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INMUNOBIOLOGA DE LA GLNDULA MAMARIA

Robert Valeris

Entre los retos en el mundo del siglo XXI est la reduccin de los niveles de dficit de consumo humano de protena animal. Ante el crecimiento sostenido de la poblacin humana, la solucin ms directa sera un crecimiento igualmente sostenido de la ganadera lechera a nivel mundial, teniendo en cuenta que la leche y sus mltiples derivados son una fuente apreciable de protena de alta calidad. Sin embargo, junto a consideraciones de tipo ecolgicas y de sustentabilidad, el crecimiento de la ganadera lechera tambin enfrenta un reto intrnseco a la alta produccin lechera: la mastitis. La seleccin de los individuos con mayores niveles de produccin lctea ha seleccionado a la vez, a los individuos ms susceptibles a la mastitis de origen bacteriano (la forma ms frecuente); esto es debido a que la produccin intensiva de leche propicia una serie de factores estresantes que repercuten de manera negativa en el sistema inmunitario de la glndula mamaria, responsable de mantener estril el parnquima y la secrecin de dicha glndula (Heringstad et al., 2005). El sistema inmunitario de los mamferos (y por ende de los bovinos) es el resultado de una larga co-evolucin de los hospedadores con las bacterias y otros microorganismos comensales y patgenos. As, el sistema inmunitario se desarrolla como un complejo conjunto de clulas y sustancias solubles que tienen como funcin la proteccin del hospedador ante los ataques de estos microorganismos; su especializacin y eficiencia es tal, que sin un sistema inmunitario sano, es indudable la aparicin de patologas graves e incluso la muerte del animal (Lee et al., 2010). Debido al papel fundamental del sistema inmunitario en el mantenimiento de la salud de la glndula mamaria, lo que deriva en una produccin de leche de alta calidad, este captulo se dedica a revisar los aspectos ms relevantes de dicho sistema: los componentes de la inmunidad innata, de la inmunidad adaptativa, las estrategias que han desarrollado los microorganismos para evadir la respuesta del hospedador y por ltimo, los factores que propician una inmunosupresin en el perodo periparto, que es el perodo de la lactancia de mayor susceptibilidad a la mastitis bacteriana.

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INMUNIDAD INNATA
La inmunidad innata est conformada por una serie de componentes sobre los que reposa el sistema inmunitario. Estos son los primeros componentes que se activan y son los responsables de activar y dirigir la siguiente rama del sistema inmunitario: la inmunidad adaptativa. La inmunidad innata se compone de las barreras anatmicas, de unos componentes celulares y otros solubles (Delves et al., 2000a). Barreras Anatmicas El canal del pezn es la primera lnea de defensa, puesto que las bacterias deben penetrar por el pezn para causar una infeccin intramamaria. La funcin del msculo del esfnter del pezn es mantener el orificio cerrado y por ende, aislar el interior de la glndula mamaria. Esto significa que cualquier dao a esta estructura se relaciona con un incremento en la incidencia de mastitis. El canal del pezn est delimitado con queratina, lo que provee una barrera fsica adicional, previniendo la migracin bacteriana hacia la cisterna de la leche. Asociados con la queratina existen cidos grasos esterificados y no esterificados (mirstico, palmitolico y linolico) que funcionan como bacteriostticos. Adems, estn presentes las protenas catinicas (defensinas) que se unen a los microorganismos causantes de mastitis, aumentando su susceptibilidad a los cambios osmticos (Oviedo-Boyso et al., 2007). Componente celular (Neutrfilos y Macrfagos) Cuando las bacterias pasan el esfnter del pezn y el canal del pezn, se activa el componente celular de la inmunidad innata: los neutrfilos y los macrfagos. Los macrfagos tisulares o los de la leche reconocen a los patgenos invasores e inician una respuesta inflamatoria; en esta respuesta, las citocinas proinflamatorias inducen el reclutamiento de neutrfilos hacia la glndula mamaria. El tejido y la leche de una glndula mamaria sana contienen principalmente macrfagos, mientras que en el tejido y en las secreciones infectadas hay un predominio de neutrfilos. Cuando los macrfagos reconocen a las bacterias, debido a la presencia de receptores de PAMP (del ingles, pathogen associated molecular patterns, patrones moleculares asociados a patgenos) en los macrfagos, liberan citocinas proinflamatorias tales como el TNFa y la IL-1b, que estimulan la actividad bactericida de los neutrfilos y la produccin de prostaglandinas y leucotrienos por parte de varios tipos celulares, lo que incrementa la reaccin inflamatoria local. Hay evidencia de que las clulas epiteliales de la glndula mamaria, al igual que otras lneas epiteliales, juegan un importante rol en el reclutamiento de los neutrfilos al sitio de infeccin. Asimismo, la adhesin de las bacterias a las clulas epiteliales o la interaccin con sus toxinas induce la sntesis de TNFa, IL-6 y la quimiocina IL-8 (Oviedo-Boyso et al., 2007). Las citocinas proinflamatorias y las quimiocinas secretadas por los macrfagos y clulas epiteliales activan a su vez la expresin de las molculas de adhesin celular: E-selectina, ICAM-1 y VCAM-1 en las clulas endoteliales. Esto resulta en la unin de neutrfilos sanguneos al endotelio, su migracin a travs de la matriz epitelial y subepitelial y su posterior localizacin en el sitio de infeccin

