TEMA: DETERMINACION DE GRUPOS SANGUINEOS: SISTEMAS ABO Y RH.

OBJETIVO DE LA PRCTICA: a) Tipificar y encontrar los diferentes tipos de grupos sanguneos en los alumnos. b) Iniciar el estudio inmunolgico y comprender a travs de la prctica, la afinidad o diferencia entre los grupos sanguneos. c) Comprender la importancia de saber el grupo sanguneo y el factor Rh d) Hacer investigacin y estadstica de los resultados obtenidos en el laboratorio. MATERIALES: 1. 2. 3. 4. 5. Placas, portaobjetos y cubreobjetos. Lancetas sanguneas. Mondadientes o palillos de dientes. Torundas de alcohol yodado. Reactivo para determinacin de grupos sanguneos: anti A, anti B, anti D.

PROCEDIMIENTO: A) Esterilice el pulpejo del dedo con una torunda de algodn empapado de alcohol yodado. B) Pinche el dedo con la lanceta sangunea o con una aguja hipodrmica. C) Descarte las dos primeras gotas de sangre y las prximas coloque en 2 placas portaobjetos de acuerdo con el siguiente esquema: D) Sobre las gotas de sangre, coloque los reactivos para la determinacin de grupos y factor Rh. Reactivo azul es anti A, reactivo amarillo es anti B, reactivo blanco es anti D. E) Mezcle las dos gotas (sangre y reactivo) ayudado de un mondadientes. No use mondadientes sucios. F) Espere unos segundos para leer la reaccin. Haga ligeros movimientos de rotacin o de vaivn con las placas sobre todo en la placa con el reactivo anti D. G) Lea el resultado de la reaccin: Si hay aglutinacin es positivo, si no hay aglutinacin el resultado es negativo. H) Escriba el resultado obtenido. CUESTIONARIO: 1. Cules fueron los resultados de grupos sanguneos ABO Y Rh entre sus compaeros de curso?

2. Cul es la semejanza y/o diferencia con estadsticas de grupos sanguneos ene l Ecuador?

3. Porque en la determinacin del factor Rh solo se utiliza el anti D?

4. Porque solo es importante y peligroso que una mujer Rh negativa se cases con un hombre Rh positivo?

5. Hay la posibilidad de eritroblastosis fetal en caso de un hombre Rh negativo casado con una mujer Rh positiva?

6. Cul es la utilidad en el conocimiento previo del grupo y factor sanguneo?

7. Cul es la utilidad de la determinacin de grupo sanguneo para definir la paternidad?

8. Determine los antgenos en el grupo sanguneo ABO!

9. Determine los antgenos en el factor Rh!

10. Haga los dibujos y las explicaciones de lo realizado en el laboratorio!

TEMA: OBSERVACION DE LEUCOCITOS Y PLAQUETAS EN UN EXTENDIDO DE SANGRE PERIFERICA. OBJETIVO DE LA PRCTICA: a) Reconocer los diferentes tipos de leucocitos en un extendido de sangre. b) Reconocer las plaquetas en un extendido de sangre y diferenciarlos de los eritrocitos y leucocitos.

