos casos es un recubrimiento total, en forma de una fina capa que envuelve las esferas de polmero (fig.9).

Fig. 10. Comparacin entre PCL recubierto con Qn (derecha) y sin recubrimiento (izquierda).

CONCLUSIONES La preparacin de micro y nanopartculas de los polmeros biodegradables manejados es totalmente factible, y arroja resultados bastante exactos, que pierden precisin debido a las variaciones en parmetros intrnsecos de los polmeros, como el peso molecular. Es evidente que, controlando de la mejor forma posible todas las perturbaciones que influyen en el tamao de las micro y nanopartculas formadas a travs de una tcnica de emulsin con evaporacin del solvente, exceptuando el tipo y el medio de agitacin, es posible establecer una dependencia entre ambas variables. El tamao de las partculas formadas va a ser directamente dependiente del tipo de agitacin que presente la emulsin durante la etapa de mezclado de la fase acuosa con la fase aceitosa. Se obtuvieron partculas con dimetros entre 15 y 28 m con alta dispersin de tamaos para un sistema de agitacin con ultradispersin, en un reactor cilndrico Dimetros cercanos a 10m cuando se sustituye el reactor por uno con aletas, que aumenta el grado de turbulencia durante la agitacin y los choques con las paredes. Al usar la combinacin entre agitacin con el ultradispersor y un agitador magntico, no hay cambios aparentes y puede considerarse el efecto de ste ltimo sobre las dimensiones de las partculas, despreciable. Sin embargo, las imgenes muestran que si tiene un efecto positivo, pues forma una minora de partculas con dimetros mucho menores.

Fig. 9. Dos partculas diferentes de PCL recubiertas por una fina capa de Quitosano.

La agitacin con ultradispersor y ultrasonido resulta la mejor alternativa en la obtencin de micropartculas que alcanzan rdenes nanomtricos. La desviacin en los dimetros de las partculas resultantes es muy baja, lo que se traduce en grupos de microcpsulas homogneos y con uniformidad estructural. El recubrimiento de partculas de polmeros hidrofbicos con un polisacrido hidroflico como el quitosano, a travs de la tcnica va emulsin estudiada, es factible. Sin embargo, deben regularse parmetros en la suspensin que permitan eliminar trazas del quitosano de las partculas, con el fin de evitar la adherencia de micropartculas recubiertas al polmero orgnico. En base a las investigaciones referidas en la bibliografa, es un hecho que recubrir polmeros como la policaprolactona con quitosano, le confiere a stos propiedades nuevas, ideales para las distintas condiciones requeridas por los frmacos a encapsular para cumplir su objetivo tras su suministro.

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