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y en la leche; en la leche, se puede evidenciar por el aumento en el contaje de clulas somticas que ocurre tanto en las mastitis subclnicas como clnicas. Para que se lleve a cabo el reclutamiento de los neutrfilos, se requiere la participacin de molculas quimioatrayentes como ciertos componentes del complemento (C5a y C3a), citocinas como IL-8 e IL-12. El lipopolisacrido LPS de las bacterias gramnegativas es un fuerte estmulo para la migracin de neutrfilos hacia la glndula mamaria (Sordillo, 2005; Oviedo-Boyso et al., 2007). Los neutrfilos que han migrado al sitio de infeccin en la glndula mamaria fagocitan las bacterias y producen especies reactivas de oxgeno y defensinas, que eliminan una amplia variedad de patgenos causantes de mastitis. Durante el perodo puerperal, la disminucin de la actividad de los neutrfilos est asociada a una mayor incidencia de mastitis (Oviedo-Boyso et al., 2007). En caso que la bacteria invasora sobreviva, la infiltracin neutroflica es reemplazada en un perodo corto de tiempo por linfocitos T y B y por monocitos; sin embargo, los neutrfilos siguen siendo un grupo mayoritario en las mastitis crnicas (Boutet et al., 2007; Oviedo-Boyso et al., 2007). Componente soluble (lactoferrina, complemento, citocinas proinflamatorias) La glndula mamaria contiene factores bacteriostticos no especficos que forman parte de la inmunidad innata. Uno de estos factores es la lactoferrina producida por las clulas epiteliales, los macrfagos y los neutrfilos. Esta protena se une al hierro presente en la leche para que no est disponible para el crecimiento bacteriano, ya que el hierro es un factor limitante del mismo. Sin embargo, hay bacterias que usan la lactoferrina como una fuente de hierro (por ejemplo Streptococcus agalactiae). La principal funcin de la lactoferrina es la proteccin de la glndula mamaria contra la infeccin por coliformes, especialmente en la fase de involucin, debido a la activacin de la fagocitosis y del sistema de complemento (Oviedo-Boyso et al., 2007). El sistema de complemento de los bovinos est presente en el suero sanguneo y en la leche, siendo una parte importante de los mecanismos de defensa innatos contra la mastitis. Las protenas del complemento son producidas predominantemente por los hepatocitos, aunque tambin son producidas por monocitos y macrfagos en algunos tejidos. Las molculas del complemento no solo se requieren para el reclutamiento de los neutrfilos hacia la glndula mamaria, sino tambin para la opsonizacin y destruccin de las bacterias. Las bacterias gramnegativas como Escherichia coli son sensibles a la accin ltica del complemento, mientras que muchas bacterias grampositivas como Staphylococcus aureus son resistentes; sin embargo, todas las bacterias son susceptibles a la accin opsonizante del C3b y C3bi. Las actividades lticas del complemento estn incrementadas en los cuartos inflamados de la glndula mamaria (Sordillo, 2005; Oviedo-Boyso et al., 2007). La actividad de las clulas del sistema inmunitario en la fisiopatologa de la mastitis bovina est regulada por las citocinas proinflamatorias que incrementan la capacidad bactericida de macrfagos y neutrfilos, promueven el reclutamiento de los neutrfilos hacia el sitio de infeccin, inducen la maduracin de las clulas dendrticas y el control de la respuesta inmunitaria adaptativa. Se han descrito