c) Hacer una formula diferencial y porcentual de leucocitos y relacionarlos con estados de normalidad y pato. d) Interpretar y explicar el porqu de la coloracin de cada una de las clulas observadas. e) Reconocer la presencia de plaquetas y relacionarlos con el nmero de eritrocitos con el fin de sacar un valor estimativo del nmero de plaquetas. MATERIALES: 1. Placas con extendidos sanguneos coloreados por el mtodo de Giemsa o de Wright. 2. Placas coloreadas con azul de metileno. PROCEDIMIENTO: 1. Coloque la placa de sangre preparada, ya coloreada con el mtodo de Giemsa en la platina del microscopio. 2. Separe el lente objetivo de 100 X de la placa y por lo tanto de la platina del microscopio. 3. Coloque una gota de aceite de cedro entre la cola y el cuerpo del frote sanguneo. 4. Suba lentamente la platina hasta que el lente 100X, tope con la gota de aceite de cedro. Este movimiento se lo hace sin mirar a travs de los oculares. 5. Enfoque con el tornillo micromtrico, mirando a travs de los oculares. 6. Inicie la observacin mirando la morfologa, color, tamao, etc. de los eritrocitos. 7. Observe la presencia de plaquetas y determine el nmero aproximado de estas clulas (no son propiamente clulas). Mientras los eritrocitos se encuentran en aproximadamente 5 000 000 por milmetro cubico (o ml), las plaquetas se encuentran en 200 00 por milmetro cubico (o ml). Es decir una relacin de 25/1, si conocemos esta relacin podemos calcular la cantidad de plaquetas. Observando el nmero de plaquetas existentes en 100 eritrocitos y adems relacionando con el hematocrito. 8. Inicie la observacin de leucocitos con un Neutrofilo. a) Observe la forma de la clula y dibuje, determine el tamao de la clula (compare con los eritrocitos que tienen 7.2 micrmetros) b) Observe la forma del ncleo, cuente el nmero de segmentaciones que presenta. c) En el citoplasma determine la presencia de grnulos, mire de cuantos tipos hay y vea la coloracin que tienen. d) Por la forma del ncleo y el nmero de segmentaciones que tiene, establezca si es una forma juvenil (ncleo en forma de cayado o herradura), o es un segmentado o clula diferenciada terminal (ncleo con 3 a 5 segmentaciones o lobulaciones). 9. Mire un linfocito y determine: a) Observe la forma de la clula y el tamao que tiene. b) Observe el ncleo y la distinga la presencia y disposicin de la cromatina. c) Observe el citoplasma, anote el tipo de coloracin que presenta. d) Busque la presencia de granulaciones en el citoplasma. e) Establezca si es un linfocito pequeo o un linfocito grande. f) Dibuje sus observaciones. 10. Busque un eosinofilo y distinga: a) La forma y el tamao de la clula. b) La presencia de grnulos citoplasmticos, de color rojo como en racimo de uvas. c) Distinga el ncleo y cuente el nmero de lobulaciones que presenta. d) Dibuje el eosinofilo observado. 11. Identifique un Monocito y observe:

a) La forma y el tamao de la clula. b) El citoplasma vea la coloracin e identifique la presencia o no de granulaciones. c) Compare la disposicin de la cromatina con los neutrofilos y los linfocitos. d) Observe la forma y el tamao del ncleo, compare con la de un linfocito. e) Dibuje sus observaciones. 12. Encuentre un basfilo e investigue: a) La forma y el tamao de la clula. b) La forma, el tamao y la presencia o no del ncleo. c) La presencia de granulaciones azurofilas en el citoplasma. d) Busque las semejanzas y las diferencias con los Eosinofilos. 13. Cuando ya haya aprendido a distinguir los diferentes leucocitos, cuente 100 leucocitos, determinando y anotando a qu clase de leucocito pertenece, al final habr realizado una formula porcentual. CUESTIONARIO: 1. Cul es la formula porcentual de los diferentes leucocitos que encontr en la observacin de su placa?

2. Determine los numero absolutos de leucocitos si el nmero total de estos se supone fue de 8500 por ml.

3. Cul es la cifra de plaquetas que encontr en las observaciones de su placa si se supone un hematocrito de 52?

4. La placa que usted miro, es normal o patolgica, defina el porqu?

5. A que se llama leucocitosis y qu significado tiene?

6. Qu es una plaquetopenia y qu significado tiene?

7. Qu es hemostasia?

8. Qu es Leucopenia y qu significado tiene?

9. Qu es aplasia y qu significado tiene?

10. Haga los dibujos y ponga nombres de lo observado en el laboratorio.

TEMA: OBSERVACIN DE MEDULA OSEA O TEJIDO MIELOIDE OBJETIVO DE LA PRCTICA: a) b) c) d) Reconocer: en un extendido o en una biopsia de medula sea, al tejido mieloide. Diferenciar un extendido de medula sea, de un extendido de sangre perifrica. Conocer y diferenciar clulas estromaticas y clulas de parnquima del tejido mieloide. Observar las diferencias lneas de diferenciacin celular hematopoyticas (eritroide, mieloide, megacariocitica, linfocitica, monocitica). e) Estudiar a la mayor parte de las clulas hematopoyticas posibles por su tamao, coloracin y morfologa. MATERIALES: 1. 2. 3. 4. Microscopio fotnico, comn o corriente. Preparaciones de extendido de Medula sea. Preparaciones de tejido seo esponjoso con medula sea activa. Circuito de video para reconocer las diferentes clulas.