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30 / Robert Valeris varias citocinas, tales como IL-1b, IL-2, IL-6, IL-8, IL-12, IFNg y TNFa tanto en la glndula mamaria sana como infectada (Sordillo, 2005; Oviedo-Boyso et al., 2007). El TNFa es producido por macrfagos, neutrfilos y clulas epiteliales de la glndula mamaria. Esta citocina participa en la actividad quimiotctica atrayendo neutrfilos, ya que induce la expresin de molculas de adhesin en las clulas endoteliales. El TNFa es la principal citocina producida durante la fase temprana de la infeccin y es la responsable del shock endotxico que ocurre en la mastitis aguda por Escherichia coli (Alluwaimi, 2004; Oviedo-Boyso et al., 2007). La IL-1b es producida por monocitos/macrfagos y por clulas epiteliales activadas. Durante la respuesta inflamatoria, IL-1b regula la expresin de adhesinas en las clulas endoteliales y la quimiotaxis de los neutrfilos en infecciones causadas por Escherichia coli. El papel de IL-1b en las infecciones causadas por Staphylococcus aureus es importante solo en las fases tempranas (Alluwaimi, 2004; Oviedo-Boyso et al., 2007). La IL-6 es una citocina proinflamatoria producida por macrfago que se encuentra involucrada en el shock sptico producido durante las mastitis por coliformes o Staphylococcus aureus. Esta citocina facilita el intercambio de neutrfilos por monocitos en la glndula mamaria, lo que es necesario para reducir los efectos deletreos de los neutrfilos. Adems, la IL-6 es una de las principales citocinas reguladoras de la sntesis de protenas de fase aguda en los hepatocitos (Alluwaimi, 2004; Oviedo-Boyso et al., 2007). La IL-8 es una quimiocina producida por los monocitos, linfocitos T, macrfagos, clulas epiteliales y endoteliales activadas. Se produce en grandes cantidades durante la mastitis causadas por Escherichia coli, mientras que est presente en bajas concentraciones en las mastitis producidas por Staphylococcus aureus y su funcin biolgica consiste en la quimiotaxis de neutrfilos hacia el sitio de infeccin (Alluwaimi, 2004; Oviedo-Boyso et al., 2007). La IL-12 es secretada por los macrfagos y clulas dendrticas, siendo un mediador entre la inmunidad innata y adaptativa puesto que regula la maduracin de los linfocitos T CD4+ hacia un patrn Th1 necesario para controlar y eventualmente erradicar la infeccin intramamaria (Alluwaimi, 2004; Oviedo-Boyso et al., 2007). La osteopontina (o fosfoprotena secretada 1, SPP1) es una citocina producida por los macrfagos y los linfocitos T activados. Se ha atribuido a la osteopontina un rol como un componente temprano de los mecanismos de activacin de los linfocitos T. Recluta a los macrfagos al sitio de infeccin y estimula la inmunidad mediada por clulas (tipo Th1) a travs de la induccin de IFNg. La osteopontina es una protena multifactica que se ha asociado a la remodelacin sea (de ah su nombre), a la cicatrizacin de heridas, a la supervivencia de clulas bajo estrs (incluidas clulas metastsicas), urolitiasis y enfermedades autoinmunes. En la actualidad, hay datos que indican que hay una expresin temprana de la osteopontina en cuartos con mastitis y que se correlaciona con la contaje de clulas somticas, pudiendo adems, ser un gen propicio para seleccin gentica (Alain et al., 2009).