TECNICA DE OBSERVACIN DE UN EXTENDIDO DE MDULA SEA: 1. Obtenga una muestra de medula sea del esternn o de la espina iliaca postero superior. a) Ubique el sitio de puncin. Si se trata del esternn debe realizarlo 2 cm por debajo del ngulo de Louis. Si es en la espina iliaca postero superior debe estar seguro del sitio de puncin. b) Esterilice la piel con una gasa empapada en yodo o alcohol yodado. c) Pinche la zona escogida con una aguja adecuada, la misma que debe tener un mandril para evitar el taponamiento. d) Coloque una jeringuilla en la aguja y absorba lentamente la medula sea. 2. Realice un extendido de mdula sea, en forma parecida a como se lo realiza con sangre. 3. Proceda a colorear con el mtodo de Giemsa o de Wright. Es probable que todos estos pasos anteriores se deban obviar. Es mejor trabajar con placas preparadas con anterioridad. Estas tcnicas requieren de manos expertas y no estn exentas de problemas graves. 4. Enfoque la placa con la lente de menor aumento: 3.2X, luego 10X, haga una observacin panormica observando las clulas estromaticas (como clulas almacenadoras de grasa) y las clulas del parnquima mieloide. Mientras mas ncleos observe, mayor cantidad de clulas habrn. Pero no olvide que estos ncleos pertenecen en su mayor parte a las clulas del parnquima.

5. Con 10X y en observacin panormica reconozca a los megacariocitos, que son las clulas muy grandes que se presentan en los campos del microscopio. 6. Lleve a 100X y confirme que son megacariocitos. Son megacarioblastos cuando estas clulas son muy basofilas, tienen un ncleo grande y su citoplasma no desprende plaquetas. Los megacariocitos clulas gigantes con ncleo enorme mamelonado y citoplasma ligeramente basfilo que si desprenden plaquetas. 7. Con 100X, observe panormicamente a las clulas y reconozca las clulas maduras de la medula sea, que son exactamente iguales a las clulas de un extendido sanguneo de sangre perifrica. Eritrocitos maduros, leucocitos maduros, presencia de plaquetas. Se denomina pool de clulas maduras. 8. La observacin con lente panormico y con 100X tambin le permitir reconocer a las clulas de la serie eritroide, porque son clulas que son colorantes para sangre se encuentran ms pigmentadas y le confieren a la medula sea una tonalidad azul intensa, tanto as cuando hay una reaccin eritroblastica se llega a decir que la medula es azul. Se observa medula azul en casos de hemolisis intensas ya que el ndice mittico de la medula esta aumentado. 9. Reconozca a las diferentes clulas de diferentes series en proceso de maduracin de todas y cada una de las series antes mencionadas. 10. Haga el reconocimiento en una placa de biopsia de medula sea. La medula sea puede obtenerse tambin por puncin biopsia, de la cresta iliaca postero superior. 11. Reconozca las clulas del estroma: clulas almacenadoras de grasa, macrfagos, clulas endoteliales, en caso de biopsias. Fibroblastos y fibrocitos, clulas reticulares, osteoblastos, osteoclastos, etc. 12. Reconozca el tejido noble de la medula sea. Aqu es difcil distinguir las clulas en diferentes etapas de maduracin, excepto cuando hay una medula con un solo tipo de clulas (por ejemplo leucemia linfoblastica), en estos casos se habla de una medula montona. 13. Cuente 100 clulas y establezca una relacin entre la serie roja y la serie blanca. (Solo debe considerarse las clulas en proceso de maduracin, en lo referente a la serie roja.) CUESTIONARIO: 1. Qu relacin obtuvo entre la serie mieloide y la eritroide, en sus observaciones de medula sea?

2. Cul es la diferencia en coloracin entre la serie roja y la serie blanca?

3. Cmo reconoce a una clula de la serie megacariocitica?

4. Cul es el significado del hallazgo de gran cantidad de clulas plasmticas en medula sea?

5. Qu pozas o tipos de clulas tiene la medula sea?

6. Qu es una clula madre?

7. Por qu los linfocitos T no se forman en la medula sea?

8. Enumere las clulas reconocibles en el proceso de maduracin de un eritrocito.

9. Enumere las clulas reconocibles en el proceso de maduracin de un neutrofilo.

10. Haga los dibujos de sus observaciones en el laboratorio, debe comprender todas las series y en todos los estados o procesos de diferenciacin celular.