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INMUNIDAD ADAPTATIVA
La inmunidad adaptativa est conformada por los linfocitos T y B, siendo la responsable de eliminar (o controlar) la infeccin intramamaria al potenciar la accin de los neutrfilos y macrfagos, bien sea por la secrecin de citocinas o por la produccin de anticuerpos. Un aspecto caracterstico de la inmunidad adaptativa es la capacidad de memoria inmunitaria, lo que posibilita la vacunacin (Delves et al., 2000a). Componente celular (linfocitos T y B) Los linfocitos pueden reconocer una variedad de estructuras antignicas a travs de receptores de membrana (TCR para los linfocitos T y BCR para los linfocitos B) que definen su especificidad y diversidad. Por otra parte, los linfocitos son los responsables del fenmeno de memoria inmunitaria. A grandes rasgos, los linfocitos T se pueden dividir segn su TCR en linfocitos Tab y Tgd. Los linfocitos Tab incluyen los linfocitos CD4+ (cooperadores) y CD8+ (algunas subpoblaciones son citotxicas y otras reguladoras). En una glndula mamaria sana, la subpoblacin predominante de linfocitos T es CD8+, mientras que existe una inversin durante la mastitis, siendo los linfocitos T CD4+ los mayoritarios. La activacin de estos linfocitos se lleva a cabo tras la interaccin del TCR con un complejo pptido bacteriano:MHC clase II expuesto en la superficie de las clulas presentadoras de antgenos (clulas dendrticas, macrfagos, linfocitos B, clulas epiteliales activadas). Los linfocitos T CD8+, como se mencion antes, tienen funciones citotxicas eliminando clulas lesionadas y sus secreciones cuyo acmulo pudiera hacer a la glndula mamaria ms susceptible, ayudando adems en la regulacin de la respuesta inmunitaria (Oviedo-Boyso et al., 2007). Por otra parte, aun no se han caracterizado muy bien los linfocitos Tgd, pero se sabe que estn ntimamente asociados con las superficies epiteliales donde al parecer destruyen las clulas epiteliales lesionadas (Oviedo-Boyso et al., 2007). En cuanto a los linfocitos B, su principal funcin es la produccin de anticuerpos tras haber interactuado con su antgeno especfico y haber recibido la cooperacin de los linfocitos T CD4+ Th1 (o Th2 dependiendo del agente patgeno) (Delves et al., 2000b). En los bovinos, desde el punto de vista anatmico, cada cuarto de la glndula mamaria est completamente separado por tejido fibroelstico. Los dos cuartos de cada lado estn conectados por conductos linfticos aferentes que drenan a los ndulos linfticos supramamarios ipsilaterales. Los linfocitos vrgenes migran desde la circulacin sangunea hacia un ndulo linftico, de all al sistema linftico y de vuelta a la circulacin sangunea. Cuando se establece una mastitis, los linfocitos presentes en los ndulos linfticos ipsilaterales se activan y proliferan; migran hacia la glndula mamaria y comienzan a realizar diversas funciones para combatir la infeccin (Kimura et al., 2005). La mayora de los linfocitos en la glndula mamaria son del tipo efector o del tipo de memoria. Estos tipos de linfocitos tienen una migracin preferencial hacia los tejidos perifricos (en este caso, la glndula mamaria) que hacia los ndulos linfticos. Algunos de esos linfocitos migran hacia la leche y son removidos durante el ordeo. Por mucho tiempo se pens que la migracin de los linfocitos era rgida y

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32 / Robert Valeris en un solo sentido: ndulo supramamario-sistema linftico-sangre-glndula mamaria ipsilateral inflamada; sin embargo, se ha demostrado que es una circulacin mucho ms dinmica, pudiendo los linfocitos migrar de la leche al tejido mamario, de all hacia los ndulos linfticos supramamarios y otros tejidos (incluidos los cuartos contralaterales) por va sangunea) (Kimura et al., 2005). Se ha sugerido que el eje entrico-mamario, en el cual los linfocitos migran entre sitios inductores y efectores en la mucosa intestinal y mamaria, pudiera estar subdesarrollado en rumiantes, en contraposicin a lo que ocurre en monogstricos. Esto se basa en observaciones de que la vacunacin intestinal en rumiantes no induce una respuesta de anticuerpos protectores en leche (Chang et al., 1981, Moon et al., 1983; citados por Hodgkinson et al., 2009). Las bajas concentraciones relativas de IgA en rumiantes en comparacin con monogstricos, en los cuales la IgA es el isotipo mayoritario, soporta esta tesis junto con la falta de evidencia de la expresin de MadCAM-1 en el tejido mamario, necesario para el reclutamiento de linfocitos intestinales (Hodgkinson et al., 2007). Sin embargo, estudios recientes han concluido que el sistema IgA en los rumiantes est de manera natural silente, pero que puede ser estimulado por un desafo antignico local (Hodgkinson et al., 2009). Componente soluble (anticuerpos y citocinas de la inmunidad adaptativa) La IL-2 es producida por los linfocitos T CD4+ y fue inicialmente descrita como un factor de crecimiento de linfocitos T. Esta citocina regula la respuesta inmunitaria adaptativa, ya que estimula el crecimiento y la diferenciacin de los linfocitos B, incrementa la proliferacin de timocitos, activa los linfocitos NK (natural killer: asesinos naturales) e induce la activacin de los linfocitos T. Las alteraciones en la produccin de IL-2 causan una disminucin de la respuesta inmunitaria en la glndula mamaria, lo que contribuye a enfermedades bacterianas como la mastitis (Alluwaimi, 2004; Oviedo-Boyso et al., 2007). El IFNg es producido principalmente por los linfocitos T CD4+ Th1, siendo tambin fuentes importantes del mismo los linfocitos T CD8+ y los NK. La produccin de IFNg depende de los niveles de IL-12 en la glndula mamaria o ndulos linfticos supramamarios, puesto que la IL-12 es necesaria para que los linfocitos T CD4+ vrgenes se diferencien en un patrn Th1 caracterizado por su capacidad de producir IFNg tras un posterior estmulo antignico en el sitio de infeccin. El IFNg potencia la capacidad fagoctica de los neutrfilos y macrfagos reclutados en la glndula mamaria, y es importante para el cambio del isotipo de IgM a IgG en los linfocitos B (Alluwaimi, 2004; Oviedo-Boyso et al., 2007). Los anticuerpos o inmunoglobulinas son componentes solubles sumamente importantes para la defensa de la glndula mamaria y para la transferencia de inmunidad pasiva al neonato en rumiantes. Los anticuerpos son producidos por los linfocitos B y en la glndula mamaria se encuentran tres isotipos de estas inmunoglobulinas: IgG (IgG1 e IgG2), IgA e IgM. En una glndula mamaria sana, el principal isotipo encontrado es la IgG1, pero cuando comienza una inflamacin de la glndula, el isotipo IgG2 aumenta sustancialmente en concentracin (Sordillo, 2005), debido principalmente al aumento de la produccin de IFNg que estimula a las poblaciones de linfocitos B a dejar de producir IgM (produc-

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cin basal) y comienzar a producir IgG2 la cual contribuye a la fagocitosis como opsonina (Araujo et al., 2008). Los tres isotipos (IgG, IgM e IgA) actan como opsoninas favoreciendo la fagocitosis con diferente eficiencia. La IgM lo hace de manera indirecta al activar el complemento y la produccin de C3b y C3bi que son opsoninas. El papel de la IgA en la opsonizacin es controvertido, con algunos hallazgos que indican la capacidad de los macrfagos calostrales de fagocitar tras el estmulo del receptor FcaR (Honorio-Frana et al., 1997), aunque tambin se han planteado resultados contrarios en neutrfilos calostrales (Honorio-Frana et al., 2001).

EVASIN DE LA RESPUESTA INMUNITARIA EN LA GLNDULA MAMARIA: PRODUCCIN DE BIOPELCULAS


La habilidad del Staphylococcus aureus de escapar la respuesta inmunitaria y sobrevivir dentro de diferentes clulas es fundamental para su persistencia por largos perodos. Staphylococcus aureus secreta una cantidad apreciable de protenas que inhiben o retrasan los efectos de la inmunidad innata. Por ejemplo, la estafiloquinasa (SAK) se une a las -defensinas e inhibe su actividad bactericida. Adems, la SAK transforma el plasmingeno a plasmina, la que se une a las IgG y C3b, con una actividad anti-opsonizante. Staphylococcus aureus produce otras protenas, tales como la aureolisina, la proteinas V8 (posiblemente una anti-defensina) y las enterotoxinas (ETs) que funcionan como superantgenos, estimulando los linfocitos T de manera indiscriminada al unirse a las molculas de MHC tipo II y los TCR. En la mastitis bovina causada por cepas de Staphylococcus aureus, la enterotoxina ms frecuentemente secretada es la ETC (Oviedo-Boyso et al., 2007). Staphylococcus aureus, Escherichia coli y varias especies de Streptococcus spp. tienen la capacidad de producir biopelculas. Las biopelculas son una comunidad estructurada de clulas bacterianas rodeadas por una matriz polimrica nativa que les permite adherirse a superficies inertes o vivas. La produccin de biopelculas constituye un medio de crecimiento protectivo que permite la supervivencia de las bacterias en medios hostiles, especialmente en medios con un rpido flujo (Melchior et al., 2006). Los exopolmeros que conforman una biopelcula protegen a las bacterias de los componentes del sistema inmunitario de la glndula mamaria de la actividad fagoctica de los macrfagos y neutrfilos, de las opsoninas y de las especies reactivas de oxgeno producidas por los polimorfonucleares. Por otro lado, se ha demostrado que las bacterias que crecen en biopelculas pueden ser entre 10 a100 veces ms resistentes a los antibiticos que la misma cepa en forma planctnica (libre). Se han propuesto varios mecanismos para esta resistencia: una menor penetracin de los antibiticos a travs de la matriz de la biopelcula, una tasa lenta de crecimiento de los organismos de la biopelcula y varios cambios fisiolgicos debido a la produccin de clulas persistentes (con las rutas para la apoptosis deshabilitadas) en las biopelculas (Melchior et al., 2006). Se ha documentado que las cepas de Staphylococcus aureus recuperadas de casos crnicos de mastitis son productoras de exopolmeros y por tanto, tienen la capacidad de formar biopel-

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34 / Robert Valeris culas. Esto es de gran relevancia a la hora de instaurar protocolos de tratamiento para mastitis crnica y para la eleccin de los frmacos, puesto que las tetraciclinas y la eritromicina activan los genes productores de esos exopolmeros (Melchior et al., 2006).

FACTORES INMUNOSUPRESORES DURANTE EL PERIODO DE PERIPARTO


Factores Genticos Ha habido mucho inters en definir unos marcadores genticos e inmunolgicos que pudieran ser usados para seleccionar las vacas con una mayor resistencia a la mastitis durante el perodo periparto, el cual es el de mayor susceptibilidad para la mastitis. Diversas evidencias sugieren que existe una variacin gentica en varios parmetros inmunolgicos en las vacas lecheras durante el periparto que pudieran contribuir a episodios de inmunosupresin. Se ha encontrado una variabilidad gentica significativa en cuanto al nmero total de neutrfilos, la capacidad fagoctica de los neutrfilos, la concentracin srica de las inmunoglobulinas y la actividad del complemento durante el perodo periparto (Mallard et al., 1998; Burton et al., 2003; Begley et al., 2009). La capacidad de predecir los perfiles inmunolgicos de las vacas tendr un profundo impacto en el desarrollo de estrategias inmunoreguladoras eficaces para el perodo periparto (Sordillo, 2005). Factores Hormonales El estrs durante la gestacin y el parto estimula la produccin de una variedad de hormonas que pueden tener un efecto importante en la respuesta del sistema inmunitario. Un grupo de estas hormonas son los corticoesteroides (Sordillo, 2005). Se ha documentado que los neutrfilos en vacas periparturientas presentan una disminucin de la expresin de las molculas de adhesin (CD62L y CD18) que se correlaciona con una disfuncin neutroflica y una predisposicin a la mastitis. Esto se debe a que los altos niveles de cortisol circulantes durante el perodo de periparto interactan con los receptores citoplasmticos de glucocorticoides (GR) en los neutrfilos y se altera la expresin del gen de CD62L a nivel pretranscripcional (Weber et al., 2001). Adems, los glucocorticoides disminuyen la cantidad de linfocitos Tgd en sangre, la concentracin de IgM en leche, la expresin de MHC en las clulas mononucleares, disminuyendo tambin la produccin de gran mayora de citocinas (Sordillo, 2005). Otras hormonas tambin son capaces de influenciar la respuesta inmunitaria, bien sea como inmunoestimuladoras (estradiol, IGF-1, GH, prolactina) o como inmunodepresoras (progesterona). Por tanto, los cambios en las concentraciones de progesterona, estradiol, IGF-1, prolactina y de la hormona del crecimiento que se dan durante el periparto modifican las funciones de los neutrfilos y mononucleares (Karpuzoglu et al., 2006; Boutet et al., 2007; Su et al., 2009; Liu et al., 2010).

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Estrs Oxidativo El estrs fisiolgico asociado a la rpida diferenciacin del parnquima secretor, al comienzo de la produccin y secrecin de leche, est acompaado con una alta demanda energtica y un incremento en los requerimientos de oxgeno. Esta alta demanda de oxgeno aumenta la produccin de reactivos derivados del oxgeno, conocidos como ROS (reactive oxygen species). Cuando se producen en exceso, los ROS son importantes mediadores de lesiones a nivel celular y tisular llevando a la condicin conocida como estrs oxidativo (Sordillo, 2005). Los tejidos del bovino tienen varias enzimas y molculas (vitamina E glutatin peroxidasa y su cofactor, el selenio) que reducen a los ROS a metabolitos menos reactivos, siendo esta capacidad antioxidante la que protege a las clulas de los efectos deletreos del estrs oxidativo. Por lo tanto, un desbalance entre una alta produccin de ROS y la disponibilidad de las molculas antioxidantes en el perodo periparto puede conllevar a un estrs oxidativo durante este perodo crtico y aumentar con ello la susceptibilidad a la mastitis (Sordillo, 2005; Sordillo & Aitken, 2009). Aunque en muchas partes del mundo es habitual la suplementacin con altos niveles de selenio y vitamina E, el estrs oxidativo en la fase de transicin sigue siendo considerable, debido en parte a que hay una marcada individualidad en la respuesta a altas dosis de vitamina E: si no hay niveles adecuados en las vacas de los componentes del sistema de regeneracin de la vitamina E encargados del metabolismo de las molculas oxidadas de vitamina E, esa dieta alta en vitamina E pudiera incrementar el estrs oxidativo en vez de disminuirlo (Bouwstra et al., 2010).

CONCLUSIONES
El conocimiento de las peculiaridades de la respuesta inmunitaria de la glndula mamaria en rumiantes tanto en el estado de salud como en presencia de las diferentes mastitis bacterianas, permitir hacer ms efectivos los protocolos de vacunacin intramamarios, entender mejor la persistencia de cepas aun ante el uso de tratamientos antibiticos parenterales y/o locales, determinar predictores tempranos de mastitis clnica y caracterizar los alelos relacionados a la resistencia a la mastitis para poder emplearlos en programas de seleccin gentica. Por lo tanto, es un rea de investigacin frtil que deber brindar importantes avances en los prximos aos.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Alain K, Karrow NA, Thibault C, St-Pierre J, Lessard M, Bissonnette N. 2009. Osteopontin: an early innate immune marker of Escherichia coli mastitis harbors genetic polymorphisms with possible links with resistance to mastitis. BMC Genomics 10:444-461. Alluwaimi AM. 2004. The cytokines of bovine mammary gland: prospects for diagnosis and therapy. Res Vet Sci 77(3):211-222. Arajo FR, Costa CM, Ramos CAN, Farias TA, de Souza IIF, Melo ESP, Elisei C, Rosinha GMS, Soares CO, Fragoso SP, Fonseca AH. 2008. IgG and IgG2 antibodies from cattle naturally infected with Anaplasma marginale recognize the recombinant

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